Hidrolisis Pati Enzimatis

BAB II HIDROLISIS HIDROLI SIS PATI PATI ENZIMATIS

A. TUJUAN PRAKTIKUM

1. Menguraikan karbohidrat kompleks dari biomassa menjadi gula sederhana melalui reaksi hidrolisis dengan enzim. 2. Mengetahui faktor – faktor yang mempengaruhi reaksi hidrolisis enzimatis.

B. DASAR TEORI 1. Karbohidrat dan Pati

Karbohidrat memegang peranan penting dalam alam karena merupakan sumber energi utama bagi manusia dan hewan. Semua karbohidrat berasal dari tumbuh-tumbuhan. Melalui fotosintesis klorofil tanaman dengan bantuan sinar  matahari mampu membentuk karbohidrat dari karbondioksida !"# 2$ berasal dari da ri ud udar araa da dan n ai airr !%2#$ dari tan tanah. ah. Kar Karboh bohidr idrat at yan yang g dih dihasil asilkan kan ada adalah lah klarbohidrat sederhana glukosa. &i samping itu dihasilkan oksigen !# 2$ yang lepas di udara. 'roduk yang dihasilkan terutama dalam bentuk gula sederhana yang yan g mud mudah ah lar larut ut dal dalam am air dan mud mudah ah dia diangk ngkut ut ke selu seluruh ruh sel-sel sel-sel gun gunaa  penyediaan energi. Sebagian dari gula sederhana ini kemudian mengalami  polimerisasi dan membentuk polisakarida. (da dua jenis polisakarida tumbuhtumbuhan yaitu pati dan nonpati. 'olisakarida non pati merupakan sumber  utama serat makanan Karbo Kar bohi hidr drat at te terb rbag agii me menj njad adii be bebe berap rapaa ba bagi gian an me menu nuru rutt pa panj njan ang g ran rantai tai karb ka rbon onny nya. a.

Mono Mo nosa saka kari rida da

disa di saka kari rida da

dan da n

poli po lisa saka kari rida da..

"ont "o ntoh oh

dari da ri

monosakarid mono sakaridaa adalah sukrosa. Sukrosa merup merupakan akan produksi akhir asimila asimilasi si karb ka rbon on !" !"$$ pa pada da pr pros oses es fo foto tosin sinte tesi siss ya yang ng te terja rjadi di di da daun un

dan da n be bent ntuk  uk 

karb ka rboh ohid idrat rat ya yang ng mu muda dah h di ditr tran ansp spor ortas tasik ikan an ke jar jarin inga gan n sim simpa pan n ata atau u sink  tissues. Se Selai lain n be berfu rfung ngsi si da dalam lam pe peny nyed ediaa iaan n en ener ergi gi da dan n ke kera rang ngka ka ka karb rbon on sukrosa juga berperan dalam pengaturan ekspresi gen lainnya ! )ohanis 2*1*$. 2*1* $. +enis karbohidrat ,

1. Monosakarida Monosakarida yang mengandung yang mengandung satu gugus aldehida disebut aldosa sedangkan ketosa mempunyai satu gugus keton. Monosakarida dengan enam atom " disebut heksosa misalnya glukosa !dekstrosa atau gula anggur$ ruktosa !leulosa atau gula buah$ dan galaktosa. Sedangkan mempunyai lima atom " disebut pentosa misalnya /ilosa arabinosa dan ribosa. Monosakarida adalah senyawa karbohidrat sederhana yang mengandung gugus fungsi karbonil. Se0ara umum senyawa ini dibagi menjadi dua kelompok besar yaitu aldosa jika mengandung gugus aldehid dan ketosa jika mengandung gugus keton. Monosakarida juga sering dinamai sesuai jumlah atom karbon penyusunnya seperti triosa pentosa heksosa dll. lukosa merupakan 0ontoh monosakarida aldosa yang mengandung enam atom karbon dan satu gugus aldehid. Monosakarida dengan jumlah atom tertentu akan membentuk 0in0inanomer dan karbon anomerik !memiliki sifat  pereduksi yang kuat$. 3katan glikosidik terbentuk ketika atom karbon anomerik  !"1$ bereaksi dengan gugus hidroksil 2. #ligosakarida #ligosakarida adalah polimer dengan derajat polimerisasi 2 sampai 1* dan biasanya bersifat larut dalam air. #ligosakarida yang terdiri dari dua molekul disebut disakarida dan bila tiga molekul disebut triosa4 bila sukrosa ! sakarosa atau gula tebu$ terdiri dari molekul glukosa dan fruktosa laktosa terdiri dari molekul glukosa dan galaktosa dan maltosa terdisi dari dua molekul glukosa. Serta ada rafinosa yang trdisri atas tiga molekul monosakarida yang  berikatan yaitu galaktosa-glukosa-fruktosa. Sukrosa adalah oligosakarida yang mempunyai peran penting dalam  pengolahan bahan makanan dan banyak terdapat pada tebu siwalan dan kelapa kopyor. 5ntuk industri-industri makanan biasa digunakan sukrosa dala bentuk  kristral halus atau kasar dan dalam jumlah yang banyak dipergunakan dalam  bentuk 0airan sukrosa !sirup$. Sebagian sukrosa akan terurai menjadi glukosa dan fruktosa yang disebut gula inert. 6. 'olisakarida

'olisakarida

adalah

senyawa

yang

terdiri

dari

unit

terke0il

monosakarida yang dihubungkan oleh ikatan glikosidik. 'olisakarida akan menjadi monosakarida bila dihidrolisis se0ara lengkap. 'ati merupakan polimer  dari 17-8-&-glukosa yang terdiri dari amilosa dan amilopektin. (milosa akan  berubah menjadi warna biru bila diwarnai dengan reagen iodin.

ambar 6.1 struktur amilosa dan amilopektin 'olisakarida merupakan polimer yang disusun oleh monosakarida yang  bertautan dengan ikatan glikosidik. ungsi utama senyawa ini sebagai komponen struktural atau bentuk penyimpanan energi. 9eberapa 0ontoh  polisakarida adalah pati dekstrin glikogen dan selulosa. 'olisakarida dalam  bahan makanan berfungsi sebagai penguat tekstur ! selulosa hemiselulosa  pektinlignin$ dan sebagai sumber energi ! pati dekstrin glikogen fruktan$. 'olisakarida penguat tekstur ini tidak dpat di0erna oleh tubuh tetapi merupakan serat-serat yang dapat menstimulasi enzim-enzim pen0ernaan. 'olisakarida merupakan polimer molekul-molekul monosakarida yang dapat berantai lurus atau ber0abang dan dapat dihidrolisis dengan enzim-enzim yang spesifik kerjanya. %asil hidrolosis sebagian akan menghasilkan oligosakarida dan dapat di pakai untuk menentukan struktur molekul  polisakarida. ! . :inarno , 1;-2;$. 'ati merupakan karbohidrat yang tersebar dalam tanaman terutama tanaman berklorofil. 9agi tanaman pati merupakan 0adangan makanan yang terdapat pada biji batang dan pada bagian umbi tanaman. 9anyaknya kandungan  pati pada tanaman tergantung pada asal pati tersebut misalnya pati yang berasal dari biji beras mengandung pati <*–=*> dan pati yang berasal dari umbi singkong mengandung pati ?*> !:inarno 1@?=$.'ati adalah polisakarida nutrien yang

tersedia melimpah pada sel tumbuhan dan beberapa mikroorganisme. 'ati umumnya berbentuk granula dengan diameter beberapa mikron. ranula pati mengandung 0ampuran dari dua polisakarida berbeda yaitu amilum dan amilopektin. +umlah kedua poliskarida ini tergantung dari jenis pati. 'ati yang ada dalam kentang jagung dan tumbuhan lain mengandung amilopektin sekitar ;< –  ?*> dan amilum sekitar 2*- 2<>. Komponen amilum merupakan polisakarida rantai lurus tak ber0abang terdiri dari molekul &-lukopiranosa yang berikatan 8!17$ glikosida. Struktur  rantai lurus ini membentuk untaian heliks seperti tambang !+ames A 1@@7$.Komponen penting penyusun pati adalah amilosa dan amilopektin. Kedua komponen ini dapat dikatakan homogen se0ara kimia tetapi masih heterogen dalam ukuran molekul derakat per0abangan rantai susunan dan kea0akan rantai 0abang !:inarno 1@?=$. (milosa merupakan komponen pati yang mempunyai rantai lurus dan larut dalam air. 5mumnya amilosa menyusun pati 1; – 21> terdiri dari satuan glukosa yang bergabung melalui ikatan 8-!17$ &-glukosa. (milopektin merupakan komponen pati yang mempunyai rantai 0abang terdiri dari satuan glukosa yang  bergabung melalui ikatan 8-!17$ &-glukosa dan 8-!1=$ &-glukosa. Bidak seperti amilosa amilopektin tidak larut dalam air tetapi larut dalam pelarut organik  seperti butanol !)ohanis 2*1*$. 2. Hidroi!i! Pati

%idrolisis adalah proses dekomposisi kimia dengan menggunakan air  untuk memisahkan ikatan kimia dari substansinya. %idrolisis pati merupakan  proses peme0ahan molekul amilum menjadi bagian-bagian penyusunnya yang lebih sederhana seperti dekstrin isomaltosa maltosa dan glukosa !Cehninger 1@?2$. 'roses hidrolisis dipengaruhi oleh beberapa faktor yaitu, Anzim ukuran partikel temperatur p% waktu hidrolisis perbandingan 0airan terhadap bahan baku !olume substrat$ dan pengadukan.

Anzim merupakan senyawa protein kompleks yang dihasilkan oleh sel-sel organisme dan berfungsi sebagai katalisator suatu reaksi kimia !:inarno 1@?=$. Kerja enzim sangat spesifik karena strukturnya hanya dapat mengkatalisis satu tipe reaksi kimia saja dari suatu substrat seperti hidrolisis oksidasi dan reduksi. 5kuran partikel mempengaruhi laju hidrolisis. 5kuran partikel yang ke0il akan meningkatkan luas permukaan serta meningkatkan kelarutan dalam air ! 'oedjiadi (na dkk 2**<$. Bemperatur hidrolisis berhubungan dengan laju reaksi. Makin tinggi temperatur hidrolisis maka hidrolisis akan berlangsung lebih 0epat. %al ini disebabkan konstanta laju reaksi meningkat dengan meningkatnya temperatur  operasi. Anzim dapat diisolasi dari hewan tumbuhan dan mikroorganisme !Cehninger 1@?2$. 'ati merupakan 0adangan karbohidrat pada tanaman berbentuk granula-granula tak larut yang tersusun dari dua ma0am molekul polisakarida yaitu amilosa dan amilopektin umumnya ditemukan pada umbi akar dan biji. ula reduksi terutama dalam bentuk glukosa diperoleh dari hidrolisis pati oleh enzim amilase yang terdapat pada kapang  Rhizopus. Selain dari pati glukosa dapat diperoleh dari hidrolisis isoflaon glikosida oleh kapang Rhizopus. p% untuk enzim acid   fungal amilase optimum pada 7 – < dan untuk enzim glukoamilase pada 6< – < !Cehninger 1@?2$. %idrolisis amilosa oleh 8-amilase terjadi melalui dua tahap. Bahap pertama adalah degradasi menjadi maltosa dan maltotriosa yang terjadi se0ara a0ak. &egradasi ini terjadi se0ara 0epat diikuti pula dengan menurunnya iskositas dengan 0epat. Bahap kedua relatif lambat dengan pembentukan glukosa dan maltosa sebagai hasil

akhir.

Sedangkan

untuk

amilopektin

hidrolisis

dengan

a-amilase

menghasilkan glukosa maltosa dan berbagai jenis 8-limit dekstrin yang merupakan oligosakarida yang terdiri dari 7 atau lebih residu gula yang semuanya mengandung ikatan 8-1= glikosidik !:inarno 1@?=$. ".

 Apergillus niger 

Kapang Aspergillus

oryzae dikenal

sebagai

kapang

yang

banyak 

menghasilkan berma0am-ma0am enzim diantaranya 8-amilase8-glaktosidase glutaminase proteinase dan D-glukosidase !'oedjiadi (na dkk. 2**<$. Baksonomi  Aspergillus oryzae , Kingdom

, Fungsi

&iision

, Ascomycota

"lass

, Eurotiomycetes

#rder

, A.oryzae

amily

, Trichocomaceae

enus

, Aspergillus

Spesies

, Eurotiales

lukoamilase

merupakan

enzim

karbohidrase

yang

mengkatilasis

 peme0ahan ikatan 8!!1-7$ glikosidik pada polisakarida pati menjadi glukosa. 'otensi hidroltik dari suatu enzim dapat berariasi hal ini sangat dipengaruhi oleh sumber substrat dan nutrisi enzim itu. 'roduksi enzim-enzim termasuk enzim karbohidrase sangat dipengaruhi oleh komposisi nutrisi terutama protein dan mineral pada media tumbuh mikroorganisme. 'emberian nutrient ke dalam media fermentasi dapat menyokong dan meransang pertumbuhan mikroorganisme dan demikian memproduksi enzim potensial. 9ahkan dengan pemberian nutrient  bernitrogen mempunyai fungsi fisologis bagi mikroorganisme. 'emberian nutrient  bernitrogen pada media dedak padat sebagai media tumbuh Aspergillus niger dan Aspergillus oryzae mampu menghasilkan glukoamilase dengan tingkat  produksi ;?.61> lebih tinggi dari 0ontrol !tanpa pemberian nutrient bernitrogen$. #leh karena itu untuk memperoleh enzim glukoamilase degan biaya murah dan diharapkan memiliki potensi hidrolitik tinggi dalam mengatalisis peme0ahan

senyawa berkarbohidrat tinggi menjadi glukosa meka dalam penelitian digunakan limbah ampas tahu sebagai media tumbuh Aspergillus niger dan Aspergillus oryzae. Beknologi

fermentasi

yang

dilakukan

adalah

menumbuhkan

kedua Aspergillus tersebut dalam media ampas tahu semi yang padat yang diberi nutrient pepton !suatu senyawa organik yang mengandung nitrogen$.

#. ALAT DAN BAHAN

1. (lat a. Bimbangan  b. elas arloji 0. Spatula d.elas beaker 1** ml e. Arlenmayer 1** ml f. Arlenmayer 12< ml g. 'ipet tetes h. 'ipet ukur  i. 9allfiller   j. 9unsen k.Babung reaksi l. 'enjepit tabung reaksi m. Kompor listrik  n.'lat besi o.9uret  p. Statif klem dan boss head E. Cabu takar 1** ml r. 'engaduk ka0a s. "orong ka0a t. 9otol sampel 2. 9ahan a. 'ati  b. 5rea 0. Kapang Aspergillus niger d. Carutan gula e. Carutan Fa#% f. Carutan %2S#7 g. 3ndikator uniersal h. Carutan fehling (

i. Carutan fehling 9  j. (Euades 6. ambar (lat

ambar 6. 1 Bimbangan

ambar 6.2 elas (rloji

ambar 6.6 Spatula

ambar 6.< Arlenmeyer 

ambar 6.= 'ipet Betes

ambar 6.; 'ipet 5kur 

ambar 6.@ 9unsen

ambar 6.1* Babung Geaksi

ambar 6.11 'enjepit Babung Geaksi

ambar 6.16 'lat 9esi

ambar 6.17 9uret Hale Statif Klem dan 9oss %ead

ambar 6.1< 9otol Sampel

ambar 6.7 elas 9eker 

ambar 6.? 9all iller 

ambar 6.12 Arlenmeyer 

ambar 6.1= Cabu Bakar 

ambar 6.1? "orong Ka0a

ambar 6.1; 'engaduk Ka0a

D. SKEMA KERJA

1. Membuat Carutan %idrolisat 1** ml &imasukan dalam gelas beaker 2<* ml

< gram

'emanasan dengan kompor listrik  &ilarutkan dengan 1** ml

Carutan

Carutan (milum diteteskan pada aEuades panas sedikit demi sedikit 'en0ampuran Carutan

&iambil 1* ml dimasukan  botol sampel

'endinginan suhu ruang

Sampel 1

Carutan

6 gram

'en0am uran &imasukan dalam Arlenmeyer 12< ml  Aspergillus niger 

"ampuran 1

"ampuran 'engadukan dengan shaker 6** rpm selama 1< menit

%idrolisat ambar &.1 Skema Kerja 'embuatan %idrolisat 2. 'engambilan Sample 2 pada %I1 %idrolisat &iambil 1* ml dimasukan tabun reaksi 1* ml %idrolisat 'emanasan den an bunsen %idrolisat panas

'endin inan suhu ruan &imasukan botol sampel Sampel 2 ambar &.2 Skema Kerja 'engambilan Sampel 2

6. 'engambilan Sampel 6 pada %I; %idrolisat 'engambilan sampel 1* ml %idrolisat &imasukan botol sampel Sampel 6 ambar &.6 Skema Kerja 'engambilan Sampel 6

7. Standarisasi ehling *< ml ehling (

*< ml ehling 9

1* ml (Euades

'en0am uran Carutan ehling

'emanasan

1** ml Carutan ula *1 M &imasukan dalam 9uret

Carutan ehling panas

Bitrasi Carutan ehling standar  Menghitung konsentrasi ehling ambar &.7 Skema Kerja Standarisasi ehling

<. Menentukan Kadar ula Geduksi *< ml ehling (

*< ml ehling 9

1* ml (Euades

1* ml Sampel

'en0ampuran

aEuades

Carutan ehling

'en en0eran 1** ml

'emanasan

'enge0ekan p%

Carutan ehling panas

Carutan sampel 1** ml netral &imasukan dalam 9uret

Bitrasi Carutan ehling standar 

Menghitung kadar gula reduksi ambar &.< Skema Kerja 'enentuan Kadar ula Geduksi

E. DATA PEN$AMATAN

 Fo 1. 2. 6.

7.

<.

=.

;.

1.

2.

6.

'erilaku (. Membuat %idrolisat Melarutkan < gram amilum I aEuades Carutan amilum diteteskan ke dalam 1** ml aEuades Mengambil 1* ml larutan amilum yang telah di0ampur  didinginkan  pada suhu ruang lalu dimasukan ke  botol sampel 1 dan dimasukan ke lemari pendingin Memasukan larutan amilum lainya ke dalam erlenmeyer dan ditambah *6 gram 5rea diaduk hingga larut Menambahkan  Aspergillus niger  ke dalam larutan

'engamatan Carutan berwarna putih keruh Carutan putih keruh tetapi agak   bening dari sebelumnya Sampel 1!awal$

Carutan berwarna putih keruh

Carutan berwarna putih keruh dan terdapat  Aspergillus niger  berwarna hitam Carutan tetap

Mengo0ok larutan menggunakan  shaker  dengan ke0epatan 6** rpm selama 1< menit Carutan hidrolisat didiamkan selama ; hari

9. Mengambil Sampel 2 ! Middle$ Mengambil 1* ml larutan hidrolisat Carutan keruh kebiruan dan terdapat  pada %I1 pembuatan hidrolisat  Aspergillus niger  berwarna hitam di dasar erlenmeyer  Memasukan 1* ml larutan hidrolisat Carutan berubah menjadi bening yang telah diambil kedalam tabung reaksi dan melakukan pemanasan dengan bunsen Carutan didinginkan dan dimasukan Sampel 2 !middle) ke botol sampel 2 ". Standarisasi ehling

1. 2.

6. 7.

1.

2.

1.

2.

6. 7.

<. =.

Masukkan larutan gula standar ke dalam buret sampai 1** ml *1 M Mengambil *< ml fehling ( *< ml fehling 9 dan 1* ml aEuades ke dalam erlenmeyer Memanaskan larutan fehling dengan kompor listrik hingga mendidih Carutan fehling panas dititrasi sebanyak 6 kali

Carutan bening Carutan berwarna biru

Carutan berwarna biru panas Carutan berubah warna menjadi merah bata dan terbentuk endapan  berwarna merah bata

&. Mengambil Sampel 6 !akhir$ Mengambil sampel 6 yaitu 1* ml Carutan berwarna putih keruh larutan hidrolisat pada %I;  pembuatan hidrolisat dan dimasukan ke dalam tabung reaksi Carutan dimasukan gelas beaker   untuk dien0erkan menggunakan aEuades A.Menentukan Kadar ula Geduksi Mengambil 1* ml sampel ditambah aEuades hingga olumenya menjadi 1** ml Menguji p% larutan sampel 1 menggunakan indikator uniersal

a. Sampel 1 berwarna putih keruh  b. Sampel 2 berwarna putih keruh 0. Sampel 6 berwarna putih keruh a. Sampel 1 p% J = !netral$  b. Sampel 2 p% J ; !netral$ 0. Sampel 6 p% J ; !netral$ Memasukan larutan sampel ke dalam  buret Mengambil *< ml fehling ( *< ml Carutan berwarna biru fehling 9 dan 1* ml aEuades ke dalam erlenmeyer Memanaskan larutan fehling dengan Carutan berwarna biru panas kompor listrik hingga mendidih Carutan fehling panas dititrasi a. Bitrasi dengan sampel 1 larutan menggunakan larutan sampel fehling berubah warna menjadi  biru keputihan dan keruh tidak  terdapat endapan  b. Bitrasi dengan sampel 1 larutan fehling berubah warna menjadi  putih agak biru dan keruh lebih  bening dari titrasi menggunakan sampel 1 tidak terdapat endapan 0. Bitrasi dengan sampel 1 larutan fehling berubah warna menjadi  putih agak biru dan lebih bening dari titrasi menggubakan sampel 1 dan 2 tidak terdapat endapan

Babel A.1 &ata 'engamatan 'raktikum %idrolisis 'ati Anzimatis

%. DATA PERHITUN$AN

 Fo. 1. 2. 6.

Bitrasi 1 2 6

Holume 1 ml 1< ml 1 ml

Babel .1 &ata Holume Carutan ula %asil Bitrasi 1. Menghitung konsentrasi fehling a. Holume ehling J *< fehling ( I *< fehling 9 I 1* ml aEuades J 11 ml  b. Holume ula

1 ml+1,5 ml+1 ml 3

J

J 11=; ml 0. Konsentrasi ula J *1 M / 1 J *1 F d. Konsentrasi fehling 1 J ehling 2 J ula H1 / F1 J H2 / F2  11 / F1 J 11=; / *1 11 F1 J *11=; F1 J  Fo. Bitrasi 1. Sampel 1 2. Sampel 2 6. Sampel 6 Holume %idrolisat %asil Bitrasi

2. Menghitung kadar gula reduksi

0,1167 11

Holume <* ml 6* ml 2* ml

Babel .2 &ata

a. Holume ehling

J *< fehling ( I *< fehling 9 I 1* ml aEuades J 11 ml  b. Konsentrasi fehling J **1*= F 0. Holume %idrolisat J

50 ml+30 ml+20 ml 3

J 666 ml  d. Konsentrasi fehling 1 J ehling 2 J %idrolisat H1 / F1 J H2 / F2 11 / **1*= J 666 / F2 *11== J 666 F2 H. SIMPULAN DAN SARAN

F2 J

0,1166 33,3

1. Simpulan a. %idrolisis pati se0ara enzimatis dapat dilakukan menggunakan enzim glukoamilase yang dihasilkan oleh  Aspergillus niger !kapang$ untuk  meme0ah polisakarida menjadi gula pereduksi.  b. aktor – faktor yang mempengaruhi reaksi hidrolisis enzimatis adalah  jenis pati kandungan amilosa dan amilopektin pati kondisi lingkungan enzim meliputi suhu p% dan konsentrasi substrat maupun enzim serta  perlakuan pendahuluan enzim sebelum hidrolisis. 0. Semakin besar konsentrasi suatu zat yang dihidrolisis maka akan semakin 0epat reaksi enzimatis yang terjadi. d. 'ada praktikum hidrolisis pati enzimatis ini didapatkan hasil negatif  karena tidak terbentuk endapan merah bata pada larutan yang dihidrolisis.

2. Saran a. 'ada hidrolisis pati se0ara enzimatis untuk menghemat biaya praktikum sebaiknya menggunakan enzim glukoamilase yang dihasilkan oleh mikroba dari pada menggunakan enzim langsung karena harga enzim yang mahal.  b. 'ada saat melakukan titrasi sebaiknya suhu titrat dipertahankan agar tetap  panas sehingga reaksi hidrolisisi semakin terjadi.

0. &alam melakukan praktikum sebaiknya di0ermati langkah – langkah kerjanya dengan baik sehingga tidak ada langkah kerja yang terlewat atau tidak dilakukan yang akan mempengaruhi hasil praktikum hidrolisis pati d. +aga kebersihan peralatan saat melakukan praktikum agar tidak terdapat zat yang bisa mengganggu hasil analisa praktikum

Da&tar P'!ta(a

9rady +ames A. 1@@7. Kimia Uniersitas Edisi Kelima! "ilid #ertama. 'enerbit Arlangga, +akarta. Cehninger. 1@?2. $asar%dasar &iokimia +ilid 6. !Maggy Bhenawijaya Berjemahan$. +akarta , Arlangga.  Fgili)ohanis.2*1*. &iokimia $asar. 9andung,Gekayasa Sains. 'oedjiadi (na dkk. 2**<. $asar%$asar &iokimia.&epok, 5niersitas 3ndonesia   'ress. Gindit 'ambaylundkk. 1@@?. Mempela'ari (idrolisis #ati adungdengan Enzim. 'alembang, 5FSG3. &ay G.(.  5nderwood (.C. 1@@@.  Analisis Kimia Kuantitatif Edisi * . Arlangga,   +akarta :inarno. 1@?=. Kimia #angan dan izi. 'enerbit Arlangga, +akarta.