EXTRACCION DE LA CASEINA Y DETERMINACION DEL PUNTO ISOELECTRICO.docx

EXTRACCION DE LA CASEINA Y DETERMINACION DEL PUNTO ISOELECTRICO

EXTRACTION AND DETERMINATION CASEIN ISOELECTRIC POINT Ardila Greilly (0524209!

Corporación tecnológica de Bogotá, Tecnología en Química Industrial   Bogotá, Colombia Colombia 12/11/2015

RESUMEN

Se llevó a cabo el procedimi imiento de extracción  !eparación de la ca!e"na de #na m#e!tra de lec$e com%n& La ca!e"na e! #na  prote"na con'#(ada de la lec$e del tipo )o!)oprote"na *#e !e !epara de la lec$e por  acidi) acidi)ica icació ción n  )orma )orma #na ma!a ma!a blanca blanca++ Se reali, reali,ó ó la determ determina inació ción n experim experiment ental al del  p#nto i!oel-ctrico de la prote"na !eparada ./&01 $aciendo preparación de !ol#cione! a di)e di)ere rent nte! e! conc concen entr trac acio ione ne!!  medi medida da !# ab!orbancia en el e!pectro)otómetro+ Palabra! clave2 Prote"na& ca!e"na& extracción& P#nto i!oel-ctrico+ A"STRACT

Carrie Carried d o#t t$e proce! proce!!! o) extrac extractio tion n and !eparation o) ca!ein )rom a !ample o) re(#lar  mil3& Ca!ein i! a mil3 protein con'#(ate o)  t$e tpe p$o!p$oprotein 4$ic$ i! !eparated )rom mil3 b acidi)ication and )orm! a 4$ite ma!!+ ma!!+ Experim Experiment ental al determ determina inatio tion n o) t$e t$e i!oele i!oelectr ctric ic point point o) t$e !epara !eparated ted protei protein n ./+0 1 4a! per)ormed b preparin( !ol#tion! at di))erent concentration! and t$e ab!orbance mea!#red in a !pectrop$otometer +

INTRODUCCION

5na caract caracter" er"!ti !tica ca de la! prote" prote"na na!!  otro! otro!  biopol"mero! e! *#e la car(a total *#e ad*#ieren depende del p6 del medio+ De la mi!ma manera la! prote"na! tienen #na car(a neta dependiendo del p6 del medio en el *#e !e enc#entren  de lo! amino7cido! *#e la comp compon onen en++ La ca!e ca!e"n "naa e! #na #na prot prote" e"na na con'#(ada de la lec$e del tipo )o!)oprote"na *#e !e !epara de la lec$e por acidi)icación  )orma #na ma!a blanca+ La! )o!)oprot )o!)oproteina! eina! !on #n (r# (r#po de prote rote"n "na! a! *#e e!t7n !t7n *#"mi *#"micam cament entee #nida! #nida! a #na !#!tan !#!tancia cia *#e contie contiene ne 7cido 7cido )o!)ór )o!)órico ico++ En la ca!e"n ca!e"naa la maor"a de lo! (r#po! )o!)ato e!t7n #nido!  por lo! (r#po! $idroxilo de lo! amino7cido! !erina  treonina+ La ca!e"na en la lec$e !e enc#entra en )orma de !al c7lcica .ca!einato c7lcico1+ La ca!e"na repr repre! e!en enta ta cerc cercaa del del 889 889 al :09 :09 de la! la!  prote"na! pre!ente! en la lec$e  el 0&89 en compo!ición de la lec$e l"*#ida+ MATERIALES Y METODOS  Extracción de la caseína:

A #na #na me,c me,cla la de a(#a a(#a de!t de!til ilad adaa  lec$ lec$ee caliente !e le a(re(ó ; mL de 7cido ac-tico ;M $a!ta )ormar #n precipitado& !e )iltró  !e a(re(ó etanol para volver a )iltrar+  Determinación del punto isoeléctrico: isoeléctrico:

A /< m( de ca!e ca!e"n "naa !e le adic adicio ionó nó a(#a de!tilada& 6idróxido de pota!io  !e preparó #na !ol# !ol#ci ción ón de ;< mL& lo! c#al c#ale! e! !e di!trib#eron lo! ;< t#bo! de en!ao .; mL en cada #no1& a lo! c#ale! !e le! a(re(ó lo! vol%mene! corre!pondiente! a la tabla No+ ;&  !e midió la ab!orbancia de cada #no de

ello! a =>< nm para reali,ar la po!terior  (r7)ica .?r7)ica No+ ;1 de ab!orbancia @! p6

7cido ac-tic o <+; m

; 0 B >

<+/ ; ;+/ 0

+/  :+/ :

B+0 B+= B+: >

/ = 8

B > =

8 = >

>+0 >+/ /

T#bo RESULTADOS TESULTADOS

Y

ANALISIS

DE

 Extracción de la caseína:

Al adicionar el 7cido ac-tico a la lec$e !e ob!erva #n cambio en !# compo!ición& evidenci7ndo!e #na precipitación completa& a *#e la )a!e l"*#ida e! tra!l%cida  la )a!e !ólida completamente blanca+ Se p#ede explicar a *#e de ac#erdo al cambio de p6 experimentado por la lec$e& inicialmente entre =&/  =&8& all" la prote"na .ca!e"na1 !e enc#entra car(ada ne(ativamente !ol#bili,ada con !al c7lcica& al acidi)icar!e el p6 !e acerca al p#nto i!oel-ctrico de la prote"na& al lle(ar a  p6 aproximado a >&0  >&8 !e ne#trali,a la ca!e"na .lo! (r#po! )o!)ato! !e protonan1& a!" !e precipita debido a *#e $a meno! rep#l!ione! intermolec#lare!& evidenci7ndo!e la !eparación de e!to! comp#e!to! por medio de den!idad a *#e la den!idad del a(#a e! ; (ml *#edando arriba por tener den!idad m7!  ba'a *#e la ca!e"na *#e e! de ;+B(ml& e!ta !eparación !e da debido a *#e c#ando la!  prote"na! en e!te ca!o la ca!e"na !e enc#entra a p6 de p#nto i!oel-ctrico !on meno! !ol#ble! en a(#a  !e da la !eparación de la  prote"na  el a(#a+ Ca0  Ca!einato  C6BCOO6 CaCOO6

Ca!e"na 

De!p#-! de precipitada la ca!e"na& !e procede a lavado para eliminar el !#ero  (ra!a! )or,ando a la parte !ol#ble de la ca!e"na con la lacto!a a cri!tali,ar+

 Determinación del punto isoeléctrico:

Con la preparación previa de la! !i(#iente! !ol#cione! !e prepararon la !ol#ción para medir !# corre!pondiente ab!orbancia2

7cido ac-tic o <+<; m

acetat o de !odio <+;m

 p6 apro x+

: : 0 /+;  = > /+/ ;< : 0 =+; LANC 0 : > O Tabla No+ ;+ Fracción para preparación de !ol#cione! !e(%n !#! componente! a p6 aproximado+ Se obt#vieron corre!pondiente! ab!orbancia de di)erente! p6 en .;<1 a =>< nm2

lo! !i(#iente! re!#ltado! a la medición de la la m#e!tra de ca!e"na a di)erente! t#bo! de en!ao

 p6 T#bo Experimenta Ab!orbancia l ; 0&:; <&<:; 0 B&<; <& > B&0; <&<<0 / B&B/ G<&<<> = B&/> <&<<: 8 B&:/ <&<;< : >&;: <&<;>  /&0< <&<>< ;< 8&/ <&<;; Tabla No+ 0 Medida! de la! ab!orbancia! de la ca!e"na a di)erente! p6 en !ol#ción+

Con lo! anteriore! dato! !e reali,ó #na (r7)ica  p6 @! Ab!orbancia& en la *#e !e m#e!tra el comportamiento de la! !ol#cione!2

ale'ado! a !# p#nto i!oel-ctrico& en el t#bo *#e !e ob!erva #na li(era precipitación e!t7 indicando *#e la prote"na !e $a in!ol#bili,ado+

pH Vs absorbancia 0.1 0.05 0 2

3

4

5

6

7

8

-0.05

?r7)ica No ;+ P6 @! ab!orbancia

Se ob!erva la di!min#ción de la actividad de la prote"na .ca!e"na1 con re)erencia a !# p6 debido a *#e c#anto e!t7 a p6 ale'ado! de !#  p#nto i!oel-ctrico !e comporta di)erente& i(#al !e p#ede notar en !# ine!tabilidad de!p#-! de pa!ar por el p#nto en *#e !#! car(a! !on ne#tra!+

Derivada de absorbancia 15 10 5 0

2

3

4

5

6

7

8

?r7)ica No+ 0 derivada de ab!orbancia Se(%n la (r7)ica el p#nto i!oel-ctrico !e enc#entra en ./&01& a *#e !e p#ede ob!ervar #n a#mento de la ab!orbancia por re!pecto al  p6+

Al utiliar un porcenta!e de error tene"os #ue$

de error

=

de error

=

teorico experimental teorico −

4,7

5,2

−

4,7

× 100 10,6 =

La pr#eba para determinar el p#nto i!oel-ctrico de la ca!e"na no e! aceptable& a *#e el porcenta'e indica *#e !e $icieron errore! en el proce!o pero *#e !on aceptable!& a *#e e!t7n cerca del ran(o en *#e precipita la ca!e"na+ la! !ol#cione! de acetato de !odio  7cido ac-tico al <+;  <+<; !e #!aron como !ol#cione! amorti(#adora! *#e permitieron identi)icar la prote"na a *#e la ca!e"na !e !ol#bili,a )7cilmente en valore! de p6

CONCLUSIONES

Se lo(ró la debida !eparación de la prote"na de la lec$e .ca!e"na1 con el proce!o de acidi)icación+ Se determinó el p#nto i!oel-ctrico experimental de la ca!e"na ./&01 con la interpretación de la (r7)ica de p6 @! Ab!orbancia Se evidenció error en el procedimiento de medición de la! ab!orbancia! a *#e el  porcenta'e de error alcan,a el ;<9+ Se adoptaron conocimiento! teórico!  pr7ctico! con re!pecto a la! prote"na!+



"I"LIOGRA#IA

Le$nin(er principio! de bio*#"mica+ Nel!on& David L+& Mic$ael M+ Cox+ Fi!ico*#"mica de mol-c#la!+ Extracción de ca!e"na  determinación de p#nto i!oel-ctrico+ Licenciat#ra de iotecnolo("a+