INGENIERIA QUIMICA Y BIOQUIMICADescripción completa
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HPLC, KCKT, prosedur, sampel preparation
hplc
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26.1 Defina a) Eluci Elu ción ón Es un proce roceso so en el cual cual las las espe especi cies es son son lava lavada das s a trav través és de una una colu column mna a cromatográfica por el flujo o la adición del solvente fresco. b) Fase Fas e móvil móv il La fase móvil en cromatografía es el que los movimientos encima o a través de una fase inmóvil que se fija en su lugar en una columna o en la superficie de una placa plana. c) Fase estacionar estac ionaria ia La fase estacionaria en una columna cromatográfica es un sólido o líquido se fija en su lugar. La fase móvil entonces pasa encima o a través de la fase estacionaria. d) Constante Const ante de distribu dist ribución ción La constante distribución en cromatografía cromatografía es la relación de la concentración del analito en la fase estacionaria a su concentración !actividad) en la fase móvil cuando e"iste equilibrio entre las dos fases. e) #iempo de retención reten ción El tiempo de retención para un analito es el intervalo de tiempo entre su in$ección en una columna $ la aparición de su pico en el otro e"tremo de la columna. f)
Factor Fact or de retención reten ción
El factor % de retención se define por la ecuación&
k = K A V S / V M 'onde K A es la constante de distribución de la especie
A
(
V S $
V M son los
volmenes de las fases estacionarias $ móviles( respectivamente. g) Factor Fact or de selectiv selec tividad idad El factor factor de selec selectiv tivida idad d * de una una colum columna na +acia +acia las especi especies es , $ - es dada dada por por
α = K B / K A ( donde
K B
fuertemente fuertemente sostenidas sostenidas $
es la consta constante nte de distri distribu bució ción n de las las especi especies es más
K A es la constante de distribución de las especies menos
fuertemente sostenidas. +) ,ltura ,ltur a de pico La altur altura a 2
H
de la placa de una columna cromatográfica se define por la relación
H =σ / L dond donde e
2
σ es la variana obtenida de la /aussiana en forma de pico
cromatográfico $ L es la longitud de la columna en centímetros. i)
'ifusión 'ifu sión longitudi long itudinal nal
Es una fuente de banda ampliar en una columna en el cual un soluto difunde desde el centro de concentración de la banda a las regiones más diluidas en ambos lados. j)
'ifusión en remolino
Es un fenómeno en el cual las moléculas de un analito llegan al final de una columna en diferentes momentos como consecuencia de viajar a través de la columna por las vías que difieren en longitud. %) 0esolución de la columna La resolución ecuación
Rs
de una columna +acia dos especies
Rs=2 ΔZ /( W A + W B ) donde
entre los picos de las dos especies( $
ΔZ
W A
A
$
B
está dada por la
es la distancia !en unidades de tiempo) $
W B son las anc+uras !también en
unidades de tiempo) de las cumbres en sus bases. l)
Elu$ente
El elu$ente en cromatografía es la nueva fase móvil que lleva el analito a través de la columna. 26.4 ¿Cuáles son las principales diferencias entre la cromatografía gas-líquido y liquido-liquido? /as1líquido Fase móvil & gas La fase estacionaria es líquida $ los analitos se separan mediante reparto
Líquido1liquido Fase móvil & liquida 2uede separar macromoléculas $ especies iónicas( $ gran variedad de grupos poli funcionales de alto peso molecular El desplaamiento de la F3 se realia por Fase móvil interactiva $ fase estacionaria presión activa La muestra se in$ecta mediante una 4o está limitada por la volatilidad jeringa en una cámara de vaporiación 5sa como FE un compuesto orgánico La separación ocurre por la interacciones polimérico de baja volatilidad especificas entre las moléculas de la muestra con la F3 $ FE Componentes& gas portados( sistema de La FE puede ser variada ( lo que permite in$ección de muestras( columna( detector( una ma$or interacción selectiva $ más registrador probabilidad de separación ,plicaciones& separación de muestras ,plicaciones& fármacos( productos de la orgánicas complejas( técnica mu$ limitada industria química( medicina clínica( química forense( purificación $ separación etc. 26.. ¿Cuáles son las principales diferencias entre la cromatografía líquido ! líquido y líquido ! s"lido?
En la cromatografía líquido1líquido( la fase estacionaria es un líquido que está inmoviliado por adsorción o unión química a una superficie sólida. Los equilibrios que causa la separación son equilibrios de distribución entre dos fases líquidas inmiscibles. En la cromatografía líquido1sólido( la fase estacionaria es una superficie sólida $ los equilibrios implicados son equilibrios de adsorción. 26.6 ¿#u$ %aria&les tienen más pro&a&ilidad de afectar al factor de selecti%idad ' correspondiente a un par de analitos? La composición de la fase móvil( la temperatura de la columna( la composición de la fase estacionaria( $ las interacciones químicas entre la fase estacionaria 26.(. )*plique la manera en que se puede manipular el factor de retenci"n de un soluto. En /C( el factor de retención se varía mediante el cambio de la temperatura de la columna como se +ace en la programación de la temperatura. En LC( las variaciones se logran mediante la alteración de la composición del disolvente como en el gradiente de elución. 26.+ ¿Descri&e un m$todo para determinar el n,mero de platos de una columna? El nmero de platos en una columna se puede determinar midiendo el tiempo de retención t0 $ la anc+ura de un pico en su base !6). Entonces el nm. 'e placas 4789!t0:6) ; 26.. encione dos m$todos generales para me/orar la resoluci"n de dos sustancias en la columna cromatográfica. La disminución de las anc+uras de los picos aumentará resolución será el aumento de la separación de los picos. El aumento de la separación se puede +acer por el alargamiento de la columna para aumentar el nmero de placas o el aumento de la selectividad. 26.11 ¿#u$ es la eluci"n de gradiente? La elución de gradiente es un método que se lleva a cabo en cromatografía de líquido la cual consisten en que la fase móvil se va cambiando continuamente o en pasos con el fin de optimiar las separaciones. D03. 050 26.14 Longitud 'e 0elleno #asa 'e Flujo 7elocidad de la 89 s 7elocidad de la 8)9
;<.= cm >.?8? mL:min 8.?= mL >.89
5n cromatograma de una mecla de las especies ,( -( C $ ' proporciona los siguientes datos #iempo de retención( min ,nc+ura del pico en la base !6)( min 4o 0etenida ?.8 1 , @.< >.<8 8?.? 8.>= C 8<.8 8.89 ' ;8.9 8.=; : (.61 4.;6
#3
tiempo
muerto
5A
coeficiente
de
elución
26.14. 5os siguientes datos corresponden a una columna cromatográfica de líquidos< 5ongitud del relleno asa de flu/o
24.( cm
V M
>.?8? mL:min 8.?= mL
V S
>.89< mL
5n cromatograma de una mecla de las especies ,( -( C $ ' proporciona los siguientes datos& iempo de retenci"n= min
0nc>ura del pico en la &ase
( W )
= min
o retenida
?.8
>.<8
0
@.<
8.>=
8?.?
8.89
C
8<.8
8.=;
D
;8.9
8.=;
Calcule a) El nmero de platos para cada pico Be emplea la siguiente ecuación&
G;>cromatografia.pdf !0ecuperado el 8@ de nov del ;>8@) +ttp&::.fao.org:docrep:field:>>?:ab@.+tm !0ecuperado el 8@ de nov del ;>8@) +ttp&::.ibt.unam.m":computo:pdfs:met:Cromatografia.pdf !0ecuperado el 8@ de nov del ;>8@) +ttp&::es.scribd.com:doc:889<;<8=:Cromatografia1Fundamentos1$1 ,plicacionesHscribd !0ecuperado el 8@ de nov del ;>8@) +ttp&::rua.ua.es:dspace:bitstream:8>><@:D;<9:=:#;cromagraf.pdf !0ecuperado el 8@ de nov del ;>8@) +ttp&::;.ulpgc.es:+ege:almacen:donload:?:??9>:separacionesIporIcromat ografiaI8.pdf !0ecuperado el 8@ de nov del ;>8@)
