Efecto Del Ph Sobre La Actividad de La Amilasa Salival

TECNOLOGICO DE ESTUDIOS SUPERIORES DE ECATEPEC DIVISION DE INGENIERIA: QUIMICA Y BIOQUIMICA. ESPINOSA RAMIREZ ANGEL

EFECTO DEL PH SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA AMILASA SALIVAL INTRODUCCION: Se verá el efecto del PH sobre la actividad de la enzima amilasa salival bajo las condiciones establecidas, en presencia del almidón. OBJETIVO GENERAL: Saber la actividad que tiene la amilasa salival sobre el polisacárido y si tiene relación con el PH. OBJETIVOS ESPECIFICOS: 1) Conocer la reacción existente entre la amilasa y el polisacárido. 2) Conocer el comportamiento del almidón de manera pura. 3) Conocer el PH y temperatura optima con la que la actividad enzimática tenga mejor rendimiento. MARCO TEORICO: A) Propiedades del almidón. El almidón es el polisacárido de reserva más abundante en vegetales y constituye la Principal fuente de nutrición glicídica para la humanidad. Los almidones están Constituidos por una mezcla de dos componentes: -a-amilosa: cadena lineal de unas 200 unidades de D-glucosa unidas por enlaces a (1®4). -amilopectina: cadena lineal de D-glucosas unidas por enlaces tipo a(1®4) con Numerosas ramificaciones a (1®6). El polímero contiene unas 1000 unidades de Glucosa. La proporción en que se mezclan la a-amilasa y la amilopectina para formar el almidón depende de la especie vegetal en que aparece el almidón. La a-amilosa se disuelve fácilmente en agua, adquiriendo una estructura secundaria Característica, de forma helicoidal, en la que cada vuelta de hélice comprende seis Unidades glucosa. Esta estructura secundaria, en la que los grupos hidroxilo quedan Hacia afuera, permite que el iodo, al penetrar en el interior del helicoide, confiera a la Disolución una coloración azul violácea intensa característica que permite la Identificación positiva de trazas de almidón. Como esta coloración no es resultado de Ninguna interacción covalente, el calentamiento origina la desestabilización del Helicoide y la pérdida de color, que se recupera al enfriar lentamente la disolución. La Variación en el pH tiene un efecto análogo. Página 1 de 4


B) Hidrólisis del almidón. El almidón puede hidrolizarse por medios químicos o enzimáticos. La ebullición con ácidos o álcalis hidroliza aleatoriamente los enlaces glucosídicos entre unidades de glucosa, dando polisacáridos de longitud intermedia denominados dextrinas, cada vez menores hasta la obtención de unidades de glucosa individuales. Los compuestos que se obtienen en la hidrólisis del almidón y el color que producen con el iodo son los siguientes: -Almidón (azul). -Amilodextrinas (violeta). -Eritrodextrinas (rojo). -Acrodextrinas (incoloro*). -Maltosa (incoloro*). -Glucosa (incoloro*). * Tener en cuenta el ligero color amarillo propio del iodo. El almidón también puede hidrolizarse enzimáticamente. Uno de los enzimas que hidrolizan el almidón es la amilasa, que se halla presente en el jugo pancreático y la saliva. Este enzima ataca al azar los enlaces a (1®4) del interior de la cadena. Así, rinde finalmente unidades de glucosa libre y maltosa. La amilasa no ataca los enlaces a (1®6), base de las ramificaciones de la amilopectina. Estos enlaces pueden ser hidrolizados por otro enzima desramificador. La ptialina o amilasa salival es una proteína enzimática presente en la saliva. Como todo enzima, la acción que ejerce sobre su sustrato (almidón) depende de una serie de parámetros: pH, temperatura, concentración de enzima... REACTIVOS Y MATERIALES:

REACTIVOS Amilasa salival 1:10 Solución de lugol Reactivo de benedict

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MATERIALES Tripie Baño María Termómetro (100°c) Gradilla de asbesto Mechero Bunsen 4 tubos de ensaye Piceta Matraz aforado (50 ml) 4 vasos de precipitados Papel filtro Medidor de PH Embudo


Agitador Pipeta graduada (10 ml) Propipeta

METODOLOGIA:

OBTENCION DE LA ENZIMA Tras enjuagar la boca se mastica un trozo de papel filtro para la estimulación de saliva, los líquidos segregados se agregan a cada tubo de ensaye

PREPARACION DE LAS SOLUCIONES Diluir la saliva obtenida con agua destilada 1:10

Diluir el almidón con agua destilada al 2%

Agregar las soluciones a un vaso de precipitados, y otro solo con almidón, medir el PH inicial.

Llevar los tubos de ensaye al baño María y termostatizado a 30°c durante 30 min.

Después del tiempo transcurrido sacar los tubos y efectuar las pruebas de lugol y benedict y medir el PH final. Página 3 de 4


CALCULOS Y RESULTADOS: A continuación se muestran los resultados del muestreo de las enzimas de amilasa salival: TUBO PH

1 1

2 12

3 7

4 7

ANALISIS DE LOS RESULTADOS: En en el muestreo arrojo el pH de cada uno delos tubos, en el que se aprecia que el tubo uno tiene un PH 1 por lo que es un PH muy acido porque contiene HCL. Para el tubo 2 en contrario el PH es bastante básico por que la solución que se aplico es NAOH. Para el tubo 3 el PH es básico por que la solución solo contiene agua. Para el tubo 4 el PH se mostró de igual manera básica por el almidón no tubo una solución en que reaccionara. CONCLUSION: El efecto que se mostró en el PH fue básico, ácido y neutro, pero la actividad enzimática se mostró sin ninguna variación. La reacción existente entre la amilasa salival y el almidón es: que la enzima hidroliza al almidón en los enlaces alfa glucosídicos 1-4 ya que no puede atacar los enlaces 1-6, entonces la hrolisacion del almidón origina el monosacárido glucosa más el disacárido maltosa. Entonces la enzima actúa solo como precursor de la reacción para que tenga una mayor velocidad de reacción haciendo que la energía de activación sea menor. En cuanto a la temperatura es óptima a 37°c porque es la temperatura corporal por que a mayor temp. La enzima se desnaturaliza. Para la prueba de ligol solo sirve como identificador de almidon ya que la presencia de este la solución se tiñe de color amarillento, y si tiene poco almidon entonces el color es mas tenue.

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Efecto Del Ph Sobre La Actividad de La Amilasa Salival

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