I.
Penapisan Fitokimia
Penapisan fitokimia merupakan salah satu pendekatan dalam penelitian tumbuhan obat utuk mendeteksi senyawa tumbuhan berdasarkan golongan. Sebagai informasi awal dalam mengetahui senyawa kimia apa yang mempunyai aktivitas biologi dari suatu tanaman. Penapisan fitokimia yang dilakukan terhadap serbuk simplisia dilakukan untuk mengetahui kandungan metabolit sekunder yang terkandung pada simplisia tersebut. Pengujian ini merupakan pengujian pendahuluan yang biasa dilakukan sebelum dilakukan pengujian- pengujian lanjutan. Adanya pengetahuan mengenai kandungan senyawa metabolit sekunder yang terkandung didalam simplisia, akan memudahkan dalam identifikasi kemungkinan aktivitas dari simplisia yang digunakan (Harbone, 1977). Senyawa kimia berdasarkan asal biosintesis, sifat kelarutan, gugus fungsi digolongkan menjadi : Senyawa fenol, bersifat hidrofil, biosintesisnya berasal dari asam shikimat Terpenoid, berasal dari lipid, biosintesisnya berasal dari isopentenil pirofosfat Asam organik, lipid dan sejenisnya, biosintesisnya berasal dari asetat Senyawa nitrogen, bersifat basa dan bereaksi positif terhadap ninhidrin atau dragendorf Gula dan turunannya Makromolekul, umumnya memiliki bobot molekul yang tinggi Sedangkan berdasarkan biogenesisnya senyawa bahan alam dikelompokkan menjadi : Asetogenin : flavonoid, lipid, lignan, dan kuinon Karbohidrat : monosakarida, oligosakarida, dan polisakarida Isoprenoid : tepenoid, steroid, karotenoid Senyawa mengandung nitrogen : alkaloid, asam amino, prote in, dan nukleat
(Ditjen POM, 2000) a.
Alkaloid Sejumlah sampel dalam mortir, dibasakan dengan ammonia sebanyak 1 mL, kemudian ditambahkan kloroform dan digerus kuat. Cairan kloroform disaring, filtrat ditempatkan dalam tabung reaksi kemudian ditambahkan HCl 2N, campuran dikocok, lalu dibiarkan hingga terjadi pemisahan. Dalam tabung reaksi terpisah : Filtrat 1 : sebanyak 1 tetes larutan pereaksi Dragendorff diteteskan diteteskan ke dalam filtrat, adanya alkaloid ditunjukan dengan terbentuknya endapan atau kekeruhan berwarna hingga coklat. Filtrat 2 : sebanyak 1 tetes larutan pereaksi Mayer diteteskan ke dalam filtrat, adanya adanya alkaloid ditunjukan dengan terbentuknya endapan atau kekeruhan berwarna putih. Filtrat 3 : sebagai blangko atau kontrol negatif.
b.
Flavonoid
1
Sejumlah sampel digerus dalam mortir dengan sedikit air, pindahkan dalam tabung reaksi, tambahkan sedikit logam magnesium dan 5 tetes HCl 2N, seluruh campuran dipanaskan selama 5-10 menit. Setelah disaring panas-panas dan filtrat dibiarkan dingin, kepada filtrat ditambahkan amil alkohol, lalu dikocok kuat-kuat, reaksi positif dengan terbentuknya warna merah pada lapisan amil alkohol. c.
Tanin dan Polifenol Sebanyak 1 gram sampel ditambahkan 100 mL air panas, dididihkan selama 5 menit kemudian disaring. Filtrat sebanyak 5 mL dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambahkan pereaksi besi (III) klorida, timbul warna hiijau biru kehitaman bila ada polifenol dan ditambahkan gelatin akan timbul timbul endapan putih bila ada tanin.
d.
Steroid dan Triterpenoid Serbuk kulit buah manggis ditambahkan eter, kemudian fase fas e eter diuapkan dalam cawan penguap hingga kering, pada residu ditetesi pereaksi LiebermanBurchard. Terbentuknya warna ungu menunjukkan kandungan triterpenoid sedangkan bila terbentuk warna hijau biru menunjukan adanya adanya senyawa steroid.
e.
Kuinon Sampel ditambahkan dengan air, dididihkan selama 5 menit kemudian disaring dengan kapas. Pada filtrat ditambahkan larutan NaOH 1N. Terjadinya warna merah menunjukkan bahwa dalam bahan uji mengandung senyawa golongan kuinon.
f. Saponin Sampel ditambahkan dengan air, didihkan selama 5 menit kemudian kocok dengan kuat. Reaksi positif positif ditunjukan dengan adanya busa ± 1 cm, tidak hilang selama 30 detik dan busa tidak hilang dengan penambahan HCl (Ditjen POM, 2000).
II.
Ekstraksi
Ekstraksi adalah suatu proses pemisahan kandungan senyawa kimia dari jaringan tumbuhan maupun hewan dengan menggunakan penyari tertentu. Adala beberapa metode ekstraksi, yaitu : a. Cara dingin 1. Meserasi Meseras adalah proses pengekstrakan simplisia dengan d engan menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperat ur ruangan (kamar). Remeserasi berarti dilakukan pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan meserat pertama dan seterusnya. 2. Perkolasi Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai t erjadi penyaringan sempurna yang umumnya dilakukan pada temperatur kamar. kamar. Proses perkolasi terdiri dari tahaan pengembangan bahan , tahap meserasi 2
antara, tahap perkolasi sebenarnya (penetesan/penampungan ekstrak), terusmenerus sampai diperoleh ekstrak (perkolat) b. Cara panas 1. Refluks Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titi k didihnya selama waktu tertentu dan dalam jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan adalanya pendingin balik 2. Digesti Digesti adalah meserasi dengan pengadukan kontuniu dari temperatur kamar yaitu pada 40-50˚ 40-50 ˚ C 3. Infus Infus adalah ekstraksi menggunakan pelarut air pada temperatur penangas air (bajana infus tercelup dalam penangas air mendidih, mendidi h, temperatur terukur 90˚ 90˚ C) selama 15 menit. 4. Dekok Dekok adalah ekstraksi dengan pelarut air temperatur 90 ˚C selama ˚C selama 30 menit (Simanjuntak, 2008) 5. Sokletasi Sokletasi merupakan penyarian simplisia secara berkesinambungan, cairan penyari dipanaskan sehingga menguap, uap cairan penyari terkondensasi menjadi molekul-molekul air oleh pendingin balik dan turun menyari simplisia dalam klongsong dan selanjutnya masuk kembali ke dalam labu alas bundar setelah melewati pipa sifon. Keuntungan metode ini adalah :
Dapat digunakan untuk sampel dengan tekstur yang lunak dan tidak tahan terhadap pemanasan secara langsung. Digunakan pelarut yang lebih sedikit.
Pemanasannya dapat diatur. Kerugian dari metode ini :
Karena pelarut didaur ulang, ekstrak yang terkumpul pada wadah di sebelah bawah terus-menerus dipanaskan sehingga dapat menyebabkan reaksi peruraian oleh panas. Jumlah total senyawa-senyawa yang diekstraksi akan melampaui kelarutannya dalam pelarut tertentu sehingga dapat mengendap dalam wadah dan membutuhkan volume pelarut yang lebih banyak untuk melarutkannya. Bila dilakukan dalam skala besar, mungkin tidak cocok untuk menggunakan pelarut dengan titik didih yang terlalu tinggi, seperti metanol atau air, karena seluruh alat yang berada di bawah komdensor perlu berada pada temperatur ini untuk pergerakan uap pelarut yang efektif. 3
(Sudjadi, 1988) III.
Fraksinasi
Fraksinasi adalah suatu proses pemisahan senyawa – senyawa – senyawa senyawa berdasarkan tingkat kepolaran. Jumlah dan senyawa yang dapat dipisahkan menjadi fraksi berbeda – beda tergantung pada jenis tumbuhan. Pada prakteknya dalam melakukan fraksinasi digunakan dua metode yaitu dengan menggunakan corong pisah dan kromatografi kolom. Destilasi bertingkat atau fraksinasi adalah proses pemisahan destilasi ke dalam bagian-bagian dengan titik didih makin lama makin tinggi yang selanjutnya pemisahan bagian-bagian ini dimaksudkan untuk destilasi ulang. Destilasi bertingkat merupakan proses pemurnian zat/senyawa cair dimana zat pencampurnya berupa senyawa cair yang titik didihnya rendah dan tidak berbeda jauh dengan titik didih senyawa yang akan dimurnikan. Dengan perkataan lain, destilasi ini bertujuan untuk memisahkan senyawa-senyawa dari suatu campuran yang komponen-komponennya memiliki perbedaan titik didih relatif kecil. Destilasi ini digunakan untuk memisahkan campuran aseton-metanol, karbon tetra klorida-toluen, dll. Pada proses destilasi bertingkat digunakan kolom fraksinasi yang dipasang pada labu destilasi. Tujuan dari penggunaan kolom ini adalah untuk memisahkan uap campuran senyawa cair yang titik didihnya hampir sama/tidak begitu berbeda. Sebab dengan adanya penghalang dalam kolom fraksinasi menyebabkan uap yang titik didihnya sama akan sama-sama menguap atau senyawa yang titik didihnya rendah akan naik terus hingga akhirnya mengembun dan turun sebagai destilat, sedangkan senyawa yang titik didihnya lebih tinggi, jika belum mencapai harga titik didihnya maka senyawa tersebut akan menetes kembali ke dalam labu destilasi, yang akhirnya jika pemanasan dilanjutkan terus akan mencapai harga titik didihnya. Senyawa tersebut akan menguap, mengembun dan turun/menetes sebagai destilat. Macam – Macam – macam macam proses fraksinasi: a. Proses Fraksinasi Kering (Winterization) Fraksinasi kering adalah suatu proses fraksinasi yang didasarkan pada berat molekul dan komposisi dari suatu material. Proses ini lebih murah dibandingkan dengan proses yang lain, namun hasil kemurnian fraksinasinya rendah. b. Proses Fraksinasi Basah (Wet (Wet Fractination) Fractination) Fraksinasi basah adalah suatu proses fraksinasi dengan menggunakan zat pembasah (Wetting Agent ) atau disebut juga proses Hydrophilization proses Hydrophilization atau detergent proses. detergent proses. Hasil fraksi dari proses ini sama dengan proses fraksinasi kering. c. Proses Fraksinasi dengan menggunakan Solvent (pelarut)/ Solvent Fractionation Ini adalah suatu proses fraksinasi dengan menggunakan pelarut. Dimana pelarut yang digunakan adalah aseton. Proses fraksinasi ini lebih mahal dibandingkan dengan proses fraksinasi lainnya karena menggunakan bahan pelarut. d. Proses Fraksinasi dengan Pengembunan ( Fractional ( Fractional Condentation) Condentation) 4
Proses fraksinasi ini merupakan suatu proses fraksinasi yang didasarkan pada titik didih dari suatu zat / bahan sehingga dihasilkan suatu produk dengan kemurnian yang tinggi. Fraksinasi pengembunan ini membutuhkan biaya yang cukup tinggi namun proses produksi lebih cepat dan kemurniannya lebih tinggi. (Haznawati, 2012)
IV.
KLT Preparatif
KLT Preparatif dapat digunakan untuk memisahkan bahan dalam jumlah gram, namun sebagian besar pemakaian hanya dalam jumlah milligram. Seperti halnya KLT secara umum, KLT Preparatif juga melibatkan fase diam dan fase gerak. Dimana fase diamnya adalah sebuah plat dengan ukuran ketebalan bervariasi. Untuk jumlah sampel 10100 mg, dapat dipisahkan dengan mengunakan KLT Preparatif dengan adsorben silika gel atau aluminium oksida, dengan ukuran 20x20 cm dan tebal 1 mm, jika tebalnya di dua kalikan, maka banyaknya sampel yang dapat dipisahkan bertambah 50%, seperti halnya KLT biasa, adsorben yang paling umum digunakan pada KLT Preparatif adalah silika gel (Kristanti, 2008). Sebelum ditotolkan pada plat KLT Preparatif, sampel dilarutkan terlebih dahulu dalam sedikit pelarut. Pelarut yang baik adalah pelarut yang mudah menguap, misalnya nheksana, diklorometana atu etil asetat. Karena jika pelarut yang digunakan tidak mudah menguap, maka akan terjadi pelebaran pita. Konsentrasi sampel juga sebaiknya hanya 510%. Sampel yang ditotolkan harus berbentuk pita yang sesempit mungkin karena baik tidaknya pemisahan juga bergantung pada lebarnya pita (Kristanti, 2008). Setelah plat KLT Preparatif dielusi, pita yang kedudukannya telah diketahui dikerok dari plat. Selanjutnya senyawa harus diekstraksi dari adsorben dengan pelarut yang sesuai (5 ml pelarut untuk 1 gram adsorben). Diupayakan untuk menggunakan pelarut yang paling nonpolar yang mungkin. Harus diperhatikan bahwa makin lama senyawa kontak dengan adsorben, maka makin besar kemungkinan senyawa tersebut mengalami peruraian. Selanjutnya ekstrak yang diperoleh disaring menggunakan corong berkaca masir atau menggunakan membran. Kelebihan dari penggunaan KLT Preparatif adalah biaya yang digunakan murah dan memakai peralatan paling dasar. Sementara kekurangannya antara lain : adanya kemungkinan senyawa yang diambil dari plat adalah senyawa beracun, waktu yang diperlukan dalam proses pemisahan cukup panjang ,adanya pencemar setelah proses ekstraksi senyawa dari adsorben dan biasanya rendemen yang diperoleh berkurang dari 40%-50% dari bahan awal (Kristanti, 2008).
V.
Uji Kemurnian Uji kemurnian dilakukan dengan kromatografi lapis tipis pada berbagai polaritas fase gerak. Jika isolat tetap menunjukkan noda tunggal pada kromatografi lapis tipis, analisis dilanjutkan dengan spektrofotometer UV dan IR. Kromatografi Lapis Tipis 5
(KLT) merupakan cara pemisahan campuran senyawa menjadi senyawa murninya dan mengetahui kuantitasnya. Kromatografi juga merupakan analisis cepat yang memerlukan bahan sangat sedikit, baik penyerap maupun maupun cuplikannya. KLT dapat dipakai dengan dua tujuan. Pertama, dipakai selayaknya sebagai metode untuk mencapai hasil kualitatif, kuantitatif atau preparatif. Kedua, dipakai untuk menjajaki sistem pelarut dan sistem penyangga yang akan dipakai dalam kromatografi kolom atau kromatografi cair kinerja tinggi KLT dapat digunakan untuk memisahkan senyawa – senyawa – senyawa senyawa yang sifatnya hidrofobik seperti lipida – lipida – lipida lipida dan hidrokarbon yang sukar dikerjakan dengan kromatografi kertas. KLT juga dapat berguna untuk mencari eluen untuk kromatografi kolom, analisis fraksi yang diperoleh dari kromatografi kolom, identifikasi senyawa secara kromatografi dan isolasi senyawa murni skala kecil. Pelarut yang dipilih untuk pengembang disesuaikan dengan sifat kelarutan senyawa yang dianalisis. Bahan lapisan tipis seperti silika gel adalah senyawa yang tidak bereaksi dengan pereaksi – pereaksi yang lebih reaktif seperti asam sulfat. Data yang diperoleh dari KLT adalah nilai Rf yang berguna untuk identifikasi senyawa. Nilai Rf untuk senyawa murni dapat dibandingkan dengan nilai Rf dari senyawa standar. Nilai Rf dapat didefinisikan sebagai jarak yang ditempuh oleh senyawa dari titik asal dibagi dengan jarak yang ditempuh oleh pelarut dari titik asal. Oleh karena itu bilangan Rf selalu s elalu lebih l ebih kecil dari 1,0. Pelaksanaan KLT
1.
Fase Diam
Fase diam yang digunakan dalam KLT merupakan penjerap berukuran kecil dengan diameter partikel antara 10-30 10-30 μm. Semakin kecil ukuran rata-rata rata-rata partikel fase diam dan semakin sempit kisaran ukuran fase diam, maka semakin baik kinerja KLT dalam hal efisiensi dan resolusinya. Penjerap yang paling sering digunakan adalah silika dan serbuk selulosa,
sementara
mekanisme
sorpsi
yang
utama
pada
KLT
adalah adsorpsi dan partisi dan partisi (Gandjar (Gandjar & Rohman, 2007). 2.
Fase Gerak
Fase gerak pada KLT dapat dipilih dari pustaka, tetapi lebih sering dengan mencoba-coba karena waktu yang diperlukan hanya sebentar. Sistem yang paling sederhana ialah campuran 2 pelarut organik karena daya elusi campuran kedua pelarut ini dapat mudah diatur sedemikian rupa sehingga pemisahan dapat terjadi secara optimal. Berikut adalah beberapa petunjuk dalam memilih dan mengoptimasi mengoptimasi fase gerak : a.
Fase gerak harus mempunyai kemurnian yang sangat tinggi karena KLT
merupakan teknik yang sensitif. b.
Daya elusi fase gerak harus diatur sedemikian rupa sehingga harga Rf
terletak antara 0,2-0,8 untuk memaksimalkan pemisahan. c.
Untuk pemisahan dengan menggunakan fase diam polar seperti silika gel,
polaritas fase gerak akan menentukan kecepatan migrasi solut yang berarti juga menentukan nilai Rf. Penambahan pelarut yang bersifat sedikit polar seperti dietil 6
eter ke dalam pelarut non polar seperti metil benzene akan meningkatkan harga Rf secara signifikan (Gandjar & Rohman, 2007). Tabel 2.1. 2.1. Beberapa Sistem Pemisahan dengan dengan KLT KLT dari Bahan Alam Alam Eluen Heksan : Etil asetat Petrol : Dietileter
Fase Diam Silika Gel Silika Gel
Petrol : Kloroform
Silika Gel
Toluen : Etil asetat : Asam asetat (TEA) Kloroform : Aseton
Silika Gel Silika Gel
n-Butanol : Asam Asetat : Air Metanol : Air
Silika Gel
Asetonitril : Air Metanol : Air
C18 Selulosa
3.
C18
Keterangan Sistem umum yang digunakan Sistem umum yang digunakan untuk senyawa nonpolar seperti terpen dan asam lemak Berguna untuk pemisahan derivat asam sinamat dan kumarin Komposisi 80:18:2 80:18:2 v/v atau 60:38:2 v/v baik baik untuk pemisahan metabolit asam Sistem umum untuk produk dengan polaritas sedang Sistem polar untuk flavonoid dan glikosida Dimulai dengan metanol 100% dilanjutkan dengan penambahan konsentrasi air Sistem umum Reverse umum Reverse phase Memisahkan senyawa dengan kepolaran tinggi seperti gula dan glikosida
Penotolan Sampel
Untuk memperoleh roprodusibilitas, volume sampel yang ditotolkan paling sedikit 0,5 μl. Jika volume sampel yang ditotolkan lebih besar dari 22-10 μl, maka penotolan harus dilakukan secara bertahap dengan dilakukan pengeringan antar totolan (Gandjar & Rohman, 2007). 4.
Pengembangan
Bila sampel telah ditotolkan maka tahap selanjutnya adalah mengembangkan sampel dalam bejana kromatografi yang sebelumnya telah dijenuhi dengan uap fase gerak. Tepi bagian bawah lempeng tipis yang telah ditotoli sampel dicelupkan kedalam fase gerak kurang lebih 0,5-1 cm. Tinggi fase gerak dalam bejana harus dibawah lempeng yang telah berisi totolan sampel. Bejana kromatografi harus tertutup rapat dan sedapat mungkin volume fase gerak sedikit mungkin, akan tetapi harus mampu mengelusi lempeng sampai ketinggian lempeng yang telah ditentukan. Untuk melakukan penjenuhan fase gerak, biasanya bejana dilapisi dengan kertas saring. Jika fase gerak telah mencapai ujung dari kertas saring, maka dapat dikatakan bahwa fase gerak telah jenuh (Gandjar & Rohman, 2007). 2007). 5.
Deteksi Bercak
Deteksi bercak pada KLT dapat dilakukan secara kimia dan fisika. Cara kimia yang biasa digunakan adalah dengan mereaksikan bercak dengan suatu pereaksi melalui cara penyemprotan sehingga bercak menjadi jelas. Cara fisika yang dapat digunakan untuk menampakkan bercak adalah dengan cara pencacahan radioaktif dan fluorosensi 7
sinar ultraviolet. Fluorosensi sinar ultraviolet terutama untuk senyawa yang dapat berfluorosensi, membuat bercak akan terlihat jelas. Deteksi senyawa dilakukan dengan menggunakan detektor UV di bawah sinar UV 254 nm, indikator pada plat KLT akan memancarkan warna hijau dan pada UV 366 nm akan memancarkan warna ungu. Komponen yang menyerap cahaya pada 254 atau 366 nm akan tampak sebagai bercak gelap pada plat yang bercahaya. Metode deteksi lain adalah dengan menggunakan pereaksi semprot. Pereaksi semprot yang umum digunakan dapat dilihat pada tabel di bawah ini (Gandjar & Rohman, 2007). 2007). Tabel 2.2. Beberapa Jenis Pereaksi Semprot untuk KLT Pereaksi Komposisi semprot Vanilin asam 1 gram vanilin dalam sulfat asam sulfat pekat
Asam fosfomolibdat
Reagen Dragendorff
VI.
Perlakuan
Keterangan
Disemprot dan dipanaskan hingga muncul warna
Pereaksi umum yang digunakan. Terpen akan menghasilkan warna merah atau biru Untuk mendeteksi terpen dengan bercak biru berlatar kuning Deteksi alkaloid menghasilkan warna oranye pekat hingga merah
Asam fosfomolibdat Disemprot dan 5% b/v dalam etanol dipanaskan hingga muncul warna 10 mL larutan KI Jika reaksi tidak 40% ditambahkan spontan maka dengan 10 mL larutan diperlukan 0,85 gram bismuth pemanasan subnitrat dalam 10 mL asam asetat dan 50 mL air. Larutan tersebut diencerkan dalam 10 mL asam asetat dan 50 mL air
Isolasi Minyak Atsiri
Metode isolasi minyak atsiri dapat dilakukan dengan beberapa cara yaitu: a.
Penyulingan (destilasi) Penyulingan adalah proses pemisahan komponen berdasarkan perbedaan titik didihnya. Prinsip dasar penyulingan adalah cairan dirubah menjadi uap pada titik didihnya, kemudian uap tersebut dikondensasikan lagi ke dalam bentuk cairan dengan proses pendinginan. Penyulingan dapat dilakukan dengan bebagai cara, yaitu : a. Penyulingan dengan air b. Penyulingan dengan air dan uap c. Penyulingan dengan uap 8
b.
Ekstraksi/ Penyarian dengan Pelarut Organik (Mudah Menguap) yang Sesuai Prinsipnya adalah melarutkan minyak atsiri yang terdapat dalam simplisia dengan pelarut organik yang mudah menguap yang sesuai. Metode penyarian digunakan untuk minyak-minyak atsiri yang tidak tahan dengan pemanasan. Metode ini banyak digunakan karena rendahnya kadar minyak dalam tanaman, selain itu cara ini dianggap paling efektif karena sifat minyak atsiri yang larut sempurna di dalam bahan pelarut organik nonpolar.
c.
Enflurage Prinsipnya adalah metode perlekatan bau dengan menggunakan media lilin dan memanfaatkan aktivitas enzim yang diyakini masih aktif selama sekitar 15 hari sejak bahan minyak atsiri dipanen. Metode ini digunakan karena ada beberapa jenis bunga yang setelah setel ah dipetik enzimnya masih menunjukkan kegiatan dalam menghasilkan minyak atsiri sampai beberapa minggu, misalnya bunga melati. Diperlukan perlakuan khusus secara langsung agar tidak mengubah aktivitas enzim. Penyarian dengan Lemak Padat Biasanya untuk memperoleh minyak atsiri dari bunga-bungaan 1. Tanpa pemanasan (enfleurage) 2. Dengan lemak panas (maserasi)
d.
e.
Pemerasan Umumnya dilakukan terhadap bahan berupa buah atau kulit buah dari tanaman yang termasuk keluarga Citrus karena minyak atsirinya rusak oleh penyulingan (tidak stabil dan idak tahan pemanasan). Karena tekanan pada pemerasan, selsel yang mengandung minyak lemak pecah dan minyak atsiri keluar dan mengalir ke permukaan. Metode ini hanya cocok untuk minyak atsiri yang rendamannya relatif besar.
f.
Penyarian dengan gas CO 2 Metode berdasarkan pada kelarutan minyak atsiri yang baik dalam CO 2. (Guenther, 1990)
9
DAFTAR PUSTAKA
Ditjen POM. 2000. Metode 2000. Metode Analisis PPOM . Jakarta: Departemen Kesehatan. Gandjar, G.I dan Rohman, A. 2012. Kimia Farmasi Analisis. Analisis. Yogyakarta:Pustaka Belajar Guenther, E. 1990. Minyak Atsiri Jilid I . Jakarta : UI Press. Harborne, J.B.. 1987. Metode 1987. Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Modern MenganalisisTumbuhan . ITB Press : Bandung Haznawati. 2012. Fraksinasi. Tersedia di http://darknessthe.com/2012/01/fitokimdi http://darknessthe.com/2012/01/fitokimfraksinasi.html (diakses pada 2 Maret 2014) . Kristanti, Alfinda Novi., dkk. 2008. Buku Ajar Fitokimia. Surabaya : Airlangga University Press. Simanjuntak, M. “ Ekstraksi dan fraksinasi komponen ekstrak daun tumbuhan senduduk ( Melastoma Melastoma malabathrucum L)
serta pengujuan efek sediaan krim terhadap
penyembuhan penyembuhan luka bakar.” S, Farm skripsi. Universitas Sumatera Utara. 2008 . Sudjadi. 1988. Metode 1988. Metode Pemisahan.Yogyakarta: Pemisahan.Yogyakarta: Konsius
10
