BAB I PENDAHULUAN
A. LATAR BELAKANG Dengue adalah penyakit arbovirus endemik yang saat ini telah menjangkiti lebih dari 100 negara, baik yang terletak di daerah tropis maupun subtropis. Badan kesehatan dunia WHO memperkirakan sekitar 50-100 juta kasus infeksi virus dengue terjadi dengan 24.000 kematian kematian setiap tahunnya. Di Indonesia, Indonesia, demam berdarah dengue pertama kali di la porkan di Jakarta dan Surabaya pada tahun
1968.
Tahun-tahun
selanjutnya,
kasus
demam
berdarah
dengue
berfluktuasi jumlahnya dan cenderung meningkat dan daerah yang terjangkit semakin luas. Awal tahun 2004, Indonesia kembali diguncang wabah dengue, lebih dari 10.000 kasus terjadi di Jakarta dengan angka kematian dilaporkan 603 orang. Kemudian pada tahun 2006, insiden DBD adalah 52,48 per 100.000 penduduk dan meningkat menjadi 71,78 per 100.000 penduduk pendudu k pada tahun 2007. Di Sumatera Barat, kasus DBD tahun 2006 adalah 23,9 per 100.000 penduduk dan meningkat tajam menjadi 48,05 per 100.000 penduduk pada tahun 2007. Kekhawatiran sekarang adalah apabila virus dengue menjadi semakin ganas sehingga menyebabkan pandemi penyakit yang lebih mematikan sementara vaksin yang efektif belum berhasil dikembangkan. Alasan lain adalah masalah sanitasi lingkungan yang buruk, populasi penduduk padat, dan mobilitas tinggi. Semua ini merupakan kondisi ideal bagi virus untuk mempertahankan dan memperluas mata rantai siklusnya melalui perantara vektor (Aedes aegypti dan Aedes albopictus) sehingga memberikan peluang virus berevolusi menghasilkan varian-varian baru yang semakin ganas. Gejala awal infeksi virus dengue sering tidak khas sehingga terjadi keterlambatan diagnosis. Perjalanan penyakit bisa sangat cepat dalam beberapa
hari, bahkan dalam hitungan jam penderita bisa masuk dalam keadaan kritis. Untuk menghindari keterlambatan diagnosis, perlu diketahui deteksi dini terhadap infeksi virus ini. Saat ini, telah dikembangkan suatu pemeriksaan baru terhadap
antigen
nonstruktural
1
(NS1)
yang
dapat
mendeteksi
atau
mendiagnosis infeksi virus dengue lebih awal, bahkan pada hari pertama onset demam karena protein NS1 bersirkulasi dalam konsentrasi tinggi dalam darah pasien selama awal fase akut. Adanya pemeriksaan NS1 ini sangat penting karena dapat dilakukan terapi suportif dan pemantauan pasien segera dan dapat mengurangi risiko komplikasi maupun kematian.
B. RUMUSAN MASALAH Berdasarkan latar belakang diatas maka di dapat rumusan masalah yaitu :
Bagamana cara mengetahui ada atau tidaknya virus dengue dalam serum penderita?
C. MANFAAT 1. Mahasiswa mampu mengetahui cara pemeriksaan NS1 2. Mahasiswa mampu mengetahui adanya virus dengue pada serum penderita
BAB II TINJAUAN PUSTAKA A. Tinjauan Umum 1. Defenisi Demam Berdarah Dengue (DBD) Demam Berdarah Dengue (DBD) adalah penyakit infeksi yang disebabkan oleh virus dengue dengan manifestasi klinis demam, nyeri otot dan atau nyeri sendi yang disertai dengan leukopenia, ruam, limfadenopati, trombositopenia dan diatesis hemoragik. Pada DBD terjadi perembesan plasma yang ditandai oleh adanya hemokonsentrasi (peningkatan hematokrit) atau penumpukan cairan di rongga tubuh.Agen penyebab DBD yaitu virus dengue merupakan virus RNA untai tunggal, genus flavivirus, yang terdiri dari empat serotipe yaitu D1, D2, D3 dan D4.2 Keempat serotipe virus ini terdapat di Indonesia dan dilaporkan bahwa serotipe virus DEN-3 yang paling sering menimbulkan wabah. Struktur antigen dari keempat serotipe ini sangat mirip satu dengan yang lain, namun antibodi terhadap masing-masing serotipe tidak dapat memberikan perlindungan silang. Gambaran klinis penyakit yang disebabkan oleh infeksi virus dengue ini sering tidak khas, dapat menyerupai penyakit-penyakit lain, seperti: flu, demam tifoid, demam chikungunya, leptospirosis, malaria dan berbagai penyakit lainnya. Manifestasi klinis akibat infeksi
virus dengue ini dapat
menyebabkan keadaan yang beraneka ragam, mulai dari tanpa gejala (asimtomatik), demam ringan yang tidak spesifik (undifferentiated febrile illness), demam dengue (DD), atau bentuk yang lebih berat yaitu demam berdarah dengue (DBD) dan sindrom syok dengue (SSD). 2. Penyebaran DBD Dan Transmisi Virus Dengue DBD tersebar di wilayah Asia Tenggara, Pasifik Barat dan Karibia. Indonesia merupakan wilayah endemis dengan sebaran di seluruh wilayah tanah air. Insiden DBD di Indonesia antara 6 hingga 15 per 100.000 penduduk (1989 hingga 1995), dan pernah meningkat tajam saat kejadian luar biasa
hingga 35 per 100.000 penduduk pada tahun 1998, sedangkan mortalitas DBD cenderung menurun hingga mencapai 2% pada tahun 1999. Beberapa faktor diketahui berhubungan dengan peningkatan transmisi virus dengue yaitu: a. Vektor:
perkembangbiakan,
kebiasaan
menggigit,
kepadatan
dalam
lingkungan, jenis serotipe, transportasi dari satu tempat ke tempat lain. b. Pejamu: terdapat penderita di lingkungan keluarga, paparan terhadap nyamuk, status gizi, usia (> 12 tahun cenderung untuk DBD) dan jenis kelamin (perempuan lebih rentan dari pada laki-laki). c. Lingkungan: curah hujan, suhu, sanitasi, dan kepadatan penduduk. Penularan infeksi virus dengue terjadi melalui vektor nyamuk genus Aedes (Aedes aegypti dan Aedes albopictus). Dari kedua nyamuk ini yang paling dominan sebagai vektor adalah A. aegypti. Setelah mengisap darah, nyamuk ini akan membawa virus dari penderita dalam kelenjar ludahnya, sehingga virus dengue dapat dengan mudah ditularkan jika nyamuk tersebut mengisap darah orang lain. Sebelumnya virus telah bereplikasi dalam kelenjar ludah nyamuk selama 8-12 hari. Selain itu nyamuk Aedes memiliki waktu hidup yang cukup panjang yaitu sekitar 15-65 hari sehingga penularan masih bisa terjadi. Setelah virus masuk dalam tubuh pejamu, virus akan memasuki periode inkubasi selama 3-14 hari. Selama itu virus akan bereplikasi di dalam sel target yaitu sel dendritik dan belum menunjukkan serangan. Infeksi pada sel target seperti
sel dendritik, hepatosit, dan sel endotel, mengakibatkan
pembentukan respon imun seluler dan humoral terhadap infeksi virus pertama dan berikutnya. 3. Virus Dengue Virus dengue merupakan virus RNA untai tunggal, genus flavivirus, yang terdiri dari empat
serotipe yaitu D1, D2,
D3 dan D4.2 Menurut
Soegiyanto, keempat serotipe virus ini terdapat di Indonesia dan dilaporkan
bahwa serotipe virus DEN-3 yang paling sering menimbulkan wabah, sedangkan di Thailand penyebab wabah yang dominan adalah virus DEN-2. Dominasi serotipe di Indonesia pada kurun waktu tahun 2003-2005 adalah DEN-2, diikuti oleh DEN-3, DEN-4 dan DEN-1.3 Struktur antigen dari keempat serotipe ini sangat mirip satu dengan yang lain, namun antibodi terhadap masing-masing serotipe tidak dapat memberikan perlindungan silang. Menurut Yao,virus dengue terdiri dari 10.700 basa di dalam genomnya dan terdiri dari single-stranded positive sense RNA (ssRNA sense +). Di dalam genomnya terdapat sebuah single Open Reading Frame (ORF) yang mengkode
dua macam protein yaitu protein struktural dan protein
nonstruktural. Protein struktural terdiri dari protein inti (capsid/core/C), protein membran, termasuk preMembran (M) dan protein
envelope (E).
Protein nonstruktural terdiri dari tujuh jenis, yaitu NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B dan NS5 yang ditandai oleh sebuah 5’ dan 3’ nontranslated region (NTR) pada kedua ujungnya.
4. Patogenesis Patogenesis terjadinya DBD hingga saat ini masih diperdebatkan. Terdapat bukti yang kuat bahwa mekanisme imunopatologis berperan dalam terjadinya DBD dan SSD. Respon imun yang diketahui berperan dalam patogenesis DBD adalah: a. Respon humoral berupa pembentukan antibodi yang berperan dalam proses netralisasi virus, sitolisis yang dimediasi komplemen dan sitotoksisitas yang dimediasi antibodi. Antibodi terhadap virus dengue berperan dalam mempercepat replikasi virus pada monosit atau makrofag. Hipotesis ini disebut antibody dependent enhancement (ADE). b. Limfosit T baik T-helper (CD4) dan T-sitotoksik (CD8) berperan dalam respon imun seluler terhadap virus dengue. Diferensiasi T-helper yaitu TH
1 akan memproduksi interferon γ, interleukin-2 (IL-2) dan limfokin, sedangkan TH 2 memproduksi IL-4, IL-5, IL-6, dan IL-10. c. Monosit dan makrofag berperan dalam fagositosis virus dengan opsonisasi antibodi, namun proses fagositosis ini menyebabkan peningkatan replikasi virus dan sekresi sitokin oleh makrofag. d. Aktivasi komplemen oleh kompleks imun menyebabkan terbentuknya C3a dan C5a.
Halstead (1973), mengajukan hipotesis secondary heterologous infection yang menyatakan bahwa DBD terjadi bila seseorang terinfeksi ulang virus dengue dengan tipe yang berbeda. Re-infeksi menyebabkan reaksi amnestik antibodi sehingga mengakibatkan konsentrasi kompleks imun yang tinggi. Kurane dan Ennis pada tahun 1994, merangkum pendapat Halstead dan peneliti lain, dan menyatakan bahwa infeksi virus dengue menyebabkan aktivasi makrofag yang memfagositosis kompleks virus-antibodi non netralisasi sehingga virus bereplikasi di dalam makrofag. Terjadinya infeksi makrofag oleh virus dengue menyebabkan aktivasi T-helper dan T-sitotoksik sehingga memproduksi limfokin dan interferon γ. Selanjutnya
interferon
γ
akan
mengaktivasi
monosit
sehingga
menyekresi berbagai mediator inflamasi seperti TNF-α, IL-1, platelet activating factor (PAF), IL-6 dan histamin yang mengakibatkan terjadinya disfungsi sel endotel dan terjadi perembesan plasma. Peningkatan C3a dan C5a terjadi melalui aktivasi oleh kompleks virus-antibodi yang juga mengakibatkan terjadinya perembesan plasma. Pemahaman patogenesis virus dengue ini masih sangatlah kurang disebabkan tidak adanya model in vitro dan in vivo yang dapat digunakan untuk pembuktian penyakit akibat infeksi virus dengue ini. Leitmeyer, membentangkan sekuens genom virus dengue dikaitkan dengan kejadian DD
maupun DBD. Ia mendapatkan perbedaan deter-minan DBD terletak pada protein E, bagian 5’UTR, 3’UTR , NS4b dan NS5. Saat ini patogenesis DBD ini tidak berhenti sampai level serotipe, namun sampai genotip/subtipenya. Telah dikemukakan bahwa serotipe virus DEN-1 dikategorikan ke dalam 3-5 macam genotip, DEN-2 dikategorikan ke dalam 5-6 macam genotip, DEN-3 ke dalam 4-5 macam genotip se-dangkan DEN-4 dikategorikan ke dalam dua macam genotip.
5. Manifestasi klinik Manifestasi klinis infeksi virus dengue dapat bersifat asimtomatik, atau dapat berupa demam yang tidak khas, DD, DBD atau SSD. Pada umumnya pasien mengalami fase demam selama 2-7 hari, yang diikuti oleh fase kritis selama 2-3 hari. Pada waktu fase ini pasien sudah tidak demam, akan tetapi mempunyai risiko untuk terjadi renjatan jika tidak mendapat pengobatan adekuat. Manifestasi klinis infeksi virus dengue dapat dilihat pada Gambar 1
6. Diagnosis Berdasarkan kriteria WHO 1997 diagnosis DBD ditegakkan bila semua hal di bawah ini dipenuhi: a. Demam atau riwayat demam akut, antara 2-7 hari, biasanya bifasik. b. Terdapat minimal satu dari manifestasi perdarahan berikut: 1) uji bendung positif. 2) petekie, ekimosis, atau purpura. 3) perdarahan mukosa (tersering epistaksis atau perdarahan gusi), atau perdarahan dari tempat lain. 4) hematemesis atau melena. c. Trombositopenia (jumlah trombosit < 100.000/µL). d. Terdapat minimal satu atau tanda-tanda perembesan plasma sebagai berikut: 1) Peningkatan hematokrit > 20% dibandingkan standar sesuai dengan umur dan jenis kelamin. 2) Penurunan
hematokrit
>
20%
setelah
mendapat
terapi
cairan,
dibandingkan dengan nilai hematokrit sebelumnya. 3) Tanda
perembesan
plasma
seperti
efusi
pleura,
asites
atau
hipoproteinemia.
7. Metode Diagnostik Laboratorium a. Identifikasi dan isolasi virus Pada tahap awal infeksi, identifikasi dan isolasi virus dengue secara tradisional adalah satu-satunya cara untuk mendiagnosis infeksi dengue saat ini. Dalam teknik ini, serum dari pasien dipaparkan pada sel nyamuk. Setelah amplifikasi virus pada sel yang terinfeksi, serotipe tersebut diidentifikasi dengan menggunakan antibodi monoklonal spesifik untuk setiap serotipe dengue. Teknik ini hanya sensitif ketika ada partikel menular yang relatif tinggi di dalam serum. Viremia untuk dengue
berlangsung singkat, biasanya dimulai dua atau tiga hari sebelum serangan demam dan berlangsung sampai empat atau lima hari waktu sakit. Sebagai pilihan dalam mendeteksi virus untuk diagnosis rutin adalah sampel serum penderita, walaupun virus dengue dapat juga dideteksi dalam plasma, leukosit dan dalam beberapa jaringan yang diperoleh dari otopsi. Inokulasi
intratoraks
nyamuk
(A.
aegypti,
A.
albopictus,
Toxorhynchites splendens, T. amboinensis) adalah sistem yang paling sensitif untuk isolasi virus dengue, tetapi karena diperlukan ketram-pilan teknis tertentu dan fasilitas khusus untuk inokulasi langsung nyamuk, maka kultur sel lebih baik untuk diagnosis rutin. Baris sel nyamuk C6/36 (klon diperoleh dari A. albopictus) telah menjadi sel inang pilihan untuk isolasi rutin virus dengue, meskipun baris sel A. pseudoscutellaris AP61 juga telah digunakan dengan cukup berhasil. Sampai saat ini identifikasi virus dengue umumnya dicapai dengan teknik imunofluoresens yang menggunakan serotipe spesifik monoklonal antibodi anti dengue di kepala nyamuk yang hancur atau sel yang terinfeksi. Kenyataannya beberapa strain tidak mudah diidentifikasi karena konsentrasi yang rendah dari virus. Plaque assay adalah metode standar emas untuk kuantifikasi virus dengue. Menurut Payne et al, suatu imunofluoresens tidak langsung telah diusulkan sebagai alternatif untuk tes ini. Aliran cytometry baru-baru ini dilaporkan sebagai metode yang berguna untuk identifikasi virus dengue 1 (DEN-1), dan memungkinkan virus untuk diidentifikasi 10 jam lebih awal daripada dengan uji imunofluoresens,
dengan
menggunakan
antibodi
monoklonal
anti-
nonstruktural glikoprotein (NS1). b. Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) dari serum atau plasma RT-PCR dapat dilakukan dengan cara one-step, nested RT-PCR atau nucleic acid sequence-based amplification (NASBA). Dewasa ini di luar
negeri telah banyak dilakukan pemeriksaan RT-PCR dengan menggunakan alat real-time PCR, dimana hasil yang didapat lebih cepat dan bersifat kuantitatif. Keberhasilan PCR juga tergantung dari tahapan pengambilan serum dan variabilitas yang luas antar laboratorium dimana masih dibutuhkan standarisasi yang lebih baik. Hasil positif akan didapatkan lebih banyak pada keadaan viremia. c. Deteksi antigen Produk gen NS1 merupakan glikoprotein yang dihasilkan oleh semua flavivirus dan penting untuk replikasi dan viabilitas virus. Selama replikasi virus, NS1 terlokalisir dalam organel sel. Protein NS1 disekresikan oleh sel mamalia, tetapi tidak oleh sel-sel serangga. Bentuk protein sekresi berupa heksamer, yang terdiri dari subunit dimer. Glikosilasi protein ini diyakini penting untuk sekresi. Antigen NS1 muncul awal pada hari pertama setelah serangan demam dan menurun ke tingkat tidak terdeteksi setelah 5-6 hari. Protein NS1 merupakan antigen yang memperbaiki dan saling melengkapi, serta juga menghasilkan respon humoral yang sangat kuat. Penelitian telah banyak didedikasikan untuk kegunaan NS1 sebagai alat diagnosis infeksi virus dengue, karena disekresikannya protein ini. Dalam enam tahun terakhir terdapat beberapa studi yang menyikapi penggunaan antigen NS1 dan antibodi anti-NS1 sebagai alat untuk diagnosis demam berdarah. Tes antigen-capture ELISA telah dilakukan dengan sensitivitas berkisar antara 4 sampai 1 ng/mL. Penelitian-penelitian ini mengidentifikasikan hubungan antara keparahan penyakit dan jumlah antigen NS1 dalam serum, namun penelitian lain tidak menemukan hubungan
ini dan pada kenyataannya tidak bisa membedakan antara
infeksi primer dan sekunder. Dewasa ini, suatu antibodi monoklonal serotipe spesifik berbasis antigen-capture enzyme-linked immunosorbent assay
(ELISA) NS1 yang menunjukkan spesifisitas serotipe yang baik
telah dikembangkan. Shu et al, memiliki sebuah standar IgG NS1 serotipe
spesifik ELISA tidak langsung untuk membedakan infeksi virus dengue primer dan sekunder dan menunjukkan korelasi yang baik antara anti IgG NS1 serotipe spesifik (ditentukan oleh ELISA) dan hasil dari plaque reduction and neutralization test (PRNT). Protein NS1 serotipe spesifik IgG ELISA bekerja handal untuk serotipe virus dengue dalam serum fase konvalesen dari pasien dengan infeksi primer dan dalam serum fase akut dari pasien dengan infeksi sekunder (yang akan mendeteksi serotipe yang menyebab-kan infeksi pertama), tapi tidak demikian dengan serum pasien pada fase penyem-buhan dengan infeksi sekunder. Hasil studi yang bervariasi berhubungan dengan hasil tes IgM dan IgG, serta keparahan penyakit dan prediktor viremia. Oleh karena itu evaluasi lanjut dari tes ini harus dilakukan untuk menentukan perbedaan utama antara studi masingmasing. Menurut Mackenzie, antigen NS1 merupakan glikoprotein tersekresi 48 kDa yang tidak terdapat pada partikel virus yang terinfeksi namun terakumulasi di dalam supernatan dan membran plasma sel selama proses infeksi. Protein NS1 merupakan gen esensial di dalam sel yang terinfeksi dimana fungsinya sebagai ko-faktor untuk replikasi virus, yang terdapat bersama di dalam bentuk replikasi RNA recognition
double-stranded.
Immune
dari permukaan sel NS1 pada sel endotel dihipotesiskan
berperan dalam mekanisme perembesan plasma yang terjadi selama infeksi virus dengue yang berat. Sampai saat ini, bagaimana NS1 berhubungan dengan membran plasma, yang tidak berisi motif sekuens membranespanning masih belum jelas. Protein NS1 terikat secara langsung pada permukaan berbagai tipe sel epitel dan sel mesensim, juga menempel secara kurang lekat pada berbagai sel darah tepi. Lebih lanjut, NS1 juga terikat pada biakan sel endotel mikrovaskuler manusia lebih baik daripada sel endotel aorta atau umbilical
cord. Spesifisitas ikatan ini sudah dibuktikan terdapat pada ikatan NS1 pada endotel paru dan hati, namun tidak pada usus atau otak tikus. Menurut Dussart, protein NS1 merupakan glikoprotein yang highly conserved
tampaknya merupakan regio penting dalam viabilitas virus
namun tidak memiliki aktivitas biologis. Tidak seperti glikoprotein virus yang lain, NS1 diproduksi baik dalam bentuk yang berhubungan dengan membran maupun dalam bentuk yang disekresikan. Alcon, mengemukakan bahwa antigen NS1 terdapat baik pada infeksi primer maupun sekunder dan dapat dideteksi dalam sembilan hari pertama demam, baik pada serotip DEN-1 (terbanyak), DEN-2, DEN-3 dan DEN-4. Kumarasamy, meneliti sensitivitas dan spesifisitas NS1 pada 554 donor sehat dan 297 pasien terinfeksi virus dengue, dimana 157 pasien dengan PCR positif diperiksa juga IgM dan IgG antidengue.
Ia mendapatkan
spesifisitas 100% dan sensitivitas 91,0 % dari 157 sampel tersebut dengan perbedaan yang tidak
bermakna untuk ke empat serotip. Blacksell,
meneliti NS1 dan mendapatkan sensitivitas NS1 63% dan spesifisitas 100% dengan mem-perhatikan adanya perbedaan sekresi yang bervariasi antar serotipe. Kit komersial untuk mendeteksi anti-gen NS1 dalam sampel serum telah tersedia. Pengujian ini tidak membedakan antar serotipe. Antigen NS1 muncul di awal infeksi dan sebelum munculnya antibodi. Tes tersebut berguna untuk deteksi dini kasus dan untuk investigasi wabah. Evaluasi dari pemeriksaan-pemeriksaan ini seharusnya dilakukan untuk menilai kegunaan dan efektivitas biaya. Terdapat dua macam kit pemeriksaan antigen NS1 di Indonesia, yaitu dari Panbio dan BioRad, keduanya memakai prinsip metode ELISA. Saat ini juga sudah terdapat reagen NS1 dalam bentuk menggunakan metode Immuno chromato-graphy (ICT).
rapid test
yang
B. Prinsip percobaan Dengue NS1 Ag pada serum, plasma, atau whole blood sebagai antigen akan bergerak di sepanjang membrane kromatografi untuk bereaksi dengan anti dengue NS1 Ag yang dilapisi koloidal emas pada strip sebagai antibody menuju wilayah test akan membentuk garis warna sebagai kompleks partikel emas antibody antigen.
BAB III METODE PERCOBAAN
A. Alat dan bahan 1. Alat a. Pipet disposable b. Cassete test (SD Bioline Dengue NS1 Ag) c. Sentrifus d. Rak tabung e. Tabung 2. Bahan a. Serum b. Buffer
B. Prosedur kerja 1. Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan 2. Diteteskan sampel serum sebanyak 2 tetes (sekitar 60 ul) pada sumur sampel (S) 3. Diteteskan larutan buffer sebanyak 1 tetes (sekitar 40 ul) pada sumur sampel (S) 4. Ditunggu sampai garis berwarna muncul dan dibaca hasilnya dalam waktu 15 menit dan tidak boleh dibaca hasilnya setelah 20 menit.
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil pengamatan Nama pasien
Sampel
Hasil
Keterangan Timbul 1 garis merah pada
MR.F
Plasma/serum
Negative (-)
area control (C) dan tidak ada garis merah pada area test (T)
B. Pembahasan Demam berdarah atau breakbone fever atau demam dengue adalah penyakit akut yang disebabkan oleh virus dengue yang ditularkan oleh nyamuk aedes aegpty. Penyakit demam berdarah memiliki gejala yang tidak sama atau beraneka ragam, mulai dari tanpa gejala, demam ringan yang tidak spesifik, demam dengue atau demam berdarah dengue sampai sindrom syok dengue. NS1 merupakan suatu glikoprotein yang muncul dengan konsentrasi tinggi pada pasien, ketika terinfeksi virus dengue pada tahap awal penyakit. NS1 merupakan gen esensial didalam sel yang terinfeksi dan berfungsi sebagai kofaktor untuk replikasi virus. NS1 diperlukan untuk kelangsungan hidup virus namun tidak diketahui dengan pasti aktivitas biologisnya. Dari bukti yang sudah ada menunjukan bahwa NS1 terlibat dalam proses replikasi virus. NS1 dengue diekskresikan kedalam system darah pada individu-individu yang terinfeksi dengan virus dengue. Antigen NS1 dapat ditemukan pada hari pertama sampai hari ke Sembilan sejak awal demam pada pasien dengue primer atau dengue sekunder. Untuk mempertahankan hidup, virus dengue memerlukan dukungan dari protein yang mempertahankan tubuhnya, terutama untuk membantu masuk dalam
sel inang. Protein ini disebut sebagai protein structural yang berfungsi sebagai enzim dan katalis dalam upaya virus mempertahankan hidupnya. Pemeriksaan NS1 Ag yang berarti nonstructural 1 antigen adalah pemeriksaan yang mendeteksi bagian tubuh virus dengue itu sendiri. Karena mendeteksi bagian tubuh virus dan tidak menunggu respon tubuh terhadap infeksi maka pemeriksaan ini dilakukan paling baik saat panas hari ke 0 hingga hari ke 4, karena itulah pemeriksaan ini dapat mendeteksi infeksi virus dengue bahkan
sebelum
terjadi
penurunan
trombosit.
Angka
sensitivitas
dan
spesifitasnya pun juga tinggi. Bila ada hasil NS1 yang positif menunjukan kalau seseorang “hamper pasti” terkena infeksi virus dengue. Sedangkan kalau hasil NS1 Ag dengue menunjukan hasil negative tidak menghilangkan kemungkinan infeksi virus dengue dan masih perlu dilakukan observasi serta pemeriksaan lanjutan. Ini terjadi karena untuk mendeteksi virus dengue diperlukan kadar yang cukup dari jumlah virus dengue yang beredar, sedangkan pada fase awal mungkin belum terbentuk cukup banyak virus dengue tetapi apabila pengambilan dilakukan setelah munculnya antibody maka kadar virus dengue juga akan turun. Sebagian besar antigen secara teori seharusnya ada pada sel darah namun pada pengujian NS1 digunakan sampel serum atau plasma karena NS1 merupakan glikoprotein yang terekskresi 48 k Dalton yang tidak ada pada partikel virus yang terinfeksi tetapi terakumulasi di dalam membrane plasma selama proses infeksi dengue. NS1 sendiri merupakan antigen nonstructural dari virus dengue yang terakumulasi pada serum dan plasma selama infeksi dengue berlangsung. Pada praktikum kali ini dilakukan pengujian kualitatif NS1 dengan menggunakan pengujian immunokromatografi rapid test dengan strip test SD BIOLINE Dengue NS1 Ag rapid test. SD BIOLINE Dengue NS1 Ag rapid test adalah immunokromatografi in vitro, salah satu uji yang dirancang untuk penentuan kualitatif virus dengue antigen NS1 dalam serum, plasma, atau whole blood manusia untuk diagnosis awal infeksi demam berdarah akut. Perangkat test
ini berisi strip membrane, yang sudah dilapisi dengan lapisan antibody spesifik terhadap NS1 pada daerah uji pita. Lapisan antibody ini akan mendeteksi dan mengikat antigen NS1 yang ada pada sampel. Sampel yang berupa serum atau plasma akan bergerak sepanjang membrane chromatographically (secara kapilaris) kedaerah tes (T) dan control (C) membentuk garis merah sebagai indicator terbentuknya ikatan antibody-antigen partikel emas membentuk kompleks (tanda positif). Dengan prinsip, SD BIOLINE Dengue NS1 Ag menghasilkan perangkat tes jendela yang memiliki 2 jalur pra-dilapisi, “T” (garis test) dan “C” (garis control) kedua garis uji dan garis control dalam hasil jendela tidak terlihat sebelum ditambahkan sampel. Garis control digunakan untuk control procedural dan harus selalu muncul jika prosedur tes dilakukan dengan benar. Dengue NS1 Ag dapat mengidentifikasi virus dengue NS1 antigen dalam serum, plasma atau seluruh specimen darah dengan tingkat tinggi sensitivitas dan spesifisitas. Pada praktikum pemeriksaan NS1 digunakan sampel serum inisial MR F, sebelum melakukan praktikum mula-mula dipastikan tanggal kadaluwarsa dari strip test, bila reagen telah kadaluarsa maka tidak dapat digunakan sebab sensivitas reagen telah berkurang sehingga ditakutkan adanya positif maupun negative palsu. pada strip test yang digunakan memiliki tanggal kadaluwarsa tahun 2019, sehingga aman digunakan. Kemudian barulah strip test dikeluarkan dan sampel ditambahkan sebanyak 2 tetes pada sumur sampel stript test menggunakan pipet tetes disposable. Uantuk sampel yang berbeda maka digunakan pipet tetes
disposable yang berbeda pula untuk menghindari
keracunan hasil uji, lalu hasil dibaca setelah 15 menit dan tidak boleh lebih dari 20 menit sebab dapat memberi hasil positif palsu. berdasarkan hasil uji pada sampel serum inisial MR F diperoleh hasil negative yang ditandai dengan munculnya garis berwarna merah pada area control (C) saja tidak ada garis merah pada area test (T) yang menunjukan tidak adanya ikatan antige NS1 dan antibody pada membrane.
Hal-hal yang harus diperhatikan dalam pemeriksaan NS1 Ag yaitu : 1. Antikoagulan (EDTA, Heparin, citrate) tidak mempengaruhi hasil test 2. Digunakan pipet tetes dan tip mikropipet dispossible yang berbeda untuk setiap sampel untuk menghindari kontaminasu silang. 3. Sampel yang ikterik, hemolysis dapat memberikan hasil uji yang tidak sesuai 4. Sampel serum dan strip uji harus pada kondisi suhu ruang sebelum digunakan untuk pengujian 5. Sampel yang mengandung rhemathoid factor dapat memberi hasil positif palsu 6. Sampel dibaca tidak boleh lebih atau kurang dari 15-20 menit. Jika dibaca kurang dari 15 menit dapat menyebabkan hasil negative palsu dan apabila dibaca lebih dari 20 menit maka akan dapat menyebabkan hasil positif palsu.
BAB V PENUTUP
A. Kesimpulan Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan dapat ditarik kesimpulan bahwa sampel yang digunakan pada saat pemeriksaan didapat hasil negative yang ditandai dengan terbentuknya 1 garis merah pada area control (C) sedangkan pada area test (T) tidak terbentuk garis merah.
B. Saran Sebagai seorang laboran saya menyarankan bahwa pada saat pemeriksaan NS1 sampel yang digunakan tidak boleh ikterik dan hemolysis karena karena dapat memberikan hasil uji yang tidak sesuai, dan usahakan gunakan pipet kapiler yang berbeda untuk setiap sampel untuk menghindari kontaminasi silang.
DAFTAR PUSTAKA
Dussart P, Labeau B, Lagathu G . Evaluation of an enzyme immunoassay for detection of dengue virus NS1 antigen in human serum. Clin Vaccine Immunol 2006;13:1185 – 9. World Health Organization . Dengue haemorrhagic fever : Diagnosis, treatment, prevention and control. Edisi ke-2. Geneva:WHO;1997.h.1-84. Nimmannitya S. Dengue haemorrhagic fever: A scourge of South-East Asian Region. Global innovation to fight dengue. 2nd International Conference on Dengue and Dengue Haemorrhagic Fever. Phuket: Thailand;2008.h.22. Suroso T, Umar AI. Epidemiologi dan penenggulangan penyakit demam berdarah dengue (DBD) di Indonesia. Dalam: Hadinegoro SR, Satari HI, penyunting. Tata laksana kasus DBD. Naskah lengkap pelatihan bagi dokter spesialis anak dan dokter spesialis penyakit dalam. Jakarta : Balai Penerbit FKUI; 2004.h.14-31. Suwandono A, Kosasish H, Nurhayati. Four dengue virus serotypes found circulating during an outbreak of dengue fever ang dengue haemorrhagic fever in Jakarta, Indonesia, during 2004. Trans R Soc Trop Med 2006;100:855-62.
LAPORAN LENGKAP IMUN SEROLOGI II (P) Pemeriksaan Antigen Non Struktural 1(NS1) Untuk Deteksi Dini Infeksi Virus Dengue
Di susun oleh :
Nama
: Didin Muhammad Hasyir
Nim
: 15 3145 453 006
Kelas
: 15 A
Kelompok
: 1 (satu)
PROGRAM STUDI DIII ANALIS KESEHATAN STIkes MEGA REZKY MAKASSAR 2017
LAMPIRAN
Gambar pemeriksaan virus dengue menggunakan metode NS1.
