(t)
( S)
CP: Magita 089609137413
[email protected]
LAPORAN PRAKTIKUM
BIOKIMIA
PENGARUH pH TERHADAP KEAKTIFAN SUATU ENZIM
Kelompok 8:
Umdatun Watsiqoh (131311133084)
Amalia Khasanah Ima Dudini (131311133085)
Magita Novita Sari (131311133086)
Fitria Budiarti (131311133087)
Tri Lestyorini (131311133088)
PROGRAM STUDI ILMU KEPERAWATAN
FAKULTAS KEPERAWATAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
SURABAYA
2013
BAB I
PENDAHULUAN
I.1 Latar Belakang
Enzim merupakan polimer biologis yang mengkatalisis reaksi kimia yang memungkinkan berlangsungnya kehidupan. Keberadaan dan pemeliharaan rangkaian enzim yang lengkap dan seimbang merupakan hal yang esensial untuk menguraikan nutrien menjadi energi dan bahan dasar kimiawi. Enzim memiliki beberapa fungsi, antara lain adalah sebagai biokatalisator yaitu mempercepat reaksi kimia dalam proses metabolism. Selain itu, ia memiliki sifat spesifik (teori lock and key) dimana sisi aktif enzim (catalityc site) sesuai dengan substratnya. Dengan begitu, enzim dapat dikatakan sebagai pengkatalis yang paling efektif.
Seperti molekul protein lainnya, sifat biologis enzim sangat dipengaruhi oleh berbagai faktor fisika-kimia. Faktor-faktor yang mempengaruhi kerja enzim antara lain suhu dan pH. Di samping itu, kecepatan reaksi enzimatik dipengaruhi pula oleh konsentrasi enzim maupun substratnya. Derajat keasaman atau pH dapat dikatakan optimum ketika aktivitas enzim yang maksimum dan dapat menghasilkan produk (substrat yang dicerna) dalam jumlah besar. Namun hal ini juga dipengaruhi oleh lamanya waktu kerja enzim dengan substratnya. Semakin lama waktu yang digunakan maka semakin banyak produk yang dihasilkan.
Jika ditinjau dari pengaruh pH, maka jumlah produk yang dihasilkan akan berbeda-beda. Karena tiap enzim memiliki pH optimum sendiri-sendiri. pH yang ekstrem (terlalu tinggi atau terlalu rendah) depat mengakibatkan enzim mengalami denaturasi atau kerusakan. Sehingga sisi aktif enzim tidak sesuai lagi dengan substratnya, dan enzim pun tidak bisa bekerja secara optimal. Berdasarkan teori tersebut, maka dilakukanlah percobaan ini untuk mengaplikasikan, membuktikan dan menguji kebenaran dari teori tersebut agar dapat lebih mudah untuk dipahami dan dipelajari
I.2 TUJUAN PRAKTIKUM
I.2.1 Tujuan Umum
Mempelajari pengaruh pH pada kerja enzim.
I.2.2 Tujuan Khusus
Mempalajari pengaruh pH 6,5 pada kerja enzim.
Menghitung jumlah substrat yang dicerna apabila enzim dipengaruhi oleh pH 6,5.
BAB II
METODE PRAKTIKUM
II.1 Bahan
Bahan-bahan yang digunakan pada percobaan ini adalah Larutan enzim "E" 0,1%, Larutan NaCL 0,9%, Larutan substrat "S" 1%, Larutan penyangga, pH 6,5, Larutan KI-KIO3, dan Larutan HCL 0,05 M
II.2 Alat
Adapun alat-alat yang digunakan dalam percobaan ini diantaranya ialah tabung reaksi, rak tabung reaksi, erlenmeyer, biuret, pipet skala 1 mL, stopwatch dan spektrofotometer.
II.3 Metode kerja
Dalam 1 buah tabung erlenmeyer diisi 15 mL larutan penyangga pH 6.5, 6 mL larutan NaCl 0.9 %, 3 mL larutan substrat dicampur dan kocok. Siapkan 5 buah tabung reaksi dengan diberi label waktu 0 menit (0'), 5 menit (5'), 10 menit (10'), 15 menit (15'), 20 menit (20'). Lalu isi masing-masing tabung reaksi dengan 10 ml HCl 0,05 N. Masukkan 1 mL larutan dari erlenmeyer ke tabung 0 menit dengan menggunakan pipet, kocok sebentar. Kemudian, masukkan 1 mL larutan enzim pada erlenmeyer, campur cepat dan catat waktunya. Ambil 1 mL larutan dari tabung erlenmeyer menggunakan pipet pada waktu 4 menit lalu pada waktu 5 menit masukkan ke tabung berlabel 5 menit lalu kocok. Ambil 1 mL larutan dari tabung erlenmeyer menggunakan pipet pada waktu 9 menit lalu pada waktu 10 menit masukkan ke tabung berlebel 10 menit lalu kocok. Ambil 1 mL larutan dari tabung erlenmeyer menggunakan pipet pada waktu 14 menit lalu pada waktu 15 menit masukkan ke tabung berlebel 15 menit lalu kocok. Ambil 1 mL larutan dari tabung erlenmeyer menggunakan pipet pada waktu 19 menit lalu pada waktu 20 menit masukkan ke tabung berlebel 20 menit lalu kocok. Masukkan 1 mL larutan KI-KIO3 ke masing-masing tabung lalu campur. Tunggu 10 sampai 15 menit untuk dibaca λ 620 nm. Setelah ditunggu dan berubah warna, baca absorbance substrat yang ada dengan spektofotometer, panjang gelombang 620 nm
campurkan15 mL larutan penyangga pH 6.53 mL larutan substrat6 mL larutan NaCl 0.9 %Isi dengan 10 ml HCL 0,05 MBeri label untuk setiap tabung reaksiBagan alur pelaksanaan
campurkan
15 mL larutan penyangga pH 6.5
3 mL larutan substrat
6 mL larutan NaCl 0.9 %
Isi dengan 10 ml HCL 0,05 M
Beri label untuk setiap tabung reaksi
HASIL PRAKTIKUM
.1 ml larutan. kocokLakukan setiap 5 menit selanjutnya untul tabung selajutnya.
.
1 ml larutan. kocok
Lakukan setiap 5 menit selanjutnya untul tabung selajutnya.
.1 ml enzimCampur cepat dan catat waktu
.
1 ml enzim
Campur cepat dan catat waktu
Masukkan 1 mL larutan dari erlenmeyer ke tabung 0 menit dengan menggunakan pipet, kocok sebentar.
Masukkan 1 mL larutan dari erlenmeyer ke tabung 0 menit dengan menggunakan pipet, kocok sebentar.
.1 ml larutan KI-KIO3Ke masing-masing tabung. Tunggu 10-15 menit
.
1 ml larutan KI-KIO3
Ke masing-masing tabung. Tunggu 10-15 menit
Baca absis substrat dengan spektofotometer panjang gelombang 620 nmHitung substrat yang dicerna
Baca absis substrat dengan spektofotometer panjang gelombang 620 nm
Hitung substrat yang dicerna
BAB III
HASIL DAN PEMBAHASAN
III.1 Pendahuluan
Umumnya enzim efektifitas maksimum pada pH optimum, yang lazimnya berkisar antara pH 4,5 - 8.0. Tetapi ada beberapa enzim yang kisaran pHnya sempit, misalnya peptin yang kisaran pHnya 1,8 dan arginase yang mempunyai pH optimum 10,0. Pada pH yang terlalu tinggi atau terlalu rendah umumnya enzim menjadi non aktif secara irreversibel karena menjadi denaturasi protein. Pada percobaan kali ini, dilakukan uji pengaruh pH terhadap aktivitas enzim amilase. Enzim mempunyai aktivitas paling besar pada pH optimumnya. Perubahan pH dapat menyebabkan aktivitas menurun atau hilang sama sekali karena terjadinya perubahan konfirmasi akibat pecahnya ikatan ion dari gugus-gugus tertentu. Perubahan pH lingkungan akan berpengaruh terhadap efektivitas bagian aktif enzim dalam membentuk kompleks enzim substrat.
Gambar 1. Hasil praktikum
Gambar 1. Hasil praktikum
III.2 Tabel Pengamatan
Tabel 1. Hasil Absorbance Substrat pada waktu (t)
Absis pada pH
Waktu (t)
0'
5'
10'
15'
20'
6,5
1,22
0,068
0,088
0,093
0,121
Tabel 2. Substrat yang Dicerna pada waktu (t)
pH
% Substrat yang Dicerna pada t
0'
5'
10'
15'
20'
6,5
0%
94,33%
92,67%
92,25%
89,917%
III.3 Perhitungan ( S) dengan alat Spektrofotometer
% Substrat yang Dicerna = 100% - { absis waktu t absis waktu to x 100% }
% Substrat yang Dicerna = 100% - { absis waktu t absis waktu to x 100% }
Pada waktu 0' = 100% - { 1,22 1,22 x 100% } = 0%
Pada waktu 5' = 100% - { 0,068 1,22 x 100%} = 94,33%
Pada waktu 10' = 100% - { 0,088 1,22 x 100% } = 92,67%
Pada waktu 5' = 100% - { 0,093 1,22 x 100% } = 92,25%
Pada waktu 5' = 100% - { 0,121 1,22 x 100% } = 89,917%
III.4 Grafik Pengamatan
III.5 Pembahasan
Pada percobaan ini, digunakan larutan penyangga dengan pH 6,5 yang ditambahkan larutan substrat (amilum), larutan NaCL 0,1 M. Penambahan NaCL bertujuan sebagai pengaktif kerja enzim dan amilum merupakan substrat yang akan bereaksi dengan iodium membentuk kompleks biru. Kemudian ditambahkan enzim amilase yang akan menghidrolisis pati menjadi dekstrin kemudian maltosa (disakarida) dan terhidrolisis lagi menjadi 2 molekul glukosa secara enzimatis. Pada tabung reaksi yang berisi larutan buffer dengan pH 6,5 ditambahkan larutan KI-KIO3 sebagai indikator yang akan bereaksi dengan amilum membentuk kompleks biru keunguan yang ditandai dengan perubahan warna dari bening menjadi biru.
Hasil dari percobaan ini didapat larutan pada tabung reaksi yag sudah ditambahkan KI-KIO3 mengalami perubahan terlihat pada warna yang berbeda. Pada tabung 0' (larutan tanpa enzim) larutan menjadi berwarna biru kehitaman. Pada tabung 5' yaitu larutan dengan menambahkan enzim setelah 5 menit menjadi berwarna kuning bening. Pada tabung reaksi lainnya (10', 15', 20') setelah penambahan KI-KIO3 larutannya juga berwarna kuning bening.
Dari nilai absorbansi yang telah diketahui, maka dapat diketahui hasil perhitungan kadar substrat yang dicerna pada waktu optimum kerja enzim. Pada waktu 0 menit kadar patinya 0%, pada waktu 5 menit kadar patinya 94,33%, pada waktu 10 menit kadar patinya 92,67%, pada waktu 15 menit kadar patinya 92,25%, pada waktu 20 menit kadar patinya 89,92%, Hasil tersebut menyatakan bahwa enzim bekerja secara optimal pada waktu 5 menit dengan kadar pati 0%. Hal ini membuktikan pada waktu 5 menit enzim memecah substrat paling banyak dan telah mencapai waktu optimal sehingga pada menit berikutnya kinerja enzim akan menurun. Seperti pada waktu 0 menit, enzim bekerja tidak optimal. Pada waktu 20 menit enzim tidak lagi bekerja secara optimum.
Daftar pustaka
Murray, Robert K. Granner, Daryl. Rodwell, Victor W. 2009. Biokimia Harper, edisi 27. Jakarta: EGC
Fessenden, R. J. dan Fessenden, J. S., 1994, Kimia Organik, Erlangga, Jakarta.
Lehninger, A.L., 1997, Dasar-dasar Biokimia Jilid 1, Erlangga, Jakarta.
Tim Dosen Kimia, 2007, Kimia Dasar II, Universitas Hasanuddin, Makassar.
Lampiran Foto
Mengambil pH 6,5
Larutan yang sudah dicampurkan
Mengambil HCL 0,05 M
Tabung diberi nama, dan diisi HCL 0,05 M
Mengambil 1 ml larutan
Larutan siap dimasukkan ke tabung 0'
Tabung 0' dikocok rata
Mengambil enzim untuk dicampurkan ke larutan
Dikocok-kocok hingga rata
Siap untuk menghitung waktu
5 menit awal, masukkan ke tabung 5'. Dst
Memberi KI-KIO3 ke tabung 0'
Aduk. Tunggu hingga 5-10 menit.
Catat waktu pemberian KI-KIO3
Baca absorbance substrat yang ada dengan spektofotometer
Hasil praktikum
Perhitungan
Diskusi hasil perhitungan
Hasil perhitungan
Hasil perhitungan semua kelompok
Cuci alat
Alat sudah selesai dicuci
Mengembalikan ke tempat semula
Cuci tangan setelah praktik ya, biar sehat
Terima kasih
% Substrat yang Dicerna
