Cromatografía Líquida Denaturalizante de Alto Rendimiento- Astrid Félix

Félix Osorio Sandra Astrid

18 de Diciembre del 2014 Biología Molecular 

LTO O R ENDIMIENTO ENDIMIENTO CROMATOGRAFÍA  LÍQUIDA DESNATURALIZANTE DE ALT

Introdui!n La cromatografía líquida es un método físico de separación basado en la distribución d istribución de una mecla entre dos fases inmiscibles! inmiscibles! una fi"a # otra mó$il% &sta 'ltima! 'ltima! en dic(a técnica! técnica! es un líquido que flu#e a tra$és de una columna columna que contiene la fase fi"a! la cual es un sólido inerte% )on el fin de aumentar la eficacia en dic(as separaciones! se (an lle$ado a cabo di$e di$ers rsas as modi modifi fica caci cion ones es al méto método do orig origin inal al%% De esta esta mane manera ra surg surgee la técni técnica ca de crom cromat atog ograf rafía ía líqui líquida da desn desnat atur ural ali iant antee de alto alto rendi rendimi mien ento to!! la cual cual traba traba"a "a con con el incremento incremento en la presión requeridas requeridas para la optima optima separación separación de las moléculas! moléculas! utilia utilia la $ariante de fase re$ersa de la cromatografía líquida de alta eficiencia #! como su nombre lo indica! la desnaturaliación de la muestra a analiar mediante temperatura%

D"sarrollo *btención de +D, # amplificación por -).  +ntes de lle$ar a cabo la cromatografía líquida desnaturaliante de alto rendimiento se debe tratar la muestra para la obtención del D,+ de la célula de interés% -osteriormente! para obtener la secuencia de D,+ de interés! se realia un -). para amplificar dic(a secuencia de D,+% Desnaturaliación # .enaturaliación /na $e obtenida la secuencia de D,+ de interés! se lle$a a cabo la eposición de los fragm fragmen ento toss muta mutados dos de dic( dic(aa secu secuen enci cia! a! esto esto a tra$é tra$éss de la desn desnat atura urali lia aci ción ón # renaturaliación del material genético% -ara este proceso se utilia la $ariación de temperatura! sabiendo que las (ebras de D,+ a altas temperaturas 3) por 3 minutos5 se separan% -ara la renaturaliación! la muestra se enfría en (ielo 10 minutos5% )romatografía líquida desnaturaliante de alto rendimiento &st6 detectar6 las mutaciones dependiendo de los fragmentos de los genes obtenidos en el -). # posterior a la desnaturaliación # renaturaliación! esto a partir de los tipos de reaparamientos que se (a#an lle$ado a cabo por las (ebras de D,+% Las moléculas quedar6n atrapadas en la fases solida fi"a! # posteriormente ser6n etraídas% &ste proceso depender6 de la temperatura que posea la molécula%

Félix Osorio Sandra Astrid

18 de Diciembre del 2014 Biología Molecular 

-osteriormente! se realia un cromatograma! en el cual se pueden leer los correspondientes resultados%

An#lisis La sensibilidad # especificidad de D7-L) superan el 9% &stas características # su ba"o costo (acen D7-L) una de las (erramientas m6s poderosas para la resecuenciación de los genomas (umanos # de otras especies% +parte de su aplicación al an6lisis mutacional de genes candidatos! D7-L) (a demostrado un papel decisi$o en la aclaración de la e$olución (umana # en el mapeo de genes% &mpleando condiciones completamente desnaturaliantes! la utilidad de D7-L) (a sido etendida a la determinación del genotipo de los  polimorfismos conocidos mediante la utiliación de la capacidad de para obtener moléculas de +D, monocatenario de tama:o idéntico que difieren en un solo base%

Conlusi!n La cromatografía líquida desnaturaliante de alto rendimiento pro$ee al in$estigador una (erramienta de separación a tra$és de métodos físicos para la e$aluación del material genético% ;i bien! este método sigue conser$ando el fundamento de la cromatografía original! con el tiempo se (a ido adecuando a las necesidades de los in$estigadores% +sí surgiendo la parte de
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