DETERMINACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS DEL SUELO MARTHA POSADA SEGUNDO CICLO 2014
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Annderson Alfonso, Alfonso, Carlos Diaz, 3 Carolina rincón 1
Ingenieria Ambiental, Ambiental, Universidad Universidad de La Salle, 2 Ingeniería Ambiental. Ambiental. Universidad Universidad de La Salle Ingeniería Ambiental, Ambiental, Universidad Universidad de La Salle,
Fecha práctica 01/10/2014; Fecha entrega de infore 22/10/2014
RESUMEN !n esta práctica "#e se realizó en el $a%oratorio de &icro%iolog'a de la (ni)ersidad De $a *alle se est#dió el análisis icro%iológico del s#elos, para poder hacer los respecti)os rec#entos epleando el +todo de placa prof#nda con dil#ciones en serie 1-10, 1-100, . 1-1000, #sando los edios de c#lti)o respec respecti) ti)os os para para identi identific ficar ar los icroo icroorg rgani aniso soss Agar Agar *a%o# *a%o#ra# ra#d d De ac#erd ac#erdo o a los res#lt res#ltado adoss o%tenidos podreos disc#tir so%re la po%lación icro%iana presente en este s#elo teniendo en c#enta los paráetros fisico"#'icos %ásicos Con el fin de poder esta%lecerse c#al"#ier #so del s#elo %ien sea con fines de agric#lt#ra o pastoreos de ganados con el fin de poder o%tener o #n s#elo adec#ado para dicho tra%aa "#e se "#iera realizar
Palabras claves: po%lación icro%iana; paráetros fisico"#'icos; análisis icro%iano ABSTRACT his his practi practice ce as carrie carried d o#t in the $a%ora $a%orato tor. r. of &icro% &icro%io iolog. log. of the (ni)ersi (ni)ersit. t. De $a *alle *alle icro%iological anal.sis of soils as st#died in order to ae the respecti)e co#nts #sing the ethod of deep plate ith serial dil#tions 1-10, 1- 100, and 1- 1000, #sing the respecti)e c#lt#re edia to identif. icroorg icroorganis anisss *a%o#ra#d *a%o#ra#d Agar Agar Accordi According ng to the o%tained o%tained res#lts res#lts e can disc#ss disc#ss this icro%ial icro%ial pop#lation in the soil soil taing into acco#nt the %asic ph.sicocheical ph.sicocheical paraeters o o an. land #se p#rposes p#rposes either faring or cattle grazing in order to o%tain or a s#ita%le gro#nd for s#ch ors ae .o# ant to set 1
Keywords: icro%ial pop#lation; ph.sicocheical paraeters; icro%ial anal.sis
INTRODUCCION
!l s#elo es la parte e6terior de la corteza terrestre en donde las rocas se han desintegrado por efecto del inteperiso, forando #na c#%ierta en la "#e )i)e #na icro%iota, #na flora . #na fa#na icro%ianas "#e, act#ando en con#nto, transforan ateria ineral en aliento de las plantas, para "#e p#edan ser #tilizadas posteriorente por los aniales . los seres h#anos !l s#elo está constit#ido por #na capa ás o enos gr#esa de aterial fragentario no consolidado "#e se conoce con el no%re de 9regolita: . "#e se apo.a en la roca s#%.acente !l s#elo, #nto con el ag#a en fora de ll#)ia o corrientes, perite el esta%leciiento de las acti)idades forestales, ganaderas . agr'colas As', el s#elo es el res#ltado de la interacción del clia, la roca adre, el drenae, la topograf'a, los icroorganisos . la )egetación a lo largo del tiepo $a calidad del s#elo se refiere a s# capacidad para sostener la prod#cti)idad )egetal . anial, as' coo antener o eorar la calidad del aire . ag#a *# iportancia radica en s# nat#raleza no reno)a%le en los tiepos de )ida h#ana
!l s#elo es #n ecosistea "#e contiene #na gran )ariedad de po%laciones icro%ianas c#.os ie%ros representan #chos tipos fisiológicos $as caracter'sticas "#'icas, f'sicas . %iológicas de #n s#elo partic#lar, as' coo la presencia de creciiento de plantas infl#irán en el n5ero . acti)idades de s#s di)ersos coponentes icro%ianos Adeás, a ca#sa de la nat#raleza heterog+nea del s#elo )arios tipos fisiológicos de organisos serán encontrados en las pro6iidades cercanas de #no a otro $a co#nidad icro%iana en s#elos es iportante por s# relación con la fertilidad del s#elo . con los ciclos %iogeo"#'icos de los eleentos, adeás del #so potencial de los ie%ros espec'ficos para aplicaciones a%ientales e ind#striales 7or lo "#e e6iste la necesidad de conocer, en#erar . aislar los ie%ros principales . enores de la co#nidad icro%iana en s#elos
OBJETIVOS 8dentificar los icroorganisos caracter'sticos "#e se enc#entran en la #estra de s#elo toada
IMPORTANCIA DE "A MICROBIANA EN E" SUE"O
VIDA
$os icroorganisos presentes en el s#elo eec#tan #na )ariedad de f#nciones, alg#nas de e6trea iportancia para la sal#d del s#elo . las plantas !stas acti)idades son e6treadaente iportantes para el noral
MARCO TEORICO !UE ES E" SUE"O# 2
f#ncionaiento de las plantas *in e%argo los icroorganisos p#eden ser afectados de anera drástica por los a%ientes "#'icos, f'sicos . %iológicos, por factores coo el p, la fertilidad, la disponi%ilidad . el contenido de ateria orgánica, contenido de resid#os, la teperat#ra, la porosidad de los s#elos . la )ariedad de c#lti)os Coo res#ltado todas las practicas de aneo "#e afectan estos factores ta%i+n afectan las acti)idades icro%ianas de #na o )arias aneras C#ando el proceso icro%iano es afectado en fora negati)a, generalente se )en efectos indirectos "#e red#cen en la sal#d . el )igor de las plantas C#ando se afecta en fora positi)a, este se anifiesta eorando el )igor de la planta, la tolerancia al estr+s . la resistencia a plagas
*# capacidad de #ltiplicación les perite crear po%laciones #. grandes en #n tiepo #. corto, colonizando rápidaente los s#stratos a degradar $a clase . a%#ndancia de %acterias presentes en #na fracción de s#elo dependen de los s#stratos "#e la copongan . de s#s condiciones $os gr#pos %acterianos "#e act5an priero so%re los s#stratos disponi%les son doinantes hasta "#e terina s# acción . l#ego dan oport#nidad a "#e otros gr#pos crezcan en el resid#o del eta%oliso de los prieros 7or lo tanto ha. gr#pos %acterianos "#e peranecen . otros "#e entran en latencia hasta "#e enc#entran condiciones fa)ora%les para s# creciiento $as %acterias tienen especial iportancia en la relación s#elo>planta . son responsa%les del increento o disin#ción en el s#inistro de n#trientes
Copleo dináico el s#elo ,caracterizado por #na gran cantidad partic#lar de ag#a ,eleentos inerales, flora . fa#na; los icroorganisos "#e ha%itan en el s#elo se ha encontrado acti)idad eta%ólica ,s#s di)ersas f#nciones en el fl#o de energ'a ,asi coo el ciclo n#tricional !n este proceso la a.or parte son los icroorganisos ás a%#ndantes . pe"#e
MICROOR$ANISMOS DE" SUE"O 3
$os s#elos agr'colas "#e están soetidos a la ecanización contin#a, al onoc#lti)o, al riego, a la aplicación de agro"#'icos . fertilizantes de s'ntesis, a la copactación . a las "#eas, tienen #na flora icro%iana #. %aa "#e afecta s# fertilidad$as %acterias %en+ficas del s#elo son indispensa%les para rec#perar la estr#ct#ra perdida por las practicas agr'colas, para hacer disponi%les los n#trientes "#e ha. en el s#elo . para incorporarle la ateria organiza "#e necesita para eorar la fertilidad
%ON$OS DE" SUE"O Conforan #na iportante fracción de la %ioasa total icro%iana del s#elo Crecen en fora de red e6tendi+ndose coo icelio hasta s# estado reprod#cti)o donde dan origen a esporas se6#ales o ase6#ales *on iportantes degradadores aero%ios de aterial )egetal en descoposición en s#elos ácidos 7rod#cen enzias . eta%olitos "#e contri%#.en al a%landaiento . a la transforación de s#stancias orgánicas a%i+n estas enzias foran parte de la acti)idad de otros icroorganisos
!ntre los g+neros %acterianos ás iportantes agr'colaente por la transforación de los cop#estos orgánicos e inorgánicos . "#e fa)orecen la n#trición de las plantas están?acill#s, 7se#doonas, Azoto%acter, Azospirill#, ?eierincia, @itrosoonas, @itro%acter, Clostridi#, hio%acill#s, $acto%acill#s, . =h.zo%i#
*on especies "#e se enc#entran en el s#elo, generalente cerca de la s#perficie donde pre)alece #na condición aeró%ica $os hongos son los descoponedores de cel#losa, lignina . pectina $a iportancia del hongo en el s#elo es "#e eora la estr#ct#ra f'sica ediante la ac##lación de s#s iceliosasa de hifas en +l Adeás los hongos foran #nos agregados "#e a.#dan a retener ag#a
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$os hongos eta%olizan cop#estos car%onados de #. dif'cil degradación coo las cel#losas, las heicel#losas . las ligninas a%i+n degradan az5cares siples, alcoholes, ainoácidos . ácidos n#cleicos 7#eden ser parásitos o saprofiticos *on #. iportantes en s#elos con desechos de cosecha *# creciiento raificado rápido . la intensa acti)idad degradadora les periten antener #n e"#ili%rio en los ecosisteas del s#elo
$os g+neros de hongos ás iportantes asociados a las ra'ces de las plantas son Aspergill#s, 7enicilli#, =hizop#s . richodera !l Aspergill#s . el 7enicilli# o)ilizan el fósforo . el nitrógeno del s#elo !l richodera sostiene la h#edad en las ra'ces en condiciones de se"#'a Alg#nas le)ad#ras son iportantes ferentadoras de car%ohidratos prod#ciendo alcoholes "#e son #tilizados por otros icroorganisos coo f#entes de energ'a !ntre los g+neros ás iportantes están el *accharo.ces . el =hodotor#la
$as ra'ces de las plantas están po%ladas de hongos "#e apro)echan las e6#daciones radic#lares constit#idas por az5cares, ainoácidos, ácidos orgánicos, n#cleótidos, enzias, )itainas . s#stancias prootoras de creciiento $os hongos o)ilizan n#trientes inerales hacia las ra'ces de las plantas, a#entan la capacidad de retener ag#a en se"#'a, fian nitrógeno . fósforo . protegen las ra'ces de fitopatógenos por espacio . eitiendo s#stancias "#e los inhi%en $os hongos son #. acti)os en las plantas . prefieren los az5cares "#e estas segregan por las ra'ces a%i+n toan ainoácidosAlg#nos hongos entran en si%iosis con las ra'ces llaadas icorrizas *on ás acti)os en s#elos arenosos . po%res en ateria orgánica $a si%iosis se )e fa)orecida por la po%reza ineral del s#elo
ACTINOMICETOS DE" SUE"O *on %acterias "#e se parecen a los hongos por tener icelio a+reo raificado !stán distri%#idos en di)ersos há%itats, se enc#entran en distintas prof#ndidades . son casi a%#ndantes coo el resto de las %acterias *on aero%ios . enos sensi%les a la se"#edad
*e enc#entran en el s#elo, las ag#as estancadas, el lodo . los ateriales orgánicos en degradación *e n#tren de ateriales orgánicos Degradan desde az5cares siples, prote'nas, ácidos orgánicos hasta s#%stratos #. copleos cop#estos por heicel#losas, ligninas, "#itinas . parafinas 7or esto son iportantes en el proceso de transforación hasta la o%tención del h##s en el s#elo Adeás son considerados coo los eores degradadores del s#elo, p#es son #. eficientes prod#ciendo s#stancias h5icas
Alg#nos actinoicetos prod#cen anti%ióticos "#e reg#lan los patógenos de las plantas "#e están en el s#elo Al agregar conidias de actinoicetos en #n s#elo containado con %acterias . hongos fitopatógenos, crecen inhi%iendo las po%laciones de los patógenos, reg#lando los pro%leas hasta alcanzar #n %alance "#e le perita a las plantas o%tener n#trientes . desarrollarse
!n s#elos %ien aireados con alto contenido de ateria orgánica alcanzan po%laciones #. altas Constit#.en del 10 al 0B de la co#nidad icro%iana del s#elo *e desarrollan %ien en s#elos con p desde hasta *e reprod#cen por conidias . estas son resistentes a condiciones dif'ciles de teperat#ra, acidez . h#edad !sto les perite gerinar c#ando se resta%lecen las condiciones fa)ora%les para s# desarrollo !n s#elos secos los actinoicetos se coportan #. %ien
$os g+neros de actinoicetos del s#elo ás iportantes para la n#trición de las plantas son*trepto.ces, @ocardia, &icroonospora, heroactinoices, Frania . Actino.ces
desarrollo %acteriano . fa)orece el creciiento de hongos . le)ad#ras !l agar es el agente solidif'cante
Co+-os.c./* ,0-.ca Contiene noralente 40 g/$ gl#cosa 10 g/$ pl#ripeptona 1 g/$ agar
MEDIO USADO PARA "A IDENTI&ICACI'N DE "OS MICROOR$ANISMOS DE" SUE"O
0,0 g/$ Ecloranfenicol p
Sabo(ra(d A)ar
RESU"TADOS1 Pr.+era ses./*1 !n esta priera parte se tiene #na #estra de s#elo de Gard'n casa, $a#ra casasG se hace #na toa de #estra de 10 gr de la s#elo !n #na %otella de tapa az#l se hace #na dil#ción de 1-10 de ag#a 7eptonada
Uso
$#ego se toan tres t#%os ensa.o . se hacen tres dil#ciones consec#ti)as 1-100 H 1-1000 H 1-10000 respecti)aente en cada t#%o se hace #na dil#ción de 1 $
&edio #tilizado para el aislaiento, identificación . conser)ación de hongos patógenos . saprófitos a%i+n es 5til para el c#lti)o de le)ad#ras
&(*da+e*,o
*e tienen inicialente I placas, se toa #na para hacer #na pr#e%a de esterilidad con el edio presente, l#ego en las placas restantes se pone 1$ de cada dil#ción pero esta se hace de fora clonada, en dos placas se aplica 1$ de cada dil#ción l#ego se agrega #na cantidad considera%le del edio en cada placa . cerrarla . ponerlas en las inc#%adora
&edio de c#lti)o recoendado para el aislaiento . desarrollo de hongos, partic#larente los asociados con infecciones c#táneas piel, pelo !n el edio de c#lti)o, la peptona, la tripte'na . la gl#cosa son los n#trientes para el desarrollo de icroorganisos !l alto contenido de gl#cosa, la presencia de cloranfenicol . el p acido, inhi%en el
Finalente se hace la tinción Jra en cada dil#ción para o%ser)ar en el icroscopio
8ageninción Jra dil#ción 1-10000 8agen1-7r#e%a esteril#estra dil#ciones con edio
•
Se)(*da ses./*
Desp#+s de tener #n d'a en la inc#%adora se sacan . se tiene en #na teperat#ra esta%le las placas . a los K d'as se o%ser)a lo sig#iente-
8agen2- incion Jra dil#ción 1-10
8agen3- inción Jra dil#ción 1-100 8agen- placas . pr#e%a esteril desp#es de K dias
8agen4- inción Jra dil#ción 1-1000
K
orado por de%ao . %lanco por encia, #no gris con 8agen - #estra dil#ción 1-10 desp#es K dias parte %lanco en fora de #, #no aarillo por de%ao . adelante . atrás %lanco por encia, #no aarillo con negro fora o)alada, #no aarillo con negro en fora redonda, !n estas placas o%ser)aos ha. 4 hongos diferentes a (no )erde con aarillo . %lanco, #no %lanco por siple )ista #no gris algodonoso, #no %lanco por encia . por de%ao con filaentos raificados . encia . al respaldo rosa claro, #no )erde osc#ro . creciiento radial #nas le)ad#ras "#e tienen #coides lisas aarilla por 4 le)ad#ras diferentes; #na #. grande, #na orada de%ao . %rillante por encia, #na %lanca con %ordes en el centro . las deás con foras )aria%les . tonos circ#lar no tan %rillante distintos !n estas placas o%ser)aos "#e se reprod#cen #. %ien los hongos . le)ad#ras estas crecen alg#nas en fora radial, otras crecen . se ro%an los n#trientes . no dean "#e crezca nada alrededor
8 8agen I- #estra dil#ción 1-1000 desp#+s K d'as parte adelante . atrás !n estas placas o%ser)aos 3 hongos a siple )ista #no rosado, #no gris, #no aarillo de diferentes foras, #no %lanco por encia . por de%ao grande, otro %lanco en el centro . caf+ por de%ao $e)ad#ras; #na aarilla %rillante, #na aarilla ate, aarillo %rillante en fora de #, #na %eige ate pe"#e
8agenK- #estra dil#ción 1-100 desp#es K dias adelante . atrás !n estas placas o%ser)aos I hongos diferentes a siple )ista .a "#e tienen filaentos raificados, #no I
8agen 10- #estra dil#ción 1-1000 desp#es K dias parte adelante . atrás !n estas placas o%ser)aos #na le)ad#ra redonda %rillante ediana, #n hongo pe"#e
!sta iagen #estra las placas 1 dias desp#es de la sie%ra . coo podeos o%ser)ar las le)ad#ras . hongos a#entaron s# taa
Des-(2s se el.)e* al)(*as +(es,ras de cada d.l(c./* y se observa* as0:
!sta placa es est+ril . coo o%ser)aos a los ocho d'as no creció nada coo se espera%a, esto "#iere decir "#e lo "#e creció en las otras placas era lo "#e tra'a la #estra de s#elo escogida
8agen11- oho negro #estra Dil#ción 1-10 desp#+s de K d'as de creciiento este oho se o%ser)a en la iagen anteriorente encionada !n esta iagen se o%ser)an estr#ct#ras redondas podr'a ser #n aspergill#s 10
8agen 14- oho aarillo #estra dil#ción 1-100 desp#es K dias creciiento este podr'a ser #n
8agen 12- oho rosado #estra dil#ción 1-10 desp#+s K d'as de creciiento !ste oho se o%ser)a en la iagen anteriorente encionada !n esta iagen o%ser)aos #chas clasidosporas
8agen 1- oho orado #estra dil#ción 1-100 desp#+s K d'as creciiento !ste oho lo podeos o%ser)ar en la iagen K !n este o%ser)aos icelios no ta%icados
8agen 13- $e)ad#ra %lanca #estra dil#ción 1-10 desp#+s de 1 d'as de creciiento !sta le)ad#ra se o%ser)a en la iagen anteriorente encionada $a iagen no nos %rinda a.or inforación para sa%er "#e tipo de le)ad#ra es
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8agen 1- le)ad#ra #estra dil#ción 1-100 desp#+s 1 d'as creciiento !n esta iagen o%ser)aos pse#doicelios de le)ad#ra
8agen 1I- oho aarillo #estra dil#ción 1-1000 desp#+s 1 d'as creciiento se o%ser)an hifas . raificaciones e6cesi)as
8agen 1- oho rosado #estra dil#ción 1-1000 desp#+s de K d'as creciiento !n este o%ser)aos icelios no ta%icados
8agen 20- oho negro dil#ción 1-1000 desp#es 1 dias creciiento se o%ser)an raificaciones e6cesi)as
8agen1K- le)ad#ra aarilla #estra dil#ción 1-10000 desp#+s de K d'as de creciiento !n esta iagen no lograos identificar "#+ tipo de le)ad#ra es
Al o%ser)ar estos ohos . le)ad#ras en el icroscopio f#e #. dif'cil reconocer de "#e genero eran cada #no, de%ido al estado en "#e se enc#entran los icroscopios . falta de practica para reconocer cada #no de ellos 7#dios o%ser)ar alg#nas estr#ct#ras coo pse#doicelios, clasidosporas, icelios no ta%icados M%ser)aos a siple )ista la diferencia entre #n oho . #na le)ad#ra de%ido a "#e los ohos son filaentosos .a "#e poseen #n icelio ientras "#e 12
las le)ad#ras no poseen icelios, los ohos tienen colores di)ersos . son algodonosos p#eden crecer alg#nos en fora radial, las le)ad#ras son generalente incoloras . lisas de fora redonda # o)alada !ntre a.or dil#ción o%ser)aos "#e los hongos no crecen, so%re)i)en las le)ad#ras
CONC"USIONES De%ido a las fallas en los icroscopios no lograos o%ser)ar perfectaente los hogos . le)ad#ras presentes en el s#elo *e p#do e)idenciar "#e en las placas 1-10 a la hora de )er los c#lti)os estos t#)ieron #na a.or r eprod#cción o creciiento gracias a "#e la #estra esta%a ás concentrada o enos dil#ida . ha%'a #na a.or concentración de hongos gracias a "#e en el edio "#e se realizó el c#lti)o en #n edio "#e tiene todas las condiciones fa)ora%les para dicha reprod#cción *e o%ser)ó a la hora de hacer la coparación entre las diferentes placas "#e los hongos predoinaron en la reprod#cción en todas las placas gracias a "#e estos son organisos ás d#ros . con #nas c#alidades . caracter'sticas #. diferentes "#e le fa)orece a la hora de reprod#cirse en c#al"#ier edio . entorno a coparación de las %acterias !n las diferentes placas a%os icrorganisos, hongos . %acterias se reprod#eron de #na fora adec#ada teniendo en c#anta s# edio . entorno con di)ersas caracter'sticas de reprod#cción de cada #no
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