HOSPITAL REGIONAL DEL CUSCO HOSPITAL CUSCO INTERNADO-2013
CONTROL DE CALIDAD EN PROCEDIMIENTOS EN LABORATORIO DE ANATOMIA PATOLOGICA
INTERNO DE TECNOLOGÍA MÉDICA:
MANUEL JACINTO CONCHA CHÁ CHÁVEZ VEZ
QUE ES CALIDAD? •
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La calidad es el factor principal en el desarrollo e implementación implementa ción exitosa de procedimientos dados para alcanzar las metas propuestas Es el resultado total de las caracterís características ticas del producto y servicio el cual satisf satisfará ará las expectativas expectativas del cliente
SEGURIDAD EN EL LABORATORIO •
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Comentario general general de la seguridad en el laboratorio Manual de procedimientos y Manual de seguridad Debe cubrir: Todos los procedimientos, reactivos, químicos, partes de equipos de laboratorio, laboratorio, seguridad eléctrica, infecciones, primeros auxilios, reporte se accidentes, acci dentes, inspecciones y entrenamien entrenamiento to..
SEGURIDAD EN EL LABORATORIO •
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Entrenamiento en materiales de seguridad Letreros y rótulos de preparación Vestimenta protectora y primeros auxilios Desechos de sustancia químicas peligrosas Almacenamiento de materiales inflamablees
SEGURIDAD EN EL LABORATORIO Inspeccion de seguridad: 1. Inspección para autoridades independientes: •
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Revisión detallado de procedimientos de seguridad, equipo y trabajo Debe haber documentos de quien recibió entrenamiento, cuando fue dad y por quién Los documentos de mantenimeintos de equipos y funcionamiento correcto debe estar disponible para todos
2. Inspección interna: –
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Programados a intervalos regulares Debe haber una lista de los detalles y preguntas (cuestionario)
PROCESOS ANALÍTICOS: FASE ANALÍTICA Matemáticas en el laboratorio: Solución porcentual •
v/v p/v diluciones contenido del colorante
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Manufacturador, % varía de lote a lote contenido porcentual radio de corrección
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Solución molar Solución normal Conversión de temperatura
PROCESOS ANALÍTICOS: FASE ANALÍTICA Preparación de soluciones: Formol al 10% Alcohol (100, 90, 80, 70) Hematoxilina: solución matriz A + solución matriz B Alcohol ácido: 1ml HCL + 99ml etanol (70%) Agua amoniacal: 2-4ml NH2OH (28%) + 800-1000ml H2O Eosina: 100ml eosina+10ml floxina B+780ml de etanol (95%)+4ml de ácido acético •
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PROCESOS ANALÍTICOS: FASE ANALÍTICA Fijación de tejidos: –
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Tejido endurecido ligeramente pero no se debe encoger ni fragmentar Formol al 10% Tener en cuenta ventajas y desventajas de los fijadores tiempo mínimo: 1-2 h Tiempo máximo: 24h Volumen 1/10
PROCESOS ANALÍTICOS: FASE ANALÍTICA Fijación de tejidos Tipos líquidos Alcohol: glucógeno Acetona: IHQ (lipasa fosfatasa) Formol (formalina): •
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No precipita proteinas Fijación suave Puede desarrollar burbujas Estabilizar la formalina con fosfatos (fosfato monobásico y dibásico de sodio) No estabilizado – ácido fórmico: producción de pigmento acido formalina hemática (se observa donde hay acumulación de hematíes)
Glutaraldehido: –
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Penetración más lenta Necesita temperatura baja Bueno en microscopía electrónica
PROCESOS ANALÍTICOS: FASE ANALÍTICA Fijación de tejidos Tipos líquidos Acido tricloracético: •
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Preserva aminoácidos con azufre: cisteina, metionina Decalcificante
Acido acético: –
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Rápido y penetra completamente Lisa los eritrocitos
Tipos sólidos Dicromato de potasio Ácido crómico Tetróxido de osmio: para microscopía electrónica •
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PROCESOS ANALÍTICOS: FASE ANALÍTICA Deshidratación, Aclaramiento e Infiltración •
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Remover toda el agua del tejido y reemplazarla con un medio que se solidifique para cortarlo Uso de alcoholes No es ventajoso tomar atajos (los tejidos pueden ser mal deshidratados, aclarados o infiltrados)
PROCESOS ANALÍTICOS: FASE ANALÍTICA
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Orientación del espécimen Posición del tejido en el bloque Se debe conocer lo mas posible la anatomía y la histología Los márgenes de las superficies tisulares pueden marcarse con tinta china para indicar la orientación correcta.
PROCESOS ANALÍTICOS: FASE ANALÍTICA Inclusión de tejidos •
Parafina a utilizar dependerá del tejido que se va a incluir
PROCESOS ANALÍTICOS: FASE ANALÍTICA
Microtomía •
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La elección de la cuchilla depende de la estructura del espécimen que se va a seccionar Ángulo Grosor Colocación correcta del bloque Corte del bloque
PROCESOS ANALÍTICOS: FASE ANALÍTICA
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Flotación El baño de flotación debe estar a una temperatura de unos cuantos grados menos del punto de fusión
PROCESOS ANALÍTICOS: FASE ANALÍTICA Coloración •
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Se debe filtrar periodicamente los colorantes con papel filtro Colorear aproximadamente 200 láminas Observar el color y el detalle nuclear al microscopio El control de calidad de las coloraciones se realizará mediante la observación en el microscopio
PROCESOS ANALÍTICOS: FASE ANALÍTICA Montaje •
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Medios de montaje Laminillas apropiadas según el tejido
Acido formico
CONTROL DE CALIDAD EN CITOLOGÍA
CONTROL DE CALIDAD EN CITOLOGÍA Los tres aspectos fundamentales para tener resultados confiables y en los cuales debemos trabajar son: Toma de la muestra Preparación Lectura •
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TOMA DE LA MUESTRA •
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Existe evidencia de que dos terceras partes de los errores se dan durante la toma de la muestra y el resto durante la lectura. Para asegurar una toma de calidad se necesita: Solicitud de estudio y laminilla perfectamente etiquetados (nombre, edad, antecedentes gineco-obstétricos, si es de primera vez o de control) La paciente no debe estar menstruando No usar lubricante No estar con tratamiento tópico desde una semana antes Sin relaciones sexuales Lavado o ducha 24 hrs antes.
TOMA DE LA MUESTRA •
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Para tomar la muestra debe observarse directamente el cérvix, y anotar observaciones macroscópicas La toma debe ser con cepillo y espátula de madera (debe contener células endocervicales y exocervicales) o cytobrush. Fijar la muestra inmediatamente con spray fijador a una distancia de 20-30 cm o con alcohol del 95 en Pap convencional, o depositar el cytobrush en el frasco en Papanicolaou mono capa.
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA •
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Laminilla perfectamente identificada, no rota, con solicitud de estudio perfectamente requisitado (de lo contrario se considera muestra inadecuada). Actualmente un estudio de Pap se considera una consulta médica. La muestra se tiñe con el método de Papanicolaou. Las diferentes soluciones deben tener marcada la concentración y fechas de almacenamiento y caducidad.
LECTURA DE LA MUESTRA • • •
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Debe ser por citólogo, citotecnólogo o patólogo calificado Las laminillas deben guardarse por 5-10 años. Se considera que un laboratorio de calidad debe leer por lo menos 25 000 muestras al año La citología se debe realizar a pacientes de 25 a 65 años con una periodicidad de cada 3 años cuando tuvo 3 resultados anuales negativas. Con respecto a periodicidad es importante señalar que el intervalo puede ser anual dependiendo esto de el juicio médico en casos individuales y de los factores de riesgo. El control de calidad será siempre la biopsia de cervix
CONTROL DE CALIDAD EN INMUNOHISTOQUÍMICA
EL CONTROL DE CALIDAD EN IHQ (I) La gran complejidad de los test empleados en inmunohistoquímica, la dificultad para estandarizarlos y la ausencia de valores de referencia ha llevado a que: Los procedimientos de control de calidad vayan muy por detrás de los de Análisis Clínicos. Aún no estén definidas la sensibilidad y la especificidad de cada determinación en numerosos laboratorios. •
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EL CONTROL DE CALIDAD EN IHQ (II) •
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No hay definición precisa o acuerdo sobre que muestras deben usarse como controles positivos y negativos. Los calibradores estandarizados para las pruebas apenas existen.
REQUISITOS BÁSICOS PARA LA CALIDAD EN IHQ •
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Fijación y procesamiento apropiados del tejido Eficiente recuperación antigénica Adecuada elección del anticuerpo primario y el clon en su caso Sistema de detección específico, seguro y potente Controles positivos y negativos apropiados Evitar guardar cortes de control para inmunohistoquímica más de 30 días. Si deben guardarse algunos envolverlos en papel de aluminio y almacenarlos en el congelador a - 20° C.
EL CONTROL DE CALIDAD EN IHQ: RESUMEN Es un reto importante pero no misión imposible Se basa en: • Usar controles apropiados • Emplear un sistema de detección lo más preciso, fiel,
sensible y específico posible • Manejar con eficiencia el desemascaramiento
antigénico por calor y enzimas cuando sea preciso • Usar anticuerpos primarios optimizados para
inmunoteñidores automáticos y clones apropiados • Armonizar, optimizar y estandarizar al máximo posible
todos los procesos
Conclusión Cada laboratorio debe analizar sus experiencias y problemas de vez en cuando, pero lo que debe evitarse es arrastrar problemas crónicos que pueden evolucionar en situaciones fuera de control.
