KARAKTERISASI ENZIM KOLAGENASE ORGAN DALAM IKAN PATIN (Pangasius pangasius)Deskripsi lengkap
bukuDeskripsi lengkap
ppt bioteknologi farmasiFull description
Bioinformatika RUNX1Full description
Deskripsi lengkap
Full description
makalah bioteknologi
biotek
mm
Deskripsi lengkap
bioteknologi, peran dan fungsinya
Universitas Negeri MalangFull description
Resume Jurnal BioteknologiDeskripsi lengkap
bioteknologi interferon Interferon adalah keluarga dari protein-protein yang terjadi secara alami yang dibuat dan dikeluarkan oleh sel-sel sistem imun (contohnya, sel-sel darah putih, sel…Full description
BIOTEKNOLOGIDeskripsi lengkap
Biotek kelautan
BIOTEKNOLOGI FARMASI ‘ISOLASI DAN PURIFIKASI PROTEIN’
DEWI DIANASARI, M.Farm.,Apt.
PROTEIN • ‘Protein’ a word derived from Greek word, proteios, which means ‘ of the first rank’ was coined by Jons J. Berzelius ini 1938 to stress the importance of this groups of organic compounds. Protein have been describeed as the servants of life. Most proteins are enzymes but in addition there also regulatory and structural protein.
• Sel mengandung ribuan protein • Prosedur pemurnian harus membedakan protein yang diinginkan dari protein yang lain • Sifat protein merupakan kunci dalam merancang protokol pemurnian
Prosedur pemurnian protein dapat dilakukan karena adanya variasi: Kelarutan, ukuran, muatan, binding specificity (affinity),sifat hidrofobik/hidrofilik
Inhibitor Protease: inaktivasi protease yang dibebaskan selama lisis sel Nama
Jenis Inhibitor
Target Protease
PMSF (Phenylmethylsulfonyl fluoride)
Ireversibel
Ser (+Cys) protease: terikat pada pusat aktif Ser/Cys
Benzamidine
Reversibel
Ser dan Cys protease: inhibitor kompetitif
EDTA
Reversibel
Metalo enzim: chelate metals
Pestatin (pentapeptida + gugus organik)
Reversibel
Asp’acidic’ protease: inhibitor kompetitif (target: pepsin, HIV protease)
Chromatographic Methods Protein differ in size and charge. Chromatographic methods take advantage of both properties. - Mobile phase - Stationary phase
Ion-exchange Chromatography (IEX)
• • •
Cation exchangers contain negatively charged polymer Anion exchangers contain positively charged polymer. Is effected by pH
Gel Filtration/Size Exclusion Chromatography
Kromatografi Interaksi Hidrofobik • Protein mempunyai ‘daerah’ hidrofobik dipermukaan yang dapat berinteraksi dengan resin • Resin yang mengandung gugus fenil atau alifatik mengikat protein: protein yang paling hidrofobik akan terikat paling kuat • Elusi dilakukan dengan pelarut yang kurang polar atau dengan menurunkan [garam]
Elektroforesis SDS-PAGE • Pemisahan protein (molekul bermuatan berdasarkan ukuran dalam medan listrik • Protein didenaturasi dengan detergen anion
Analisa Tingkat Kemurnian dengan SDS-PAGE 1. 2. 3. 4. 5.
Ekstrak kasar Pengendapan dengan garam Kromatografi penukar ion Kromatografi filtrasi gel Kromatografi afinitas
