PERCOBAAN 4 KARAKTERISASI BAKTERI NON FERMENTED LACTOSA
I. 1.
TUJUAN
Mendeskripsikan karekteristik pertumbuhan bakteri dari family Enterobacteriaceae non fermented lactose dalam media selektif dan diferensial.
2.
Mendeskripsikan karakteristik karakteristik fisiologis fisiologis bakteri dan family Enterobacteriaceae non fermented lactose
II.
DASAR TEORI
Menurut Menurut Nimatuzahroh Nimatuzahroh (2011), identifikasi identifikasi bakteri bakteri enterik enterik merupakan merupakan hal yang penting untuk mengontrol adanya infeksi usus yang disebabkan oleh kontaminasi makanan dan minuman, kelompok bakteri ini dapat ditemukan pada usus manusia dan usus mamalia lain yang dikelompokkan dalam famili Enterobacteriaceae. Bakteri dari golongan ini dapat dikelompokkan fermented lactosa) lactosa) dan menjadi dua yaitu bakteri enterik yang dapat memfermentasikan laktosa ((fermented tidak tidak dapat dapat memfer memfermen mentas tasika ikan n laktos laktosaa (non fermen fermented ted lactos lactosa a). GenusGenus-gen genus us bakteri bakteri yang yang coli, tergolong dalam kelompok Enterobacteriaceae fermented lactosa yaitu Escherichia coli, Citrobacter , Enterobacter , dan Klebsiella. Klebsiella. Sedangkan yang tergolong dalam Enterobacteriaceae non fermented lactosa adalah Salmonella, Salmonella, Shigella, Shigella, Proteus, Proteus, Yersinia, Yersinia, dan Edwardsiella. Edwardsiella. Menurut Suwandi, Usman (1999), di alam bakteri bakteri-bakteri yang tergolong Enterobacteriaceae memiliki peran yang beranekaragam. Bakteri dari genus Salmonella termasuk bakteri Gram negatif, bentuk batang, anerobik fakultatif, dan memiliki flagel peritrikus. Bakteri Pseudomonas aeruginosa mempunyai karakteristik berbentuk batang, gram negatif, tidak mampu memferment memfermentasi asi tetapi tetapi dapat meng-oksida meng-oksidasi si glukosa/kar glukosa/karbohidr bohidrat at lain, aerob, katalase katalase positip, oksi-dase positip dan tidak berspora. Ia dapat tumbuh di air suling dan akan tumbuh dengan baik dengan adanya unsur Nitrogen dan Carbon. Mereka banyak dijumpai melimpah dalam air dan tanah. Bakteri Alcaligenes denitrificans adalah bakteri berbentuk batang gram negatif, motil, dan aerob obligat. Media Media Mac Conkey Conkey berisi berisi garam empedu (untuk menghambat bakteri bakteri Gram-positif , kecuali
Enterococcus dan dan
bebe bebera rapa pa
spes spesie iess Staphylococcus yaitu
Staphylococcus
aureus) , pewarna kristal violet (yang juga menghambat bakteri Gram-positif tertentu), pewarna merah netral (untuk menandai mikroba yang memfermentasi laktosa), laktosa dan pepton. Komposisi Mac Conkey:
Peptone - 17 g
Proteose pepton - 3 g
Laktosa - 10 g
Garam empedu - 1,5 g
Natrium klorida - 5 g
Neutral red - 0,03 g
Agar - 13,5 g
Air - tambahkan untuk membuat 1 liter; menyesuaikan pH menjadi 7,1 + / - 0,2
Ada banyak variasi agar-agar Mac Conkey tergantung pada kebutuhan. Crystal Violet pada konsentrasi 0,0001% (0,001 g per liter) dimasukkan ketika untuk memeriksa apakah bakteri Gram-positif terhambat (Allen, Mary.E, 2005). Menurut Anonimous (2006) SSA adalah media selektif diferensial yang digunakan untuk menumbuhkan bakteri Salmonella dan Shigella. Media ini tergolong selektif karena terdiri dari bile salt yang berguna untuk menghambat pertumbuhan bakteri gram positif dan beberapa gram negatif, sehingga diharapkan bakteri yang tumbuh hanya Salmonella. Media ini digolongkan menjadi media diferensial karena dapat membedakan bakteri Salmonella dengan bakteri lainnya dengan cara memberikan tiga jenis karbohidrat pada media, yaitu laktosa, glukosa, dan salisin, dengan komposisi laktosa yang paling tinggi. Adapun komposisi dari media SSA adalah: •
Beef Extract
: 5.0 g
•
Pancreatic Digest of Casein
: 2.5 g
•
Peptic Digest of Animal Tissue : 2.5 g
•
Lactose
: 10.0 g
•
Bile Salts
: 8.5 g
•
Sodium Citrate
: 8.5 g
•
Sodium Thiosulfate
: 8.5 g
•
Ferric Citrate
: 1.0 g
•
Neutral Red
: 0.025 g
•
Agar
: 13.5 g
•
Brilliant Green
: 0.330 mg
Berikut morfologi koloni pada media Salmonella Shigella Agar : •
Escherichia coli
Slight growth, pink or red
•
Enterobacter/Klebsiella
Slight growth, pink
•
Proteus
Colorless, usually with black center
•
Salmonella
Colorless, usually with black center
•
Shigella
Colorless
•
Pseudomonas
Irregular, slight growth
•
Gram-positive bacteria
No growth
Sedangkan pada media Mac Conkey Agar : •
Escherichia coli
Red
or
Pink; Not
mucoid;
Round;
Opaque
precipitate of bile salts •
Klebsiella
Large, Red, Mucoid
•
Enterobacter aerogenes
Pink to Red
•
Serratia
Red to Pink, Not Mucoid
•
Arizona and Citrobacter
Colorless, Transparent; Red if lactose is fermented
•
Proteus
Colorless and Transparent
•
Salmonella
Colorless, Transparent or amber
•
Shigella
Colorless, Transparent or faintly Pink
ALAT DAN BAHAN
III.
Alat : •
Cawan petri
•
Labu Erlenmeyer
•
Pipet volume
Bahan: •
Bakteri Alcaligenes denitrificans
•
Bakteri Pseudomonas aeruginosa
•
Bakteri Salmonella typhosa
Media:
IV.
•
Mac Conkey agar
•
Media SSA (Salmonella Shigella Agar)
PROSEDUR PERCOBAAN 1.
Menumbuhkan semua bakteri yang digunakan pada praktikum kali ini pada media SSA dan Mac Conkey Agar dengan menggunakan metode streak .
2. Melakukan streak diharuskan secara aseptik dan menginkubasikan bakteri yang ditumbuhkan selama 24 jam. 3. Mengamati karakteristik koloni masing-masing bakteri yang tumbuh pada berbagai media baik SSA dan Mac Conkey Agar.
V.
HASIL PENGAMATAN
Tabel 4.1. Karakteristik cultural bakteri dan familia Enterobacteriaceae non fermented lactose
Bakteri
Karakteristik morfologi koloni bakteri pada media padat Mac Conkey Agar Salmonella Shigella Agar Koloni berbentuk bulat dan berukuran kecil,
Alkaligenes denitrificans
Koloni berwarna krem
dengan tengah berwarna
kekuningan , denagan
gelap dan pinggiran
elevasi flat
berwarna putih dan juga ada yang transparan,
Pseudomonas aeruginosa
Koloni berbentuk irregular ,
elevasi flat Koloni berbentuk
bewarna hijau keabuhan,
irregular , bewarna hijau
elevasi koloni flat
Sallmonela typhosa
VI.
Koloni berwarna krem, dan elevasi convex
keabuhan, elevasi koloni flat Koloni tidak berwarna atau transparan, sangat tipis, dan elevasi convex
PEMBAHASAN
Pada praktikum kali ini bertujuan untuk mendeskripsikan karakteristik pertumbuhan dan fisiologi bakteri dari family Enterobacteriaceae non fermented lactose. Namun uji fisiologis tidak dilakukan pada praktikum kali ini. Bakteri yang digunakan pada praktikum kali initidak hanya dari family Enterobacteriaceae namu juga ada bakteri dari kelompok lain. Ketiga bakteri yang digunakan adalah Alkaligenes denitrificans, Pseudomonas aeruginosa, dan Sallmonela typhosa. Pada landasan teori diketahui bahwa bakteri dari genus Salmonella termasuk bakteri Gram negatif, bentuk batang, anerobik fakultatif, dan memiliki flagel peritrikus. Bakteri Pseudomonas aeruginosa
mempunyai karakteristik berbentuk batang, gram negatif, tidak mampu
memfermentasi tetapi dapat meng-oksidasi glukosa/karbohidrat lain, aerob, katalase positip, oksi-dase positip dan tidak berspora. Bakteri Alcaligenes denitrificans adalah bakteri berbentuk batang gram negatif, motil, dan aerob obligat (Suwandi, 1999). Dari hasil pengamatan diketahui karakteristik cultural bakteri Alkaligenes denitrificans pada media Mac Conkey Agar adalah koloni berwarna krem kekuningan , denagan elevasi flat, dan pada media SSA Koloni berbentuk bulat dan berukuran kecil, dengan tengah berwarna gelap dan pinggiran berwarna putih dan juga ada yang transparan, elevasi flat. Karakteristik bakteri ini hamper mirip dengan bakteri Sallmonela typhosa dimana pada media Mac Conkey Agar Koloni berwarna krem, dan elevasi convex, sedangkan pada media SSA Koloni tidak berwarna atau transparan, sangat tipis, dan elevasi convex. Dapat diamati bahwa kedua bakteri ini hanya dapat dibedakan pada elevasinya. Pada bakteri Pseudomonas aeruginosa karakteristik cultural pada media Mac Conkey Agar adalah koloni berbentuk bulat irregular , bewarna hijau keabuhan, elevasi koloni flat, sedangkan pada SSA juga sama koloni berbentuk irregular , bewarna hijau keabuhan, elevasi koloni flat. Warna hijau pada koloni bakteri ini memang khas karena bakteri Pseudomonas aeruginosa memiliki pigmen hijau bukan karena terjadi reaksi kimia antara produk metabolisme sekunder bakteri dengan media.
Non-Lactose fermenting bacteria seperti Salmonella, Pseudomonas aeruginosa dan Alkaligenes denitrificans tidak dapat menggunakan laktosa sebagai sumber energinya. Namun, bakteri ini akan mengubah peptode menjadi amoniak yang kemudian menaikkan pH pada Mac Conkey agar. Hal ini kemudian membuat koloni menjadi tidak berwarna. Terkadang, bakteri ini juga dapat berwarna emas hingga coklat dengan bagian tengah berwarna hitam. Koloni mereka berbentuk bulat tidak teratur. Sedangkan pada Lactose fermenting bacteria dapat dapat memproduksi asam sehingga menurunkan pH. Indikator neutral red dapat diserap dan mengubah koloni menjadi warna merah (Snow dan Hussey, 2007) . VII.
KESIMPULAN
Bakteri Salmonella typhosa, Pseudomonas aeruginosa dan Alkaligenes denitrificans merupakan bakteri non fermented lactose karena tidak menggunakn laktosa sebagai sumber energinya hal ini diketahui karena bakteri koloni bakteri tersebut tidak berwarna merah. Karakteristik pertumbuhan bakteri Salmonella typhosa dan Alkaligenes denitrificans hamper mirip karena bewarna krem pada media Mac Konkey dan transparan pada media SSA. Sedangkan bakteri Pseudomonas aeruginosa bewarna hijau keabu-abuhan di kedua media tersebut. Hal ini disebabkan karena bakteri tersebut memiliki pigemen yang berwarna..
DAFTAR PUSTAKA
Allen, Mary.E. 2005. MacConkey Agar Plates Protocols. Sumber : http://www.microbelibrary.org/index.php/component/resource/laboratory-test/2855macconkey-agar-plates-protocols. Diakses pada tanggal 3 April 2011 pukul 10:40. Anonimous. 2006.
Media Uji Pemecahan Komponen Makanan oleh Mikroorganisme.
ttp://lordbroken.wordpress.com/2010/07/27/media-uji-pemecahan-komponen-makananoleh-mikroorganisme/. Diakses 10 April 2011 pukul 11:57 Joseph, Md . 1905. MacConkey J. H. State. Dept. Health. Procedures, 1960. European Pharmocopoeia 7.0. 5:33. Leifson. 1935. J. Pathol. Bacteriol. 40:581. Nimatuzahroh, et al . 2011. Petunjuk Praktikum Bakteriologi. Surabaya: Departemen Biologi Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Airlangga. Pollock., Dahlgren. 1974. Appl. Microbiol . 27 :197. Suwandi,Usman.1999.
Peran
Media
Untuk
Identifikasi
Mikroba
Patogen
http://www.kalbe.co.id/files/cdk/files/10PeranMediauntukIdentifikasiMikroba124.pdf/10 PeranMediauntukIdentifikasiMikroba124.html. Diakses 10 April 2011 pukul 11:38 Snow, Kristine., Marise, Hussey, 2007. Identification of Lactose Positive and Lactose Negative Bacteria on MacConkey Agar. Suber : http://www.wisc-online.com/objects/ViewObject.aspx?ID=MBY701. Diakses tanggal : 10 Apr 2011 Taylor., Harris. 1965. Am. J. Clin. Pathol. 44:476.
