IJPST
Analisis Makanan dan Kontaminan, 8 November 2017
ANALISIS KUALITATIF RHODAMIN B METODE KROMATOGRAFI KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS Dina Sofa Istifada (260110150045)
[email protected] Fakultas Farmasi Universitas Padjadjaran, Bandung, Jawa Barat, Indonesia Abstrak
Rhodamin B adalah zat warna sintetis berbentuk serbuk kristal, tidak berbau, berwarna merah keunguan, dalam bentuk larutan berwarna merah terang berpendar (berfluoresensi). Rhodamin B merupakan bahan tambahan pangan yang dilarang penggunaanya. Rhodamin B banyak disalahgunakan sebagai pewarna makanan seperti pada terasi, kerupuk, sambal, dan lain- lain. Bahaya yang dapat ditimbulkan diantaranya iritasi pada saluran pernapasan dan merupakan zat karsinogenik (dapat menyebabkan kanker) serta dalam konsentrasi yang tinggi dapat menyebabkan kerusakan pada hati. Analisis kualitatif rhodamin B pada sampel makanan dilakukan dengan metode KLT menggunakan fase diam plat silika dan fase gerak n butanol: etil asetat :amonia. Percobaan ini menunjukkan hasil negatif, yaitu tidak adanya kandungan Rhodamin B pada sampel, dibuktikan nilai Rf sampel yaitu 0,308, tidak sama dengan nilai Rf baku Rhodamin yaitu 0,68 untuk nilai Rf baku rhodamin. Kata Kunci : Rhodamin, Sentrifugasi, Kualitatif, KLT
QUALI TATI TATI VE ANALYSIS OF OF R HODAMI HODAMI N B WI WI TH THI N LAYER CHR OMATOGRAPHY MATOGRAPHY ME THOD Ab A bstr str act Rhodamine B is a synthetic s ynthetic pigment in the form of a crystalline powder, odorless, purplishred, in the form of a fluorescent bright red solution (fluorescence). Rhodamin B is a food additive that is prohibited its use. The risk of consume Rhodamine are irritation of the respiratory tract and carcinogenic (can cause cancer), in high concentration can cause damage to the liver. The qualitative analysis of rhodamine B in samples was performed by TLC method using silica plate as a stationary phase and mobile phase are n-butanol: ethyl acetate: ammonia. This experiment showed a negative result, because the Rf value of the sample is 0.308 and 0.68 for the Rf standard of rhodamine. rhodamine.
K eywo ywor d : R hod hodami ne, ne, S entrifuge, Quali Qualita tative, tive, TL C
1
IJPST
Analisis Makanan dan Kontaminan, 8 November 2017
dengan tampilan yang menarik dan warna-
PENDAHULUAN
Rhodamin
B
merupakan
warni (Mautinho et al , 2007).
pewarna
yang dipakai untuk industri cat, tekstil dan
Zat pewarna adalah bahan tambahan
kertas. Rodamin B merupakan zat warna
makanan yang dapat memperbaiki atau
sintetis berbentuk serbuk kristal, tidak
memberi
berbau, berwarna merah keunguan, dalam
Penambahan
bentuk larutan berwarna merah terang
dimaksud
berpendar (berfluoresensi). Zat warna ini
makanan yang berubah atau memucat
dapat menyebabkan iritasi pada saluran
selama proses pengolahan atau memberi
pernapasan
zat
warna pada makanan yang tidak berwarna
karsinogenik (dapat menyebabkan kanker)
agar kelihatan lebih menarik (Mamoto,
serta Rhodamin dalam konsentrasi tinggi
2013).
dan
merupakan
warna
pada
pewarna
untuk
pada
makanan. makanan
memperbaiki
warna
Rhodamin B termasuk jenis pewarna
dapat menyebabkan kerusakan pada hati
sintetik
(Mamoto, 2013).
berbahaya
yang
dilarang
digunakan pada proses produksi makanan
Rumus molekul dari rhodamin B berat
dan minuman. Hal tersebut diatur dalam
molekul sebesar 479 g/mol, sangat larut
Peraturan Menteri Kesehatan Republik
dalam air yang akan menghasilkan warna
Indonesia No.1168 / MENKES / PER / X /
merah kebiru - biruan dan berfluorensi
1999 (Depkes RI., 1999), dan Peraturan
kuat (Botsoglou, 2001).
Pemerintah RI No. 28 tahun 2004. Namun
adalah
C28H31N2O3Cl
dengan
demikian, masih sering dijumpai adanya Rhodamin B pada makanan yang berwarna merah, seperti pada jajanan kue berwarna merah muda di kota Manado (Yamlean dkk., 2009); pada kerupuk pati yang dijual di Jakarta (Sumarlin, 2008); dan beberapa Secara luas aditif pangan yang sering
jenis makanan lain seperti cendol, kolang-
digunakan adalah preservative (pengawet)
kaling, gulali, saus tomat, cabai giling dan
dan pewarna (dye). Zat-zat aditif ini
minuman sirup (Cahyadi, 2009).
nilai
Berdasarkan suatu penelitian terhadap
pangan. Oleh karena itu produsen pun
rhodamin B yang dilakukan pada mencit,
berlomba menawarkan aneka produknya
diketahui
digunakan
untuk
mempertinggi
bahwa
rhodamin
B
menyebabkan terjadinya perubahan sel hati
2
IJPST
Analisis Makanan dan Kontaminan, 8 November 2017
dari normal menjadi nekrosis dan jaringan
Sampel yang sudah dipekatkan ditotolkan
di
disintegrasi.
pada plat silika dengan pipa kapiler (jarak
Kerusakan pada jaringan hati ditandai
1 cm dari bawah plat dan 1,25 cm jarak
dengan
antar
sekitarnya
mengalami
adanya
piknotik
(sel
yang
noda).
Biarkan
beberapa
saat,
melakukan pinositosis) dan hiperkromatik
kemudian plat silika dimasukkan ke dalam
dari
chamber yang sudah dijenuhkan dengan
nukleus,
degenerasi
lemak
dan
sitolisis dari sitoplasma (Pohanish, 2008).
fase gerak n-butanol : etil asetat : amonia (10:4:5).
Dibiarkan
hingga
terelusi
METODE PENELITIAN
sempurna, lalu diangkat dan dikeringkan.
Alat
Lalu, diamati dan dihitung nilai rf-nya.
Alat yang digunakan yaitu beaker glass, chamber, gelas ukur, neraca analitik,
HASIL PENGAMATAN
penangas air, pipet tetes, plat silika,
Kelompok 1
sentrifugator, tabung sentrifugasi.
Nilai Rf
Baku
Bahan
Bahan
yang
digunakan
antara
Gambar
Sampel
Rhodamin
lain
B
ammonia, etanol 70%, etil asetat, n-
0,68
butanol, rhodamin B, sampel uji.
0,21
Preparasi Sampel
Penyiapan metode
sampel
dilakukan
sentrifugasi
yaitu
dengan Kelompok 2
ditimbang
sampel sebanyak 5 gr. Lalu, sampel
Nilai Rf
dilarutkan dalam 10 ml etanol 70% dan
Baku
diekstraksi dengan disentrifugasi selama 5
Rhodamin
menit (kecepatan 5000 rpm). Selanjutnya
B
diambil supernatan yang terbentuk dan
0,733
dipekatkan di atas penangas air.
Identifikasi
Kualitatif
Rhodamin
B
Metode KLT
3
Sampel
0,167
Gambar
IJPST
Analisis Makanan dan Kontaminan, 8 November 2017
Kelompok 3
Kelompok 6
Nilai Rf
Baku
Gambar
Nilai Rf
Sampel
Baku
Rhodamin
Rhodamin
B
B
0,648
Gambar
Sampel
0,928
Kelompok 4 Nilai Rf
Baku
Gambar
PEMBAHASAN
Sampel
Praktikum kali ini bertujuan untuk
Rhodamin
menentukan kandungan senyawa rhodamin
B
dalam sampel secara kualitatif. Rhodamin
0,71
0,957
B adalah zat warna sintetis berbentuk serbuk kristal, tidak berbau, berwarna merah keunguan, dalam bentuk larutan berwarna
merah
terang
berpendar
(berfluoresensi). Rhodamin B merupakan bahan tambahan pangan yang dilarang Kelompok 5
penggunaanya, namun saat ini banyak
Nilai Rf
Baku
disalahgunakan sebagai bahan pewarna
Gambar
makanan, seperti pewarna krupuk, saos,
Sampel
terasi dan arum manis.
Rhodamin
Sampel yang digunakan adalah saos
B -
sambal salah satu merk yang ada di
0,333
supermarket. Analisis Rhodamin B dalam saos ini dilakukan karena rhodamin B dalam makanan
terutama
saos
perlu
diawasi
keberadaanya sebab Rhodamin B merupakan pewarna sintesis yang biasa digunakan pada industri 4
tekstil
sehingga
penggunaan
IJPST
Analisis Makanan dan Kontaminan, 8 November 2017
rhodamin B dalam suatu sediaan (makanan
objek berotasi di dalam tabung atau
maupun minuman) dilarang karena dapat
silinder yang berisi campuran cairan dan
menimbulkan dampak yang tidak diharapkan
partikel, maka campuran tersebut dapat
bagi kesehatan seperti gangguan fungsi
bergerak menuju pusat rotasi gaya tersebut
ginjal, hati dan kanker.
adalah gaya sentrifugasi. Gaya inilah yang
Warna dari suatu produk makanan
menyebabkan
ataupun minuman dalam salah satu ciri yang
dinding
sangat penting. Warna merupakan kriteria
lebih
makanan.
sentrifugasi
yaitu
untuk pengujian rhodamin B adalah uji KLT.
menggunakan
Sentrifugasi merupakan salah satu teknik
untuk
mempercepat
untuk
perbedaan
Teknik
pada
Pemisahan
sentrifugal
prinsip
dimana
pemisahan
kepolaran
zat.
Zat
yang
diam, artinya zat tersebut dan semakin sulit untuk dielusi oleh fase gerak sehingga kecepatan terelusi akan lebih lambat dari
menggunakan diputar
adalah
fase diam akan terjerat lebih lama di fase
proses
partikel-partikelnya.
objek
KLT
memiliki kepolaran yang mirip dengan
pengendapan dengan memberikan gaya sentrifugasi
karena
senyawa dalam campuran berdasarkan
sentrifugasi, yaitu metode yang digunakan dalam
dilakukan
dilakukan dan murah. Prinsip pengujian
selama 5 menit (kecepatan 5000 rpm).
campuran.
Kromatografi
pengujian menggunakan metode ini mudah
sampel diekstraksi dengan disentrifugasi
memisahkan
dasar,
Analisis kualitatif yang dilakukan
pelarutan
dipergunakan
di
metode KLT.
mudah larut dalam etanol. Selanjutnya
dapat
berada
identifikasi secara kualitatif menggunakan
sampel saos yang tergolong zat yang
yang
akan
Setelah preparasi sampel, berikutnya yaitu
Tujuan penambahan etanol 70% yaitu proses
berat
dan dipekatkan di atas penangas air.
ditimbang
dilarutkan dalam 10 ml etanol 70%.
memudahkan
Sentrifugasi
yaitu diambil supernatan yang terbentuk
dengan
sampel sebanyak 5 gr. Kemudian, sampel
untuk
endapan.
akan terletak di atas. Langkah selanjutnya
yang dilakukan yaitu preparasi sampel.
metode
terakumulasi
sedangkan substansi yang lebih ringan
Dalam praktikum kali ini, prosedur
dilakukan
dan
jenis molekul sehingga substansi yang
petunjuk mengenai perubahan kimia dalam
sampel
menuju
memisahkan substansi berdasarkan berat
antara lain warna juga dapat memberi
Penyiapan
tabung
membentuk
dasar untuk menentukan kualitas makanan,
partikel-partikel
pada zat memiliki kepolaran yang berbeda
secara
dengan fase diam. Rhodamin memiliki
horizontal pada jarak tertentu. Apabila 5
IJPST
Analisis Makanan dan Kontaminan, 8 November 2017
kelarutan yang tinggi dalam pelarut yang
polar, etil asetat semi polar , dan ammonia
memiliki kepolaran tinggi seperti air,
non polar.
etanol sehingga dapat disimpulkan bahwa
Sebelumnya,
rhodamin bersifat polar.
dilakukan
proses
penjenuhan chamber dengan fase gerak
Kromatografi lapis tipis merupakan
yang
terdiri
dari
pelarut
campuran
salah satu analisis kualitatif dari suatu
berdasarkan perbedaan kepolaran hingga
sampel yang ingin di deteksi dengan
jenuh. Untuk mengetahui apakah fase
memisahkan komponen-komponen sampel
gerak dalam chamber sudah jenuh atau
berdasarkan
belum
perbedaan
kepolaran.
dapat
ditentukan
mencelupkan
pemisahan fisika-kimia dengan fase gerak
chamber.
(larutan pengembang yang cocok), dan
dalam chamber telah jenuh adalah kertas
fase diam (bahan berbutir) yang diletakkan
saring yang berada dalam chamber telah
pada penyangga berupa plat gelas atau
menjadi basah secara keseluruhan. Tujuan
lapisan yang cocok. Pemisahan terjadi
penjenuhan chamber ini adalah untuk
selama
menjadikan eluen memenuhi chamber dan
kapiler
Tanda
saring
ke
cara
Kromatografi lapis tipis adalah metode
perambatan
kertas
dengan
bahwa
fungsinya
di deteksi. Zat yang memiliki kepolaran
kromatografi berjalan dengan baik. Jika
yang
akan
eluen tidak memenuhi chamber, maka
cenderung tertahan dan nilai Rf-nya paling
distribusi dari fase diam tidak akan dapat
kecil. Prinsip Kromatografi lapis tipis
berjalan sehingga kromatografi gagal dan
adalah memisahkan komponen-komponen
hasil yang diperoleh tidak teliti. Dalam
atas dasar perbedaan adsorpsi atau partisi
kromatografi bertujuan untuk menentukan
oleh fase diam di bawah gerakan pelarut
apakah terdapat suatu senyawa dalam
pengembang.
sampel
dengan
fase
diam
Pada identifikasi Rhodamin dalam
fase
suasana
(pengembangan) lalu hasil pengembangan
sama
sebagai
dalam
dengan
bercak/noda
gerak
ditandai
yang
menunjukkan
dalam
adanya suatu
sampel makanan menggunakan KLT , fase
senyawa. Tiap senyawa memiliki distribusi
gerak yang digunakan adalah pelarut
yang berbeda-beda dalam suatu fase gerak.
campuran yaitu n-butanol: etil asetat :
Hasil
yang
membuktikan
dari
ammonia dengan perbandingan 10:4:5 .
praktikum
Penggunaan fase gerak dengan pelarut
sampel saos kelompok 1 yang diuji tidak
campuran ini didasarkan atas dasar tingkat
mengandung senyawa rhodamin B (negatif
kepolaran dimana n-butanol memiliki sifat
rhodamin B). Hal ini dapat dilihat dari
6
yaitu
didapatkan
bahwa
IJPST
Analisis Makanan dan Kontaminan, 8 November 2017
hasil nilai Rf yang didapatkan dari sampel
diperbilehkan
dan dibandingkan dengan nilai Rf baku
tartrazine, carmoisine, erythrosium, fast
rhodaminnya. Rf baku yang
didapatkan
green FCF, indigocarmine. Sedangkan zat
yaitu sebesar 0,68 cm sedangakan Rf
pewarna yang termasuk dalam zat pewarna
sampel sebesar 0,308 cm.
alami adalah ekstrak pigmen alami dari
Pada hasil uji sampel kelompok 2
diantarana
tumbuh-tumbuhan
dan
amaranth,
zat
pewarna
didapatkan hasil yang negatif dengan nilai
mineral, walaupun ada juga beberapa zat
Rf baku rhodamin B sebesar 0,733 dan
pewarna
seperti
nilai Rf sampel sebesar 0,167. Hasil uji
pewarna
dari
sampel kelompok 3 menunjukkan nilai Rf
diperbolehkan
sampel yang lebih tinggi daripada nilai Rf
makanan yaitu klorofil, karamel, karoten,
baku rhodamin B-nya yaitu sebesar 0,928
alkanat, besi oksida, kurkumin.
β-karoten. bahan
untuk
Contoh
alam
yang
ditambahkan
di
(sampel) dan 0,648 (baku). Pada uji sampel kelompok 4 didapatkan hasil yang
KESIMPULAN
negatif dengan nilai Rf sampel 0,957
Didapatkan
sedangkan nilai Rf baku rhodamin B
mengandung rhodamin B) pada sampel
sebesar 0,71. Sedangkan pada hasil uji
kelompok 1, 2, 3, 4, 5, dan 6 dengan
sampel kelompok 5 didapatkan nilai Rf
metode kromatografi lapis tipis (KLT).
sampel
sebesar
0,333,
tetapi
hasil
negatif
(tidak
tidak
didapatkan nilai Rf baku rhodamin B. Hal
DAFTAR PUSTAKA
ini dapat terjadi akibat human error atau
Botsoglou, N.A. 2001. Drug Residues in
kesalahan saat preparasi bahannya. Hasil
Foods pharmacology, Food Safety,
uji sampel yang terakhir yaitu sampel
and Analysis. New York: Marcel
kelompok 6 yang tidak didapatkan nilai Rf
Dekker, Inc.
sampel maupun nilai Rf baku rhodamin B-
Cahyadi, W. 2009. Analisis & Aspek
nya Pada
bahan
baku
Kesehatan
makanan,
Bahan
Tambahan
Pangan. Jakarta: Bumi Aksara.
diperbolehkan adanya tambahan pewarna
Mamoto, L. V. dan Citraningtyas, F. G.
yang dianjurkan sesuai dengan aturan yang bahan
2013. Analisis Rhodamin B pada
pewarna yang diperbolehkan pada bahan
Lipstik yang Beredar di Pasar Kota
makanan yaitu jenis pewarna sintetis dan
Manado. Pharmacon, Vol. 02 (2) :
pewarna alami. Zat pewarna sintetis yang
61-66.
sudah
diterapkan.
Salah
satu
7
IJPST
Analisis Makanan dan Kontaminan, 8 November 2017
Moutinho, ILD., Bertges, LC. and Assis,
Journal Ilmiah & Sains, Vol. 11 (2):
RVC. 2007. Prolonged use of the
289-295.
food dye tartrazine (FD&C yellow No 5) and its effects on the gastric mucosa of Wistar rats. Braz. Journal Biol ., 67(1): 141-145. Pohanish R. 2008. Sittig’s Handbook Of Toxic And Hazardous Chemicals And Carcinogens. USA: Elsevier. Sumarlin, L.O. 2008. Identifikasi Pewarna Sintetis Pada Produk Pangan Yang Beredar di Jakarta dan Ciputat . Jakarta: Program Studi Kimia FST UIN Syarif Hidayatullah. Yamlean, P.V.Y. 2011. Identifikasi dan Penetapan Kadar Rhodamin B Pada Jajan kue Berwarna Merah Muda ynag
beredar
di
Kota
Manado.
8
IJPST
Analisis Makanan dan Kontaminan, 8 November 2017
LAMPIRAN Perhitungan Rf
Rf baku
= 0,68 cm
Rf sampel =
Rf
=
= 0,21 cm
= 0,308 cm
9
