PEMBUATAN DAN EVALUASI SEDIAAN APUS VAGINA MENCIT
Oleh: Nama NIM Rombongan Kelompok Asisten
: Siti Khoerun Nisa : B1A015016 : III :3 : Indri Muhati
LAPORAN PRAKTIKUM PERKEMBANGAN HEWAN
KEMENTERIAN RISET, TEKNOLOGI, DAN PENDIDIKAN TINGGI UNIVERSITAS JENDERAL SOEDIRMAN FAKULTAS BIOLOGI PURWOKERTO 2016
I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Dalam reproduksi dikenal dengan istilah siklus reproduksi, siklus reproduksi adalah perubahan siklis yang terjadi pada sistem reproduksi (ovarium, oviduk, uterus dan vagina) hewan betina dewasa yang tidak hamil, yang memperlihatkan korelasi antara satu dengan lainnya. Siklus reproduksi dipengaruhi oleh faktor pelepasan dari hipotalamus, hormon gonadotrhopin dari hipofisis dan hormon seks dari ovarium. Siklus reproduksi pada mamalia nonprimata disebut siklus estrus sedangkan siklus reproduksi pada primata disebut siklus menstruasi (Muchtarromah, 2006). Vaginal smear atau apus vagina merupakan perubahan-perubahan histologis vagina yang terjadi pada semua mamalia betina selama siklus estrus. Teknik preparat apus vagina ini sangat bermanfaat bagi spesies yang memiliki suklus estrus pendek seperti mencit dan tikus, hal ini disebabkan oleh histologis vagina dapat menunjukan kejadian-kejadian pada ovarium dengan tepat. Spesies dengan siklus yang lebih panjang akan mengalami keterlambatan satu hingga beberapa hari dari perubahan ovarium sehingga preparat apus vagina kurang dapat dipercaya untuk digunakan sebagai indikator kejadian di dalam ovarium (Nalbandov, 1990). Vagina smear bertujuan untuk menentukan siklus estrus. Siklus estrus ditentukan dengan cara mengindentifikasi sel leukosit dan sel epitel yang terdapat pada mencit. Vaginal smear sangat penting dipelajari karena sangat diperlukan dalam observasi perbandingan yang membutuhkan pemahaman yang lebih mendalam khususnya masalah pada organ reproduksi (Bagnara, 1988). B. Tujuan
Tujuan praktikum pembuatan dan evaluasi sediaan apus vagina mencit adalah untuk melakukan prosedur pembuatan preparat apus vagina, dapat mengidentifikasi tipe-tipe sel dalam preparat tersebut dan menentukan fase pada hewan uji.
II. MATERI DAN METODE
A. Materi
Alat-alat yang digunakan dalam praktikum pembuatan dan evaluasi sediaan apus vagina mencit adalah cotton bud , larutan NaCl 0,9%, larutan alkohol 70 %, pewarna methylen blue 1% akuades, dan gelas objek beserta penutupnya dan mikroskop cahaya. Bahan-bahan yang diperlukan dalam praktikum pembuatan dan evaluasi sediaan apus vagina mencit adalah mencit betina matang kelamin yang tidak sedang hamil. B. Metode
Metode yang dilakukan dalam praktikum ini adalah: 1.
Mencit betina yang akan diperiksa dipegang dengan tangan kanan dengan cara melentangkannya di atas telapak tangan sementara tengkuk dijepit oleh ibu jari dan telunjuk. Ekor dijepit diantara telapak tangan dan jari kelingking.
2.
Ujung cotton bud dibahasi dengan larutan NaCl 0,9% kemudian secara perlahan dimasukkan ke dalam vagina mencit sedalam 5 mm dan diputar searah jarum jam secara perlahan-lahan dua hingga tiga kali.
3.
Gelas objek dibersihkan dengan alkohol 70% dan dikeringudarakan. Ujung cotton bud yang sudah dioleskan pada vagina tersebut dioleskan memanjang dua atau tiga baris olesan dengan arah yang sama pada gelas objek.
4.
Olesan vagina tersebut ditetesi dengan larutan methylen blue 1% sambil sesekali dimiringkan agar pewarna merata pada permukaan ulasan dan ditunggu selama 5 menit. Pewarna yang berlebihan dibersihkan dengan membilas gelas objek menggunakan akuades atau air mengalir kemudian ditutup dengan gelas penutup.
5.
Amati preparat di bawah mikroskop dengan perbesaran lemah kemudian perbesaran kuat. Perhatikan tipe dan proporsi sel dalam preparat apusan. Gambarlah sel-sel yang ditemukan dalam sediaan tersebut dan tentukan fas enya.
6.
Gambarlah bentuk sel epitel dan leukosit yang tampak pada preparat apus vagina yang dibuat.
III. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil 1
(A)
(B)
Keterangan: Gambar (A) : Mikroskopis Siklus Estrus Fase Estrus Perbesaran 10X10 Gambar (B) : Skematis Siklus Estrus Fase Estrus Keterangan Gambar : 1. Sel Epitel Terkornifikasi
B. Pembahasan
Ada beberapa metode yang dapat dilakukan untuk mengetahui fase estrus pada mencit. Salah satunya dengan metode Vaginal Smear . Metode vaginal smear lebih banyak digunakan karena bisa menunjukkan hasil yang lebih akurat. Metode ini menggunakan sel epitel dan leukosit sebagai bahan identifikasi. Sel epitel merupakan sel yang terletak di permukaan vagina, sehingga apabila terjadi perubahan kadar estrogen maka sel epitel merupakan sel yang paling awal terkena akibat dari perubahan tersebut. Leukosit merupakan sel antibodi yang terdapat di seluruh bagian individu. Leukosit di vagina berfungsi membunuh bakteri dan kuman yang dapat merusak ovum. Sel epitel berbentuk oval atau polygonal, sedangkan leukosit berbentuk bulat berinti (Nalbandov, 1990). Siklus reproduksi yang biasa disebut siklus estrus memiliki 4 tahap yaitu Proestrus, estrus Metestrus, dan Diestrus. Tahap Proestrus merupakan tahapan awal dimana folikel tumbuh berkembang dengan stimuli FSH dan menghasilkan hormone estrogen. Terdapat banyak sel epitel berinti dan beberapa leukosit dan sel epitel terkornifikasi (Xiao, 2014). Tahap Estrus adalah tahap dimana folikel sudah matang dan siap berovulasi. Tidak terlihat sel leukosit. Lebih banyak sel epitel yang terkornifikasi dan beberapa sel epitel berinti. Fase estrus dapat terlihat dari prilaku mencit dan morfologi vagina mencit. Pada saat estrus biasanya mencit terlihat tidak tenang dan lebih aktif, dengan kata lain mencit berada dalam keadaan mencari perhatian kepada mencit jantan (Chakraborti, 2013). Fase estrus merupakan periode ketika betina reseptif terhadap jantan dan akan melakukan perkawinan, mencit jantan akan mendekati mencit betina dan akan terjadi kopulasi. Mencit jantan melakukan semacam panggilan ultrasonik dengan jarak gelombang suara 30 kHz – 110 kHz yang dilakukan sesering mungkin selama masa pedekatan dengan mencit betina, sementara itu mencit betina menghasilkan semacam pheromon yang dihasilkan oleh kelenjar preputial yang diekskresikan melalui urin. Pheromon ini berfungsi untuk menarik perhatian mencit jantan. Mencit dapat mendeteksi pheromon ini karena terdapat organ vomeronasal yang terdapat pada bagian dasar hidungnya (Gilbert, 1994). Pada fase estrus yang dalam bahasa latin disebut oestrus yang berarti “kegilaan” atau “ gairah” (Campbell et al, 2010). Hipotalamus terstimulasi untuk
melepaskan gonadotropin-releasing hormone (GRH). Estrogen menyebabkan pola perilaku kawin pada mencit. Gonadotropin menstimulasi pertumbuhan folikel yang dipengaruhi follicle stimulating hormone (FSH) sehingga terjadi ovulasi (Gilbert, 1994). Jika kandungan FSH lebih rendah dibandingkan kandungan luteinizing hormone (LH) dan terjadi coitus, maka dapat dipastikan mencit akan mengalami kehamilan. Pada tahap estrus vagina pada mencit betinapun membengkak dan berwarna merah. Tahap estrus pada mencit terjadi dua tahap yaitu tahap estrus awal dimana folikel sudah matang, sel-sel epitel sudah tidak berinti, dan ukuran uterus pada tahap ini adalah ukuran uterus maksimal, tahap ini terjadi selama 12 jam. Lalu tahap estrus akhir dimana terjadi ovulasi yang hanya berlangsung selama 18 jam. Jika pada tahap estrus tidak terjadi kopulasi maka tahap tersebut akan berpindah pada tahap matesterus (Soeminto, 2000). Tahap Metestrus merupakan tahapan dimana kadar hormone gonatropin dalam ovarium menurun akibat tidak terjadi fertilisasi. Sel leukosit yang hilang mucul kembali. Namun masih ada beberapa sel spitel terkonifikasi dan sel epitel berinti (Hanson JL, 2012). Tahapan diestrus merupakan tahapan dimana konsentrasi hormone gonatropin dan hormone ovarium kembali ke level basal. Korpus luteum meregresi. Kadar sel leukosit dan epitel kembali ke semula, namun masih ada sedikit sisa sel epitel terkornifikasi (De Jong, 2014). Berdasarkan pengamatan yang telah dilakukan, dapat diketahui dari sel yang tampak yaitu epitel mengalami penandukan (terkornifikasi) menunjukan bahwa mencit sedang mengalami fase estrus. Pertumbuhan yang cepat dan kornifikasi epitelium vagina selama dan pada akhir estrus disebabkan oleh estrogen. Naiknya kadar estrogen pada mencit juga memberikan kontribusi pada menurunnya kadar kalori pada mencit (Frisch, 1975). Kelebihan metode vaginal smear adalah dapat menunjukkan hasil yang akurat terkait kondisi sitologi vagina pada mencit dalam siklus estrus. Kekurangannya adalah masih sukarnya membedakan perbedaan sitologi tahap yang sedang dialami oleh mencit. Terkadang sering terjadi kesalahpahaman antara beberapa tahapan. Perlu diketahui bahwa disetiap tahap pasti ada sel epitel yang terkornifikasi. Tahap estrus sulit dibedakan dengan tahap metesrtus karena jika dibawah mikroskop, kedua tahapan itu semuanya terdapat sel epitel terkornifikasi yang tersebar banyak.
Terkadang lapang pandang mikroskop juga mempengaruhi hasil pengamatan terhadap siklus estrus. Jika dilihat dari gambar yang didapat dari hasil praktikum dan membandingkannya dengan referensi maka akan didapatkan sedikit perbedaan. Hasil pengamatan menunjukkan sel epitel yang terkornifikasi namun masih ada seperti bintik-bintik sel yang lain di sekitranya. Kemungkinanan besar itu tahapan estrus atau metestrus. Oleh karena itu, metode vaginal smear sangat efektif dan cukup akurat, namun masih sulit membedakan beberapa tahapan dalam siklus estrus (Byers, 2012).
IV. KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan
Berdasarkan hasil dan pembahasan di atas maka dapat diambil kesimpulan sebagai berikut: 1. Vaginal smear digunakan untuk mengidentifikasi tipe-tipe sel dalam sediaan apus vagina dan untuk menentukan fase – fase siklus estrus yang terjadi hewan uji. Tipe sel yang diidentifikasi dalam vaginal smear adalah sel epitel dan sel leukosit. 2. Siklus estrus terdapat empat tahap yaitu proestrus, estrus, metestrus dan diestrus. 3. Tipe sel pada fase estrus di siklus estrus hewan mamalia betina yaitu adanya ephitel terkornifikasi. 4. Praktikum vaginal smear untuk kali ini didapatkan fase estrus pada mencit betina yang ditandai dengan adanya epithel terkornifikasi
B. Saran
Saran yang dapat saya sampaikan pada praktikum kali ini , yaitu sebaiknya dalam pembuatan apus vagina tidak hanya dilakukan pada mencit saja, tetapi pada mamalia lain yang dapat diujikan dengan metode vaginal smear, s ebaiknya seluruh praktikan satu persatu mencoba pembuatan apus vagina, supaya semua praktikan dapat membuat apus vagina dengan benar dan yang terakhir adalah waktu untuk praktikum lebih diefisiensikan untuk mendapatkan hasil pengamatan yang lebih baik sehingga dalam pembuatan laporan tidak terdapat hal yang kurang jelas.
DAFTAR REFERENSI
Bagnara, T. 1988. Endokrinologi Umum. Diterjemahkan oleh Harjoso. Surabaya: Universitas Airlangga. Byers SL, Wiles MV, Dunn SL, Taft RA. 2012. Mouse Estrous Cycle Identification Tools and Image. PLos ONE 7 (4). Campbell, N. A et al. 2010. Biologi Edisi ke 8 Jilid III . Erlangga, Jakarta Chakraborty P, Roy SK. 2013. Expression of Estrogen Receptor a 36 (ESR36) in the Hamster Ovary throughout the Estrous Cycle: Effects of Gonadotropins. PLoS ONE 8 (3). De Jong TR, Beiderbeck DI, Neumann ID. 2014. Measuring Virgin Female Aggression in the Female Intruder Test (FIT): Effects of Oxytocin, Estrous Cycle, and Anxiety. PLoS ONE 9 (3). Frisch, R. E. 1975. Body Weight and Food Intake at Early Estrus of Rats on a High Fat Diet , 12: 4172-4176. Gilbert, S.F. 1994. Developmental Biology 4th ed. Massachusetts: Sianuer Associates inc Publisher. Hanson JL, Hurley LM. 2012. Female Presence and Estrous State Influence Mouse Ultrasonic Courtship Vocalizations. PLoS ONE 7 (7). Muchtarromah, Bayyinatul. 2006. Panduan Praktikum Struktur Perkembangan Hewan II . Malang: Universitas Islam Negeri Malang. Nalbandov, A. V. 1990. Reproductive Physiology of Mammals and Birds. San Fransisco: W. H. Freeman and Company. Soeminto. 2000. Embriologi Vertebrata. Purwokerto: Unsoed. Xiao L, Zhang C, Li X, Gong S, Hu R, et al. 2014. Signaling Role of Prokineticin 2 on the Estrous Cycle of Female Mice. PLoS ONE 9 (3).
