UNIVERSID UNIVERS IDAD AD PRIVADA PRIVADA AUTÓNOMA DEL DE L SUR
PARÁMETROS DE CALIDAD Y VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS
Validación de métodos analíticos Los métodos utilizados en un laboratorio de análisis químicos han de ser evaluados y sometidos a prueba para asegurarse de que producen unos resultados válidos y coherentes con el objetivo previsto, es decir, han de ser validados (UNO!, "#$#%&
ETAPAS PRELIMINARES
VALIACIÓN EL M"TOO ANAL#TICO
SUPERVISIÓN Y CONTROL EL !UNCIONAMIENTO EL M"TOO
.eplanteamiento
e'inicin del problema )lecccin del método
*oma de muestra
Optimizacin del método
*rans'ormacin de la muestra
dquisicin de los datos
*ratamiento de los datos
Operaciones previas /étodo analítico
Validación del método analítico
-aloracin de los resultados
.esultados
Eta$as $%elimina%es $& 0denti'icar los requisitos
"& )legir el método analítico que se postulará
1& esarrollar el método
Validación del método analítico 2 0denti'icar el tipo de método (parámetros% )speci'icidad3selectividad Límite de deteccin 4recisin (en condiciones de repetibilidad y3o reproducibilidad en laboratorio% )stabilidad Linealidad y margen de error )5actitud (sesgo% (en condiciones de repetibilidad y3o reproducibilidad en laboratorio% .ecuperacin /edicin de la incertidumbre
4.6/)*.O7 ) !L0
)74)!080!0 )ste parámetro se relaciona con el grado en que otras sustancias inter'ieren en la identi'icacin y, si procede, en la cuanti'icacin de los analitos de que se trate& /ide la capacidad del método para identi'icar3cuanti'icar los analitos en presencia de otras sustancias, endgenas o e5genas, en una muestra de la matriz en las condiciones e5igidas por el método& La especi'icidad depende de la concentracin y debe determinarse el margen de error de calibracin en su nivel más bajo&
L0/0*) ) )*)!!09N 7e trata de la concentracin mínima de analito que puede ser detectada e identi'icada con un determinado grado de certidumbre& )l límite de deteccin se de'ine también como la concentracin mínima que puede distinguirse del ruido de 'ondo con un determinado grado de con'ianza& 4ara estimar el límite de deteccin pueden utilizarse varios métodos, todos los cuales dependen del análisis de especímenes en blanco y el e5amen de la relacin entre la se:al y el ruido& 4or lo general se acepta un requisito mínimo de relacin se:al3ruido de 13$& )l límite de deteccin no es un parámetro robusto y puede resultar a'ectado por cambios menores del sistema analítico (por ejemplo, temperatura, pureza de los reactivos, e'ectos de matriz, condiciones instrumentales%&
4.)!0709N La precisin mide el grado de acuerdo entre los resultados analíticos obtenidos de una serie de mediciones repetidas del mismo analito realizadas en las condiciones previstas en el método& La precisin re'leja los errores aleatorios que se producen cuando se utiliza un método& Las condiciones en que se mide la precisin se dividen, seg;n opinin general, en condiciones repetibles y condiciones reproducibles& La repetibilidad de las condiciones e5iste cuando el mismo analista analiza muestras el mismo día y con el mismo instrumento (por ejemplo, cromatgra'o en 'ase gaseosa% o los mismos materiales (por ejemplo, reactivos para pruebas visuales% y en el mismo laboratorio& !ualquier cambio de estas condiciones (por ejemplo, di'erentes analistas, di'erentes días, di'erentes instrumentos, di'erentes laboratorios% implica que las condiciones slo serán reproducibles&
La precisin normalmente se mide en términos de coe'iciente de variacin o desviacin típica relativa de los resultados analíticos obtenidos con patrones de control preparados independientemente& La precisin depende de la concentracin y debe medirse con concentraciones di'erentes dentro del rango aceptado, normalmente en la parte baja, media y alta de éste& Una precisin aceptable en el nivel in'erior de concentracin es del "#<&
L0N)L0 = /.>)N ) )..O. *radicionalmente se considera que un método es lineal cuando e5iste una relacin directamente proporcional entre la respuesta obtenida cuando se aplica el método y la concentracin del analito en la matriz dentro del rango de concentraciones del analito buscado (rango de trabajo%& )l rango de trabajo viene de'inido por la 'inalidad del método y puede representar slo una parte de la totalidad de la línea recta& ?abitualmente los criterios de aceptacin implican una prueba de la @bondad de ajusteA& 8recuentemente se utiliza como criterio de la linealidad un coe'iciente de correlacin (r % elevado, del #,BB& 7in embargo, este criterio no basta para demostrar que e5iste una relacin lineal, por lo que cabe considerar que se puede utilizar un método que no permita establecer un coe'iciente de correlacin tan alto como el #,BB pero permita cumplir los 'ines previstos& )stos parámetros no son aplicables a los métodos cualitativos salvo si se establece un umbral de concentracin para re'lejar resultados&
)C!*0*U /edicin de la di'erencia entre los resultados previstos del análisis y el valor de re'erencia aceptado, debido a un error sistemático del método y del laboratorio& Normalmente se e5presaen porcentaje& La e5actitud y la precisin determinan el error total del análisis& La e5actitud se determina tericamente utilizando material de re'erencia certi'icado (/.!% si es posible, métodos de re'erencia, estudios en colaboracin o mediante comparacin con otros métodos& Lo normal es estimar la e5actitud analizando muestras a:adidas con tres concentraciones distintas (baja, media y alta% que abarquen la totalidad del rango de trabajo& La concentracin de estas adiciones estándar debe ser distinta de la utilizada para preparar las curvas de calibracin y debe prepararse con una solucin estándar de trabajo distinta& Los criterios de aceptacin de la e5actitud deben ser similares a los utilizados para medir la precisin&
.)!U4).!09N 4or recuperacin de analitos en un ensayo se entiende la respuesta del detector ante una adicin o e5traccin de analito de la matriz, en comparacin con su respuesta ante la concentracin real del estándar de re'erencia verdadero (los materiales incautados%& *ambién puede entenderse como el porcentaje de droga, metabolito o estándar interno presente inicialmente en el espécimen, que llega hasta el 'inal del procedimiento& No es necesario que la recuperacin del analito sea del $##<, pero el grado de recuperacin (del analito y del estándar interno% debe ser estable (con cualquier tipo de concentracin analizada%, precisa y reproducible (más del "#<%&
/)0!09N ) L 0N!).*0U/D.) )n metrología, la incertidumbre se de'ine como un parámetro asociado con el resultado de una medicin que caracteriza la dispersin de los valores que puede atribuirse razonablemente al mensurando& (/ensurandoE cantidad concreta medida%& )n términos más prácticos la incertidumbre se puede de'inir como la probabilidad o el nivel de con'ianza& !ualquier medicin que hagamos entra:ará un cierto grado de incertidumbre, por lo que el intervalo de incertidumbre que se 'ije será el rango dentro del cual se situará el valor real con un determinado grado de con'ianza& Normalmente se utiliza un grado de con'ianza del BF<& La incertidumbre de las mediciones, por lo general, tiene muchos componentes& La incertidumbre se calcula estimando los errores que se producen en las distintas etapas del análisis, por ejemplo, la etapa preanalítica, la homogeneizacin, el pesaje, el pipeteado, la inyeccin, la e5traccin, la derivacin, la recuperacin y las curvas de calibracin& Los datos e5igidos para la validacin, por ejemplo, la e5actitud y precisin en condiciones de repetibilidad3 reproducibilidad, re'lejan ya muchos de estos 'actores y deben ser utilizados&
)7*D0L0 4ara validar un método debe demostrarse en qué medida los analitos se mantienen estables durante todo el procedimiento de análisis, incluido su almacenamiento antes y después de éste& )n general, la medicin se hace comparando patrones recién reparados con una concentracin conocida con patrones similares almacenados durante di'erentes períodos de tiempo y en di'erentes condiciones&
Validación del método analítico 2 4reparar la documentacin de la validacin
/odelo de procedimiento normalizado de trabajo para la validacin de un nuevo método analítico
Validación del método analítico 2 .edactar las instrucciones para los usuarios )laboracin del procedimiento del método analítico&
S&$e%'isión ( cont%ol del )&ncionamiento del método espués de haber sido validado el método, y de haberse empezado a utilizar, cualquier sistema de garantía de la calidad e5ige una vigilancia continua para establecer si sigue 'uncionando de acuerdo con las especi'icaciones& )ste proceso de vigilancia supone un control continuo de la calidad del método&
/uchas gracias por su atencin
*i+lio,%a)ía irectrices para la validacin de métodos analíticos y la calibracin del equipo utilizado para el análisis de drogas ilícitas en materiales incautados y especímenes biolgicos& Naciones Unidas& NeG =orH, "#$#& 4rincipios de nálisis 0nstrumental& && 7Hoog, 8&I& ?oller y *&& Nieman& /c>raGJ ?ill, /adrid, "##$&
