TINCIONES ESTRUCTURALES ALVAREZ TICONA DORIS, CHAYACAÑA CHOQUEPATA NAZARETH, CUTIPA CHOQUE SONIA FACULTAD DE CIENCIAS FARMACEÚTICAS UNIVERSIDAD CATÓLICA DE SANTA MARIA – AREQUIPA AREQUIPA MICROBIOLOGA FARMACEÚTICA
RESUMEN Las tinciones en microbiología son las primeras herramientas que se utilizan en el laboratorio para el diagnóstico de las enfermedades infecciosas. Desde hace más de un siglo han ayudado a resolver problemas de etiología microbiana. Hay una gran variedad de tinciones, que se han ido desarrollando para la detección de los diferentes agentes infecciosos en los que se incluyen bacterias, parásitos y hongos. La tinción de Gram se considera básica en la valoración inicial de muestras para análisis bacteriológico, mientras que la tinción de Wright se ocupa para el diagnóstico de enfermedades muy particulares en el rubro de la parasitología. Hay técnicas tintoriales específicas de gran utilidad, como la tinción de ZiehlNeelsen, que se utiliza para el diagnóstico de enfermedades crónicas como la tuberculosis o la actinomicosis, o la tinción de azul de lactofenol, que preserva e identifica a los componentes estructurales de los hongos. Las diferentes tinciones en el laboratorio microbiológico tienen una utilidad fundamental para el diagnóstico y tratamiento oportuno de múltiples patologías de etiología infecciosa.
I.
ABSTRACT Stains in microbiology lab are the first tools employed for diagnosis of infectious diseases. Stains have helped to identify the ethiology of microbial involvement for more than a century. As the wide spectrum of stains is currently in progress for the detection of bacteria, fungus and parasites, such fundamentals as the Gram stain are still considered basic for initial evaluation of bacteriological samples, while the Wright stain is used for very particular diseases as those related to parasites. Other specific tintorial methods as the ZiehlNeelsen stain are used for diagnosis of chronic diseases such as tuberculosis oractinomycosis. The lactophenol blue stain is best employed for diagnosis of fungal infections, as it helps to identify fungi and to preserve their morphological structures. Different stains in the clinical microbiological lab are permanent basic tools for the diagnosis and treatment of many diseases of
infectious ethiology
INTRODUCCIÓN
En microbiología el microscopio se utiliza de forma rutinaria, ya que pr oporciona importante información para la identificación temprana y definitiva de los microorganismos. En la valoración de las muestras, es trascendente el poder de resolución del microscopio, el cual se define como la capacidad que posee un objetivo para distinguir la distancia mínima entre dos puntos del objeto para que se puedan visualizar como dos puntos separados. El poder de resolución de un objetivo es el responsable de la calidad, claridad, nitidez y fineza detallada de la imagen, y depende de la longitud de onda ( λ) del haz de luz utilizado y de la apertura numérica del objetivo empleado. El máximo poder de resolución en un microscopio de luz emitida es de 0.2 μm, por lo que se requiere de una amplificación entre 1000-1400x, mientras que el poder de resolución del ojo humano es de aproximadamente 0.2 mm. Para aprovechar esta ventaja de los microscopios, se han desarrollado técnicas tintoriales que des tacan las características morfológicas de los microorganismos. Existe una gran variedad de tinciones que pueden ser aplicadas dentro del campo de la microbiología. TINCIONES ESTRUCTURALES Mientras las tinciones diferenciales permiten distinguir entre distintos tipos de microorganismos, las tinciones estructurales incrementan el contraste en las células microbianas y revelan estructuras particulares, entre las que se incluyen las endosporas, los flagelos y las cápsulas .
Tinción de Gram La técnica de la tinción de Gram fue desarrollada por el bacteriólogo danés Christian Gram en 1884. Esta tinción clasifica las bacterias en dos grupos: Gram positivas y Gram negativas. La técnica incluye tinción primaria, decoloración y tinción de contraste: Se tiñe el espécimen con el primer colorante, cristal violeta, que tiñe d e violeta. Se añade el mordiente, iodo. Se aplica el agente decolorante, normalmente una s olución de acetona o etanol. En este momento, las bacterias Gram negativas pierden su tinción violeta, pero las Gram positivas retienen el colorante. Como colorante de contraste se añade safranina, que tiñe de rosa las bacterias Gram negativas, previamente decoloradas; mientras que a las bacterias Gram positivas les proporciona un color violeta más intenso.
El distinto comportamiento frente a los colorantes de las bacterias Gram positivas y Gram negativas se debe a las diferencias existentes en sus superficies externas. Las células Gram negativas poseen una capa de peptidoglicano delgada y una membrana externa. Las bacterias Gram positivas poseen una capa gruesa de peptidoglicano v carecen de membrana externa. La tinción de Gram es extraordinariamente útil en clínica. Esta técnica es, casi siempre, la primera prueba que se lleva a cabo en la identificación de un microorganismo causante de una enfermedad, aislado de un paciente. Con sólo un microscopio y unos cuantos botes de colorante podemos averiguar si un organismo es Gram positivo o Gram negativo, su morfología celular y su agrupación típica. Esto, a veces, es suficiente para determinar con qué tipo de bacteria estamos trabajando. Es más, el tratamiento de una infección depende de que el agente sea Gram positivo o Gram negativo, ya que algunos antibióticos actúan sólo sobre los primeros, y otros sobre los segundos. La penicilina, por ejemplo, es más efectiva contra bacterias Gram positivas; mientras que la estreptomicina y la tetraciclina actúan sobre ambas. TINCIÓN DE ÁCIDO-ALCOHOL RESISTENCIA La tinción diferencial de ácido-alcohol resistencia fue desarrollada por Paul Ehrlich en 1882. Actualmente se utiliza una modificación de la técnica de Ehrlich que recibe el nombre de tinción de Ziehl-Neelsen. Esta tinción sirve para teñir bacterias del género Mycobacterium, el resto de las bacterias se tiñen de azul por el colorante de contraste. M. tuberculosis, causante de la tuberculosis y M. leprae, causante de la lepra o enfermedad de Hansen, se identifican mediante esta tinción.
Las micobacterias son ácido-alcohol resistentes porque p oseen en sus cubiertas lípidos de ácidos grasos complejos que forman en su pared celular un material de tipo céreo resistente a la decoloración. Una tinción ácido-alcohol resistente se realiza según los siguientes pasos: 1. Tinción primaria con fucsina básica, que tiñe todas las células de rojo. 2. Calentamiento suave de la preparación para facilitar la penetración del colorante en el interior de la célula. 3. Decoloración con una solución de ácido clorh ídrico en etanol. Este decolorante elimina la fucsina de tod as las células excepto de las micobacterias, que la retienen debido a su superficie cérea. 4. Coloración de contraste con azul de metileno. Se tiñen de azul todas las células previamente decoloradas, lo que facilita la diferenciación entre las células de Mycobacterium, aún teñidas de rojo, y las células restantes del espécimen.
TINCIÓN DE ESPORAS DE WIRTZ-CONKLIN Algunas bacterias poseen endosporas, estructuras de resistencia que les permiten sobrevivir en condiciones ambientales extremas. Las endosporas poseen cubiertas gruesas e impermeables que no absorben la mayoría de los colorantes. La tinción de esporas de Wirtz-Conklin, sin embargo, es efectiva: Tinción con verde de malaquita. Calentamiento a emisión de vapores durante tres a seis minutos, para que el colorante penetre a través de las paredes de la endospora. Lavado con agua del grifo, que elimina el colorante verde de todas las partes de la célula, con excepción de las esporas. Tinción de contraste con el colorante rosa safranina. Al final del proceso, las endosporas bacterianas quedan teñidas de verde y el resto de la célula de rosa. Las bacterias Bacillus anthracis y Clostridium perfringens, agentes etiológicos del carbunco y la gangrena, respectivamente, forman esporas y pueden ser identificadas mediante esta tinción. TINCIÓN DE FLAGELOS DE LEIFSON Los flagelos, largos y finos apéndices de las células bacterianas que les permiten moverse, son tan delgados que resultan invisibles al microscopio óptico, si no se realiza una técnica especial para su tinción. Los distintos métodos de tinción utilizan combinaciones de mordientes y metales para engrosar los flagelos, así como colorantes para teñirlos. La tinción de flagelos de Leifson se realiza según la siguiente técnica: Se fija químicamente la suspensión bacteriana, mediante formol, y se hace la extensión en un portaobjetos. Se deja secar al aire, sin calentamiento alguno. Se cubre la preparación con una mezcla de ácido tánico y el colorante rosanilina, de preparación extemporánea. El ácido tánico engruesa los flagelos y la rosanilina los tiñe. - Se retira el exceso de colorante con agua. Se deja secar al aire, antes de su observación al microscopio.
Esta tinción permite determinar el número y la disposición de los flagelos de las bacterias, lo que constituye una información esencial para la identificación de muchas especies. La tinción de flagelos es un arte que se adquiere sólo con la práctica . TINCIÓN NEGATIVA Algunas bacterias están rodeadas por una estructura protectora denominada cápsula. Para poner de manifiesto la presencia de una cápsula se utiliza una técnica denominada tinción negativa: Se hace una preparación en fresco del espécimen. Se añade tinta china. Las partículas de carbón de la tinta no pueden penetrar en la cápsula, de manera que solo se ennegrece el fondo. Al microscopio, se observan las células y sus capsulas, como zonas claras alrededor de las mismas. Se puede aplicar un colorante para hacer las células más visibles (los colorantes habituales no tiñen las cápsulas). También se puede usar nigrosina, en lugar de tinta china.
(a) La tinción de Wirtz-Conklin se utiliza para observar endosporas. Bacillus cereus es una bacteria esporulada. Las endosporas mantienen la tinción primaria verde, mientras que las otras células se observan teñidas con la coloración de contraste rosa. (b) La tinción de Leifson revela que este microorganismo posee flagelos, lo cual contribuye a su identificación como Spirillum volutans..(c) La tinción negativa con tinta china permite observar que esta bacteria posee cápsula, lo que facilita su identificación como Klebsiella pneumoniae, agente causal de la neumonía. II. PARTE EXPERIMENTAL
MATERIALES Y METODOS
MATERIALES Microscopio Laminas porta objetos Set para coloración Asas de platino Cultivos con gérmenes diferentes Aceite de inmersión Reactivos Fucsina básica Acido tánico
Solución de cloruro de sodio Colorante de leifson Coloración hiss Xilol Safranina Verde de malaquita Colorante Albert Solución de lugol
PROCEDIMIENTO A) TINCION DE FRAGELOS - METODO DE LEIFSON Utilizando un cultivo joven en un medio de agar adecuado, preparar una ligera suspensión bacteriana en agua Coloque una gota de la suspensión bacteriana sobre una lámina porta objeto limpia
Deje pasar a temperatura ambiente o pasando por una llama suavemente para obtener la fijación del frotis con la finalidad que el material no sea arrastrado durante el proc eso de tinción Colorear durante 15 minutos, permitiendo que s e forme un precipitado al evaporarse el alcohol. El tiempo es menor si el colorante es fresco. Cuando se forma un precipitado, enjuague el porta objeto con agua destilada, escurrir el exceso de agua y dejar secar al aire seco. Obtener al microscopio con lente de inmersión (100x) y con aceite de inmersión
B) TINCION DE CAPSULAS - METODO HISS Tome una lámina porta objeto limpia, coloque una gota de agua destilada para hacer un frotis. Debe realizarse un frotis espeso a partir de una suspensión de los gérmenes en suero sanguíneo diluido en 1/3en suero fisiológico. Deje secar a temperatura ambiente o pasando por la llama suavemente para obtener la fijación del frotis. Cubrir la preparación con solución de cristal violeta y se calienta a vapor fuerte durante 1 minuto. Lavar con solución de sulfato de cobre. Secar al aire a temperatura ambiente. Observar al microscopio con lente de inmersión (100x) y con aceite de intención .
C) TINCION DE ESPORAS - METODO DE WIRTS CONKLIN Se fija el frotis al calor. Se cubre con la solución de verde malaquita y se calienta hasta la emisión de vapores, durante unos ocho minutos Se lava con agua destilada Se añade la solución de safranina y s e deja actuar por 30 segundos Se lava con agua y se seca a temperatura ambiente Observar al microscopio con lente de inmersión (100x) y con aceite de inmersión. D) TINCION DE CORPUSCULOS METACROMATICOS METODOS DE ALBERT Se fija el frotis Se cubre con el colorante Albert y se deja actuar durante 15 minutos Se lava con agua Se seca a temperatura ambiente Se observa con lente de inmersión (100X ). RESULTADOS A) MÉTODO DE LEIFSON Los flagelos teñidos se visualizan de colores oscuros, rojo a negro-azulado . ,
B) MÉTODO HISS, Las células del fondo aparecen teñidos en color azul oscuro mientras que la capsula aparece de color azul pálido.
C) MÉTODO DE WIRTS CONKLIN, Las esporas se observan verdes, mientras que las formas vegetativas se ven de color rojo:
D) MÉTODOS DE ALBERT no se pudo realizar en la práctica, pero se buscó información para ,
poder observar la tinción, la figura de abajo muestra.
BIBLIOGRAFIA
1. Díaz R Gamazo C y López Goñi I. 1999. Manual práctico de microbiología. Edición Masson 2. Jenkins, D., Richard, M. y Daigger, G. (1993). Manual on th e causes and control of activated sludge bulking and foaming. 2ª Edición. Lewis Publishers. Michigan. 3. Feimbrook ME, Wang WLL, Campbell G. Staining bacterial flagella easily. . J. Clin. Microbiol. 1989. 4. Tortora, G. J., Funke, B. R. y Case, C. L. 2007. Introducción a la Microbiología, 9ª Ed. Editorial Médica Panamericana. Buenos Aires. Argentina. 5. Gamazo, C.; López-Goñi, I. y R. Díaz. 2005. Manual práctico de microbiología. Masson. Barcelona.
CUESTIONARIO 1. ¿Cuáles son las partes del flagelo y hacer un esquema?
El flagelo bacteriano consta de tres partes: a) La parte más larga y evidente es el filamento del flagelo, que se extiende desde la superficie de la célula hasta la punta del flagelo. b) El cuerpo basal está insertado en la célula. c) El gancho del flagelo es un segmento corto y curvado, que une el filamento a su cuerpo basal y actúa como acoplamiento flexible. El filamento es un cilindro hueco y rígido constituido por subunidades de la proteína flagelina; algunas bacterias tienen vainas que rodean sus flagelos. El gancho y el cuerpo basal son distintos del filamento. El gancho, ligeramente más ancho que el filamento consta de diferentes subunidades proteicas. El cuerpo basal es la parte más compleja; en la mayoría de bacterias gram negativas, consta de cuatro anillos conectados por un cilindro central. El movimiento de rotación del flagelo parte del cuerpo basal que funciona como un motor. La energía necesaria para para la rotación proviene de a fuerza motriz generada por el gradiente de protones. 2. Clasificación de los flagelos, de ejemplos de cada uno de ellos y haga un dibujo: a) Monótrica: Pseudomona aeroginosa Vibrio comma b) Lofótrica Pseudomonas fluoresces Spirillus c) Perítricas E. coli Proteus vulgaris Salmonella typhasa Clostridium parabotulinum
3. Mencione 4 coloraciones que permitan visualizar flagelos y describa el procedimiento de cada una de ellas y como se observó dicha estructura: TINCIÓN DE LEIFSON: Utilizando un cultivo joven en un medio de agar adecuado, preparar una ligera suspensión bacteriana en agua Coloque una gota de la suspensión bacteriana sobre una lámina porta objeto limpia Deje pasar a temperatura ambiente o pasando por una llama suavemente para obtener la fijación del frotis con la finalidad que el material no sea arrastrado durante el proceso de tinción Colorear durante 15 minutos, permitiendo que se forme un precipitado al eva porarse el alcohol. El tiempo es menor si el colorante es fresco. Cuando se forma un precipitado, enjuague el porta objeto con agua destilada, escurrir el e xceso de agua y dejar secar al aire seco. Obtener al microscopio con lente de inmersión (100x) y con aceite de inmersión. MÉTODO DE GRAY Utiliza un mordiente cubre la superficie del flagelo aumentando aparentemente su grosor y a su vez proporciona una copa de material teñible para captar el colorante de golpe. Método Pasar el portaobjeto 3 o 4 veces sobre la flama del mechero. Preparar una suspensión de la bacteria en agua esteril. Sobre el portaobjeto flameado y frio colocar 5 gotas de la suspensión. Deja secar la preparación al aire, no calentar. Cubrir con el mordiente durante 10 minutos Cubrir una solución carbol-fucsina durante 5 minutos Lavar con agua. Dejar secar al aire Observar a los flagelos de color rojo TEORÍA KODOKA Se agrega una gota de colorante en el borde del cubreobjetos y se dejó reposar por 10 minutos a temperatura ambiente el colorante entrara en la preparación y teñirá los flagelos TINCIÓN DE NOLAND Solución I: 20 mg de cristal violeta + 80 mg de fenol + 20 ml de formaldehido al 40 % + 4 ml de glicerol. Procedimiento: Mexclar una gota de solución I con una gota de muestra en el portaobjetos. Colocar un portaobejtos y observar a 100x bajo aceite de inmersión y campo claro. Resultados Los flagelos aparecen teñidos de color azul 4. ¿En qué casos se aconseja hacer una coloración para flagelos?
Esta tinción permite determinar el número y la disposición de los flagelos de las bacterias, que constituyen una información esencial para la identificación de muchas especies y fundamentalmente en el caso de bacteria móviles. 5. ¿Cuál es la composición de la cápsula? ¿glicocalix?
Capsula bacteriana Compuesta de polisacáridos, polialcoholes y amino azúcares Resistencia a la desecación
Resistencia al ataque de las células fagocitas y anticuerpos Fijación a células hospedadoras Glucocalix Ayuda a proteger las bacterias contra los fagocitos fija el agua evitando que la células se seque Compuesta de glucoproteinas y proteoglicanos
6. Mencione tres coloraciones que permiten visualizar capsula y en qu e consiste: METODO HISS Tome una lámina porta objeto limpia, coloque una gota de agua destilada para hacer un frotis. Debe realizarse un frotis espeso a partir de una suspensión de lo s gérmenes en suero sanguíneo diluido en 1/3en suero fisiológico. Deje secar a temperatura ambiente o pasando por la llama suavemente para obtener la fijación del frotis. Cubrir la preparación con solución de cristal violeta y se calienta a vapor fuerte durante 1 minuto. Lavar con solución de sulfato de cobre. Secar al aire a temperatura ambiente. Observar al microscopio con lente de inmersión (100x) y con aceite de intención.
METODO DE DUGUID Poner con el asa una gota pequeña de tinta china en el centro de un portaobjetos limpio. Poner una gota de agua del mismo tamaño junto a la gota de tinta china Tomar con el Asa bacteriológica un pequeño fragmento del cultivo de bacterias Hacer una suspensión ( sin extenderla) en la gota de agua Mezclarla con la tinta china Colocar un cubreobjetos sobre la suspensión, evitando que queden burbujas Observar la preparación al microscopio con el objetivo seco fuerte y de inmersión. La cápsula se observa como una zona brillante alrededor de la bacteria en un campo oscuro
METODO DEL ROJO CONGO Poner una gota pequeña de rojo congo en el centro de un portaobjetos limpio Tomar con el asa bacteriológica un pequeño fragmento de crecimiento de colonia bacteriana Suspender la muestra en la gota de rojo congo y hacer un frotis cubrir el frotis (SIN FIJARLO A LA FLAMA DEL MECHERO) con una gotas del mordente de cápsula y dejarlo actuar durante un minuto. Lavar el frotis con agua destilada y dejarlo secar al aire Observar la preparación al microscopio con el objetivo de inmersión
La cápsula se observa como una zona brillante alrededor de la bacteria de color rojo en un campo de azul oscuro.
7. Mencione microorganismos que presentan capsula y glicocalix
Haemophilus influenzae
Streptococcus pneumoniae
8. Mencione 4 funciones que cumplan las cápsulas
Mejora en las propiedades de difusión de nutrientes hacia la célula. Protección contra desecación Protección contra predacion por parte de protozoos Protección contra agentes antibacterianos.
9. ¿Qué función tienen las esporas?
Las esporas son unidades de dispersión de los hongos, musgos y algunas plantas, su función primaria es asegurar la supervivencia en tiempos de tensión ambiental. 10. Mencione 4 microorganismo capaces de formar espora
Clostridium tetani
Clostridium perfringens
Bacillus cereus
Clostridium botulinum
11. ¿Cómo se produce el proceso de esporulación y germinación, explique y haga un esquema?
PROCESO DE ESPORULACIÓN
PROCESO DE GERMINACIÓN
El proceso de esporulación en bacterias sigue una serie de etapas: 1. Se produce una duplicación del material genético (ADN). 2. Comienza a formarse el septo de la espora y va aislando el ADN recién replicado junto a una pequeña porción de citoplasma. 3. La membrana plasmática comienza a rodear el ADN, citoplasma y membrana aislada en el paso 2. 4. El septo de la espora rodea la porción aislada formándose la forespora. 5. Se forma una capa de peptidoglicano entre las membranas. 6. La espora se recubre de una cubierta de resistencia. 7. Liberación de la endospora de la célula al medio, en ocasiones a este paso también se le denomina esporulación. Durante el proceso de esporulación se llevan a cabo una serie de cambios químicos y físicos que dan lugar a cambios morfológicos en la espora .
1. Desarrollo del embrion. 2. Acumulación de reservas alimenticias: éstas se fabrican en las partes verdes de la planta y son transportadas a la semilla en desarrollo. En las semillas denominadas endospérmicas, las reservas alimenticias se depositan fuera del embrión, formando el endospermo de la semilla. En las semillas llamadas no endospérmicas, el material alimenticio es absorbido por el embrión y almacenado en contenedores especiales llamadas cotiledones. 3. Maduración: durante esta fase, se seca la semilla y se separa la conexión con la planta madre, cortando el suministro de agua y formando un punto de debilidad estructural del que se puede separar fácilmente la semilla madura
PROCESO DE ESPORULACIÓN
PROCESO DE GERMINACIÓN
12. Mencione 2 coloraciones que permiten visualizar esporas y en que consiste cada una de ellas:
METODO DE WIRTS CONKLIN
Preparar el frotis bacteriano que se va a teñir. Colocar un trozo de papel de filtro, del tamaño de la extensión, encima de ella. Añadir el colorante verde malaquita para que cubra bien la extensión. Pasar la preparación por encima de la llama del mechero bunssen para fijar el colorante, durante cinco minutos. Retirar el papel de filtro y lavar con agua destilada para eliminar el exceso de colorante. Teñir la preparación con safranina, para el contraste, durante un minuto. Lavar el agua destilada hasta el eliminar el exceso de colorante. Secar la preparación al aire, o entre dos papeles de filtro, teniendo especial cuidado en el segundo caso para no arrastrar la extensión. Observar al microscopio óptico y anotar los resultados.
VERDE DE MALAQUITA
Es un colorante débilmente básica, y por tanto, se une débilmente a las bacteria, se penetre en las células vegetativas, cuando se calienta la preparación también penetra las endosporas. CARBOL FUSCINA
Técnicas de protección personal identificación al producto ya que se penetra en la célula . 13. ¿Cuáles son las estructuras de verde de malaquita que apar ecen en el medio circundante?
Son endosporas bacterianas a las esporas, para carecer de paredes celulares no se tiñen colorante regulares y son teñidos con verde de malaquita . 14. ¿Todas las endosporas aparecen igual en las bacterias de la misma especie? ¿A qué se debe estas diferencias?
No aparecen iguales, ya que la posición de las esporas diferencia entre especies de bacterias y es útil en la identificación, las endosporas son difíciles de observar al microscopio debido a la impermeabilidad de su pared, que evita la entrada de colorantes . 15. ¿A qué se denomina gránulos de reserva?
A los polisacáridos, lípidos, polifosfatos y azufre, esto sucede cuando las sustancias de partida se encuentra en el medio pero el crecimiento está li mitada por la falta de nutrientes de terminado o por la presencia de inhibidores. 16. Mencione microorganismo que presentan de volutina?
Se encuentra de forma de gránulos constituidos en su mayor parte por polifosfatos tipo sal de Graham. Spirillum volutans 17. Mencione 2 colorantes que permitan observar los corpúsculos metacromáticos y en que consiste cada uno de ellos: a) Coloración de loffer: azul de metileno en Loffer para tinción de bacteria AAR, como bacilos de tuberculosis. b) Coloración de Albert: la tinción simple se basa en la afinidad del colorante por los componentes celulares tinción puede ser uniforme. 18. Mencione 3 tipos de inclusiones y que función cumple cada uno de ellos: Inclusiones de reserva Son acúmulos de sustancias orgánicas e inorgánicas, rodeadas de una envoltura limitante de naturaleza proteínica . Inclusiones de hidrocarburos Son acumulador de reserva de los hidrocarburos que determina bacterias como de fuente de carbono.
Inclusiones de sales minerales Acúmulos grande, denso, y refregentes de sales insolubles de calcio (sobre todo de carbonato) Inclusiones polisacáridos Son acumulador en glucanos que se depositan de modo más o menor uniforme por todo el citoplasma cuando determina bacterias crece en media limitación de fuente de nitrógeno.
