Tabla de Agares Diferenciales

Nombre

Staphilococcus Aureus

Agar Diferencial o Selectivo Agar Sal y Manitol

Composición

Fundamento

Fórmula (en gramos por litro)

Extracto de carne Pluripeptona d-Manitol Cloruro de sodio Agar Rojo de fenol

1.0 10.0 10.0 75.0 15.0 0.025

Agar Verde Brillante

Escherichia Coli

Gram (-)

Agar de Acetato

Crecimiento

Características de las colonias

Pluripeptona 10.0 Extracto de levadura 3.0 Cloruro de sodio 5.0 Lactosa 10.0 Sacarosa

Escherichia coli ATCC 25922


Rojo fenol

Gram (-)

Microorganismos

Staphylococcus aureus ATCC 25923 Excelente Amarilla Staphylococcus epidermidis ATCC Bueno Roja 14990 Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido Inhibido Klebsiella pneumoniae ATCC Inhibido Inhibido 700603 Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella spp., En el medio de cultivo, la pluripeptona y el extracto de levadura, constituyen la fuente de nitrógeno, vitaminas y minerales. La lactosa y la sacarosa son los hidratos de carbono fermentables, el rojo fenol es el indicador de pH, que vira al amarillo cuando hay producción de ácido a partir de la fermentación de azúcares, el cloruro de s odio mantiene el balance osmótico, y el verde brillante actúa como agente selectivo.}

Gram (+)

Salmonella spp.

Una alta concentración de sal promueve el crecimiento de algunos organismos mientras inhibe el crecimiento de otros. AMS es un medio diferencial porque contiene el azúcar manitol y el indicador de pH rojo de fenol. Los organismos que pueden fermentar el manitol liberan subproductos ácidos, que causan un cambio de color. El rojo de fenol presenta un color rojo cereza por arriba de pH 8.5, un color amarillo rojizo desde un pH 6.9 a 8.5, y un amarillo brillante por debajo de un pH de 6.9. Aunque tanto el Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus aureus puede tolerar el alto contenido de sal en el AMS, solamente S. aureus puede fermentar el manitol, causando que el r ojo de fenol vire al amarillo.

Microorganismos

10.0 0.08


Acetato de sodio Sulfato de magnesio Cloruro de sodio Fosfato de amonio Fosfato dipotásico Azul de bromotimol Agar

2.0 0.2 5.0 1.0 1.0 0.08 14.8


Amarillo-verdosas sobre fondo amarillento Rosas, blancas o transparentes sobre fondo Salmonella enteritidis ATCC 13076 rojo Salmonella typhi Crecimiento inhibido Rosas, blancas o transparentes sobre fondo Salmonella typhimurium ATCC 14028 rojo Shigella flexneri. ATCC 12022 Crecimiento inhibido Staphylococcus aureus ATCC 25923 Crecimiento inhibido Es un medio de cultivo que contiene una mezcla de sales en la cual, el acetato de sodio es la única fuente de carbono. No posee azúcar es ni tampoco inhibidores del crecimiento bacteriano Un microorganismo que es capaz de usar acetato como su única fuente de carbono, utiliza también las sales de amonio c omo su única fuente de nitrógeno. Debido a la utilización de sales de amonio, se libera amoníaco, am oníaco, que alcaliniza el medio, y esto produce un viraje del indicador azul de bromotimol del color verde al color azul. La mayoría de las enterobacterias utilizan el acetato como única fuente de carbono, excepto Shigella spp., Proteus spp., y Providencia spp. Escherichia coli y Shigella spp., son enterobacterias que presentan gran homología entre sí, y este medio de c ultivo es útil para diferenciarlas, especialmente a Escherichia coli,biotipo A-D, inmóvil, anaerogénico, de Shigella spp.

Microorganismos

Bacillus subtilis

Agar Yema de Huevo o Agar Selectivo B.cereus


Manitol Cloruro de sodio Sulfato de magnesio Fosfato disódico Fosfato monopotásico Azul de bromotimol Piruvato de sodio Agar

10.0 2.0 0.1 2.5 0.25 0.12 10.0 14.0

Gram (+)

Microorganismos

Klebsiella pneumonae

Agar Verde Brillante


Pluripeptona 10.0 Extracto de levadura 3.0 Cloruro de sodio 5.0 Lactosa 10.0 Sacarosa Rojo fenol

Gram (-)

Crecimiento

Apariencia

E. coli ATCC 25922 Bueno a excelente Azul K. pneumoniae ATCC 700603 Bueno a excelente Azul S. typhimurium ATCC 14028 Bueno a excelente Azul S. flexneri ATCC 12022 Pobre a bueno Verde En el medio de cultivo, el contenido de peptona es bajo (0.1%), y la adición de piruvato de sodio y emulsión de yema de huevo mejora el aislamiento y esporulación de esta bacteria. Para verificar la utilización del manitol, se usa un indicador de pH, azul de bromotimol. Este medio es selectivo, por el agregado del suplemento para Bacillus cereus (código B03-60632) con el que se obtiene una concentración final de 100 U de Polimixina B por ml de medio.El diagnóstico primario se basa en la morfología y color de la c olonia, en la precipitación de la lecitina hidrolizada y en la falta de utilización del manitol por Bacillus cereus. Las colonias típicas de B. cereus son crenadas, filamentosas de aproximadamente 5 mm de diámetro a las 24 horas de incubación, y tienen un color turquesa (peacock blue) rodeado por un precipitado de hidrólisis de yema de huevo. A las 48 horas de incubación presentan el color con centro grisáceo. Estos hallazgos diferencian B. cereus de B. subtilis y B. licheniformis, pero pueden no diferenciar B. cereus de otras especies de Bacillus, tales como B. thuringiensis, B. anthracis, B. mycoides, y en estos casos, será necesario realizar mas ensayos para su identificación. Crecimiento

Bacillus cereus ATCC 10876 Bueno Staphylococcus aureus ATCC 25923 Bueno Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido Bacillus subtilis ATCC 6633 Bueno, Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella spp., En el medio de cultivo, la pluripeptona y el extracto de levadura, constituyen la fuente de nitrógeno, vitaminas y minerales. La lactosa y la sacarosa son los hidratos de carbono fermentables, el rojo fenol es el indicador de pH, que vira al amarillo cuando hay producción de ácido a partir de la fermentación de azúcares, el cloruro de s odio mantiene el balance osmótico, y el verde brillante actúa como agente selectivo.} Microorganismos

10.0

Salmonella typhimurium ATCC 14028

0.08

Klebsiella pneumonae ATCC 13883 Shigella flexneri. ATCC 12022 Staphylococcus aureus ATCC 25923


Rosas, blancas o transparentes sobre fondo rojo Colonias mucoides amarillas a verdes. Crecimiento inhibido Crecimiento inhibido

Shigella Flexneri

Agar Mac Conkey

Gram (-)

Enterobacter cloacae

Gram (-)

Agar Eosina Azul de Metileno


Pluripeptona 5.0 Extracto de 5.0 carne Lactosa 10.0 Mezcla de sales 8.5 biliares Citrato de sodio 8.5 Tiosulfato de 8.5 sodio Citrato férrico 1.0 Agar 13.5 Verde brillante 0.00033 Rojo neutro 0.025


Agar Azul de metileno Eosina Y Fosfato dipotásico Lactosa Peptonas Sacarosa

13.5 g 0.065 g 0.4 g 2.0 g 5.0 g 10.0 g 5.0 g

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial. La selectividad, esta dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp. Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y a la form ación de ácido sulfhídrico a partir del tiosulfato de sodio. Los pocos m icroorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obteniéndose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo. Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, c recen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.. La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formación de s ulfuro de hierro. Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la muestra en Selenito caldo (B02-120-05). Microorganismos

Colonias

Salmonella typhimurium ATCC 14028 Transparentes, centro negro Shigella flexneri Incoloras Shigella sonnei Incoloras Proteus mirabilis ATCC 43071 Transparentes, centro negro Escherichia coli ATCC 25922 Rosadas a rojas con halo turbio Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas cremosas y mucosas Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras, de muy escaso crecimiento El medio de cultivo eosina y azul de metileno agar es selectivo y diferencial para el aislamiento de bacilos entéricos que permite una diferenciación entre las c olonias de organismos fermentadores de lactosa y aquellos que no la fermentan. La presencia de sacarosa permite para ciertos miembros del grupo coliforme, fermentarla con m ás facilidad que la lactosa. Las colonias lactosa positivas son verdes con brillo metálico o poseen centros oscuros con periferias transparentes incoloras , mientras que aquellas que son negativas en lactosa o sacarosa son rosa pálido translucidas. Microorganismos

Escherichia coli ATCC 25922 Enterobacter aerogenes ATCC 13048 o Enterobacter cloacae ATCC 13047 Salmonella typhimurium ATCC 14028 o Shigella flexneri ATCC 12022 ó 9199 Proteus mirabilis ATCC 43071 Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Staphylococcus aureus ATCC 25923 o Enterococcus faecalis ATCC 29212

Crecimiento

Colonias medianas azul a morado con brillo metálico verdoso. Colonias grandes con centro oscuro y bordes rosados, generalmente sin brillo metálico Colonias medianas transparentes , incoloras a rosa Transparentes o rosadas Colonias mucosas rosadas- purpuras Inhibición total o colonias puntiformes


Leuconostoc

Agar Sangre

Infusión de músculo de corazón Peptona Cloruro de sodio Agar

375.0 10.0 5.0 15.0

Leuconostoc se desarrolla bien en placas de agar sangre, es de forma esférica o lenticular y

mide de 0,5 a 0,7 µ de ancho por 0,7 a 1 µ de longitud. La temperatura óptima para su desarrollo es entre 20 y 30º C, con un pH entre 4,4 y 5. En la superficie del agar son ahemolíticas o no hemolítica, por lo que puede confundirse con otros Streptococcus grupo viridans - razón razón por la que el laboratorio evaluó resistencia a vancomicina por difusión-, Enterococcus o Lactococcus sp. El 30% de estas bacterias pueden reaccionar con antisueros contra grupo D 2,8.

Gram (+)

Proteus mirabilis

Agar Sulfito de Bismuto

Gram (-)

Agar CNI Yersinia enterocolitica

Gram (-)


Agar Dextrosa Extracto de carne Fosfato de sodio Peptonas Sulfato ferroso Sulfito de bismuto (indicador)

20.0 g 5.0 g 5.0 g 4.0 g

Microorganismos

10.0 g 0.3 g 8.0 g

Crecimiento

Colonias con centro negro y bordes claros, a las 48 h con halo negro grisáceo y brillo metálico. Salmonella enteritidis ATCC 13076 Colonias negras a verdes Salmonella typhimurium ATCC 14028 Colonias negras a verdes. Colonias pequeñas sin Proteus mirabilis ATCC 12453 Swarming (crecimiento en olas) verde pálido a veces mucoides Escherichia coli ATCC 25922 Crecimiento inhibido o colonias verdes Varios antibióticos (Suplemento selectivo para Yersinia (CIN) así como el Violeta cristal y el desoxicolato inhiben ampliamente la flora acompañante perturbante. Por otra parte, una base nutritiva de alto valor favorece, conjuntamente con el piruvato, el crecimiento de las Yersinias. Éstas degradan el manitol existente formando ácido, de tal forma, que sus colonias toman tom an un color rojo debido al viraje del indicador Rojo neutro. Las Yersinias crecen como colonias con un centro rojo oscuro y un halo transparente. El tamaño de las colonias, la anchura del borde de las mismas y la estructura superficial, pueden variar dependiendo del serotipo. Ciertos gérmenes acompañantes (por ejemplo algunas Enterobacteriáceas y Pseudomonas) también pueden aparecer en el medio pero con un crecimiento escaso. Salmonella typhi ATCC 19430


Peptona de caseina Peptona de carne Extracto de levadura Manitol Cloruro de sodio Sulfato de magnesio Piruvato de sodio Agar Mezcla de sales biliares Rojo Neutro Cristal violeta

La presencia de sulfito de bismuto y de verde brillante inhiben el crecimiento de bacterias Gram positivas y de la mayoría de las bacterias Gram negativas. La producción de sulfuro de hidrógeno se manifiesta en el centro de la colonia por un precipitado negro y un halo negro grisáceo con brillo metálico por la reacción de los iones bismuto c on el sulfuro de hidrógeno.

10.0 10.0 2.0 20.0 1.0 0.01 2-0 12.5 1 0.03 0.001

Microorganismos

Crecimiento

Centro rojo en las colonias

Yersinia enterocolitica ATCC 9610 Yersinia enterocolitica ATCC 35669

Bueno/muy bueno Positivo

Escherichia coli ATCC 25922

Nulo

Salmonella typhimurium ATCC 14028 Nulo Enterobacter cloacae ATCC 13047

Nulo/ligero

Staphylococcus aureus ATCC 25923 Nulo Diferenciación Salmonella y Shiguella

Agar Salmonella Shiguella


Pluripeptona Extracto de carne Lactosa Mezcla de sales biliares Citrato de sodio Tiosulfato de sodio Citrato férrico Agar Verde brillante Rojo neutro

10.0 5.0 10.0 8.5 8.5 8.5 1.0 13.5 0.00033 0.025

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial. La selectividad, esta dada por las sales biliares y el verde brillante, que inhiben el des arrollo de bacterias Grampositivas, de la mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteusspp. Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y a la form ación de ácido sulfhídrico a partir del tiosulfato de sodio

NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50C y distribuir unos 20 ml por placa. Secar la superficie del medio unos minutos en la estufa.

Microorganismos

Diferenciación de Enterobacterias

Agar TSI (Triple Sugar Iron)


Agar Dextrosa Extracto de carne Fosfato de sodio Peptonas Sulfato ferroso Sulfito de bismuto (indicador)

20.0 g 5.0 g 5.0 g 4.0 g 10.0 g 0.3 g 8.0 g


Escherichia coli ATCC 25922 Cremiento de colonias rosadas o rojas Klebsiella Pneumonae ATCC 700603 Colonias rosadas cremosas y mucosas Salmonella typhimurium ATCC 14028 Colonias Transparentes, centro negro Shigella flexneri. ATCC 12022 Colonias Transparentes Proteus mirabilis Colonias Transparentes, centro negro El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente fuente de iones Fe +3 los cuales cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio m edio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de c olor negro.

Tubo

Microorganismo

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 Tubo 6 Tubo 7

Sin inoculo Escherichia coli Enterobacter cloacae Klebsiella pneumonae Pseudomona aeruginosa Shalmonella Thyphi Shiguella sonnei

Bibliografia Consultada http://www.britanialab.com.ar/esp/pr http://www.britanialab.c om.ar/esp/productos/b02/s oductos/b02/sangreagarbase.htm angreagarbase.htm http://www.articlearchives.com http://www.article archives.com/manufacturing/fo /manufacturing/food-mfg-dairy-product-chee od-mfg-dairy-product-cheese/1294421-1.html se/1294421-1.html http://www.biol.unlp.edu.ar/micro http://www.biol. unlp.edu.ar/microbiologiagral biologiagral/problemas /problemas01-08.doc 01-08.doc http://tegra.lasalle.edu.co/ds http://tegra.lasall e.edu.co/dspace/bitstream/ pace/bitstream/10185/1222/1/1396 10185/1222/1/13961076.pdf 1076.pdf http://80.37.246.49/ScharlabDades/Pr http://80.37.246.49/ ScharlabDades/Productos/descar oductos/descargarpdf.php?pag=38&pm= garpdf.php?pag=38&pm=803 803 http://www.alimentariaonline.co http://www.alime ntariaonline.com/apadmin/im m/apadmin/img/upload/MLC g/upload/MLC006_quesopro 006_quesoprobioWSF.pdf bioWSF.pdf http://www.farmacopea.org.mx/ http://www.farmacope a.org.mx/consulta/dispme consulta/dispmed/DMD016.pdf d/DMD016.pdf http://www.farmacopea.org.mx/ http://www.farmacope a.org.mx/consulta/dispme consulta/dispmed/DMD016.pdf d/DMD016.pdf

Hecho por: Guillermo Mercado Torres Orlando Fabrizio Delgado Mota Antonio Dominguez Garza

Tabla de Agares Diferenciales

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