LAPORAN PRAKTIKUM FARMAKOTERAPI INFEKSI PENENTUAN KERENTANAN SUATU BAKTERI TERHADAP BERBAGAI SEDIAAN ANTIBIOTIKA Rabu, 9 November 2016 Kelompok 6 Selasa, 07.00 – 07.00 – 10.00 10.00 WIB
Nama Anggota
NPM
Shifa Hudzaifah
260110150002 260110150002
Luthfi Utami S.
260110150013 260110150013
Chairunnisa
260110150014
Alif Virisy B.
260110150023 260110150023
Kiara Puspa D.
260110150026 260110150026
Rahma Alya N.
260110150037 260110150037
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS PADJADJARAN JATINANGOR 2016
I.
TUJUAN Menentukan kerentanan suatu bakteri terhadap berbagai sediaan antibiotika, melalui tes resistensi dengan metode cakram kertas ( Paper Disk Plate).
II.
PRINSIP 2.1. Resistensi Bakteri Penggunaan obat-obatan antibakteri (antibiotika) yang tidak tepat dapat menyebabkan berkembangnya resistensi bakteri (Billater, 2006). 2.2. Antibiotika Zat-zat kimia oleh yang dihasilkan oleh fungi dan bakteri, yang memiliki khasiat mematikan atau menghambat pertumbuhan kuman, sedangkan toksisitasnya bagi manusia relatif kecil (Tjay, 2007). 2.3. Metode Cakram Kertas Metode yang biasa digunakan untuk menguji aktivitas antimikroba suatu antibiotik terhadap mikroorganisme patogen penyebab penyakit (Lay, 1994).
III.
TEORI DASAR Penemuan antibiotik diinisiasi oleh Paul Ehrlich yang pertama kali menemukan apa yang disebut “magic bullet’, yang dirancang untuk menangani infeksi mikroba. Pada tahun 1910, Ehrlich menemukan antibiotika pertama, Salvarsan, yang digunakan untuk melawan syphilis (Utami, 2012). Antibiotika dapat ditemukan dalam berbagai sediaan, dan penggunaanya dapat melalui jalur topical, oral, maupun intravena. Banyaknya jenis pembagian, klasifikasi, pola kepekaan kuman, dan penemuan antibiotika baru seringkali menyulitkan klinisi dalam menentukan pilihan antibiotika yang tepat ketika menangani suatu kasus
penyakit. Hal ini juga merupakan salah satu faktor pemicu terjadinya resistensi (Utami,2012). Antimikroba adalah obat yang digunakan untuk memberantas infeksi mikroba pada manusia. Sedang antibiotika adalah senyawa kimia yang dihasilkan oleh mikroorganisme (khususnya dihasilkan oleh fungi) atau dihasilkan secara sintetik yang dapat membunuh atau menghambat perkembangan bakteri dan organisme lain (Munaf, 1994). Secara garis besar antimikroba dibagi menjadi dua jenis yaitu yang membunuh
kuman
(bakterisid)
dan
yang
hanya
menghambat
pertumbuhan kuman (bakteriostatik). Antibiotik yang termasuk golongan bakterisid antara lain penisilin, sefalosporin, aminoglikosida (dosis besar), kotrimoksazol, rifampisin, isoniazid dan lain-lain. Sedangkan antibiotik yang memiliki sifat bakteriostatik, dimana penggunaanya tergantung status imunologi pasien, antara lain sulfonamida, tetrasiklin, kloramfenikol, eritromisin, trimetropim, linkomisin,
klindamisin,
asam
paraaminosalisilat,
dan
lain-lain
(Laurence & Bennet,1987). Mekanisme salah satu antibiotika seperti amoksisilin dari golongan penisilin yaitu bekerja menghambat pembentukan mukopeptida yang diperlukan untuk sintesis dinding mikroba. Golongan ini terhadap bakteri yang sensitif penisilin akan menghasilkan efek bakterisid (membunuh kuman) pada mikroba yang sedang aktif membelah sedangkan pada mikroba dalam keadaan metabolik tidak lengkap tidak aktif (tidak membelah) praktis tidak dipengaruhi oleh penisilin kalau pun ada pengaruhnya hanyak bersifat bakteriostatik (menghambat pertumbuhan bakteri) (Lisni dkk,2015). dkk,2015). Resistensi didefinisikan sebagai tidak terhambatnya pertumbuhan bakteri dengan pemberian antibiotik secara sistemik dengan dosis normal yang seharusnya atau kadar hambat minimalnya. Sedangkan multiple drugs resistance didefinisikan sebagai resistensi terhadap daua atau lebih obat maupun klasifikasi obat. Sedangkan cross resistance
adalah resistensi suatu obat yang diikuti dengan obat lain yang belum pernah dipaparkan (Tripathi, 2003). Resistensi terjadi ketika bakteri berubah dalam satu atau lain hal yang menyebabkan turun atau hilangnya efektivitas obat, senyawa kimia atau bahan lainnya yang digunakan untuk mencegah atau mengobati infeksi. Bakteri yang mampu bertahan hidup dan berkembang biak, menimbulkan menimbulkan lebih banyak bahaya. Kepekaan bakteri terhadap kuman ditentukan oleh kadar hambat minimal yang dapatmenghentikan perkembangan bakteri (Bari, 2008). Resistensi pasti diawali adanya paparan antibiotika, dan meskipun hanya ada satu atau dua bakteri yang mampu bertahan hidup, mereka punya peluang untuk menciptakan satu galur baru yang resisten. Sayangnya, satu galur baru yang resisten ini bisa menyebar dari satu orang ke orang lain, memperbesar potensinya dalam proporsi epidemik. Penyebaran ini dipermudah oleh lemahnya control infeksi dan penggunaan antibiotika yang luas (Peterson, 2005). Sensitivitas menyatakan bahwa uji sentivitas bakteri merupakan suatu metode untuk menentukan tingkat kerentanan bakteri terhadap zat antibakteri dan untuk mengetahui senyawa murni yang memiliki aktivitas antibakteri. Metode uji sensitivitas bakteri adalah metode cara bagaimana mengetahui dan mendapatkan produk alam yang berpotensi sebagai bahan anti bakteri serta mempunyai kemampuan untuk menghambat pertumbuhan atau mematikan bakteri pada konsentrasi yang rendah. Uji sentivitas bakteri merupakan suatu metode untuk menentukan tingkat kerentanan bakteri terhadap zat antibakteri dan untuk mengetahui senyawa murni yang memiliki aktivitas antibakteri. Seorang ilmuan dari perancis menyatakan bahwa metode difusi agar dari prosedur Kirby-Bauer, sering digunakan untuk mengetahui sensitivitas bakteri. Prinsip dari metode ini adalah penghambatan terhadap pertumbuhan mikroorganisme, yaitu zona hambatan akan terlihat sebagai daerah jernih di sekitar cakram kertas yang mengandung zat
antibakteri.
Diameter
zona
hambatan
pertumbuhan
bakteri
menunjukkan sensitivitas bakteri terhadap zat antibakteri. Selanjutnya dikatakan bahwa semakin lebar diameter zona hambatan yang terbentuk bakteri tersebut semakin sensitif (Gaman, et al, 1992). Sensitivitas
bakteri
terhadap
antibiotik
tergantung
kapada
kemampuan antibiotik tersebut untuk menembus dinding sel bakteri. Antibiotik lebih banyak yang efektif bekerja terhadap bakteri Gram positif karena permeabilitas dinding selnya lebih tinggi dibandingkan bakteri Gram negatif. Jadi suatu antibiotik dikatakan mempunyai spektrum sempit apabila mampu menghambat pertumbuhan bakteri Gram positif, sedangkan antibiotik berspektrum luas jika pertumbuhan bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif dapat dihambat oleh antibiotik tersebut (Sumadio, et al, 1994). Pada umumnya metode yang dipergunakan dalam uji sensitivitas bakteri adalah metode met ode Difusi D ifusi Agar yaitu dengan cara mengamati daya hambat pertumbuhan mikroorganisme oleh ekstrak yang diketahui dari daerah di sekitar kertas cakram ( paper paper disk ) yang tidak ditumbuhi oleh mikroorganisme.
Zona
hambatan
pertumbuhan
inilah
yang
menunjukkan sensitivitas bakteri terhadap bahan anti bakteri (Jawelz, 1995). Tujuan dari proses uji sensisitivitas ini adalah untuk mengetahui obat-obat yang paling cocok (atau paling poten) untuk kuman penyebab penyakit terutama pada kasus-kasus penyakit yang kronis dan untuk mengetahui adanya resistensi terhadap berbagai macam antibiotik. Penyebab kuman resisten terhadap antibiotik yakni memang kuman tersebut resisten terhadap antibiotik yang diberikan, akibat pemberian dosis dibawah dosis pengobatan dan akibat penghentian obat sebelum kuman tersebut betul-betul terbunuh oleh antibiotic (Dwidjoseputro, 1998).
IV.
ALAT DAN BAHAN 4.1. Alat 4.1.1. Cawan petri 4.1.2. Inkubator 4.1.3. Pembakar spiritus 4.1.4. Penggaris 4.1.5. Pinset 4.1.6. Spreader 4.2. Bahan 4.2.1.
Cakram-cakram kertas berbagai antibiotik
4.2.2. Nutrient Agar Agar (NA) 4.2.3.
V.
Suspensi bakteri
PROSEDUR DAN DATA PENGAMATAN
No. Prosedur
Hasil
1.
Dituangkan 20 ml NA
Media agar telah
cair bersuhu 40-50oC
membeku
ke dalam cawan petri, dan diamkan sampai beku 2.
Dioleskan suspensi
Suspensi bakteri
bakteri ke seluruh
terdapat didalam
permukaan. Biarkan
media agar
selama kurang lebih 30 menit
Gambar
3.
Diletakkan cakram-
Cakram antiibiotik di
cakram antibiotika
atas permukaan agar
pada permukaan agar
4.
Inkubasi cawan
Didapati diameter:
dengan suhu 37 oC
Amoksisiliin : 2,1 cm
selama 18-24 jam.
Ciprofolxasin : 3 cm
Ukur zona inhibisi
Cloramphenikol : 2,7 cm Tetrasiklin : 3,25 cm
VI.
PEMBAHASAN Pada praktikum kali ini dilakukan uji resistensi bakteri. Uji resistensi bakteri ini bertujuan untuk menentukan kerentanan suatu bakteri terhadap berbagai sediaan antibiotika. Metode yang digunakan yaitu metode cakram kertas (paper disk plate). Antibiotik yang digunakan yaitu amoksisilin, siprofloksasin, kloramfenikol dan tetrasiklin. Metode cakram kertas merupakan uji untuk menentukan aktifitas agen antimikroka dengan cara meletakkan piringan berisi agen anti mikroba di atas medium yang telah diberi biakan mikroba. Area jernih mengindikasikan adanya hambatan pertumbuhan mikroorganisme oleh agen anti mikroba. Jika di sekeliling cakram kertas tidak menunjukkan adanya zona bening, hal tersebut mengindikasikan bahwa mikroba yang ada pada medium tumbuh telah resisten terhadap antibiotik yang ada dalam cakram kertas.
Antibiotik merupakan senyawa kimia yang dihasilkan oleh mikroorganisme atau dihasilkan secara sintetik yang dapat membunuh atau menghambat perkembangan bakteri dan organisme lain. Amoksisilin merupakan antibiotik spektrum luas golongan penisilin dengan mekanisme kerja mencegah sintesis dinding sel bakteri dengan menghambat enzin DD-transpeptidase bakteri sehingga bakteri tidak dapat berkembang biak. Amoksisilin digunakan untuk mengobati infeksi pada telinga, hidung, tenggorokan, gigi, saluran genitourinaria, kulit dan struktur kulit, dan saluran pernapasan bawah oleh Streptococcus sp , S. pneumoniae, Staphylococcus sp , H. influenzae, E. coli, P. mirabilis, atau E. faecalis faecalis.
Siprofloksasin merupakan antibiotik spektrum luas golongan fluorokuinolon generasi kedua dengan mekanisme kerja menghambat dua tipe enzim II topoisomerase yaitu DNA Gyrase dan topoisomerase IV. Topoisomerase IV memerlukan DNA terpisah yang telah direplikasi sebelum pembelahan sel bakteri. Dengan DNA yang tidak dipisahkan, proses terhenti dan dan bakteri tidak bisa membagi. Sedangkan DNA DNA gyrase bertanggungjawab untuk supercoil supercoil DNA sehingga akan cocok di dalam sel yang baru terbentuk. Siprofloksasin digunakan untuk pengobatan infeksi saluran pernafasan, saluran kemih, pencernaan, dan infeksi perut, termasuk infeksi oleh baketri gram negatif seperti Escherichia Escherichia coli, Haemophilus influenzae, Klebsiella pneumoniae, Legionella pneumophila, pneumophila,
Moraxella Moraxella
Pseudomonas
aeruginosa ,
catarrhalis, catarrhalis,
serta
Proteus
bakteri
mirabilis, mirabilis,
gram
positif
dan
seperti
Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus epidermidis, Enterococcus faecalis, dan Streptococcus pyogenes .
Kloramfenikol
merupakan
antibiotik
spektrum
luas
dengan
mekanisme kerja menghambat aktivitas peptidil transferase dari ribosom bakteri, secara spesifik mengikat residu resi du A2451 dan A2452 dari 23s rRNA subunit ribosom 50s untuk mencegah terjadinya ikatan peptida.. Kloramfenikol digunakan untuk untuk pengobatan demam
tifus, paratifus, infeksi Salmonella sp sp, H.influenzae H.influenzae, terutama infeksi meningeal, Rickettsia, Lympogranulloma Lympogranulloma psitatacosis psitatacosis , bakteri gram negatif penyebab bakteria meningitis, infeksi kuman yang resisten terhadap antibiotik lain, tidak untuk hepatobilier dan gonorrhoea. Tetrasiklin merupakan antibiotik spektrum luas dengan mekanisme kerja menghambat sintesis protein dengan mekanisme mengikat sub unit 30s ribosom bakteri sehingga introduksi asam amino pada rantai peptida yang baru terbentuk tidak terjadi. Ketika melakukan uji resistensi bakteri, konsentrasi bakteri dan kekuatan antibiotik yang digunakan harus mengikuti atau sesuasi dengan standar yang telah ditentukan dalam uji resistensi bakteri. Untuk tetrasiklin dengan kekuatan 30 µg, dikatakan resisten (R) jika diameter zona beningnya beningnya ≤14 mm. Dikatakan Dikatakan intermediet (I) jika diameter zona beningnya 15-18mm, dan dikatakan selektif (S) jika diameter zona beningnya ≥19mm. Untuk siprofloksasin dengan kekuatan 5 µg, diameter zona bening untuk dikatakan R = ≤15mm, I = 1616 -20mm, S = ≥ 21mm. Untuk kloramfenikol dengan kekuatan 30 µg, diameter zona bening untuk dikatakan R = ≤12mm, ≤12mm, I = 13 13 -17mm, S = ≥ 18mm. Untuk 18mm. Untuk amoksisilin dengan kekuatan 20 µg, diameter zona bening untuk dikatakan R = ≤13mm, I = 14-17mm, 14 -17mm, S = ≥ 18mm. Prosedur kerja pada praktikum kali ini yaitu dengan meletakkan empat jenis antibiotika dalam bentuk piringan di atas media yang telah dicampur dengan biakan bakteri. Sebelumnya bagian dasar cawan tempat medium dibagi menjadi empat bagian karena akan digunakan empat jenis antibiotik pada praktikum ini. Peletakkan piringan kertas dibantu dengan menggunakan pinset. Setelah itu bakteri diinkubasi pada suhu 37 0C selama 24 jam lalu diamati dan diukur diameter zona bening yang terbentuk. Sebelum pinset digunakan untuk meletakkan piringan kertas, harus difiksasi terlebih dahulu untuk mematikan mikroorganisme yang
menempel pada pinset. Sebelumnya pinset yang telah difiksasi jangan langsung digunakan untuk menaruh piringan kertas, tetapi dibiarkan dahulu sebentar hingga dingin, baru dapat digunakan. Jika pinset masih panas dan langsung langsung digunakan, dikhatirkan bakeri yang ada pada media tumbuh akan mati karena tidak tahan pada panas pinset, sehingga akan megganggu proses pengamatan yang dilakukan dan tidak dapat ditentukan kerentanan bakeri tersebut. Setelah piringan diletakkan, piringan tersebut sedikit ditekan agar piringan kertas antibiotik anti biotik menempel pada medium dan tidak ti dak jatuh atau ata u bergeser tempat. Peletakan piringan juga harus sedemikian rupa, jangan sampai berdekatan antar piringan atau terlalu dekat dengan ujung cawan. Karena jika letak antar piringan atau piringan terlalu dekat dengan ujung atau sisi cawan, dikhawatirkan zona bening yang terbentuk akan sulit diukur sehingga kerentanan suatu bakteri terhadap antibiotik tersebut sulit untuk ditentukan. Dalam meletakkan piringan harus hati-hati,
jangan sampai saat sedang diangkat jatuh di area
medium yang tidak sesuai. Karena jika piringan tersebut diangkat lalu dipindahkan ke tempat yang sesuai, bekas area jatuh piringan tersebut dapat menghasilkan zona bening karena ada antibiotik yang tertempel pada area tersebut. Jika letak antara bekas jatuhan piringan kertas dengan letak piringan kertas yang terbaru terlalu dekat, maka ada kemungkinan zona bening yang dihasilkan saling menempal sehingga pengukuran diameter sulit untuk dilakukan. dilakukan. Setelah semua piringan telah diletakakan di atas medium., selanjutnya cawan dibungkus dengan koran tanpa dibalikdahulu. Jika posisi cawan saat diinkubasi dibalik, dikhawatirkan piringan kertas antibiotik terjatuh sehingga pengamatan menjadi terganggu. Inkubasi dilakukan pada suhu 37-40
0
C, selama 18-24 jam.
Diinkubasi pada suhu tersebut karena pada suhu tersebut merupakan suhu yang ideal bagi bakteri untuk tumbuh dengan optimal. Dan
dilakukan selama 18-24 jam dilakukan karena bakteri sudah dapat memperbanyak diri dalam kurun waktu tersebut. Semua proses yang dilakukan pada praktikum ini dilakukan secara aseptis. Hal ini bertujuan untuk meminimalisir adanya cemaran dari lingkungan yang dapat memengaruhi atau menghambat proses pengamatan yang dilakukan. Berdasarkan hasil pengamatan dan pengukuran yang dilakukan, semua bakteri menunjukkan me nunjukkan adanya zona bening disekitar antibiotik yang diberikan. diberikan. Untuk amoksisilin, diameter zona bening yang didapat yaitu 2,1 cm. Sedangkan untuk siprofloksasin diameter zona beningnya yaitu 3 cm, untuk kloramfenikol diameter zona beningnya 2,7 cm, dan dan untuk untuk tetrasiklin diameter zona beningnya adalah 3,25 cm. Dari hasil tersebut dapat disimpulkan bahwa bakteri yang terdapat dalam media masih bersifat selektif terhadap keempat jenis antibiotik yang diberikan.
VII.
KESIMPULAN Metode cakram kertas dapat digunakan untuk menentukan kerentanan suatu bakteri terhadap sediaan antibiotik. Antibiotik yang digunakan adalah AML, CIP, C, dan TE. Terdapat zona bening yang memiliki diameter yang berbeda-beda tiap antibiotik, menunjukkan daya hambat tiap antibiotik terhadap bakteri berbeda pula. Daya hambat Tetrasiklin paling besar dengan hasil diameter 3,25 cm dan daya hambat AML paling kecil dengan hasil diameter 2,1 cm.
DAFTAR PUSTAKA
Bari, S. B., Mahajan, B. M., Surana, S. J. 2008. Resistance to antibiotic : A challenge in chemotherapy. Indian journal of pharmaceutical pharmaceutical education and research.
Billater, M. 2006. Bacterial Resistance. Pharmacotherapy Self-Assessment Program;
4
:
169-189.
Available
online
at
http://www.accp.com/p4b4m2samples.pdf (accessed 12th November 2016, 11.38). Dwidjoseputro, D. 1998. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta : Djambatan. Gaman, P. M., dan Sherrington, K. B. 1992. Ilmu Pangan : Pengantar Ilmu Pangan, UGM – Press. Press. Nutrisi, dan Mikrobiologi. Mikrobiologi. Edisi Edisi Kedua. Yogyakarta. UGM – Ganiswarna, S.G, 1995 . Farmakologi dan Terapi Edisi 4. Jakarta : Universitas Indonesia. Jawetz, G., Melnick, J. L., dan Adelberg, E. A. 1995 . Mikrobiologi untuk Profesi Kesehatan. Jakarta : EGC.
Laurence, D. R., Bennet, P. N. 1987. Clinical Pharmacology Sixth edition . Churchill livingstone, Edinburgh. Lisni, Ida, dkk. 2015. Evaluasi Penggunaan Antibiotik pada Pasien Faringitis Di Suatu Rumah Sakit Di Kota Bandung. Jurnal Farmasi Galenika: Galenika: Vol.02,No.01.
Munaf, S., Chaidir, J. 1994. Obat antimikroba. Farmakologi . Jakarta: UNSRI. EGC. Peterson, L. R. 2005 . Squeezing the antibiotic balloon : The impact of antimicrobial classes on ermerging resistance. European society of clinical microbiology and infectious deseases . The Feinberg school of medicine, North Western
University, USA.
Sumadio, H., dan Harahap. 1994 . Biokimia dan Farmakologi Antibiotika. Antibiotika. Medan : USU Press. Tripathi, K. D. 2003. Antimicrobial Antimicrobial drugs : general consideration. consideration. Essential of medical pharmacology. Fifth edition . Jaypee brothers medical publishers.
Utami,Eka.R.2012. Antibiotika,Resistensi, dan Rasionalisasi Terapi . Sainstis : Vol.1,No.1.
