Reporte Practica i Fosforilacion Oxidativa

OBSERVACIONES Equipo Reactivo ph(0) pH(1) pH(2) pH(3 ) pH(4) pH(5) 1 Glucosa 6.4 6.14 5.81 5.65 5.54 5.45 Glucosa + 2 NaCN 7.43 6.82 7.18 6.89 6.7 6.6 Glucosa + 2,4 3 dinitrofenol dinitrof enol 6.1 5.9 5.77 5.61 5.57 5.47 Glucosa + 4 Gramicidina 5.91 5.75 5.62 5.53 5.46 5.43

pH(6) pH(7) 5.37 5.29 6.6

5.37 5.41

NOTA: el intervalo de medición de cada reactivo fue de un lapso l apso de tiempo de 5 minutos Glucosa al 10% PROCEDIMIENTO: 1. Disolución de 5 ml de suspensión de levadura con 40 ml de agua destilada 2. Adicionar 5 ml de glucosa al 10% 3. Determinación Determinación del pH en un lapso de 5 minutos durante 40 min 4. Observar RESULTADOS Equipo Reactivo 1 Glucosa

ph(0) pH(1) pH(2) pH(3 ) pH(4) pH(5) pH(6) pH(7) 6.4 6.14 5.81 5.65 5.54 5.45 5.37 5.29

CAMBIO DE PH GLUCOSA: se observo una disminución considerable al pH durante el lapso de tiempo de medición. Podemos hacer notar que la disminución del pH al agregar 5 ml de glucosa a la solución donde se encontraba la levadura del tipo Saccharomyces cereviciaer, cereviciaer, se debe a la degradación de la glucosa por parte de las levaduras ya que al momento de ponerse en contacto una con la otra las enzimas son activadas, donde la glucosa se introduce en su membrana mediante el gradiente de protones, llevando a cabo el proceso de glucolisis con el seguimiento de ciclo de Krebs, generando la producción de NADH.H el cual se dirigirá a cadena respiratoria para proceder al proceso de fosforilacion oxidativa realizando la captación de electrones por los distintos complejos localizados en la membrana interna

mitocondrial y como consecuencia permitiendo la salida de H+ hacia el medio extracelular generando la disminución de pH, el cual fue captado por el potenciómetro. Por lo que se puede concluir que la degradación de la glucosa por medio de levaduras produce la expulsión de iones H+ al medio provocando que este aumente su acidez. 2,4 dinitrofenol DESACOPLANTE PROCEDIMIENTO 1. 2. 3. 4.

Disolución de 5ml de suspensión de levaduras con 40 ml de agua Adicionar 5 ml de glucosa al 10% Adición de 0.2 ml de dinitrofenol 40mM(concentración final de 200 mM) Determinación de pH de la solución en un intervalo de 5 minutos durante 7 veces 5. Observar RESULTADOS Equipo Reactivo ph(0) pH(1) pH(2) pH(3 ) pH(4) pH(5) pH(6) pH(7) Glucosa + 2,4 3 dinitrofenol 6.1 5.9 5.77 5.61 5.57 5.47 5.37 Es observado claramente una disminución del pH debido a que como ya sabemos el dinitrofenol actúa como un desacoplante al aproximarse a la membrana interna y protonarse, debido al pH más bajo existente en esta zona. Esta protonacion aumenta la hidrofobicidad (no reacción con el agua) lo que permite que se difunda en la membrana y la atraviese. Una vez adentro el pH más alto hace que el hidroxilo fenólico de la sustancia se desprotone. Como consecuencia provoca el transporte de H+ nuevamente hacia la matriz, evitando que los electrones fluyan hacia el canal protónico de la ATPasa y no se dé la síntesis de ATP, es por ello que se observa un descenso en el pH ya que el aumento de iones hidrógenos produce que el ambiente intracelular esté ácido.

2,4 dinitrofenol (DESACOPLANTE)

Espacio intermembranico

Matriz mitocondrial

Protón ionizable

Acido

Alcalino

Carga negativa deslocalizada

Forma de anión -

carga

Diferencial de pH de aproximadamente 0,5 unidades de pH

Gramicidina PROCEDIMIENTO 1. Disolución de 5 ml de suspensión de levaduras previamente preparado con 40 ml de agua destilada 2. Adicion de 5 ml de glucosa al 10% 3. Adicionar antibiótico gramicidina a una concentración de 4. Observar

RESULTADOS Equipo Reactivo Glucosa + 4 Gramicidina

ph(0) pH(1) pH(2) pH(3 ) pH(4) pH(5) pH(6) pH(7) 5.91

5.75

5.62

5.53

5.46

5.43

5.41

Al tener el conocimiento de que la gramicidina es un desacoplante el cual funciona embebiéndose en la bicapa lipídica de la membrana mitocondrial interna, formando conductos hidrofílicos (poros) a través de los cuales pueden pasar iones como Na+, K+ y H+. La entrada de estos iones no sólo disminuye el potencial de membrana, sino además el ingreso de H+ disminuye el potencial electroquímico total , disminuyendo la síntesis del ATP. Por lo que se comprueba experimentalmente al observar la disminución continua del pH significando esto la entrada de protones al espacio extracelular en este caso nuestro vaso de precipitados.

CONCLUSION Mediante esta práctica pudimos aplicar experimentalmente los conocimientos adquiridos sobre los diferentes procesos acoplados energéticamente mediante los cuales se da síntesis de ATP en organismo aerobios, como es la fosforilacion oxidativa. Además de los modos de acción con los cuales algunos compuestos químicos son dañinos en las funciones de dicho proceso; por parte de los desacoplantes al desacoplar el proceso endergonico del exergonico provocan la perdida del potencial electroquímico por lo que como consecuencia se disminuye la síntesis de

ATP, dando paso los agentes desacoplantes al paso de H+ observando por medio del decrecimiento de pH. Mientras que los inhibidores detienen totalmente el proceso de fosforilacion oxidativo, al impedir el transporte de electrones por lo que las reacciones de oxidoreduccion cesan la producción de ATP