RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA PCR (LATEX) O fundamento básico das técnicas de aglutinação é similar ao princípio das técnicas que se utilizam do conceito de precipitação. No entanto, a reação de aglutinação baseia-se na capacidade do anticorpo se ligar ao antígeno presente em uma superfície de grande partícula de tal forma que leva a uma alteração do estado fisco do antígeno que é denominada interação secundária. intera interação ção secund secundári áriaa pod podee ser ser identi identific ficada ada de difere diferente ntess manei maneiras ras como, como, por e!emplo, quando o antígeno está presente em uma superfície de uma partícula grande como uma bactéria, fungos, láte! ou um eritr"cito# os anticorpos, uma vez ligados, levam estas partículas se agruparem agruparem de modo visível visível num fen$meno fen$meno con%ecido como como aglutinação. aglutinação. OBJETIVO presentar aos alunos a técnica usada no pcr, o processo de diluiç&es e as reaç&es de aglutinação e compreender seu significado clínico. MATERIAL MATERIAL E METÓDOS METÓD OS mostra de soro 'ipeta de () *l 'ipeta de ()) *l +it ' 'alito para %omogeneizar os reagentes olução /isiol"gica 0stante para tubos com amostras 1ubos O procedimento teve início com as e!plicaç&es da professora sobre as diluiç&es que seriam necessárias para dar início a técnica, 2) *l de solução fisiol"gica seria depositada em seis tubos, 2) *l de soro seria depositado no primeiro tubo %omogeneizado e 2) *l desse tubo seria depositado no pr"!imo tubo, repetindo esse até o ultimo tubo e descartando a mesma quantidade. 2) *l do reagente pcr seria colocada em duas superfícies da placa de fundo preto, uma sendo pro controle positivo e a outra pro controle negativo, numa segunda placa de fundo preto 2) *l seria colocado em cada superfície e 2) *l da solução com soro em cada uma das superfícies também, ap"s %omogeneizar e dei!ar tudo preparado para leitura e resultados.
RESULTADOS Na leitura das placas foi perceptível a aglutinação em escalas diferentes devido as diluiç&es do soro, um resultado comum na técnica, foi então dado o resultado do teste definido pela diluiç&es que mostrou aglutinação mais aparente.
RESUMO3 1estes de tipagem sanguínea, 4O, 5 e 1010 60 OO74 8107 4O95 om a determinação do tipo sanguíneo e do fator % é possível avaliar casos de transfusão de sangue e também a eritroblastose fetal : quando a mãe tem 5 negativo e o fil%o, positivo. Na primeira gravidez, geralmente, não %á problema. Na segunda, no entanto, o sistema imunol"gico da mãe produz anticorpos com mais rapidez e em maior quantidade e o sangue da mãe ;5 negativo< no contato com o do fil%o ;5 positivo< pode resultar em aborto. 7=1O6O 60 18'>07 4O Na tipagem direta, se ocorrer aglutinação quando as %emácias do paciente forem misturadas com o anti-soro , o antígeno está presente e o sangue é tipado como . e ocorrer aglutinação quando as %emácias do paciente forem misturadas com anti-soro 4, o anti-soro 4 está presente e o sangue é tipado como 4. e ocorrer aglutinação em ambas as misturas, tanto antígenos e 4 estão presentes e o sangue é tipado como 4. e não ocorrer aglutinação em qualquer uma das misturas, não %á antígenos presentes e o sangue é tipado como O. Na tipagem reversa, se ocorrer aglutinação quando as células 4 forem misturadas com o soro do paciente, e!iste anti-4 presente e o sangue é tipado como . e a aglutinação ocorrer quando as células forem misturadas, e!iste o anti- e o sangue é tipado como 4. e a aglutinação ocorrer tanto quando células quanto 4 forem misturadas, e!istem anti- e anti-4 e o sangue é tipado como O. e não ocorrer aglutinação quando e 4 forem misturados, nem anti- nem anti-4 está presente, o sangue é tipado como 4. 7=1O6O 60 18'>07 5 O sistema % classifica o sangue pela presença ou aus?ncia de antígeno %o;6< nas superfícies das %emácias. Neste teste, as %emácias de um paciente são misturadas com um soro contendo anticorpos anti-%o;6< e são observadas com relação @ aglutinação. e ocorrer a aglutinação, o antígeno %o;6< está presente, e o sangue do paciente é tipado como % positivo# se não ocorrer a aglutinação, o antígeno está ausente e o sangue do paciente é tipado como %-negativo. Os doadores de sangue em potencial são plenamente testados para e!cluir a variante 6u do antígeno %o;6<, antes de serem classificados como tendo sangue %-negativo. s
pessoas que t?m esse antígeno são consideradas doadores %-positivos, porém são geralmente transfundidas como receptores de %-negativo. 1010 60 OO74 O soro nti-8g> ;oro de oombs< destina-se @ pesquisa de anticorpos da fração gamaglobulina %umana, quer esteAam adsorvidos @s %emácias %umanas Bin vivoC ;1este de oombs 6ireto<, quer esteAam livres no plasma, o que se detecta ap"s adsorção Bin vitroC ;1este de oombs 8ndireto< OO74 6801O 0ste teste é empregado na pesquisa de anticorpos ;gamaglobulinas< Aá fi!ados @s %emácias, como ocorre na 6oença 5emolítica do ecém Nascido, nemia 5emolítica dquirida e em pacientes que ten%am recebido transfus&es incompatíveis. OO74 8N6801O 0ste teste é utilizado na pesquisa de anticorpos bloqueadores ;incompletos<, os quais se fi!am @s %emácias Bin vitroC mas não as aglutinam. 'ara que a reação seAa observada é necessária @ adição do oro nti8g> ;oro de oombs< ao teste. O teste de oombs 8ndireto é realizado nas pesquisas de anticorpos bloqueadores, nas pesquisas de antígenos ;usando o soro classificador apropriado< e nas provas de compatibilidade, desde que tais reaç&es não dependam de complemento para a sua detecção. Nos casos em que a reação pode ser mais bem detectada pela fi!ação de complemento, devese usar o oro nti-5umano ;nti-8g> e ntiDd< : 'oliespecífico
0N1O 60 0N8NO 'O/88ONE >F80E 08 60 OG OF8HE6O 6 8EH 0E8
RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA
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