Proposal Fix

POTENSI AKTIVITAS ANTIMIKROBA

cuss ca car i ca) SECARA IN VITRO TEH ASAM DAUN TIN (F i cu

KARYA TULIS ILMIAH

OLEH ELWIN DWI NOVITASARI  NIM 15.042

AKADEMI FARMASI PUTRA INDONESIA MALANG JANUARI 2018

PROPOSAL KARYA TULIS ILMIAH

POTENSI AKTIVITAS ANTIMIKROBA

cuss ca car i ca) SECARA IN VITRO TEH ASAM DAUN TIN (F i cu

Oleh : ELWIN DWI NOVITASARI

NIM 15.042

Telah diperiksa dan disetujui untuk diujikan

Pembimbing,

Ernanin Dyah Wijayanti, S.Si., MP.

DAFTAR ISI

COVER  LEMBAR PENGESAHAN DAFTAR ISI .................................................... .......................................................................... ............................................. .................................. ........... i DAFTAR TABEL ................................................... .......................................................................... .............................................. ......................... iii DAFTAR GAMBAR ........................................... ................................................................. ............................................ ............................ ...... iv DAFTAR LAMPIRAN .............. .................................... ............................................ ............................................ ................................. ........... v BAB I ............................................. ................................................................... ............................................ ............................................ ............................. ....... 1 PENDAHULUAN ........................................... ................................................................. ............................................ ................................. ........... 1 1.1

Latar Belakang ........................................... ................................................................. ............................................ ......................... ... 1

1.2

Rumusan Masalah ......................................... ............................................................... ............................................ ...................... 5

1.3

Tujuan Penelitian .......................................... ................................................................ ............................................ ...................... 5

1.4

Manfaat Penelitian ............................................ ................................................................... ........................................ ................. 5

1.5

Ruang Lingkup dan Keterbatasan Penelitian ............................................ ............................................ 5

1.6

Definisi Istilah ............................................ .................................................................. ............................................ ......................... ... 6

BAB II ............................................... ...................................................................... ............................................. ............................................. ......................... .. 7 TINJAUAN PUSTAKA .......................................... ................................................................ ............................................ ......................... ... 7 2.1

Tinjauan Tanaman Tin .......................................... ................................................................. .................................... ............. 7

2.2

Tinjauan Ekstraksi ............................................ ................................................................... ........................................ ................. 9

2.3

Tinjauan Flavonoid ........................................... .................................................................. ...................................... ............... 10

2.4

Tinjauan Fermentasi Kombucha ......................................... ............................................................. .................... 12

2.5

Tinjauan Mikroba Uji ........................................... .................................................................. .................................. ........... 19

2.6

Tinjauan Antimikroba ........................................... .................................................................. .................................. ........... 39

2.7

Tinjauan Metode Uji Aktivitas Antimikroba .......................................... .......................................... 41

2.8

Kerangka Konsep .......................................... ................................................................ .......................................... .................... 45

BAB III ............................................. .................................................................... ............................................. ............................................. ....................... 47 METODOLOGI PENELITIAN ........................... ................................................. ............................................. ........................... .... 47 3.2

Populasi dan Sampel Penelitian .......................................... .............................................................. .................... 48

3.3

Lokasi dan Waktu Penelitian ........................................... .................................................................. ....................... 48

i

3.4

Definisi Operasional Variabel .......................................... ................................................................. ....................... 48

3.5

Alat dan Bahan ........................................... ................................................................. ............................................ ........................ 49

3.6

Prosedur Kerja ........................................... ................................................................. ............................................ ........................ 50

3.7

Analisis Data .......................................... ................................................................ ............................................ ........................... ..... 57

DAFTAR RUJUKAN ......................................................... ............................................................................... .................................. ............ 59 LAMPIRAN .......................................... ................................................................ ............................................ .......................................... .................... 66

ii

DAFTAR TABEL

Tabel 2.1 Kandungan daun tin per 100 g ......................................... ............................................................... ...................... 8 Tabel 2.2 Kategori Kate gori Penghambatan Antimikroba Berdasarkan Zona Hambat ....... 44 Tabel 3.1 Definisi Def inisi Operasional Variabel ........................................................... ...............................................................49 ....49

iii

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Bentuk morfologi tanaman t anaman tin............................................................. tin............................................................. 9 Gambar 2.2 Struktur flavonoid, isoflavonoid, dan neoflavonoid.......................... neoflavonoid.......................... 11 Gambar 2.3 a. Jamur Kombucha ; b. Sel Acetobacter Sel  Acetobacter dan Saccharomyces dalam Saccharomyces dalam matrix Selulosa Kombucha .......................................... ................................................................. .................................. ........... 14 Gambar 2.4 Reaksi hidrolisis hidrolisi s Fermentasi ......................................... ............................................................. .................... 14 Gambar 2.5 Pathway Fermentasi Fermentas i Alkohol ............................. ................................................... ............................... ......... 15 Gambar 2. 6 Pathway Pathwa y Fermentasi Asam Asetat Aseta t ........................................... .................................................... ......... 16 Gambar 2. 7Staphylococcus 7 Staphylococcus aureus yang Dilihat dari Mikroskop Elekton .......... 26 Gambar 2. 8 Morfologi bakteri Escherichia bakteri  Escherichia coli: coli: a). Pengamatan hasil pewarnaan gram; b). Pengamatan menggunakan mikroskop elektron ............................. ............................. 28 Gambar 2. 9 Hasil Pewarnaan Gram Lactobacillus Gram Lactobacillus casei  casei ..................................... .................................... 32 Gambar 2. 10 Morfologi Fungi Candida albicans : a. Bentuk Morfologi; b. Pengamatan Hasil Pewarnaan Gram .......................................... .............................................................. .................... 36 Gambar 2. 11 Kerangka Konsep .......................... ................................................ ............................................. ........................... .... 45

iv

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Perhitungan media .................................. ........................................................ .......................................... .................... 66 Lampiran 2. Komposisi Media............................................ ................................................................... .................................. ........... 67 Lampiran 3. Standart Turbiditas McFarland ......................................... ......................................................... ................ 69

v

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Penyakit infeksi merupakan penyebab paling utama tingginya angka kesakitan dan angka kematian terutama pada negara-negara berkembang seperti Indonesia. Menurut Kemenkes RI tahun 2017, pada tahun 2016 telah terjadi kasus  penyakit infeksi hingga mencapai 7 juta j uta kasus. k asus. Penyakit infeksi merupakan suatu  penyakit yang disebabkan karena adanya mikroba patogen (Darmadi, 2008 dalam Mulyono, 2013). Selain itu, beberapa flora normal juga dapat menyebabkan infeksi pada kondisi tertentu seperti Staphylococcus aureus  aureus  pada saluran  pernafasan atas atau permukaan kulit ,  , Escherichia coli  pada saluran pencernaan , dan Candida albicans pada albicans  pada selaput mukosa saluran pernapasan. Pengobatan yang digunakan pada penyakit infeksi biasanya adalah antibiotik. Antibiotik disebut juga sebagai obat antimikroba, yang telah digunakan selama bertahun-tahun untuk mengobati pasien dengan berbagai penyakit infeksi. Sejak tahun 1940-an, obat antibiotik telah mengurangi gejala dan kematian yang diakibatkan oleh penyakit infeksi. Namun, karena telah digunakan secara luas dan  berlebihan, mikroorganisme yang seharusnya dapat dibasmi dengan obat antibiotik, telah beradaptasi dan membuat antibiotik menjadi kurang efektif (Anonim, 2017). Mekanisme resistensi yang menjadi bagian dari evolusi mikoorganisme dapat mengancam kemampuan seorang dokter dalam mengobati  penyakit infeksius umum, yang dapat mengakibatkan kecacatan kecacata n bahkan kematian

1

2

yang seharusnya dapat sembuh dan menjalankan hidup yang normal (Salim, 2016). Resistensi adalah kemampuan suatu bakteri untuk tidak terbunuh atau terhambat pertumbuhannya oleh suatu antibakteri (Priyanto dan Batubara, 2008 dalam Zamzami 2011). Tanpa adanya pengobatan antibiotik yang efektif, banyak  prosedur medis standar yang akan gagal atau menjadi sangat beresiko. Infeksi yang disebabkan oleh mikroorganisme resisten dapat mempersulit penyembuhan,  peningkatan biaya pengobatan serta resiko kematian yang meningkat (WHO, 2014). Fenomena resistensi ini mendorong berbagai penelitian untuk menemukan antimikroba dari tanaman herbal. Salah satu tanaman herbal yang diketahui memiliki aktivitas antimikroba adalah daun tin ( Ficus carica). carica). Daun tin adalah daun yang berasal dari tanaman tin. Tanaman tin ini banyak tumbuh di daerah Mediterania (Irget et al., 2008). al., 2008). Di Indonesia tanaman tin sudah mulai dibudidayakan sehingga keberadaanya mudah diperoleh, misalnya di daerah Tumpang Kabupaten Malang. Tin memiliki  beragam metabolit sekunder, tetapi yang terbesar adalah flavonoid. Kandungan flavonoid dalam daun tin menurut Konyahoglu et al . (2005) dalam Ahaddin (2014) kira-kira 1,15% dengan pelarut metanol. Pada penelitian Ahaddin (2014) hasil uji kualitatif ekstrak daun tin ( Ficus Carica) Carica) menunjukkan adanya kandungan flavonoid berupa flavon dan flavonol. Beberapa peneliti menemukan adanya aktivitas antimikroba pada daun tin. Menurut Jeong et al.  al.  (2009) melaporkan bahwa beberapa senyawa flavonoid terbukti memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri oral   (mulut). Hal tersebut mengindikasikan bahwa senyawa flavonoid yang terkandung pada daun tin memiliki efek antibakteri

3

(Jeong et al., 2009). 2009). Dalam penelitian yang dilakukan oleh Jeong et al.  al.  (2009), aktivitas antibakteri ekstrak metanol daun tin menunjukkan aktivitas yang kuat terhadap S. gordonii, S. anginosus, P. intermedia, A. actinomycetemcomitans, dan  P. gingivalis (MIC, 0.156 sampai 0,625 mg / ml; MBC, 0,313 sampai 0,625 mg / ml). Sedangkan untuk aktivitas antifungi, menurut Aref et al.  al.  (2010) ekstrak metanol daun tin ( Ficus carica) carica) sangat sesuai untuk melawan Candida albicans. Dalam hal ini membuktikan bahwa daun tin memiliki aktivitas antimikroba sehingga dapat digunakan untuk penyembuhan penyakit i nfeksi. Pemanfaatan daun tin bisa dikembangkan lagi sesuai dengan kemajuan teknologi saat ini. Untuk dapat memperoleh khasiatnya, daun tin dapat diolah menjadi sediaan oral, salah satunya adalah adalah

teh daun daun tin. Pada umumnya umumnya

masyarakat masih menggunakan cara empiris yaitu seduhan untuk mendapatkan khasiat dari tanaman daun tin, namun karena daun tin memiliki rasa yang sangat  pahit maka harus dilakukan cara ca ra untuk mengurangi m engurangi rasa pahit tersebut. Salah Sa lah satu cara yang dapat digunakan untuk mengurangi rasa pahit dari teh daun tin adalah fermentasi. Witoyo et al. (2015) al. (2015) mengatakan bahwa tujuan dari fermentasi adalah untuk membentuk rasa atau aroma teh menjadi lebih khas atau enak. Selain itu, flavonoid yang terdapat dalam tanaman masih tergolong dalam polifenol kompleks, sehingga dibutuhkan suatu proses untuk dapat memecah senyawa kompleks menjadi senyawa yang lebih sederhana untuk mudah diserap oleh tubuh yaitu melalui proses fermentasi (Filannino et al., 2016). al., 2016). Fermentasi adalah suatu proses perubahan kimiawi dari senyawa-senyawa organik dengan bantuan aktivitas enzim yang dihasilkan oleh mikroorganisme (Ningtyas, 2015). Hal ini berarti dalam proses fermentasi terjadi penguraian

4

senyawa dari bahan-bahan kompleks menjadi senyawa yang lebih sederhana (Megama, 2016). Proses fermentasi membutuhkan starter sebagai mikroba yang akan ditumbuhkan dalam substrat. Starter yang akan digunakan pada penelitian ini adalah kultur kombucha. Kultur Kombucha merupakan lapisan bersifat gelatinoid dan liat seperti nata, berbentuk piringan datar (Rinihapsari, 2008). Menurut  Naland (2008) kultur kombucha memiliki bentuk lembaran tipis setebal 0,3-1,2 cm terlihat seperti gelatin warna putih. Kombucha mengandung beberapa bakteri serta jamur, diantaranya adalah bakteri  Acetobacter xylinum dan jamur seperti Saccaromyces

cerevisiae. cerevisiae.

Kombucha

memiliki

beberapa

efek

kesehatan

diantaranya sebagai antioksidan, antibakteri, dapat meningkatkan ketahanan tubuh dan dapat menurunkan tekanan darah (Wistiana et al., al., 2015). Fermentasi dengan starter kultur kombucha dilakukan untuk memperoleh manfaat dari kombucha yaitu sebagai antibakteri, sehingga dapat digabungkan antara manfaat teh daun tin dan kombucha. Kombinasi tersebut diharapkan dapat meningkatkan aktivitas sebagai antimikroba. Oleh karena itu perlu dilakukan  penelitian aktivitas antimikroba hasil fermentasi daun tin dengan kultur kombucha. Penelitian ini dilakukan secara in vitro dengan metode difusi sumuran menggunakan mikroba indikator berupa flora normal tubuh antara lain Staphylococcus

aureus,

 Lactobacilus casei. casei.

Escherichia

coli,

dan

Candida

albicans, albicans ,

serta

5

1.2 Rumusan Masalah

Rumusan masalah pada penelitian ini adalah bagaimana potensi aktivitas antimikroba teh asam daun tin ( Ficus carica) carica) secara in vitro?

1.3 Tujuan Penelitian

Tujuan penelitian pada penelitian ini adalah untuk mengetahui bagaimana  potensi aktivitas antimikroba teh asam daun tin ( Ficus  Ficus carica) carica) secara in vitro.

1.4 Manfaat Penelitian

Manfaat dalam penelitian ini adalah dapat menghasilkan suatu produk yang dapat dimanfaatkan oleh masyarakat sebagai alternatif pengobatan penyakit infeksi.

1.5 Ruang Lingkup dan Keterbatasan Keterbatasan Penelitian

1.5.1 Ruang Lingkup Ruang lingkup dalam penelitian ini adalah pengumpulan daun simplisia yang diperoleh dari daerah Tumpang Kabupaten Malang, pembuatan simplisia, identifikasi senyawa flavonoid secara kualitatif dan dilakukan ekstraksi sederhana yaitu seduhan, kemudian dilakukan fermentasi dengan penambahan kultur kombucha, pengujian antimikroba terhadap Staphylococcus aureus, Eschericia Coli, Lactobacillus casei serta jamur Candida albicans  albicans   dengan metode difusi sumuran.

6

1.5.2 Keterbatasan Penelitian Adapun keterbatasan dalam penelitian ini yaitu : 1. Pemilihan daun tin dilakukan secara acak tanpa memperhatikan umur daun (tua/muda). 2. Identifikasi fitokimia hanya dilakukan dengan uji warna terhadap senyawa flavonoid saja yang diduga sebagai senyawa antimikroba pada daun tin. 3. Pada proses fermentasi kelembaban udara tidak dikontrol.

1.6 Definisi Istilah

1.

Potensi aktivitas antimikroba adalah kemampuan suatu bahan atau zat dalam menghambat bahkan membunuh pertumbuhan mikroba tertentu.

2.

Teh asam daun tin adalah hasil seduhan daun tin yang difermentasi dengan starter kombucha sehingga terdapat rasa asam pada rebusan daun tin.

3.

Mikroba merupakan bakteri dan fungi yang digunakan untuk pengujian aktivitas antimikroba, diantaranya adalah Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Lactobacillus casei dan Candida albicans. albicans .

4.

Metode difusi sumuran adalah metode yang digunakan untuk melihat aktivitas antimikroba dengan cara membuat sumuran pada media agar yang telah diinokulasikan mikroba uji. menentukan aktivitas agen antimikroba dengan cara dibuat sumuran pada media agar yang telah ditanami dengan mikroba dan pada sumur diberi agen antimikroba antimi kroba yang akan diujikan. Metode yang digunaikan untuk melihat aktivitas antimikroba dengan cara

dibuat

sumuran

dan

telah

diinokulasikan

mikroba

uji.

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Tinjauan Tanaman Tin

Salah satu spesies Ficus spesies  Ficus yang  yang tersebar luas di daerah tropis dan subtropis adalah pohon tin ( Ficus ( Ficus carica). carica). Tanaman yang telah ada sekitar ribuan tahun lalu ini dapat tumbuh subur serta berbuah lebat di tengah terik matahari, bahkan di  padang gurun sekalipun. Menurut Irget et al.  al.  (2008) Turki merupakan daerah  penghasil pohon tin terbesar di dunia, sekitar 65% pohon dihasilkan di daerah Aegean Barat. Di Indonesia tanaman tin mulai dibudidayakan terutama di daerah Malang. Tanaman tin telah diketahui manfaatnya dalam bidang kesehatan, hampir semua bagiannya bermanfaat sebagai obat herbal mulai dari akar, buah dan daun. Aktivitas daun tin yang telah dilaporkan ialah sebagai antioksidan (Konyahoglu et al., 2005; Patil VV dan Patil VR 2011a; Joseph dan Raj 2011; Ghazi et al ., ., 2012), antimikroba (Jeong et al ., ., 2009), antibakteri (Lee dan Cha, 2010), antifungi (Mawa, 2013), antipiretik (Patil et al ., ., 2010a), antidiabetes (El-Shobaki et al ., ., 2010), antiradang (Patil VV dan Patil VR 2011b), dan antikanker (Refli, 2012). Oleh karena itu terkadang tanaman tin disebut juga sebagai pohon kehidupan (Refli, 2012). Daun tin juga banyak mengandung gizi tertentu, kandungan gizi dalam daun tin dapat dilihat pada tabel 2.1. Menurut Joseph dan Raj 2011, taksonomi tanaman tin adalah sebagai  berikut: Kingdom

: Plantae

Divion

: Magnoliophyta

7

8

Class

: Magnolipsida

Ordo

: Rosales

Family

: Moraceae

Genus

: Ficus

Spesies

: Ficus : Ficus carica Tabel 2.1 Kandungan daun tin per 100 g Kandungan Per 100 g Protein 4,6 mg Lemak 0,9 mg Karbohidrat 16,8 mg Kalsium 1398,14 mg Zat besi 75,7 mg Potassium 117,67 mg Magnesium 396,36 mg Mangan 21,9 mg Vitamin C 21,78 mg Vitamin E 1,9 mg Fenol 6,909 mg Metanol 4,727 (Ghazi et al., 2012)

Ciri-ciri tanaman tin adalah berdaun tunggal, berselang-seling. Daun tanaman tin berwarna hijau, agak tebal dan umumnya bergerigi pada bagian  pinggirnya. Permukaan atas daun tanaman ini agak kasar dan mempunyai bulu bulu halus pada permukaan bawahnya (Husaeni, 2008). Panjang daun antara 1225 cm, lebar 10-18 cm dan berlekuk dalam 3 atau 5 cuping. Daunnya berhadapan atau tersebar, jarang ada yang majemuk. Pohon tin dapat tumbuh hingga mencapai ketinggian 3-10 m. Tanaman tin memiliki getah yang cukup banyak dan dahan yang kurang kokoh (Agung, 2014). Morfologi daun tin dapat dilihat pada gambar 2.1.

9

Gambar 2.1 Bentuk morfologi tanaman tin (Patil VV dan Patil VR, 2011)

Daun tin mengandung berbagai macam senyawa yang dapat dimanfaatkan sebagai obat herbal antara lain flavonoid, steroid/triterpenoid, alkaloid, dan tanin (Sirisha et al ., ., 2010). Tanaman tin memiliki berbagai macam metabolit sekunder, tetapi yang terbesar adalah flavonoid. Kandungan flavonoid dalam daun tin menurut Konyahoglu et al . (2005) dalam Ahaddin. (2014), kira-kira 1,15% dengan pelarut metanol. Pada penelitian Ahaddin (2014) hasil uji kualitatif ekstrak daun tin menunjukkan adanya kandungan flavonoid berupa flavon dan flavonol. Menurut Jeong et al.  al.  (2007) melaporkan bahwa beberapa senyawa flavonoid terbukti memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri oral  (mulut).  (mulut). Hal tersebut mengindikasikan bahwa senyawa flavonoid yang terkandung pada daun tin memiliki efek sebagai antibakteri (Jeong et al., 2009). 2009).

2.2 Tinjauan Ekstraksi

Menurut Agoes (2009), definisi ekstraksi adalah proses pemisahan bahan dari campurannya dengan menggunakan pelarut. Jadi, ekstrak merupakan sediaan yang diperoleh dengan cara ekstraksi tanaman obat dengan ukuran partikel tertentu dan menggunakan medium pengekstraksi yang tertentu. Ekstraksi atau

10

 penyarian dapat dilakukan dengan berbagai pelarut sesuai dengan bahan yang ingin diekstraksi. Salah satu pelarut yang umum digunakan adalah air. Hasil ekstraksi menggunakan pelarut air disebut ekstrak air. Menurut Agoes (2009)  pembuatan ekstrak air dapat dilakukan dengan dengan cara-cara berikut: 1.  Decoctum (dekok)  Decoctum (dekok) : menggunakan simplisia dengan perbandingan dan derajat kehalusan tertentu dan digunakan pada suhu 90°-95°C selama 30 menit. 2.  Infusum (infus): sama seperti dekok hanya waktu ekstraksinya lebih singkat yaitu 15 menit. 3.

Coque  Coque  (perebusan): penyarian dengan cara merebus tanaman obat dalam wadah dengan menggunakan api langsung misalnya pada pembuatan jamu tradisional.

4.

Seduhan: simplisia direndam menggunakan air mendidih dengan waktu selama 10-15 menit.

5.

Maserasi: penyarian simplisia dengan menggunakan pelarut pada suhu kamar dalam waktu tertentu.

6.

Perkolasi: ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai semua bahan aktif terekstraksi.

2.3 Tinjauan Flavonoid

Kata dari “flavonoid” merupakan kata yang merujuk pada suatu senyawa  bahan alam yang mengandung dua cincin aromatik benzena yang dihubungkan oleh 3 atom karbon, atau suatu fenilbenzopiram. Flavonoid merupakan suatu kelompok senyawa fenol terbesar yang ditemukan di alam (Kristanti et al., 2008). al., 2008). Flavonoid merupakan kandungan khas pada tumbuhan hijau dan terdapat pada

11

semua bagian tumbuhan terutama pada bagian ba gian daunnya (Rahajo, 2013). Flavonoid memiliki kerangka dasar karbon yang terdiri atas 15 atom karbon yang membentuk susunan C 6 - C3 - C6. Susunan ini dapat menghasilkan tiga jenis struktur, yaitu 1,3-diarilpropan / flavonoid; 1,2-diarilpropan / isofla vonoid dan 1-1 diarilpropan / neoflavonoid (Kristanti et al ., ., 2008),.

Gambar 2.2 Struktur flavonoid, isoflavonoid, dan neoflavonoid (Grotewold, 2006)

Menurut Juliantina (2008), flavonoid berfungsi berfungsi sebagai antibakteri dengan cara mendenaturasi protein sel bakteri dan merusak membran sel tanpa dapat diperbaiki kembali. (Edziri et al.  al.  (2012) melaporkan bahwa senyawa flavonoid dalam

bunga  Retama

raetam

memiliki

aktivitas

antibakteri

terhadap

 Pseuodomonas aeruginosa dan  Escherichia coli. Parubak (2013) melaporkan  bahwa flavonoid dalam daun akway ( Drimys Beccariana Gibbs)  Gibbs)  mempunyai aktivitas antibakteri terhadap  Escherichia coli dan  Bacilus subtilis. Sedangkan mekanisme kerja flavanoid dalam menghambat pertumbuhan jamur adalah dengan menyebabkan gangguan permeabilitas membran sel jamur. Gugus hidroksil yang terdapat dalam senyawa flavonoid menyebabkan perubahan komponen organik dan transprt nutrisi yang akhirnya akan mengakibatkan sel pada jamur menjadi lisis (Abad et al., 2007 dalam Prasetyo 2016). Menurut Jung et al. (2011) dalam

12

Prasetyo (2016), terdapat laporan bahwa senyawa flavonoid berikatan dengan  protein melalui ikatan hidrogen sehingga akan mengakibatkan struktur protein menjadi rusak. Ketidakstabilan dari dinding sel dan memberan sitoplasma jamur menyebabkan sel jamur menjadi terganggu. Gangguan integritas sitoplasma menyebabkan lolosnya makromolekul dan ion dari sel sehingga sel jamur kehilangan bentuknya dan akan menjadi lisis. Flavonoid berperan dalam menarik serangga untuk membantu proses penyerbukan. Selain itu, flavonoid juga  berfungsi sebagai pengatur tumbuh, pengatur proses fotosintesis, sebagai zat antimikroba, antivirus dan antiinsektisida. Selain itu, beberapa flavonoid juga sengaja dihasilkan oleh jaringan tumbuhan sebagai respon terhadap infeksi atau luka yang kemudian berfungsi menghambat fungi menyerangnya (Kristanti et al., 2008).

2.4 Tinjauan Fermentasi Kombucha

Istilah fermentasi diturunkan menjadi fervere, istilah latin yang berarti mendidih. Peristiwa pendidihan tersebut akibatnya terbentuk gelembung CO 2 oleh  proses katabolisme gula dan ekstrak (Wibowo, 1990 dalam dalam Minang 2008). Dalam dunia biokimia dan mikrobiologi, fermentasi adalah sebuah proses yang menyebabkan perubahan kimiawi pada suatu senyawa organik kompleks melalui  pengaruh beberapa enzim yang dihasilkan oleh mikroba (Naland, 2004). Hal ini  berarti dalam proses fermentasi terjadi penguraian senyawa dari bahan-bahan kompleks menjadi senyawa yang lebih sederhana (Megama, 2016). Selain itu, hasil dari fermentasi memberikan sifat tertentu yang khas seperti aroma spesifik sehingga menjadi daya tarik konsumen (Yuliana, 2015 dalam Megama, 2016).

13

Mikroorganisme yang berperan dalam proses fermentasi adalah golongan khamir, kapang dan fungi. Berbagai makanan dan minuman fermentasi melibatkan satu macam atau beberapa mikroorganisme yang bekerja secara simbiotik (Aditiwati dan Kusnadi, 2003 dalam Ningtyas, 2015). Proses fermentasi membutuhkan starter, starter merupakan populasi mikroba dalam jumlah dan kondisi yang siap diinokulasikan pada media fermentasi (Prabowo, 2011). Salah satu starter yang dapat digunakan adalah kombucha. Kultur kombucha merupakan lapisan bersifat gelatinoid dan liat seperti nata, berbentuk piringan datar (Rihihapsari, 2008). Menurut Naland (2008) khamir kombucha memiliki bentuk lembaran tipis setebal 0,3-1,2 cm terlihat seperti gelatin berwarna putih (Gambar 2.3a). Kultur kombucha biasa disebut dengan SCOBY (Simbiotic ( Simbiotic Culture of Bacteria and Yeast ). ). Bakteri utama berasal dari genus Acetobacter misalnya  Acetobacter xylinum  xylinum  dan komponen khamir misalnya Saccharomyces cerevisiae  cerevisiae  (Gambar 2.3b) (Wong, 2001 dalam Afifah 2010). Komposisi inokulum dalam kultur kombucha adalah khamir dan bakteri asam asetat yang tumbuh bersimbiosis yang mempunyai aktivitas sinergis dan saling melengkapi dalam fermentasi (Afifah, 2010). Bakteri dan jamur kombucha yang bersimbiosis saat proses fermentasi merombak gula menjadi senyawasenyawa seperti asam, vitamin dan alkohol. Kombucha memiliki beberapa efek kesehatan diantaranya sebagai antioksidan, antibakteri, dapat meningkatkan ketahanan tubuh dan dapat menurunkan tekanan darah (Wistiana et al., 2015). al., 2015).

14

 A cettobacte cter dan Gambar 2.3 a. Jamur Kombucha (Naland, 2008); b. Sel Ace  Sacch  Saccha aromy romyces ces dalam matrix Selulosa Kombucha (Naland, 2004)

Pada proses fermentasi diawali oleh pemecahan sukrosa menjadi glukosa dan fruktosa oleh aktivitas khamir. Hidayat (2006) dalam Ningtyas (2015), menjelaskan bahwa jka yang digunakan adalah disakarida seperti sukrosa, reaksi hidrolisis fermentasi sama seperti penggunaan monosakarida. Reaksinya adalah sebagai berikut: intervase

C12H22O11 + H2O Sukrosa

Air

2C6H12O6 Glukosa dan Fruktosa

Gambar 2.4 Reaksi hidrolisis Fermentasi Fermentasi (Ningtyas, 2015)

Fermentasi sukrosa oleh khamir memerlukan kerja enzim intervase atau  biasa disebut juga sakarase atau sukrase untuk menghidrolisis sukrosa menjadi glukosa dan fruktosa. Selanjutnya, hasil hidrolisis tersebut akan difermentasi menjadi etanol. Enzim invertase pada Saccharomyces cereviceae terikat pada dinding sel (Gandjar dan Wellyzar, 2006 dalam Ningtyas 2015). Proses fermentasi  pada kombucha lebih jelasnya bisa dilihat pada gambar gambar 2.5 dan 2.6.

15

1. Fermentasi Alkohol

Glukosa

Glikolis

Asam Piruvat

 Piruvat dekarboksilase

CO2

Asetaldehid  Alkohol dehidrogenase

Etanol

Gambar 2.5 Proses Fermentasi Alkohol (Mehta et al., 2012)

Gambar 2.5 menjelaskan tentang fermentasi alkohol yaitu pertama khamir akan mendegradasi heksosa (glukosa, fruktosa) melalui glikolisis menjadi asam  piruvat.

Selanjutnya

asam

piruvat

tersebut

dikarboksilasi

oleh

enzim

dekarboxilase piruvat menjadi asetaldehid, juga menghasilkan CO 2. Kemudian asetaldehid berubah menjadi etanol oleh enzim alkohol dehidrogenase (Mehta et al., 2012).

16

2. Fermentasi Asam asetat Etanol  Alkohol dekarboksilase

Asetaldehid  Aldehid dehidro enase

Asetil CoA  Fos otransasetilase Asetil fosfat  Asetat kinase

Asam asetat Gambar 2. 6 Proses Fermentasi Asam Asetat (Mehta et al., 2012)

Setelah alkohol dihasilkan, maka segera dilakukan fermentasi asam asetat, dimana bakteri asam asetat akan mengubah alkohol menjadi asam asetat secara aerob (Hidayat et al., al., 2006 dalam Ningtyas, 2015). Etanol diubah menjadi asetaldehid oleh enzim alkohol dehidrogenase. Selanjutnya, asetaldehid dioksidasi menjadi asetil-koenzim A (CoA) oleh enzim aldehid dehidrogenase. Kemudian asetil- CoA

diubah menjadi asetil-fosfat oleh enzim fosfotransasetilase.

Kemudian, asetil-fosfat mengalami defosforilasi menjadi asam asetat oleh enzim asetat kinase (Mehta et al., 2012). Asam asetat merupakan produk dari proses fermentasi kombucha oleh aktivitas utama dari  Acetobacter . Aktivitas lain dari  bakteri Acetobacter   bakteri Acetobacter  adalah  adalah pembentukan asam glukonat yang berasal dari oksidasi glukosa.

17

Kultur kombucha dalam waktu yang bersamaan juga menghasilkan asamasam organik lainnya. Bakteri  Acetobacter   xylinum   xylinum  mengubah gula menjadi selulosa yang disebut nata dan melayang di permukaan medium. Jika nutrisi dalam medium telah habis dikonsumsi, kultur akan berhenti tumbuh tetapi tidak mati (masuk pada fase teteap atau stasioner). Kultur akan aktif lagi jika memperoleh nutrisi kembali (Hidayat et al., al., 2006 dalam Ningtyas, 2015). Pada  proses fermentasi berlangsung, bakteri  Acetobacter  xylinum  Acetobacter   xylinum   yang terdapat di dalam starter kombucha akan mengubah glukosa menjadi berbagai jenis asam, vitamin, dan alkohol alkohol yang berkhasiat bagi tubuh. Pembentukan etanol dilakukan dilakukan oleh khamir dan selulosa oleh  Acetobacter xylinum, xylinum, glukosa dikonversi menjadi asam glukonat melalui jalur fosfat pentosa oleh bakteri asam laktat, sebagian  besar fruktosa diubah menjadi asam-asam (Marwati et al., 2013). Kandungan kimia pada kombucha diantaranya adalah vitamin B1, vitamin B2, vitamin B3, vitamin B6, vitamin B12, vitamin B15, vitamin C, asam folat, asam glukoronat, asam glukonat, asam asetat, asam chondroitin sulfat, asam hyalunoric, asam laktat, acetaminophen, asam amino esensial, enzim, antibiotik tertentu (Naland, 2004). Fermentasi kombucha berkisar antara 4-14 hari. Lama fermentasi yang disarankan adalah 14 hari, karena gula telah benar-benar terfermentasi, maka akan semakin asam dan rasa manis akan berkurang (Hidayat et al., 2006 dalam  Ningtyas 2015). 2.4.1 Antibakteri Kombucha Liana (2013) menyatakan bahwa antimikroba adalah bahan-bahan atau obat-obatan yang digunakan untuk membasmi infeksi mikroba, khususnya yang

18

merugikan manusia. Tujuan utama dari penggunaan zat antimikroba adalah untuk mencegah penyebaran penyakit, infeksi, membasmi mikroorgansime pada inang yang terinfeksi dan mencegah pembusukan dan perusakan oleh mikroba. Produksi asam pada kultur kombucha  kombucha  memiliki pH 2,5, hal ini dapat membatasi kemampuan bakteri patogen dari berbagai mikroorganisme lain (Greenwalt et al., 1998 dalam Afifah, 2010). Asam organik memiliki sifat lipolifik yang berbeda antara satu dengan yang lain, sehingga hal ini akan menentukan tingkat kemudahan asam-asam tersebut untuk memasuki bagian dalam sel. Sejumlah penelitian membuktikan  bahwa secara secar a umum dan dalam keadaan yang serupa, ser upa, aktivitas antimikroba asam adalah asam asetat>asam propionat>asam laktat>asam sitrat. pH dan tingkat kelarutan asam yang tinggi pada kombucha juga sangat berpengaruh terhadap sifat antimikroba yang dihasilkan. Asam juga memiliki sifat molekul yang berbeda beda sehingga pada konsentrasi molekul yang tidak terdisosiasi. Khamir dan kapang secara khusus sensitif terhadap asam sorbat dan asam propionat, sedangkan bakteri lebih sensitif terhadap asam asetat (Ray, 1996 dalam Afifah, 2010). Penelitian Greenwalt et al., (1998) dalam Afifah (2010) membuktikan  bahwa aktivitas antibakteri pada kombucha melawan mikroba patogen sebagian  besar dikontribusikan oleh zat asam yang terkandung di dalam kombucha, hal ini dapat diketahui dengan uji yang dilakukan pada beberapa mikroba yang mengalami penghambatan hampir sama, tetapi pada saat sampel teh kombucha dinetralkan, aktivitas antibakteri ini menghilang. Oleh karena itu, aktivitas antibakteri ini kemungkinan besar dikontribusikan oleh asam organik yang

19

dihasilkan oleh mikroba. Kombucha mengandung 7g/L (0,7%) asam asetat. Asam asetat pada kombucha memiliki aktivitas antibakteri secara in vitro melawan Staphylococcus aureus, E.coli, Salmonella cholerasius, Serotype typhimurium dan  Agrobacterium tomefaciens (Afifah, 2010).

2.5 Tinjauan Mikroba Uji

Mikroba uji yang digunakan untuk penelitian ini ada 2 jenis, yaitu bakteri serta jamur. Bakteri yang digunakan adalah Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Lactobacillus dan Lactobacillus casei, casei, sedangkan jamur menggunakan m enggunakan Candida albicans. 2.5.1 Bakteri 2.5.1.1 Definisi Bakteri Bakteri merupakan mikroba uniseluler. Menurut Kenneth (2012) bakteri adalah mikroorganisme bersel tunggal dengan komponen seluler prokariot. Bakteri umumnya mempunyai ukuran sel 0,5-1,0 µm  –   2,0-5,0 µm. Bakteri umumnya memiliki berat sekitar 10-12 g sebagai partikel kering (Hidayat et al., 2006 dalam Maulid, 2016). Dinding sel bakteri mengandung kompleks karbohidrat dan protein yang disebut sebagai peptidoglikan (Radji, 2010). Bakteri bereproduksi dengan cara membelah diri menjadi dua sel yang  berukuran sama yang disebut dengan pembelahan biner. Bakteri mendapatkan nutrisinya dengan menggunakan bahan kimia organik yang diperoleh secara alami dari organisme hidup atau organisme yang sudah mati. Beberapa bakteri dapat membuat makanan sendiri dengan biosintesis, sedangkan beberapa bakteri yang lain memperoleh nutrisi dari substransi organik (Radji, 2010). Berbagai jenis

20

 bakteri dapat dibedakan menurut bentuknya yang terkadang tercermin pada namanya. Struktur sel bakteri terdiri atas tiga bagian penting, yaitu struktur eksternal sel, struktur internal sel dan struktur dinding sel. Struktur eksternal sel merupakan  bagian-bagian penting yang ada dipermukaan sel, antara lain adalah glikokaliks (substansi yang menyelimuti permukaan sel), flagel (bagian yang membantu  bakteri dalam bergerak), fimbria (bagian yang berperan dalam adesi bakteri dengan sel hospes) dan pilli (alat untuk menempel). Sedangkan struktur internal sel bakteri terdiri dari membran sitoplasma, sitoplasma, area nukleus, ribosom, mesosom dan inklusi. Bagian yang terakhir adalah bagian struktur dinding sel. Dinding sel berfungsi untuk mempertahankan bentuk dan keutuhan sel. Selain itu, dinding sel juga berperan dalam proses pembelahan sel. Dinding sel dapat melakukan biosintesis sendiri untuk membentuk dinding sel itu sendiri (Radji, 2010). 2.5.1.2 Klasifikasi Bakteri Berdasarkan pewarnaan gram, bakteri dibagi menjadi dua yaitu bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif negatif (Yuwono, 2002 dalam Maulid 2016). Perbedaan antara bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif terletak pada dinding sel. Bakteri Gram positif merupakan bakteri yang memiliki struktur dinding sel yang tebal (15-80 µm) dan berlapis tunggal (mono). Bakteri Gram  positif adalah bakteri yang dapat mempertahankan zat warna ungu yang berasal dari kristal violet meskipun telah didekolorisasi dengan alkohol. Bakteri tersebut  juga akan tetap mempertahankan warna ungunya meskipun disertai dengan  pengecatan oleh zat warna kontras. Hal ini terjadi karena kandungan

21

 peptidoglikan yang cukup banyak pada bakteri Gram positif yang mampu mempertahankan warna ungu (Maulid, 2016). Salah satu bakteri yang tergolong  bakteri Gram positif adalah S.aureus. S.aureus. Bakteri Gram negatif adalah bakteri yang memiliki struktur dinding sel yang tipis (10-15 nm) dan berlapis tiga (multi). Bakteri Gram negatif adalah  bakteri yang tidak dapat mempertahankan zat warna yang telah didekolorisasi dengan alkohol akan kembali menjadi tidak berwarna. Hal ini disebabkan oleh  banyaknya kandungan lipid yang tidak mampu mempertahankan warna ungu. Apabila diberikan pengecatan dengan zat warna kontras, maka akan berwarna sesuai dengan zat warna kontras. Hasil pengecatan Gram negatif adalah bakteri  berwarna merah (Irianto, 2006 dalam Maulid, 2016). Salah satu bakteri yang tergolong dalam bakteri Gram negatif adalah E.coli adalah E.coli.. Menurut Irianto (2013), bentuk bakteri dibagi menjadi 3 yaitu : 1.

Bakteri berbentuk bulat (bola) Bakteri berbentuk bulat atau bola dinamakan coccus, dapat dibedakan

sebagai berikut: a.  Monococcus, yaitu bakteri berbentuk bola tunggal.  b.  Diplococcus, yaitu bakteri berbentuk bola bergandengan dua-dua. c.

Sarcina, yaitu bakteri berbentuk bola yang berkelompok empat-empat sehingga bentuknya mirip kubus.

d.

Streptococcus, yaitu bakteri bentuk bola yang berkelompok memanjang membentuk rantai.

e.

Staphylococcus,

yaitu bakteri berbentuk bola yang berkoloni membentuk

sekelompok sel tidak beraturan sehingga mirip seperti buah anggur.

22

2.

Bakteri bentuk batang Bakteri berbentuk batang dinamakan bacillus. bacillus. Bentuk bacillus dapat bacillus dapat pula

dibedakan sebagai berikut: a.

Basil tunggal, yaitu bakteri yang hnaya berbentuk satu batang tunggal.

 b.

Diplobasil, yaitu bakteri berbentuk batang yang ber gandengan dua-dua.

c.

Streptobasil, yaitu bakteri berbentuk batang yang bergandengan memanjang membentuk rantai.

3.

Bakteri berbentuk melilit Bakteri berbentuk melilit yang dinamakan spirillum dinamakan spirillum atau  atau spiral   spiral . Ada tiga macam bentuk spiral, yaitu sebagai berikut:

a.

Spiral, yaitu golongan bakteri yang bentuknya seperti spiral, misalnya Spirillum.

 b.

Vibrio atau bentuk koma yang dianggap sebagai bentuk spiral tak sempurna.

c.

Spirochaeta, yaitu golongan bakteri berbentuk spiral yang bersifat lentur. Pada saat bergerak, tubuhnya memanjang dan mengerut. me ngerut.

2.5.1.3 Faktor-faktor Pertumbuhan Bakteri Menurut Pratiwi (2008), ada beberapa faktor yang mempengaruhi  pertumbuhan bakteri. Faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan bakteri antara lain: 1.

Temperatur Temperatur mempengaruhi aktivitas enzim. Apabila temperatur terlalu

tinggi, maka enzim akan rusak karena terjadi denaturasi protein. Apabila temperatur terlalu rendah, maka kinerja enzim akan berjalan lambat bahkan dapat

23

terhenti. Bakteri memiliki temperatur optimal untuk tumbuh. Berdasarkan temperatur, bakteri dikelompokkan dalam empat kelompok yaitu : a.

Psikrofil, temperatur maksimal 15°-20°C, optimal 0°-15°C.

 b.

Psikrofil fakultatif/psikotrof. Temperatur maksimal 30°C, optimal 20°-30°C.

c.

Mesofil, temperatur optimal 20°-45°C, maksimal 45°C.

d.

Termofil, temperatur optimal 55°-65°C, maksimal 100°C.

2.  pH  pH merupakan indikasi konsentrasi ion hidrogen. Berdasarkan pH, bakteri dapat dibedakan dalam empat kelompok, yaitu: a.

Asidofil, tumbuh pada pH 1,0-5,5

 b.  Neutrofil, tumbuh pada pH 5,5-8,0 5,5-8,0 c.

Alkalofil, tumbu pada pH 8,5-11,5

d.

Alkalofil ekstrem, tumbuh pada pH ≥ 10

3.

Tekanan osmosis Bakteri membutuhkan air dalam pertumbuhannya. Air masuk ke dalam sel

 bakteri dengan cara osmosis. osmosis . Apabila sel bakteri bak teri berada dalam larutan hipertonik, maka air akan keluar dari dalam sel sehingga akan menyebabkan terjadinya  plasmolisis pada bakteri. Namun, beberapa bakteri dapat bertahan hidup pada lingkungan hipertonik dengan kadar garam yang tinggi. Bakteri ini dis ebut halofil. 4.

Oksigen Berdasarkan kebutuhan oksigen , bakteri dikelompokkan ke dalam aerob

dan

anaerob.

Bakteri

aerob

dan

anaerob.

dikelompokkan ke dalam empat kelompok, yaitu:

Bakteri

aerob

dan

anaerob

24

a.

Obligat aerob: O2  sebagai syarat utama metabolisme, tumbuh pada  permukaan media.

 b.

Obligat anaerob: tidak mentoleransi adanya O 2 tumbuh pada dasar media.

c.

Anaerob fakultatif: menggunakan O 2  sebagai pernafasan, sebagian besar  berkumpul di permukaan media. media.

d.

Mikroaerofil: tumbuh baik dengan kadar O 2 kurang dari 20%.

5.  Nutrisi  Nutrisi

dibutuhkan

untuk

pembentukan

energi.

Nutrisi

dapat

dikelompokkan ke dalam dua kelompok kelompok yaitu mikroelemen (dibutuhkan (dibutuhkan dalam  jumlah

banyak)

dan

makroelemen

(dibutuhkan

dalam

jumlah

sedikit).

Mikroelement meliputi mangan (Mn), zinc (Zn), kobalt (Co), molibneum (Mo), nikel (Ni), dan tembaga (Cu). Makroelemen antara lain adalah karbon (C), oksigen (O), hydrogen (H), nitrogen (N), sulfur (S), fosfor (P), kalium (K), magnesium (Mg), kalsium (Ca), besi (Fe). 6.

Media kultur Media

kultur

merupakan

bahan

nutrisi

yang

digunakan

untuk

menumbuhkan bakteri di laboratorium. Media kultur yang digunakan harus disesuaikan dengan habitat asli dari bakteri tersebut agar dapat tumbuh dengan  baik. 2.5.1.4 Fase Pertumbuhan Bakteri Menurut Pratiwi (2008), fase pertumbuhan bakteri dapat dibagi menjadi 4, yaitu: 1.

Fase lag

25

Saat dipindahkan ke media yang baru, bakteri tidak langsung tubuh dan membelah, meskipun kondisi media sangat mendukung untuk pertumbuhan. Bakteri biasanya akan mengalami masa penyesuaian untuk menyeimbangkan metabolisme sel. 2.

Fase log Selama fase ini, populasi akan meningkat dua kali pada interval waktu

yang teratur. Jumlah koloni bakteri akan terus bertambah seiring lajunya aktivitas metabolisme sel. 3.

Fase tetap Pasa fase ini terjadi kompetisi antara bakteri untuk memperoleh nutrisi dari

media agar tetap hidup. Sebagian bakteri mati sedangkan lainnya tumbuh dan membelah sehingga jumlah sel bakteri yang hidup menjadi tetap. 4.

Fase kematian Pada fase ini, sel bakteri akan mati lebih cepat daripada terbentuknya sel

 baru. Laju kematian mengalami percepatan yang eksponensial. eksponensial. 2.5.1.5 Tinjauan Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus merupakan salah satu bakteri Gram positif anaerobik fakultatif berbentuk bulat dengan ukuran 0,7-12 µm, tidak membentuk spora, dan tidak bergerak serta tersusun dalam kelompok-kelompok yang tidak  beraturan mirip seperti buah anggur (Gambar 2.7) (Brooks et al.,  al.,  2007 dalam Salim, 2016). Menurut Allo (2016), bakteri ini diberi nama aureus (berarti emas, seperti matahari) karena menghasilkam pigmen berwarna kuning emas. Bakteri ini dapat tumbuh pada suhu optimal 37°C, tetapi membentuk pigmen paling baik  pada suhu kamar (20-25°C). Koloni pada perbenihan padat biasanya berwarna

26

abu-abu sampai kuning keemasan, berbentuk bundar, halus, menonjol, dan  berkilau. Bakteri ini bersifat flora normal pada kulit yang sehat, namun dapat menjadi patogen pada jaringan kulit yang terbuka. Staphylococcus aureus hidup aureus hidup sebagai saprofit di dalam saluran hidung, mulut dan tenggorokan serta dapat dikeluarkan pada waktu batuk atau bersin. Bakteri ini juga sering terdapat pada  pori-pori dan permukaan kulit, kelenjar keringat dan saluran usus (Brooks et al., 2007 dalam Salim, 2016).

 Staphy hylo loco cocc ccus us aureus ureus yang Dilihat dari Mikroskop Elekton Gambar 2. 7 Stap (Todar, 2008) 2.5.1.5.1 Klasifikasi Staphylococcus aureus Divisio

: Schizophyta

Class

: Schizomycetes

Ordo

: Eubacteriales : Eubacteriales

Family

: Micrococcaceae : Micrococcaceae

Genus

: Staphylococcus

Spesies

: Staphylococcus aureus (Atikah, aureus (Atikah, 2013).

2.5.1.5.2 Patogenesis Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus adalah patogen utama pada manusia. Hampir semua orang pernah mengalami infeksi S.aureus selama hidupnya, dengan tingkat keparahan yang beragam, mulai dari keracunan makanan atau infeksi kulit hingga

27

infeksi berat yang mengancam jiwa. Sebagian bakteri Stafilokokus Stafilokokus merupakan flora normal pada kulit, saluran pernafasan, dan saluran pencernaan makanan manusia. Bakteri ini juga dapat ditemukan di udara dan lingkungan sekitar. Sifat  patogen Staphylococcus aureus  aureus   pada kondisi normal diseimbangkan oleh mikroorganisme pertahanan tubuh, akibatnya sifat patogenitas dari bakteri ini tidak terlihat. Apabila pertahanan tubuh menjadi lemah, maka dapat memicu timbulnya beberapa penyakit infeksi.

S.aureus  patogen bersifat

invasif,

menyebabkan hemolisis, memproduksi koagulase, dan mampu memfermentasi manitol. Staphylococcus aureus  aureus   memproduksi koagulase yang mengkatalis  perubahan fibrinogen menjadi fibrin dan dapat membantu organisme ini untuk membentuk barisan perlindungan. Bakteri ini memproduksi enzim litik ektraseluler misalnya lipase, yang mencegah jarinngan pejamu dan membantu invasi (Gillespie, S dan Bamford K, 2008). Infeksi yang disebabkan oleh S.aureus ditandai dengan kerusakan jaringan yang disertai abses. Beberapa penyakit infeksi yang disebabkan oleh S. Aureus adalah jerawat, bisul, impetigo, serta infeksi luka. Sedangkan infeksi yang lebih  berat diantaran ya adalah pneumonia, mastitis, plebitis, meningitis, infeksi saluran kemih, osteomielitis, dan endokarditis. S.aureus juga S.aureus  juga merupakan penyebab utama infeksi nosokomial, kercunan makanan, dan sindroma syok toksik (Kusuma, 2009). 2.5.1.6 Escherichia 2.5.1.6 Escherichia coli 2.5.1.6.1 Tinjauan Escherichia Tinjauan  Escherichia Coli  Escherichia coli  coli  merupakan bakteri Gram negatif bersifat anaerob fakultatif berbentuk batang pendek yang memiliki panjang sekitar 2µm, diameter

28

0,7µm, lebar 0,4-0,7 µm dan tidak dapat membentuk spora.  Escherichia coli merupakan golongan bakteri mesofilik yaitu bakteri yang suhu pertumbuhan optimumnya 15-45°C dan dapat hidup pada pH 5,5-8.  E. coli akan tumbuh secara optimal pada suhu 27°C.  Escherichia coli membentuk koloni yang bulat, cembung, dan halus dengan tepi yang yang nyata (Gambar 2. 7). Spesies ini bersifat motil dengan flagel peritrik yang dimilikinya, tetapi beberapa ada yang non motil (Purwoko, 2007 dalam Maulid 2016).  Escherichia coli  coli  banyak ditemukan dalam saluran pencernaan manusia sebagai flora normal tubuh, habitat pada umumnya adalah tanah, lingkungan akuatik, makanan, air seni dan tinja (Rahmadani, 2015). E. 2015).  E. coli merupakan coli merupakan bakteri komensal yang dapat bersifat patogen, bertindak sebagai penyebab utama morbiditas dan mortilitas diseluruh dunia (Tenailon et al ., ., 2010). Bakteri ini dapat menyebabkan beberapa penyakit pada manusia, antara lain: menyebabkan infeksi  primer pada usus manusia (diare pada anak), infeksi saluran kemih. Bakteri in  banyak ditemukan dalam saluran pencernaan, habitat umumnya adalah ditanah, lingkungan akuatik, makanan, air seni serta pada tinja (Rahmadani, 2015).

A B scherr i chia coli  coli : a). Pengamatan hasil Gambar 2. 8 Morfologi bakteri E sche pewarnaan gram; b). Pengamatan menggunakan mikroskop elektron (Kunkel, 2004)

29

2.5.1.6.2 Klasifikasi Escherichia Klasifikasi Escherichia Coli Divisio

: Bacteria : Bacteria

Class

: Schizomycetes

Ordo

: Enterobacteriales : Enterobacteriales

Family

: Enterobacteriaceae : Enterobacteriaceae

Genus

: Escherichia : Escherichia

Spesies

: Escherichia : Escherichia coli (Rahmadani, 2015)

2.5.1.6.3 Patogenesis Escherichia Patogenesis  Escherichia Coli Beberapa strain dari  E.coli   E.coli  selama proses evolusi mendapat kemampuan virulensi yang membantu mereka menginfeksi inangnya Jenis  E.coli yang  E.coli yang patogen tersebut dapat mengakibatkan gangguan intestinal dan infeksi saluran kemih (Prescott, 2008). Di negara- negara berkembang  E.coli   E.coli  bersifat patogen menyebabkan kurang lebih seperempat dari seluruh kejadian diare. Transmisi kuman berlangsung secara water borne  borne  atau  food borne. borne.  Escherichia coli  coli  dapat dikelompokkan

berdasarkan

karakteristik

virulensinya

sehingga

dapat

menyebabkan penyakit dengan mekanisme yang berbeda. Menurut Sari (2015), terdapat lima golongan Escherichia golongan Escherichia coli yang coli yang dapat berhubungan dengan penyakit diare

yaitu  Enterophatogenic

 Escherichia coli

Escherichia

coli

(EPEC),  Enterotoxigenic

(ETEC),  Enterohaemorrhagic Escherichia coli

(EHEC),

 Enteroinvasive Escherichia coli (EIEC), dan  Enteroagregative Escherichia coli (EAEC). 1.  Enterophatogenic Escherichia coli (EPEC) Merupakan penyebab diare berair akut pada anak-anak dan bayi. Sumber kontaminasi makanan terdapat pada penjamah makanan, pembuangan air limbah

30

dan lingkungan. EPEC akan melekat pada sel mukosa usus halus yang akan menyebabkan hilangnya mikrofili dan terkadang EPEC masuk ke dalam mukosa.

2.  Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) ETEC merupakan penyebab diare yang sangat sering pada bayi di negara  berkembang. Beberapa strain ETEC memproduksi suatu enterotoksin dalam enterotoksin dalam usus halus dan menyebabkan penyakit seperti kolera atau enterotoksigenik   pada manusia. Enterotoksigenik menyebabkan terjadinya diare pada orang yang sedang melakukan perjalanan. Waktu inkubasinya 8-24 jam dengan gejala yaitu diare, muntah-muntah, dan dehidrasi seperti kolera. 3.  Enterohaemorrhagic Escherichia coli (EHEC) Bantuk antigenik dari toksin yaitu menyebabkan gejala diare yang disertai  pendarahan, kolitis hemoragik, serta sindroma hemolitik uremik (suatu penyakit yang menyebabkan gagal ginjal akut, anemia hemolitik mikroangiopati dan trombositopenia). Kandungan verotoksin yang ada pada EHEC memiliki banyak kesamaan sifat dengan toksin Shiga yang dihasilkan oleh beberapa strain dari Shigella dysentrerica tipe dysentrerica tipe 1, namun terdapat perbedaan dari antigenik dan genetik masing-masing toksin tersebut. Sumber kontaminasi terhadap makanan yaitu kotoran ternak, peralatan pengolahan daging dan pabrik susu sehingga salah satu  pencegahannya adaah memasak daging hingga hingga matang. 4.  Enteroinvasive Escherichia coli (EIEC) Merupakan penyebab penyakit infasiv, infasiv, colitis  colitis  atau gejala seperti disentri, sangat mirip shigellosis. Strain EIEC sama seperti Shigell sp. Tidak meragi

31

laktosa atau memfermentasikan laktosa dengan lambat dan nonmotil. Waktu inkubasi adalah 8-44 jam (rata-rata 26 jam) dengan gejala-gejala antara lain: demam, dingin, sakit kepala, kejang perut, dan diare berair. Sumber kontaminasi terhadap makanan yaitu penjamah makanan dan pembuangan air limbah. Penyakit ini terjadi umumnya pada anak di negara berkembang. 5.  Enteroagregative Escherichia coli (EAEC) Penyebab penyakit diare yang akut dan kronis dalam jangka waktu >14 hari pada orang-orang di negara berkembang. EAEC memiliki pola perlengketan yang sangat khas pada manusia. EAEC ini juga menghasilkan toksin mirip ST (Stabil Temperature) Temperature) dan hemolisin. 2.5.1.7 Lactobacillus 2.5.1.7 Lactobacillus casei  Lactobacillus casei adalah bakteri Gram positif, anaerobik fakultatif, tidak memiliki alat gerak, tidak menghasilkan spora, berbentuk batang dan menjadi salah satu bakteri yang berperan penting.  Lactobacillus adalah  Lactobacillus adalah bakteri yang dapat memecah protein, karbohidrat, lemak dalam makanan, membantu penyerapan elemen penting dan nutrisi seperti mineral, asam amino, dan vitamin yang dibutuhkan manusia dan hewan untuk bertahan hidup (Damika, 2006 dalam Budiyanto, 2011). Genus bakteri ini membentuk sebagian besar dari bakteri asam laktat, dinamakan demikian karena kebanyakan anggotanya dapat merubah laktosa dan gula menjadi asam laktat. Kebanyakan dari bakteri ini umum dan tidak berbahaya  bagi kesehatan. Di dalam tubuh manusia, bakteri ini dapat ditemukan dalam vagina dan sistem pencernaan, dimana mereka bersimbiosis dan merupakan sebagian kecil dari flora usus. Bakteri ini berukuran 0,7- 1,1 x 2,0-4,0 µm dan

32

merupakan bakteri penting dalam pembentukan asam laktat. Bakteri ini membentuk gerombolan dan merupakan bagian dari spesies heterofermentatif fakultatif, dimana bakteri ini memproduksi asam laktat dari gula heksosa dengan  jalur Emblen-Meyerlhof dan dari pentose dengan jalur 6-fosfoglukonat, fosfoketolase.

Pertumbuhan  Lactoacillus

casei  pada

suhu

15°C,

dan

membutuhkan riboflavin, asam folat, kalsium pantotenat, dan faktor pertumbuhan lain (Budiyanto, 2011).  Lactobacillus casei dapat tumbuh pada media de Man  Rogosa Sharpe Agar atau MRS agar (Widodo dkk., 2003 dalam Megama 2016).

actobac acii llus llu s casei  casei  (Jaya, Gambar 2. 9 Hasil Pewarnaan Gram L actob  (Jaya, 2007) 2.5.2 Fungi 2.5.2.1 Definisi Fungi Fungi adalah organisme berspora, tidak berklorofil, berupa sel atau benang  bercabang-cabang dengan dinding dari selulosa atau dari kitin atau dari keduanya. ke duanya. Pada umumnya berkembang biak secara seksual dan aseksual (Pelezar dan Chan, 1986 dalam Mozer, 2015). Fungi termasuk ke dalam organisme kemoheterotrof yang memerlukan senyawa organik untuk menutrisinya misalnya sumber karbon dan energi. Bila sumber nutrisi tersebut diperoleh dari bahan organik mati, maka fungi tersebut bersifat saprofit. Fungi saprofit mendekomposisi sisa-sisa tumbuhan dan hewan yang kompleks dan menguraikannya menjadi zat yang lebih sederhana. Dalam hal ini, fungi bersifat menguntungkan sebagai elemen daur

33

ulang yang vital. Beberapa fungi juga bersifat menguntungkan karena dapat dijadikan bahan makanan, misalnya cendawan (mushroom ( mushroom). ). Beberapa fungi juga dapat bersifat parasit dengan memperoleh senyawa organik dari organisme hidup. Oleh karena itu, fungi bersifat merugikan karena dapat menimbulkan penyakit  pada manusia, hewan, maupun tanaman (Pratiwi, 2008). 2.5.2.2 Fisiologi Fungi Dalam pertumbuhannya fungi memerlukan kondisi kelembapan yang tinggi, persediaan bahan organik, dan oksigen. Pertumbuhan fungi dapat meningkat dengan adanya lingkungan yang hangat dan lembab. Fungi juga dapat tumbuh dengan baik dalam kondisi lingkungan yang mengandung banyak gula dengan tekanan osmosis tinggi dan kondisi asam. Fungi tumbuh dalam kisaran temperatur yang luas. Temperatur optimal berkisar antara 22-30°C. Spesies fungi yang tergolong dalam fungi patogen mempunyai temperatur pertumbuhan optimal yang lebih tinggi dibandingkan fungi non patogen, yaitu berkisar antara 30-37°C (Pratiwi, 2008). 2.5.2.3 Macam-macam fungi Fungi dibedakan menjadi dua macam, yaitu: 1.

Kapang (Mold) Kapang merupakan fungi yang memiliki filamen atau miselium,

 pertumbuhannya dalam bahan makanan mudah sekali untuk dilihat, yakni  berbentuk seperti kapas. Sedangkan tubuh atau talus suatu kapang pada dasarnya terdiri dari dua bagian yaitu miselium dan spora. Miselium merupakan kumpulan dari beberapa filamen yang dinamakan hifa. Pertumbuhan fungsi mula-mula  berwarna putih, namun apabila telah memprodukksi spora akan membentuk

34

 berbagai warna tergantung dari jenis kapang. Biasanya kapang bersifat mesofilik, yaitu mampu tumbuh baik pada suhu kamar. Suhu optimum pertumbuhan untuk kebanyakan kapang adalah 25°-30°C, tetapi beberapa dapat tumbuh pada suhu 35°-37°C atau lebih, misalnya  Aspergilus nigers dan Trichophyton rubrum. Beberapa kapang bersifat psikotrofik, yakni dapat tumbuh dengan baik pada suhu almari es, dan beberapa bahan masih dapat tumbuh lambat pada suhu di bawah suhu pembekuan, misalnya -5° sampai -10°. Selain itu, beberapa kapang bersifat aerobik, yakni membutuhkan oksigen dalam pertumbuhannya. Kapang dapat tumbuh baik pada pH luas, yakni 2,0 sampai 8,5 tetapi biasanya pertumbuhannya akan baik pada kondisi asam atau pH rendah (Waluyo, 2005 dalam Mozer, 2015). 2.

Khamir (Yeast) Khamir merupakan fungi bersel tunggal dan tidak berfilamen. Sebagai sel

tunggal khamir tumbuh dan berkembang biak lebih cepat dibandingkan dengan kapang yang tumbuh dengan pembentukan filamen. Reproduksi vegetatif terjadi dengan cara pertunasan. Sel khamir memiliki ukuran yang bervariasi, yaitu dengan panjang 1,2-5 mm sampai 20-50 mm, dan lebar 1-10 mm. Bentuk khamir  bermacam-macam, yaitu bulat oval, silinder, ogival yaitu bulat panjang dengan salah satu ujung runcing, segitiga melengkung (triangeluer), berbentuk botol  bentuk alpukat atau lemon, membentuk pseudomiseliu, dan sebagainya. Dinding selnya sangat tipis untuk sel-sel yang masih muda, dan semakin lama akan semakin tua jika sel semakin tua. Komponen dinding selnya berupa glukan (selulosa khamir), mannan, protein, kitin, dan lipid. Contoh khamir yang sering merugikan manusia adalah Candida albicans (Waluyo, albicans  (Waluyo, 2005 dalam Mozer, 2015). 2.5.2.4 Pertumbuhan Fungi

35

Pertumbuhan fungi merupakan peningkatan semua komponen dari suatu organisme secara teratur. Bila suatu medium ditanam sel-sel fungi maka  pertumbuhannya dapat digambarkan dalam bentuk kurva pertumbuhan. Berikut adalah fase-fase pertumbuhan fungsi menurut Gandjar et al. (2006) al. (2006) dalam Mozer (2015): 1.

Fase lag (Penyesuaian) Fase ini disebut juga fase saat penyesuaian sel dengan lingkungan seta

 pembentukan enzim-enzim untuk mengurai substrat. Pada fase ini tidak ada  pertumbuhan populasi karena sel mengalami perubahan komposisi kimiawi dan ukuran serta bertambahnya substansi intra seluler sehingga siap untuk membelah diri. 2.

Fase Akselesarasi Pada fase ini yaitu sel-sel fungi membelah dan fase lag akan menjadi aktif.

3.

Fase Logaritmik (Eksponensial) Pada fase ini sel fungi membelah diri dengan laju konstan, sehingga masa

akan menjadi dua kali lipat dan keadaan pertumbuhan seimbang. Pertumbuhan sel-sel ini dapat dipengaruhi oleh beberapa faktor diantaranya adalah media yang digunakan, konsentrasi, kepadatan media, suhu, kadar oksigen, volume dan faktor lainnya. Pada awal fase ini kita dapat memanen enzim-enzim dan merupakan fase yang sangat penting dalam kehidupan mikroba. 4.

Fase delerasi Fase saat sel-sel mulai kurang aktif membelah, kita dapat memanen

 biomassa sel atau senyawa yang tidak diperlukan lagi oleh sel-sel fungi. 5.

Fase Stasioner

36

Pada fase ini terjadi penumpukan racun akibat metabolisme sel dan kandungan nutrien mulai habis, akibatnya terjadi kompetisi nutrisi sehingga  beberapa sel fungi mati dan lainnya tetap tumbuh. Sehingga pada fase ini  pertumbuhan tetap. 6.

Fase kematian Sel menjadi mati akibat penumpukan racun dan habisnya nutrisi,

menyebabkan jumlah sel yang mati lebih banyak daripada jumlah sel yang  bertahan sehingga mengalami penurunan jumlah sel secara eksponensial. 2.5.2.5 Candida albicans 2.5.2.5.1 Deskripsi Candida albicans Candida albicans  albicans   merupakan jamur dimorfik karena kemampuannya untuk tumbuh dalam dua bentuk yang berbeda yaitu sebagai sel tunas yang akan  berkembang menjadi blastospora dan menghasilkan kecambah yang akan membentuk hifa semu. Perbedaan bentuk ini tergantung pada faktor eksternal yang mempengaruhinya. Sel ragi (blastospora) berbentuk bulat, lonjong atau bulat lonjong dengan ukuran 2- 5 μ x 3 -6 μ hingga 2 -5,5 μ x 5 -28 μ (Gambar 2.10) (Aini, 2012).

andi da albi albicans cans : a. Bentuk Morfologi; b. Gambar 2. 10 Morfologi Fungi C andi Pengamatan Pengamatan Hasil Pewarnaan Gram (Simatupang, 2009)

37

Candida albicans memperbanyak diri dengan membentuk tunas yang akan terus memanjang membentuk hifa semu. Hifa semu terbentuk dengan banyak kelompok blastospora yang berbentuk bulat atau lonjong di sekitar septum. Pada  beberapa strain, blastospora berukuran besar, berbentuk bulat atau seperti botol, dalam jumlah sedikit. Sel ini dapat berkembang menjadi klamidospora yang  berdinding tebal dan bergaris tengah sekitar 8-12 μ (Aini, 201 2). 2.5.2.5.2 Taksonomi Candida albicans Kingdom

: Fungi

Phylum

: Ascomycota

Subphylum

: Saccharomycotina

Class

: Saccharomycetes

Ordo

: Saccharomycetales

Family

: Saccharomycetaceae

Genus

: Candida

Spesies

: Candida albicans (Aini, 2012)

2.5.2.5.3 Patogenesis Pada manusia Candida albicans sering ditemukan di dalam mulut, feses, kulit dan di bawah kuku orang sehat. Candida albicans  albicans   dapat membentuk  blastospora dan hifa, baik dalam biakan maupun dalam tubuh. Bentuk jamur di dalam tubuh dianggap dapat dihubungkan dengan sifat jamur, yaitu sebagai saproba tanpa menyebabkan kelainan atau sebagai parasit patogen yang menyebabkan kelainan dalam jaringan (Aini, 2012). Penyelidikan lebih lanjut membuktikan bahwa sifat patogenesis tidak  berhubungan dengan ditemukannya Candida albicans dalam bentuk blastospora

38

atau hifa di dalam jaringan. Terjadinya kedua bentuk tersebut dipengaruhi oleh tersedianya nutrisi, yang dapat ditunjukkan pada suatu percobaan di luar tubuh. Pada keadaan yang menghambat pembentukan tunas dengan bebas, tetapi yang masih memungkinkan jamur tumbuh (Aini, 2012). 2.5.2.5.4 Morfologi dan Identifikasi Spesies Candida tumbuh Candida tumbuh sebagai sel ragi tunas dan berbentuk oval dengan ukuran 3-6 µm pada biakan atau jaringan. Candida albicans  bersifat dimorfik, selain ragi dan pseudohifa, spesies tersebut juga dapat menghasilkan hifa sejati. Pada media agar, dalam 24 jam pada suhu 37°C atau suhu ruangan spesies kandida menghasilkan koloni lunak berwarna krem dengan bau seperti ragi. Candida albicans  bergerombol dan membentuk suatu rangkaian spora pada sediaan mikroskopik (Pramitasari, 2011). Candida albicans merupakan jamur bersel satu dan bereproduksi dengan  blastospora, dibentuk pada bagian ujung-ujungnya. Candida albicans  albicans   tahan terhadap suhu dingin, tetapi sensitif terhadap suhu panas (50°-60°C), juga sensitif terhadap pewarnaan anilin seperti methyl, violet dan briliant  green. briliant  green.   Jamur ini mudah tumbuh pada suhu 20°-37°C pada agar sabouraud. Morfologi koloni Candida albicans albican s pada media padat sabouraud dextrose agar umumnya berbentuk  bulat dengan permukaan sedikit cembung, halus, licin, dan kadang-kadang sedikit  berlipat-lipat, terutama pada koloni yang sudah tua. Umur biakan mempengaruhi mempe ngaruhi  besar kecil koloni (Pramitasari, 2011).

39

2.6 Tinjauan Antimikroba

Antimikroba adalah suatu senyawa yang dapat membunuh atau menghambat pertumbuhan suatu mikroorganisme terutama mikroorganisme  patogen manusia (Syarif et al., 2007 dalam Salim, 2016). Agen senyawa antimikroba dapat digolongkan menurut jasad renik yang dibasmi, yaitu antibiotik, antivirus, antifungi, antiprotozoa, dan antihelmintes, antimikroba juga dibagi menjadi dua kelompok luas, yaitu golongan bakteriostatik yang menghambat replikasi mikroba, dan golongan bakterisidal yang bekerja secara utama membunuh mikroba (Bennett et al ., ., 2012). Antibiotik adalah salah satu  jenis antimikroba yang digunakan untuk mengobati atau mencegah infeksi bakteri. Antimikroba yang digunakan untuk membasmi mikroba penyebab infeksi pada manusia ditentukan harus memiliki sifat toksisitas selektif setinggi mungkin. Artinya agen antimikroba tersebut haruslah bersifat sangat toksik untuk mikroba, tetapi relatif tidak toksik untuk hospes. 2.6.1

Mekanisme Kerja Antimikroba Mekanisme kerja antimikroba dibagi menjadi tiga cara, yaitu :

1.

Penghambatan sintesis dinding sel Mikroba terutama bakteri memiliki dinding sel yang kaku, terdiri atas

 peptidoglikan dan d an berfungsi untuk mempertahankan bentuk mikroorganisme dan menahan sel bakteri, yang memiliki tekanan osmosis yang tinggi di dalam selnya. Mekanisme

antimikroba

yaitu

akan

menghambat

reaksi

pembentukan

 peptidoglikan yang berfungsi sebagai dinding sel bakteri. Oleh karena itu, tekanan osmosis dalam sel bakteri lebih tinggi daripada diluar sel sehingga merusak dinding sel bakteri yang akan menyebabkan lisis (Bennett et al ., ., 2012).

40

2.

Penghambatan sintesis protein bakteri Salah satu mekanisme penghambatan sintesis protein dilakukan dengan

menghambat perlekatan t-RNA dan m-RNA ke ribosom, sehingga akhirnya dapat mengganggu proses translasi dan transkripsi bahan genetik. 3.

Penghambat sintesis asam nukleat Agen antimikroba memiliki mekanisme menghambat sintesis asam nukleat

dengan cara menginterupsi pembentukan asam folat sehingga dapat mengganggu kehidupan bakteri (Bennett et al ., ., 2012). 2.6.2

Faktor-faktor yang Mempengaruhi Aktivitas Antimikroba Banyak faktor yang dapat mempengaruhi kerja antimikroba sehingga hasil

yang didapatkan didapatkan kurang maksimal. Menurut Rante Allo (2016) beberapa faktor tersebut adalah: 1. Populasi inokulum Semakin besar populasi mikroba maka semakin rendah pula kepekaan mikroba terhadap antimikroba. Bakteri resisten sering muncul pada populasi yang besar. 2. Masa inkubasi Semakin lama masa inkubasi berlangsung, semakin besar kemungkinan timbulnya mutan resisten; semakin besar juga kemungkinan mikroba yang kurang peka untuk mulai berkembang biak sementara kekuatan antimikroba  berkurang. 3. Spesies mikroba

41

Spesies mikroba menunjukkan kerentanan yang berbeda-beda terhadap antimikroba. Spesies mikroba yang memiliki sopra lebih resisten terhadap antimikroba. 4. Suhu Suhu inkubasi optimal umumnya 35°C. Jika suhu dibawah 35°C maka zona hambat yang terbentuk lebih lebar dan watu yang dibutuhkan lebih lama, sedangkan bila suhu terlalu tinggi biakan tampak sensitif.

2.7 Tinjauan Metode Uji Aktivitas Antimikroba

Pengujian mikrobiologi memanfaatkan mikroorgansime sebagai penentu konsentrasi

komponen

tertentu

pada

campuran

komplek

kimia,

untuk

mendiagnosis penyakit tertentu serta untuk menguji bahan kimia guna menentukan potensi mutegenik atau karsinogenik suatu bahan. Pada uji ini diukur  pertumbuhan mikroba terhadap agen antimikroba. Kegunaan uji antimikroba adalah diperolehnya suatu sistem pengobatan yang efektif dan efisien. Penentuan aktivitas antimikroba dapat dilakukan dengan dua metode, yaitu metode difusi dan metode dilusi. Pada metode difusi termasuk didalamnya metode disk diffusion  diffusion  (tes kirby & Baur), E-test, E-test, ditch-plate technique, cup-plate technique. technique. Sedangkan pada metode dilusi termasuk didalamnya metode dilusi cair dan dilusi padat (Pratiwi, 2008). 2.7.1

Metode Difusi (Penyebaran)

1. Metode disk diffusion (metode diffusion (metode Kirby Bauer) untuk menentukan aktivitas agen antimikroba. Piringan berisi media agar yang telah ditanami mikroba yang akan berdifusi pada media agar tersebut. Area jernih mengindikasikan adanya

42

hambatan pertumbuhan mikroba oleh agen antimikoba pada permukaan media agar (Pratiwi, 2008). 2. Metode E-test  E-test   digunakan untuk mengestimasi MIC ( Minimum ( Minimum Inhibitory Concentration) Concentration) atau KHM (Kadar Hambat Minimum), yaitu konsentrasi minimal suatu agen antimikroba untuk dapat menghambat pertumbuhan mikroba. Pada metode ini digunakan strip plastik yang mengandung agen antimikroba dari kadar terendah hingga tertinggi dan diletakkan pada  permukaan media agar yang telah ditanami mikroba. Pengamatan dilakukan  pada tuimbulnya area jernih yang menunjukkan kadar agen antimikroba menghambat pertumbuhan mikroba pada media agar (Pratiwi, 2008). 3.  Ditch plate techique techique. Pada metode ini uji sampel berupa agen antimikroba yang diletakkan pada parit yang dibuat dengan cara memotong media agar dalam cawan petri pada bagain tengah secara membujur dan mikroba uji (maksimum 6 macam) digoreskan ke arah parit yang berisi agen antimikroba (Pratiwi, 2008). 4. Cup- plate  plate technique. Metode technique. Metode ini serupa dengan metode disk diffusion, diffusion, dimana dibuat sumur pada media agar yang telah ditanam dengan mikroba dan pada sumur tersebut diberi agen antimikroba yang diuji (Pratiwi, 2008). 5. Gradient-plate technique. technique. Pada metode ini konsentrasi agen antimikroba pada media agar secara teoritis bervariasi dari 0 hingga maksimal. Media agar dicairkan dan larutan uji ditambahkan. Campuran kemudian dituang ke dalam cawan petri dan diletakkan dalam posisi miring. Nutrisi kedua selanjutnya dituang diatasnya dan diinkubasi selama 24 jam untuk memungkinkan agen antimikroba berdifusi dan permukaan media mengering. Mikroba uji

43

(maksimal 6 macam) digoreskan pada arah mulai dari konsentras tinggi ke rendah. Hasil diperhitungkan sebagai panjang total pertumbuhan mikroba maksimum yang mungkin dibandingkan dengan panjang pertumbuhan hasil goresan. Bila : X = panjang total pertumbuhan mikroba yang yang mungkin Y = panjang panjang pertumbuhan pertumbuhan aktual C = konsentrasi final agen antimikroba pada total volume media mg/mL atau µg/mL, Maka konsentrasi hambat adalah : . 

 (mg/mL atau µg/mL) Yang perlu diperhatikan adalah hasil perbandingan yang didapat

dari lingkungan padat dan cair, fator difusi agen antimikroba dapat mempengaruhi keseluruhan hasil pada media padat (Pratiwi, 2008). 2.7.2

Metode Dilusi (Pengenceran) Metode dilusi dibedakan menjadi dua macam yaitu :

1. Metode dilusi cair/ broth dilution test ( serial  serial dilution) dilution) Metode

ini

dilakukan

untuk

mengukur

MIC

( Minimum ( Minimum

Inhibitory

Concentration atau Kadar Hambat Minimum, KBM) dan MBC ( Minimum ( Minimum  Bactericidal Concentrasion atau Kadar Bunuh Minimum, KBM). Cara yang dilakukan adalah dengan membuat seri pengenceran agen antimikroba pada media cair yang ditambahkan dengan mikroba uji. Larutan uji agen antimikroba pada kadar terkecil yang terlihat jernih ta npa adanya pertumbuhan mikroba uji ditetapkan sebagai KHM. Larutan yang ditetapkan sebagai KHM

44

tersebut selanjutnya dikultur ulang pada media cair tanpa penambahan mikroba uji ataupun agen antimikroba, dan diinkubas selama 18-24 jam. Media cair yang tetap terlihat setelah diinkubasi ditetapkan sebagai KBM (Pratiwi, 2008). 2. Metode dilusi padat/ solid padat/ solid dilution test. Metode ini serupa dengan metode dilusi cair namun menggunakan media  padat (solid). Keuntungan metode ini adalah satu konsentrasi agen antimikroba yang diuji dapat digunakan untuk menguji beberapa mikroba uji (Pratiwi, 2008). 2.7.3

Penentuan Zona Bening Penentuan zona bening atau zona hambat dapat dilihat pada daerah bening

yang tidak memperlihatkan adanya pertumbuhan jamur yang terbentuk dikeliling agen antimikroba atau pada sekitar sumur. Parameter uji zona hambat atau zona  bening dari masing-masing perlakuan ekstrak dengan menggunakan jangka sorong dan diukur dari kelima sisi yang berbeda, kemudian dirata-rata. Tabel 2. 2 Kategori Penghambatan Antimikroba Berdasarkan Berdasarkan Zona Hambat Diameter (mm) Respon hambatan pertumbuhan 0,3 mm Lemah

3-6 mm >6 mm

Sedang Kuat (Pan et al., 2009)

45

2.8 Kerangka Konsep

Mengandung : Seduhan daun tin ( Ficus  Ficus carica L.) carica L.) Fermentasi

Flavonoid, steroid/terpenoid, alkaloid dan tanin.

 Kombucha Teh asam daun tin ( Ficus  Ficus carica L.) carica L.) Kandungan senyawa Mengubah

Menggabungan kedua

tertinggi :

Flavonoid

manfaat antimikroba

Flavonoid

kompleks

antara daun tin dan

menjadi lebih

kombucha

sederhana Aktivitas Antimikroba

Mikroba uji

S. aureus

 E. coli

C. albicans

Gambar 2. 11 Kerangka Konsep

 L. casei

46

Daun tin ( Ficus carica cari ca)) mengandung banyak senyawa metabolit sekunder salah satunya adalah flavonoid. Kandungan flavonoid yang terdapat pada daun tin ( Ficus  Ficus carica) carica) dapat menghambat pertumbuhan bakteri patogen (Cha et al., 2007). Proses fermentasi dilakukan untuk mengubah flavonoid kompleks menjadi lebih sederhana, selain itu untuk meningkatkan aktivitas antimikroba pada daun tin, yaitu dengan bantuan starter kultur kombucha. kombucha. Kultur kombucha mengandung Saccharomyces cerevisiae  berperan mengubah gula menjadi alkohol dan  Acetobacter xylinum x ylinum yang berperan untuk mengubah alkohol menjadi asam-asam organik, seperti asam astetat, asam laktat dan lainnya. Pada proses fermentasi menggunakan kultur kombucha akan kombucha akan dihasilkan senyawa yang memiliki aktivitas antimikroba, untuk mengetahui potensi aktivitas antimikoba pada teh asam daun tin ( Ficus  Ficus carica) carica) maka dilakukan pengujian aktivitas antimikroba dengan menggunakan metode difusi sumuran yang akan diujikan pada mikroba flora normal tubuh seperti Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Candida albicans, dan Lactobacillus dan Lactobacillus casei.

BAB III METODOLOGI PENELITIAN

3.1 Rancangan Penelitian

Berdasarkan tujuannya, penelitian ini termasuk penelitian eksperimental. Aktivitas antimikroba teh asam daun tin diuji pada 4 spesies mikroba yaitu  Lactobacillus casei, Staphylococcus aureus, Escherichia coli serta Candida albicans dengan albicans dengan pengulangan sebanyak 3 kali dan menggunakan dosis daun 75 g. Untuk mengetahui potensi aktivitas antimikroba dalam penelitian ini digunakan metode difusi sumuran, dengan alasan karena ekstrak dapat langsung dimasukkan disetiap lubang sumur, sehingga efek untuk menghambat mikroba lebih kuat. Pada metode sumuran terjadi proses osmolaritas dari konsentrasi ekstrak yang lebih tinggi daripada metode difusi disk, setiap lubang diisi dengan konsentrasi ekstrak maka osmolaritas terjadi lebih menyeluruh dan lebih homogen serta konsentrasi ekstrak lebih kuat dan lebih l ebih tinggi untuk menghambat pertumbuhan mikroba. Tahapan pada penelitian ini meliputi determinasi tanaman, pembuatan simplisia daun tin, pembuatan seduhan dari daun tin, uji identifikasi fitokimia senyawa flavonoid, fermentasi dengan kultur kombucha, pengujian potensi aktivitas antimikroba teh asam daun tin terhadap mikroba yang sudah dipilih, dan analisis data.

47

48

3.2 Populasi dan Sampel Penelitian

Populasi dan sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah teh asam daun tin ( Ficus  Ficus carica) carica) dengan dosis daun 75 g.

3.3 Lokasi dan Waktu Penelitian

3.3.1 Lokasi Penelitian Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi dan Laboratorium Farmakognosi Akademi Farmasi Putra Indonesia Malang. 3.3.2 Waktu Penelitian Waktu penelitian dilaksanakan mulai penyusunan proposal sampai terselesaikannya karya tulis ilmiah ini yaitu pada bulan November 2017 sampai  bulan Juni 2018.

3.4 Definisi Operasional Variabel

Definisi operasional variabel dalam penelitian ini terdiri dari variabel  bebas dan variabel terikat. Variabel bebas penelitian ini adalah dosis antimikroba teh asam daun tin, sedangkan variabel terikat dalam penelitian ini aktivitas antimikroba. Definisi operasional variabel dalam penelitian ini dapat diklasifikasikan sebagai berikut :

49

Tabel 3. 1 Definisi Operasional Variabel Variabel Definisi operasional Alat ukur Hasil variable ukur takaran teh asam daun tin Timbangan 75g Bebas : dosis  Ficus carica  carica  untuk analitik, antimikroba dari teh asam  pengujian potensi aktivitas Timbangan kasar daun tin Ficus antimikroba

Skala ukur Rasio

carica Terikat : potensi aktivitas antimikroba

kemampuan teh asam daun Jangka tin  Ficus carica untuk sorong menghambat mikroba yang ditunjukkan dengan adanya zona bening di sekitar sumuran.

Diameter zona  bening (mm)

Rasio

3.5 Alat dan Bahan

Adapun alat-alat dan bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah sebagai berikut : 3.5.1 Alat Alat yang digunakan dalam peneitian ini adalah panci, gelas ukur,  pengaduk, nampan, kain hitam, pisau, toples kaca, botol kaca, tabung reaksi, rak tabung reaksi, pipet tetes, pipet volume, autoklaf, oven, inkubator, blue tip, erlenmeyer 250 ml, kertas coklat, beaker glass 500 ml, cawan petri, batang  pengaduk, spektrofotometer, kuvet, bunsen, kaki tiga, kawat kasa, jarum ose,  jangka sorong, botol semprot, laminar air flow  flow   (LAF), timbangan analitik, timbangan kasar, mikropipet. 3.5.2 Bahan Bahan yang digunakan dalam penelitian adalah daun tin segar yang diperoleh dari daerah Poncokusumo Kabupaten Malang, aquadest, serbuk magnesium, asam klorida pekat H 2SO4 pekat, NaCl 0,9 %, kultur kombucha, kombucha, gula,

50

 biakan murni Staphylococcus aureus, Lactobacilus casei  casei   yang diisolasi dari minuman probiotik Yakult ,  , Escherichia coli dan Candida albicans, karet gelang, kertas saring, kertas cokelat, media de Mann Rogosa Sharpe  Agar (MRSA), Eosin (MRSA), Eosin  Methylene Blue Agar  (EMBA),   (EMBA),  Manitol Salt Agar  (MSA),   (MSA),  Mueller Hinton Agar  (MHA), dan Sabouraud Dextosa Agar  (SDA).  (SDA).

3.6 Prosedur Kerja

Prosedur kerja dalam penelitian ini dilakukan dengan beberapa tahap sebagai berikut, 3.6.1 Tahap Determinasi Tumbuhan Dilakukan dengan cara membandingkan ciri-ciri morfologi tumbuhan dengan literatur flora literatur flora of java. java. 3.6.2 Tahap Pembuatan Simplisia Daun Tin 1.

Tahap awal pada pembuatan simplisia daun tin adalah dengan cara  pengumpulan daun tin, untuk penyimpanan daun tin dijauhkan dari sinar matahari langsung.

2.

Setelah dikumpulkan, dilakukan sortasi basah pada daun tin.

3.

Setelah dilakukan sortasi basah, selanjutnya dilakukan pencucian. Sampel

yang sudah dicuci dan dibersihkan selanjutnya selanjutn ya dirajang. 4.

Proses selanjutnya adalah dikeringkan, proses pengeringan dilakukan dengan

cara diangin-anginkan. 5.

Setelah pengeringan dilanjutkan proses sortasi kering.

6.

Tahap akhir pada pembuatan simplisia adalah penyimpanan (Mozer, 2015).

3.6.3 Tahap Pembuatan Seduhan Daun Tin

51

Pembuatan seduhan daun tin dilakukan dengan cara sebagai berikut: 1.

Disiapkan daun tin sebanyak ... gram.

2.

Disiapkan air panas dengan suhu ± 100° C sebanyak 1 L.

3.

Diseduh simplisia dari daun tin dalam panci yang berisi 1 L air panas.

4.

Diaduk sampai air berubah warna menjadi hijau kecoklat-coklatan serta

aroma khas daun tin tercium ±10-15 menit. Prosedur pembuatan seduhan daun tin mengacu pada Agoes (2009) yang dimodifikasi. 3.6.4 Tahap Identifikasi Fitokimia Senyawa Flavonoid 1.

Dimasukan seduhan daun tin sebelum dan sesudah terfermentasi kedalam tabung reaksi ± sebanyak 5 mL.

2.

Ditambahkan serbuk Magnesiun dan 10 tetes asam klorida pekat serta 1 mL etanol 96%.

3.

Diamati adanya warna merah, kuning atau jingga pada larutan menunjukkan

adanya flavonoid. 4.

Prosedur identifikasi fitokimia senyawa flavonoid mengacu pada Harborne

(1987) yang di modifikasi. 3.6.5

Tahap Fermentasi Kombucha

Berikut ini adalah fermentasi kombucha menurut Naland (2004) : 1.

Disiapkan hasil seduhan daun tin, gula, dan kultur kombucha.

2.

Ditambahkan gula pasir sebanyak 10% dari jumlah larutan, atau setara

dengan 100 gram, aduk hingga gula tercampur dengan ai r teh daun tin. 3.

Setelah larutan dingin, dimasukkan ke dalam toples kaca, serta dimasukkan

kultur kombucha ke dalam toples berisi larutan tersebut.

52

4.

Ditutup toples dengan kain bersih dan ikat dengan menggunakan karet

gelang. 5.

Larutan teh daun tin dan kombucha difermentasi selama 7-10 hari. Lebih

hangat suhu ruangan, lebih cepat proses fermentasinya. Suhu ruangan tidak kurang dari 20°C dan tidak lebih dari 30°C. Suhu ruangan sebaiknya 23-27°C. Sebaiknya, ruangan tempat fermentasi dalam keadaan gelap, tetapi kondisi udaranya tidak lembab. Koloni kombucha akan rusak jika terkena sinar matahari langsung. 6.

Selama proses fermentasi, toples yang berisi jamur kombucha tidak perlu

dipindah-pindah atau digoyang-goyang. 7.

Proses fermentasi akan ikatakan selesai apabila larutan teh daun tin mencapai

tingkat keasaman yang benar (pH 3-5,5), diangkat jamur kombucha dengan tangan yang sebelumnya sudah dicuci bersih ataupun menggunakan alat yang  bersih. 8.

Kemudian larutan dipindahkan ke dalam botol pastik atau kaca dengan

 bantuan corong plastik. Setelah itu botol ditutup rapat, dan disimpan dalam lemari l emari es. 3.6.6 Tahap Pengujian Aktivitas Antimikroba 3.6.6.1 Sterilisasi alat dan bahan Sebelum alat untuk pengujian antimikroba digunakan harus dilakukan  proses sterilisasi terlebih dahulu yaitu dengan sterilisasi panas basah dan sterilisasi  panas kering. Sterilisasi panas basah adalah sterilisasi dengan menggunakan autoklaf, alat yang di sterilisasi panas basah adalah beaker glass berisi blue tip, erlenmeyer berisi media, tabung reaksi yaitu dengan cara di bungkus

53

menggunakan kertas coklat, kemudian dimasukkan ke dalam autoklaf dengan suhu 121°C selama 15 menit. Prosedur sterilisasi alat mengacu pada Allo (2016) yang dimodifikasi. Sedangkan untuk sterilisasi panas kering merupakan sterilisasi dengan menggunakan oven, alat yang di sterilisasi sterilisasi panas kering adalah cawan petri yang dibungkus menggunakan kertas coklat, kemudian dimasukkan ke dalam inkubator dengan suhu 175°C selama 1 jam. 3.6.6.2 Tahap Pembuatan Media 1.

Ditimbang beberapa macam media dengan berat masing-masing.

2.

Dipindahkan ke dalam erlenmeyer, lalu ditambahkan aquadest sebanyak 20

mL untuk media MSA, EMBA, serta MRSA, dan 100 mL untuk media MHA dan SDA. 3.

Dihomogenkan larutan dengan bantuan pemanasan serta pengadukan.

4.

Pelarutan dilakukan sampai sedikit mendidih (proses perlarutan harus

sempurna sehingga tidak ada kristal yang tersisa). 5.

Setelah media sedikit mendidih, dibiarkan sampai sedikit dingin kemudian

tutup erlenmeyer menggunakan kapas dan kertas coklat. 6.

Selanjutnya, disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121°C (1 atm) selama 15

menit. Prosedur pembuatan seduhan daun tin mengacu pada Atikah (2013) yang dimodifikasi. 3.6.6.3Pembiakan Mikroba Uji 1.

Disiapkan media selektif seperti MSA, EMBA, MRSA dan SDA yang sudah

disterilkan, kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi ± 5 mL secara aseptis, tutup mulut tabung dengan kapas.

54

2.

Kemudian dimiringkan tabung reaksi berisi media selektif dan dibiarkan

sampai memadat. 3.

Diinokulasi biakan murni mikroba uji pada media selektif miring steril yang

telah memadat dengan teknik goresan sinambung. (EMBA untuk  Escherichia coli, coli, MSA untuk Staphylococcus aureus, aureus, SDA untuk Candida albicans, albicans , serta MRSA untuk Lactobacillus untuk Lactobacillus casei). casei). Prosedur pembiakan mikroba uji mengacu pada Nurcahyani dkk. (2010) dalam Atikah (2012) yang dimodifikasi. 3.6.6.4 Pembuatan Suspensi Mikroba dan uji turbiditas. Bakteri uji yang telah diinokulasi diambil dengan kawat ose steril lalu disuspensikan kedalam tabung berisi NaCl 0,9 % hingga di peroleh kekeruhan. Setelah selesai membuat suspensi, langkah selanjutnya menguji suspensi untuk menghitung banyaknya jumlah sel bakteri dengan metode turbidimetri atau uji kekeruhan menggunakan spektrofotometer. Langkah yang harus dilakukan adalah sebagai berikut : 1.

Disiapkan alat spektrofotometer beserta kuvetnya, dan menyiapkan suspensi

mikroba uji. 2.

Disiapkan 2 kuvet bersih dan kering, kuvet pertama diisi larutan blanko yaitu

 NaCl 0,9 %, kuvet kedua diisi suspensi mikroba. Pengisian kurang lebih hanya ¾ kuvet. 3.

Kemudian dimasukkan ke dalam sel pada spektrofotometer.

4.

Setelah

selesai

spektrofotometernya.

meletakan

kuvet,

tutup

kembali

bagian

penutup

55

5.

Kemudian diatur panjang gelombang sebesar 600 nm (bakteri) dan 530 nm

(fungi). 6.

Selanjutnya ditekan sel B atau Blanko, kemudian setelah muncul angka pada

layar, ditekan zero. Setelah itu ditekan sel B kembali, dicatat hasilnya. 7.

Kemudian untuk melihat absorbansi sampel. Ditekan sel 3 kemudian tunggu

sampai nilai absorbansinya muncul, dicatat hasilnya. 8.

Setelah nilai absorbansi sudah sesuai dengan standar yang di kemukakan oleh

tabel Mcfarland, maka kuvet bisa dibersihkan dan diletakkan pada tempatnya kembali. Yang akan dibuat acuan yang mana? 9.

Dan suspensi bakteri yang sudah sesuai dengan nilai absorbansinya, sudah

siap untuk digunakan. Absorbansi disesuaikan dengan standart Mcfarland untuk  bakteri diperoleh absorbansi sampai 0,1 (setara dengan 1,5x106  CFU/mL), sedangkan untuk fungi sampai diperoleh absorbansi 0,12-0,15 (setara dengan 1,5x106 CFU/mL). Prosedur pembuatan suspensi mikroba dan uji turbiditas mengacu pada Atikah (2013) yang dimodifikasi. 3.6.6.5. Pembuatan Kontrol dan Perlakuan 3.6.6.5.1. Kontrol Media untuk MHA menurut .... (1) Untuk Bakteri 1.

Dicairkan media Mueller Hinton Agar (MHA) dengan bantuan pemanasan.

2.

Dimasukkan media Mueller Hinton Agar (MHA) 10-15 mL ke dalam cawan

 petri. 3.

Didiamkan hingga memadat.

(2) Untuk Fungi

56

1.

Dicairkan media Sabouraud Dextrose Agar (SDA) dengan bantuan  pemanasan.

2.

Dimasukkan media Sabouraud Dextrose Agar (SDA) 10-15 mL ke dalam

cawan petri. 3.

Didiamkan hingga memadat.

3.6.6.5.2. Kontrol Media+ Mikroba (1) Untuk Bakteri ( Escherichia  Escherichia coli, Lactobacillus casei, Staphylococcus aureus) aureus) 1.

Dicairkan media Mueller Hinton Agar (MHA) dengan bantuan pemanasan.

2.

Dimasukkan suspensi bakteri uji ( Escherichia coli, Lactobacillus casei,

Staphylococcus aureus), aureus ), kemudian media MHA sebanyak 10-15 mL ke dalam cawan petri, diputar searah membentuk angka delapan sampai media dan suspensi  bakteri homogen. 3.

Diamkan hingga memadat.

(2) Untuk Fungi (Candida albicans) albicans ) 1.

Dicairkan media Sabouraud Dextrose Agar (SDA) dengan bantuan  pemanasan.

2.

Dimasukkan suspensi bakteri Candida albicans, albicans , kemudian media SDA

sebanyak 10-15 mL ke dalam cawan petri, diputar searah membentuk angka delapan sampai media dan suspensi bakteri homogen. 3.

Diamkan hingga memadat.

3.6.6.5.3. Uji Aktivitas Antimikroba dengan Metode Sumuran 1.

Disiapkan suspensi masing-masing mikroba uji.

57

2.

Disiapkan media yang masih cair atau belum memadat melalui pemanasan

diatas bunsen. 3.

Dimasukkan suspensi mikroba sebanyak 1 mL ke dalam cawan petri secara

aseptis. 4.

Dimasukkan media yang masih cair sebanyak 10-15 mL, kemudian putar

cawan petri membentuk angka delapan hingga homogen dan biarkan menjadi  padat. 5.

Setelah media+suspensi mikroba padat. Dibuat sumur menggunakan pipa

 pelubang sumuran dengan diameter .......pada permukaan agar yang telah memadat, kemudian ditetesi 0,5 mL teh asam daun tin dari masing-masing konsentrasi. 6.

Biakan perlakuan dan biakan kontrol negatif maupun kontrol media

diinkubasi pada suhu 37°C untuk bakteri dan 29°C untuk fungi selama 24-48 jam (1-2 hari). 7.

Diukur diameter zona bening yang terbentuk disekitar sumur menggunakan

 jangka sorong kemudian kemudian dicatat hasil yang diperoleh. 8.

Diperiksa apakah hasil sudah sesuai dengan tabel 2.2 yang digunakan sebagai acuan.

Prosedur uji aktivitas antimikroba dengan metode difusi sumuran mengacu pada  Ningsih (2017) yang dimodifikasi.

3.7 Analisis Data Analisis data yang digunakan dalam penelitian ini menggunakan program SPSS menggunakan uji statistik one way anova  anova   dan dilanjutkan dengan turkey

58

HSD. Analisis ini bertujuan untuk melihat adanya perbedaan potensi aktivitas teh asam daun tin ( Ficus carica) carica ) secara in vitro berdasarkan variasi mikroba yang digunakan.

DAFTAR RUJUKAN

Afifah, Nurul. 2010. Analisis 2010.  Analisis Kondisi dan Potensi Lama Fermentasi Medium  Kombucha (Teh, Kopi, Rosela) dalam Menghambat Pertumbuhan Bakteri  Patogen (Vibrio cholerae dan Bacillus cereus).Skripsi cereus) .Skripsi tidak diterbitkan. Malang: Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang.

Agoes, G. (2009). Teknologi Bahan Alam (Serial Farmasi Industri-2) Industri-2 ) ed. Revisi. Bandung : Penerbit ITB

Agung, dr. Insan. 2014.  Dahsyatnya Tin & Zaitun Tumpas Penyakit Kronis &  Berbahaya.  Berbahaya. Surakarta: Al-Qudwah. Halaman 10-14

Ahaddin, AY. (2014).  Isolasi Dan Sitotoksisitas Ekstrak Flavonoid Daun Tin (Ficus carica Linn.). Linn.). Skripsi. Bogor: Institut Pertanian Bogor.

Aini, Q. 2012.  Efek Pemberian Ekstrak Daun Sirih (Piper Betle L.) Terhadap  Perubahan Hitung Jenis Leukosit Darah Tepi Tikus Wistar Jantan Yang  Dipapar Candida albicans Secara Intrakutan. Intrakutan. Skripsi. Jember: Universitas Jember.

Allo, M. B. R. 2016.Uji 2016. Uji Aktivitas  Aktivitas Antibakteri Dari Ekstrak Air Kulit Buah Pisang  Ambon Lumut (Musa acuminata Colla) Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus.Skripsi. aureus .Skripsi. Jogjakarta: Universitas Sanata Dharma.

Ardheniati, M. 2008.  Kinetika Fermentasi Pada Teh Kombucha Dengan Variasi  Jenis Teh Berdasarkan Pengelolahannya.  Pengelolahannya.  Skripsi. Surakarta: Universitas Sebelas Maret.

Aref, H. L., Salah, K. B., Chaumont, J. P., Fekih, A., Aouni, M., & Said, K. (2010). In (2010).  In vitro antimicrobial activity of four Ficus carica latex fractions against resistant human pathogens (antimicrobial activity of Ficus carica latex). Pak latex). Pak J Pharm Sci, Sci, 23(1), 23(1), 53-58.

Atikah, N. 2013. Uji Aktivitas Antimikroba Ekstrak Herba Kemangi (Ocimum americanum L) Terhadap Staphylococcus aureus dan Candida albicans. Skripsi. Jakarta: Universitas Islam Malang Syarif Hidayatullah.

59

60

Bennett, PN. Brown, MJ. Sharma, P. (2012). Clinical pharmacology 11 th edition. London: Churchill Livingstone Elsevier.

CDC

A. 2017.  Antimicrobial Resistance, Resistance, (http://www.cdc.gov/drugresistance/ http://www.cdc.gov/drugresistance/,, diakses 9 Januari 2018).

(Online),

Edziri, H., Mastouri, M., Mahjoub, M. A., Mighri, Z., Mahjoub, A., & Verschaeve, L. (2012). Antibacterial, (2012).  Antibacterial, antifungal and cytotoxic activities of two flavonoids from Retama raetam flowers. Molecules, flowers.  Molecules, 17 (6), (6), 7284-7293.

El-Shobaki, F. A., El-Bahay, A. M., Esmail, R. S. A., El-Megeid, A. A., & Esmail, N. S. (2010).  Effect of figs fi gs fruit (Ficus carica L.) and its leaves on hyperglycemia in alloxan diabetic rats. World Journal of Dairy & Food Sciences , 5(1), 5(1), 47-57.

Filannino, P., Cavoski, I., Thlien, N., Vincentini, O., De Angelis, M., Silano, M., Gobbetti & Di Cagno, R. (2016). Lactic  Lactic Acid Fermentation of Cactus Cladodes (Opuntia ficus-indica L.) Generates Flavonoid Derivatives With  Antioxidant and Anti-Inflammatory Properties. Properties. PloS one11 one11(3): (3): e0152575. doi: 10.1371/journal. pone.0152575. pone.0152575.

Ghazi F, Rahmat A, Yassin Z, Ramli NS, Buslima NA. 2012.  Determination of total polyphenol and nutritional composition of two different types of  Ficus carica leaves cultivated in Saudi Arabia. Arabia. Pak J Nutr . 11(11):10611065.

Gillespie, Stephen dan Kathleen Bamford. 2008. At  At a Glance Mikrobiologi Medis dan Infeksi Edisi Ketiga. Ketiga. Jakarta: Erlangga.

Grotewold, E., 2006, The Science of Flavonoids, Flavonoids , Springer Science and Business Media Inc., United States of America.

Harborne, S.B, 1987. Metode 1987.  Metode Fitokimia. Fitokimia. Bandung: ITB P: 21, 71,102-104

Husaeni, HRK. 2008.  Efek Ekstrak Air Buah Tin (Ficus Carica L.) Terhadap  Kadar Glukosa Darah Puasa Tikus Putih Jantan Galur Wistar (Rattus

61

 Norvegicus L.) Yang Diinduksi Aloksan Monohidrat . Tesis. Bandung: Institut Teknologi Bandung.

İrget, M. E., Aksoy, U., Okur, B., Ongun, A. R., & Tepecik, M. (2008 ). Effect of calcium based fertilization on dried fig (Ficus carica L. cv. Sarılop) yield and quality. Scientia horticulturae, 118(4), 118(4), 308-313.

Irianto, K. 2013.  Mikrobiologi Menguak Dunia Mikroorganisme. Bandung: Yrama Widya.

Jaya, Adi Noegroho F. 2007.  Pembuatan Minuman Probiotik (Yoghurt) Dari  Proporsi Susu Sapi Dan Kedelai Dengan Isolat Lactobacillus Casei Dan  Lactobacillus Plantarum, Plantarum, (Online) (firmanjaya.lecture.ub.ac.id/files/2008/10/yoghurt.doc, diakses 14 Januari 2018).

Jeong MR, Kim HY, Cha JD. 2009.  Antimicrobial activity of methanol extract  from Ficus carica leaves against oral bacteria. bacteria. J Bacteriol Virol .39(2):97-102. doi: 10.4167/jbv/2009.39.2.97. 10.4167/jbv/2009.39.2.97.

Joseph, B., & Raj, S. J. J . (2011). Pharmacognostic (2011).  Pharmacognostic and phytochemical properties of  Ficus carica Linn –   An overview. overview. International journal of pharmtech research, 3(1), 8-12.

Juliantina, F. R., Ayu, D. C. M, dan Nirwani, B. 2008.  Manfaat Sirih Merah (Piper crocatum) sebagai Agen Antibakterial Terhadap Bakteri Gram  Positif dan Gram Negatif . Jurnal Kedokteran dan Kesehatan Indonesia.

Kementrian Kesehata Republik Indonesia. 2017.  Data dan Informasi Profil  Kesehatan Indonesia 2016 . Jakarta: Kementrian Kesehatan.

Kristanti, Alfinda Novi., dkk. 2008. “Buku Ajar Fitokimia”. Airlangga University Press. Surabaya

Konyalιoğlu, S., Sağlam, H., & Kιvçak, B. (2005). α-tocopherol, flavonoid, and  phenol contents and antioxidant activity of Ficus carica. leaves. leaves . Pharmaceutical biology, 43(8), 43(8), 683-686.

62

Kunkel, D. 2004. Dennis 2004.  Dennis Kunkel Microscopy, Inc. Inc. Diunduh tahun 2013, dari Science Stock Photography: http://www.denniskunkel.com/index.php

Kusuma, S. A. F., 2009. Staphylococcus aureus. aureus . Makalah, Fakultas Farmasi Universitas Padjadjaran, Jatinangor.

Lee YS, Cha JD. 2010. Synergistic antibacterial activity of fig ( Ficus carica) leaves extract against clinical isolates of methicillin-resitant Staphylococcus aureus . aureus . Kor J Microbiol Microbiol Biotechnol . 38(4):405-413.

Liana.

2013.  Makalah Antimikroba, (Online), (https://www.scribd.com/doc/119237884/Antimikroba, https://www.scribd.com/doc/119237884/Antimikroba,   diakses 10 Januari 2018).

Marwati, Hudaida Syahrumsyah dan Ratri Handria, 2013.  Pengaruh Konsentrasi Gula dan Starter terhadap Mutu Teh Kombucha . Jurnal Teknologi Pertanian. Vol.08. No. 02. Hal : 49-53.

Mawa S, Husain K, Jantan I, 2013,  Ficus carica L. (Moraceae) Phytochemistry, Traditional Uses and Biological Activities.  Evidence-based Complementary and Alternative Medicine: eCAM , 2013. 2013 .

Maulid, RR. 2016. Uji Efektivitas Antibakteri Ekstrak Daun Patikan Kebo (Euphorbia hirta) Terhadap Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus Dengan Pelarut Yang Berbeda Secara In Vitro.   Skripsi. Malang: Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim.

Mehta, Bhavbhuti M., Afaf Kamal-Eldin., Robert Z. Iwanski. 2012.  Fermentation  Effect on Food Properties. Boca Raton, London, New York: CRC Press and Taylor & Francis Group.

Megama, Oktaviani P. 2016.  Pengaruh Lama Waktu Fermentasi Terhadap Total  Asam Tertitrasi (TAT), pH dan Karakteristik Tempoyak Menggunakan Starter Basah Lactobacillus casei. Skripsi. Yogyakarta: Universitas Sanata Dharma.

Mozer, H. 2015. Uji Aktivitas Antifungi Ekstrak Etanol 96% Kulit Batang Kayu  Jawa (Lannea coromandelica) Terhadap Aspergillus niger, Candida

63

albicans, dan Trichopyton rubrum.  rubrum.   Skripsi. Jakarta: Universitas Islam Hidayatullah.

 Naland, H. 2004.  Kombucha Teh Ajaib Pencegah dan Penyembuh Aneka  Penyakit. Jakarta: PT Agro Media Pustaka.

 Naland, H. 2008. Kombucha 2008.  Kombucha Teh dengan Seribu Khasiat . Khasiat . Jakarta: PT Agro Media Pustaka.

 Ningsih, D. R. (2017).  Ekstrak Daun Mangga (Mangifera Indica L.) Sebagai  Antijamur Terhadap Jamur Candida Albicans Dan Identifikasi Golongan Senyawanya. Senyawanya. Jurnal Kimia Riset, 2(1), 61-68.

 Ningtyas, Riza Nurhermi. 2015.  Pengaruh Lama Fermentasi dan Jumlah  Inokulum Terhadap Karakteristik Kimia dan Potensi Antibakteri Teh  Kombucha dari Air Rebusan Jagung Manis (Zea mays saccharata Sturt). Skripsi. Malang: Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang.

Pan, X., Chen, F., Wu, T., Tang, H., and Zhao, Z. 2009. The acid, Bile Tolerance and Antimicrobial property of Lactobacillus acidophilus NIT . J. Food Control 20 : 598-602.

Parubak, A.S., 2013. Senyawa Flavonoid yang Bersifat Antibakteri dari  Akway (Drimys becariana Gibbs).  Gibbs).  Skripsi, Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Negeri Papua, Papua.

Patil VV, Bhangale SC, Patil VR. 2010.  Evaluation of anti-pyretic potential of  Ficus carica leaves. leaves. International Journal Pharmaceutical Sciences Review and Research. 2(2):48-50

Patil VV, Patil VR. 2011a.  Ficus carica Linn.-an overview. overview. Res J Med Plants. 5(3):246-253. doi: 10.3923/rjmp.2011.246.253. 10.3923/rjmp.2011.246.253.

Patil VV, Patil VR. 2011b. 2011b . Evaluation of anti-inflammatory activity of Ficus carica Linn. leaves. leaves. Indiam Journal of Natural Products Products and Resources. 2(2):151-155.

64

Prabowo, A. 2011.  Pengawetan Dedak Padi dengan Cara Fermentasi. Fermentasi . (http://sumsel.litbang.deptan.go.id/index.php/component/content/article/53 -it-1/206-dedak-padi,  -it-1/206-dedak-padi,  diakses pada tanggal 23 November 2017 Pukul 05.26). Pramitasari, Maharani. 2011.  Formulasi Dan Uji Aktivitas Antijamur Krim  Minyak Sereh (Cymbopogon citratus (DC) Stapf.) Dengan Basis Vanishing Cream Terhadap Candida albicans Dengan Metode Sumuran. Skripsi. Jember: Universitas Jember. Prasetyo, K.R.D. 2016. Uji Beda Daya Hambat Antara Ekstrak Rimpang  Lengkuas Merah (Alphinia Purpurata K. Schum) Dengan Ekstrak  Rimpang Lengkuas Putih (Alphinia galanga W.) Terhadap Candida albicans. Skripsi. Jember: Universitas Jember.

Pratiwi, S.T. (2008).  Mikrobiologi Farmasi. Farmasi . Yogyakarta: Penerbit Erlangga. Hal. 23,106-108,111-117,142.

Prescott, et al. (2008).  Microbiology 7 th  edition. edition. USA: McGraw-Hill Book Company.

Radji, Maksum. 2010.  Buku Ajar Mikrobiologi Panduan Mahasiswa Farmasi dan  Kedokteran.  Kedokteran. Jakarta: EGC.

Raharjo, T.J. (2013).  Kimia Hasil Alam.Cetakan Alam.Cetakan I.Yogyakarta Pelajar. Hal : 111.

:

Pustaka

Rahmadani, Fitri. 2015. Uji Aktivitas Antibakteri Dari Ekstrak Etanol 96% Kulit  Batang Kayu Jawa (Lannea coromandelica) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Helicobacter pylori,  Pseudomonas aeruginosa. aeruginosa . Skripsi. Jakarta: Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah.

Refli R. 2012. Potensi 2012.  Potensi ekstrak daun Tin (Ficus carica L.) sebagai antioksidan dan aktivitas hambatannya terhadap proliferasi sel kanker HeLa [skripsi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.

Rinihapsari, E., 2008.  Fermentasi Kombuchadan Potensinya Sebagai Minuman  Kesehatan.  Kesehatan. Semarang: STIFAR Yayasan Farmasi.

65

Salim, Hari Hardana Utama.2016.  Pengaruh Aktivitas Antimiktoba Ekstrak  Bawang Putih (Allium sativum) Terhadap Bakteri Gram Positif (Staphyloccocus aureus) dan Gram Negatif (Escherichia coli) Secara In Vitro. Vitro. Skripsi. Bandar Lampung: Universitas Lampung.

Simatupang, Maria Magdalena. 2009. Candida albicans, (Online), (http://repository.usu.ac.id/bitstream/handle/123456789/1935/09E01452.p df?sequence=1&isAllowed=y,, diakses 14 Januari 2018). df?sequence=1&isAllowed=y

Sirait, M. (2007).  Penuntun Fitokimia Dalam Farmasi. Farmasi . Bandung: Penerbit ITB. Hal. 158-159.

Sirisha N, Sreenivasulu M, Sangeeta K, Madhusudhana Chetty C. (2010).  Antioxidant properties of Ficus species –   A Review. Review. Int J PharmTech Res 2: 2174-2182.

Tenailon., Skurnik D., Picard B., Denamur E. 2010. The Population Genetics Of Commensal Escherichia coli. Nature Review Microbiology. Microbiology . 8 (3) : 207217.

Todar, K. 2008. Staphylococcus Aureus and Staphylococcal disease, disease , (Online), (http://textbookofbacteriology.net/staph.html http://textbookofbacteriology.net/staph.html,, di akses 15 Januari 2018).

Todar, Kenneth, 2012, Opportunistic Infection Caused by Pseudomonas aeruginosa, aeruginosa, (Online), (http://textbookofbacteriology.net/themicrobialworld/Pseudomonas.html http://textbookofbacteriology.net/themicrobialworld/Pseudomonas.html,, 16 April 2014).

WHO. (2014). WHO |  Antimicrobial resistance.  resistance.  diakses tanggal 4 April 2015.tersedia dari http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs194/en/

Wistiana, D., dan Elok, Z. 2015. “Karakteristik Kimiawi dan Mikrobiologis  Kombucha Dari Berbagai Daun D aun Tinggi Fenol Selama Fermentasi” . Jurnal Pangan dan Agroindustri. Vol. 3 No. 4, 1446-1457.

Witoyo, JE.,Amalia, S., Putri, KN., Zain, MT., Wulandari, D. 2015.  Perubahan  Biokimia Selama Proses Black Tea. Skripsi. Malang: Universitas Brawijaya.

LAMPIRAN Lampiran 1. Perhitungan media

1. Media Manitol Salt Agar (MSA) Standar penimbangan dan pelarut media MSA adalah 111 g dalam 1000 mL 111  1000 

 x 20 ml = 2,22 gram x 3 = 6,66 gram

2. Media Eosin Methylene Blue Agar (EMBA) Standar penimbangan dan pelarut media EMBA adalah 36,0 g dalam 1000 mL 36,0  1000 

 x 20 mL = 0,72 gram x 3 = 2,16 gram

3. Media Sabouraud Dextrosa Agar (SDA) Standar penimbangan dan pelarut media SDA adalah 65,0 g dalam 1000 mL 65,0  1000 

 x 20 mL = 1,3 gram x 3 = 3, 9 gram

4. Media de Mann Rogosa Sharpe Agar (MRSA) Standar penimbangan dan pelarut media MRSA adalah 68,2 g dalam 1000 mL 68,2  1000 

 x 20 mL = 1,364 gram x 3 = 4,092 gram

5. Media Mueller Hinton Agar (MHA) Standar penimbangan dan pelarut media MHA adalah 38 g dalam 1000 mL 38  1000 

 x 100 mL = 3, 3, 8 gram x 3 = 11,4 gram

66

67

Lampiran 2. Komposisi Media

1. Media Manitol Salt Agar Komposisi : Ekstrak Sapi

1g

 NaCl

75 g

Agar

15 g

Peptone

1g

Manitol

10 g

Panored

1,025 g

Aquadest

1L

2. Media Eosin Methylene Blue Agar (EMBA) Komposisi : Peptone

10 g

Lactose

5g

Sucrose

5g

Dipotasium phosphate

2g

Eosin Y

0,4 g

Methylene blue

0,065 g

Distilled water

1L

3. Media Sabouraud Dextrosa Agar (SDA) Komposisi : Mycological peptone

10 g

Glucose

40 g

Agar

15 g

68

4. Media de Mann Rogosa Sharpe Agar (MRSA) Peptone

10 g

Lab-Lemco’ powder 

8g

Yeast extract

4g

Glucose

20 g

Sorbitan mono-oleate

1 mL

Dipotasium hydrogen phospate

2g

Sodium acetate 3H2O

5g

Triammonium citrate

2g

Magnesium sulphate 7H2O

0,2 g

Magnesium sulphate 4H2O

0,05 g

Agar

10 g

5. Media Mueller Hinton Agar (MHA) Komposisi : Beef extract

2g

Acid hydrolysate of casein

17,5 g

Starch

1,5 g

Agar

17 g

Aquadest

1L

69

Lampiran 3. Standart Turbiditas McFarland