ESCUELA PREPARATORIA FEDERAL “LÁZARO CÁRDENAS” CAPACITACIÓN “LABORATORISTA DE ANÁLISIS CLÍNICOS” “ELABORA PRUEBAS DE DIAGNÓSTICO INMUNOHEMATOLÓGICO”
REGLAMENTOS Y PROCEDIMIENTOS GENERALES BIOSEGURIDAD La bioseguridad es el manejo técnico adecuado en un laboratorio cuya eficiencia en gran parte refleja el entren entrenami amien ento to del perso personal nal,, ademá ademáss de signif significa icarr la protec protecció ciónn indivi individua dual.l. La observ observanc ancia ia de sus lineamientos repercute repercute en la calidad calidad de los resultados del del laboratorio. El trabajo que se realiza realiza en los laboratorios siempre implica riesgos especiales de contagio de enfermedades enfermedades infecciosas para el personal que labora en ellos. Es por ello que cada laboratorio debe implementar medidas de bioseguridad correspondientes a la peligrosidad de los agentes que maneja, y tener un control estricto para que estas medidas se lleven a cabo.
NORMAS BASICAS PARA PREVENIR ACCIDENTES EN EL LABORATORIO 1. No jugar jugar con con los materi materiale ales, s, equipo equipo y reacti reactivos vos de laborato laboratorio rio,, así como como con las muestra muestrass de origen biológico, químico. 2. No te está permitido permitido comer, comer, beber, beber, fumar, almacen almacenar ar alimentos, alimentos, aplicart aplicartee cosméticos cosméticos etc., etc., en el área de trabajo de laboratorio. 3. Debes mantener mantener el laboratorio laboratorio libre de de materiales materiales no relacionados relacionados con la práctica en en curso. 4. Deberás Deberás lavarte lavarte las manos después después de manipular manipular agentes agentes infecciosos infecciosos y no infeccioso infecciosos, s, animales, animales, material contaminado, y cuando abandones el laboratorio. 5. Mantendr Mantendrás ás la superficie superficie de trabajo de trabajo trabajo individua individuall (mesas) descont descontamin aminada, ada, para lo cual usarás una solución de cloro al 10 % al iniciar y finalizar cada práctica. 6. Realizará Realizaráss todos los procedimien procedimientos tos cuidadosa cuidadosamen mente te para evitar contamina contaminación ción y obtener obtener los resultados correctos. 7. Deberás Deberás utilizar utilizar guantes, guantes, cubre-boc cubre-bocas as y lentes lentes de protección protección durante durante aquellos aquellos procedimie procedimientos ntos que impliquen contacto directo con material infeccioso. EN CASO DE EMERGENCIA DEBERÁS RECURRIR AL RESPONSABLE DEL AREA.
REG EGLA LAM MEN ENTO TO DEL LABO BORA RATTOR ORIO IO DE INMUNOHEMATOLÓGICO”
“EL “ELABOR ORA A
PRUE UEB BAS DE
DIAGN IAGNÓ ÓST STIC ICO O
1. Los Los alum alumno noss debe deberá ránn entr entrar ar al labo labora rato toririoo util utiliz izan ando do una una bata bata blan blanca ca limp limpia ia,, plan planch chad adaa y debidamente abrochada. (deberá ser de mangas largas) 2. Traer Traer y utilizar lentes lentes de plástico plástico de protecc protección ión contra contra sustancia sustanciass que pudieran pudieran ser ser corrosivas corrosivas o fluidos corporales, guantes de latex o nitrilo desechables y de la medida correspondiente, cubreboca desechable. 3. Las mujere mujeress deber deberán án recoge recogerse rse el cabello cabello con la ayuda ayuda de una liga, para para poder poder trabaj trabajar ar con seguridad. 4. No se permite permite introdu introducir cir o ingerir ingerir bebida bebidass y alimentos alimentos en en el laborator laboratorio. io.
5. Los alumnos deberán presentarse a sus prácticas con su manual del laboratorio correspondiente y materiales que se les haya solicitado previamente. 6. Los alumnos no podrán entrar al laboratorio después de haberse iniciado la práctica. 7. Una vez en el laboratorio, los alumnos no podrán salir del mismo hasta que finalice la práctica salvo por indicación expresa del instructor. 8. Durante la realización de la práctica los alumnos deberán respetar el área de trabajo de los diferentes equipos y guardar un buen comportamiento. 9. Al concluir la práctica, los alumnos deberán limpiar debidamente su área de trabajo y dejar los instrumentos y reactivos ordenados. 10. La basura orgánica, inorgánica o contaminada resultante de la práctica deberá ser depositada en el recipiente correspondiente.
CRITERIOS DE DESEMPEÑO COMUNES A TODAS LAS PRÁCTICAS Cuando
(criterios de desempeño)
Te presentaras con el diagrama de flujo de la practica correspondientes Leerás las instrucciones y los procedimientos a realizar durante la práctica.
Antes
Llegarás 5 minutos antes del inicio de la práctica al laboratorio Te presentarás con la indumentaria y el material adecuado requerido por la práctica. Acomodarás el material necesario para la práctica en tu mesa de laboratorio de acuerdo a las instrucciones del facilitador.
Durante
Realizaras la secuencia de la práctica, respetando la metodología establecida en tu manual y anotaras las observaciones, y aquello que sea de importancia para la elaboración de tu reporte. Limpiarás tu área de trabajo. Dispondrás de los desechos en los lugares indicados por el instructor.
Después
Entregarás un reporte con las observaciones y discusiones generadas durante la práctica. (en el tiempo que el profesor te lo solicite) Guardarás tus prácticas revisadas y firmadas por el facilitador para conformar tu portafolios de evidencias.
Contenido de prácticas de laboratorio
Practica No. 1 Identifica la importancia inmunológica de la compatibilidad con otros tipos sanguíneos y observar la reacción Ag‐Ac Practica No. 2 Detecta la presencia de la “proteína C lectiva” Practica No. 3 Determinación de factor reumatoide Practica No. 4 Determina Antígenos de reacción febril Practica No. 5 Prueba de embarazo Practica No. 6. Panel de drogas Practica No. 7. Aplica reactivo de Mantoux para evaluar la respuesta inmune (teórica)
CAPACITACION: LABORATORISTA DE ANALISIS CLINICOS “ELABORA PRUEBAS DE DIAGNÓSTICO INMUNOHEMATOLÓGICO”
PRACTICA No. 1
Tipo sanguíneo
Alumno(a):_________________________________________________Grupo:_____________
Competencia a desarrollar en la sesión: Aprende e identifica y utiliza los materiales necesarios e idóneos para llevar a cabo una extracción sanguínea a través de la técnica de punción capilar .
Fundamento teórico Anualmente se realizan millones de transfusiones sanguíneas, por lo que la aplicación más importante de la inmunohematología es en la transfusión sanguínea segura. Una segunda aplicación es el conocimiento de la patogénesis, diagnóstico y prevención de la inmunización Rh asociada al embarazo. Además de sus aplicaciones en la medicina clínica, la inmunohematología hace importantes contribuciones en las áreas de genética humana, antropología, criminología
Equipo, Instrumental, Material e insumos. • • • •
Sueros hemoclasificadores anti‐A, anti‐B y anti‐D Aplicadores de madera Tubos de ensayo, placas de vidrio y/o portaobjetos Pipetas de transferencia
Procedimiento “ DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS” Prueba en placa o portaobjetos: a) b) c) d) e) f) g)
Colocar separadamente una gota de suero anti‐A, anti‐B y anti‐D. Al lado de éstas depositar una gota de sangre venosa o capilar. Con un palillo de madera distinto, mezclar y extender aprox. 2 cm Mover de forma circular la placa para favorecer la mezcla. Observe si existe aglutinación macroscópica antes de 3 minutos. En caso de resultado dudoso, examine la mezcla en el microscopio con objetivo 10X. Interprete y registre sus resultados.
Análisis de resultados y conclusiones (recuerden poner y explicar sus conclusiones) I.
De acuerdo al procedimiento dibuja las muestras o anexa imagen que observaste en tu equipo y coloca que tipo sanguíneo se confirmaron.
II.
De acuerdo a los resultados obtenidos del grupo 603, elabora una grafica de (Excel en 3d), sobre el porcentaje de cada tipo de sangre que abunda en el grupo así como marcar el porcentaje en mujeres y hombre.
III.
Investiga sobre:
1.
¿Qué aporto y Como dio Origen a su descubrimiento el patólogo Landsteiner ? Explica la importancia del factor Rh ¿Quiénes son donadores universales y porque lo son?
2. 3.
Karl
4.
¿Qué interferencias pueden aparecer y mostrar un falso positivo o negativo en las pruebas? ¿Por qué aglutina la sangre cuando esta da positivo a un tipo de sangre?
5.
CAPACITACION: LABORATORISTA DE ANALISIS CLINICOS PRACTICA No. 2
Identifica la importancia inmunológica de la compatibilidad con otros tipos sanguíneos y observar la reacción Ag‐Ac
Alumno(a):________________________________________________________Grupo:___________ Competencia a desarrollar en la sesión: Realizar la tipificación de un grupo y Rh sanguíneo, valorando la importancia de una prueba cruzada como un factor trascendental para llevar a cabo una transfusión sanguínea. Fundamento teórico e información de apoyo. Anualmente se realizan millones de transfusiones sanguíneas, por lo que la aplicación más importante de la inmunohematología es en la transfusión sanguínea segura. Una segunda aplicación es el conocimiento de la patogénesis, diagnóstico y prevención de la inmunización Rh asociada al embarazo. Además de sus aplicaciones en la medicina clínica, la inmunohematología hace importantes contribuciones en las áreas de genética humana, antropología, criminología. La mayoría de los hematólogos concuerdan en que las pruebas cruzadas deben efectuarse mediante tres métodos por lo menos: Equipo Microscopio
Centrífuga
Baño María a 37°C
INSTRUMENTAL: a)Tubos de ensayo, placas de vidrio y/o portaobjetos b) Pipetas de transferencia INSUMOS: a)Sueros hemoclasificadores anti ‐A, anti‐B y anti‐D b)Suero de Coombs (antiglobulina humana) c)Aplicadores de madera Metodología de la sesión. DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS: Prueba en placa o portaobjetos: 1. Colocar separadamente una gota de suero anti ‐A, anti‐B y anti‐D. b)
depositar una gota de sangre venosa o capilar.
Al
lado
de
éstas
2. Con un palillo de madera distinto, mezclar y extender aprox. 2 cm d) Mover de forma circular la placa para favorecer la mezcla. 3. Observe si existe aglutinación macroscópica antes de 3 minutos. 4. En caso de resultado dudoso, examine la mezcla en el microscopio con objetivo 10X. ) Interprete y registre sus resultados
Las últimas dos pruebas son los métodos más seguros para detectar la mayoría de las incompatibilidades. De acuerdo con su importancia relativa, las pruebas cruzadas se dividen en “Prueba mayor” y “Prueba menor”. TÉCNICA: Etapa salina 1. Extraer sangre con y sin anticoagulante tanto a donador como receptor . 2. Las muestras sin anticoagulante, una vez completada la coagulación se centrifugan a 100 rpm por minuto para obtener el suero tanto de donador como de receptor. 3. Las muestras con anticoagulantes, se lavan 4 veces con solución salina fisiológica y se preparan suspensiones (con la solución salina fisiológica ) al 4 o 5% de glóbulos rojos lavados tanto de donador como de receptor. 4. Se rotulan 3 tubos de la siguiente manera: Prueba mayor, Prueba menor y Prueba testigo y proceder de la siguiente manera: 5. A la prueba mayor: se le agregan 2 gotas del suero del receptor y 2 gotas de la suspensión de eritrocitos del donador. 6. A la prueba menor: se le agrega 2 gotas del suero del donador y 2 gotas de la suspensión de glóbulos rojos del receptor. 7. A la prueba testigo: se le agrega 2 gotas del suero del receptor más 2 gotas de la suspensión de eritrocitos del receptor. 8. Agitar sus tubos y centrifugar 40 segundos a 1000 rpm, remover los glóbulos rojos y verificar si existe aglutinación o hemólisis. Si existe la prueba se considera INCOMPATIBLE, es decir ésa sangre (o su componente) no se le puede transfundir al receptor. Pero si no existe aglutinación o hemólisis se pasa a la siguiente etapa que es la Prueba de Albúmina : 9. Agregar a los tubos 2 gotas de albúmina bovina al 30%, agitar los tubos e incubar a 37°C durante 30 a 60 minutos. 10. Sacar del baño maría, agitar y centrifugar 30 seg. Y verificar si existe aglutinación o hemólisis, si es así la prueba se considera INCOMPATIBLE; si no existe aglutinación o hemólisis entonces proceder con la 3era. Etapa que es la Prueba de Coombs: 11. Lavar 4 veces todos los tubos con solución salina fisiológica y en el último lavado, eliminar completamente el sobrenadante. 12. Agregar 2 gotas del suero de Coombs, agitar y centrifugar 30 seg. Y observar si existe aglutinación o hemólisis, si es así la prueba se considera INCOMPATIBLE y la sangre no puede ser transfundida. Pero si no existe aglutinación o hemólisis las pruebas cruzadas se consideran COMPATIBLES y la sangre si puede transfundirse al receptor. Recuerda que si la prueba mayor da compatible, significa que el receptor puede recibir concentrado de eritrocitos.
Si la prueba menor da compatible, significa que el receptor puede recibir plasma. Si ambas pruebas te dan compatibles entonces el receptor podrá recibir la sangre completa de ése donador.
CONCLUSIONES:
Para el reporte de práctica debes realizar la siguiente investigación. 1.- ¿Porque es importante verificar el grupo sanguíneo y el factor Rh? 2.- ¿Por qué se le llama “Prueba cruzada”? 3.- ¿Investiga en qué consiste una prueba menor? 4.-Explica en que consiste una prueba mayor? 5.-Explica como se llevaba a cabo las transfusiones sanguíneas cuando estas se descubrieron 6.-Explica y describe bajo qué condiciones se almacena la sangre donada en los bancos hematológicos (tiempo de duración, temperatura, recipiente, tipo de aguja hipodérmica, materiales, anticoagulantes etc.) 7.- ¿Qué es la hemofilia? 8.- ¿Por qué los pacientes con hemofilia deben recibir transfusiones de plaquetas? 9.-¿Qué es la “Policitemia Vera”? 10.- ¿Por qué los pacientes con “Policitemia Vera”, deben donar sangre casi cada semana y ¿Por qué no es usada para aplicar a los pacientes?
CAPACITACION: LABORATORISTA DE ANALISIS CLINICOS PRACTICA No. 3
Determinación de Proteína C reactiva
Alumno(a):________________________________________________________Grupo:__________ Competencia a desarrollar en la sesión: Determina y cuantifica la proteína C reactiva en suero sanguíneo humano que cursa con un proceso inflamatorio o necrótico. Fundamento teórico e información de apoyo. La proteína C-reactiva es un tipo especial de proteína producida por el hígado que sólo está presente durante episodios de inflamación aguda. El aspecto más importante de la PCR es su interacción con el sistema del complemento, el cual es uno de los mecanismos de defensa contra elementos extraños. A pesar de que éste no es un examen específico, sí advierte de forma general sobre la presencia de un proceso inflamatorio agudo. El médico puede utilizar este examen para evaluar una exacerbación de artritis reumatoide o de fiebre reumática. El examen también puede ser útil para evaluar la respuesta a la terapia. La proteína C reactiva no se eleva de forma habitual en enfermedades producidas por virus. La proteína C reactiva se eleva ante un problema infeccioso o inflamatorio antes que la VSG y comienza a disminuir ante la recuperación de la enfermedad. Si se trata la enfermedad con aspirina o antiinflamatorios desaparece su elevación. La proteína C reactiva aparece elevada en el infarto de miocardio. También puede ser de ayuda tras una intervención de cirugía, ya que aparece elevada durante 3 ó 4 días, para luego disminuir, si persiste elevada es que hay alguna infección o complicación post-quirúrgica.
Equipo •
Centrífuga
INSTRUMENTAL: • •
Laminillas con 3 áreas marcadas, con fondo negro para realizar la prueba. Aplicadores de madera
• • • • • • •
Jeringa, torundas con alcohol y torniquete Tubo rojo o con gel para la toma de sangre. Rotor Reloj o cronómetro Pipeta pasteur Pipetas graduadas de 5 ml Perilla de tres vías
Metodología de la sesión. Prueba cualitativa 1. Extraiga sangre sin anticoagulante, Centrifuga durante 5 minutos a 2000 rpm y separe el suero. 2. Diluya el suero a probar (1:40) con solución salina amortiguadora: 2 gotas (0.1 ml) del suero en 3.9 ml de solución salina amortiguadora. 3. Coloque una gota de la solución anterior en una de las divisiones de la placa de vidrio, en las otras áreas coloca una gota de suero control negativo y suero control positivo. 4. Añada una gota de látex anti proteína C reactiva a cada una de las muestras. 5. Oscile suavemente la placa durante 2 minutos y observe si se presenta aglutinación macroscópica.
Interpretación Positivo: Aglutinación visible con formación de grandes agregados y fondo claro comparable al control positivo. Si la prueba de suero sale positiva se deberá realizar la prueba cuantitativa. Negativo: Suspensión uniforme sin aglutinación visible, comparable al control negativo. En ocasiones se pueden apreciar finas granulaciones que no exceden a las observadas con el control negativo, por lo que este fenómeno no deberá interpretarse como aglutinación.
Prueba cuantitativa: 1. Prepare diluciones del suero problema en solución salina de la siguiente manera: Coloque 5 tubos de ensayo en una gradilla, deposite 0.5 ml de solución salina en cada uno de los tubos. Añada 0.5 ml del suero diluido1:40 (ver prueba cualitativo) al primer tubo. Mezcle bien y transfiera 0.5 ml de la dilución anterior al segundo tubo. Continúe efectuando la misma operación hasta terminar con el tubo No.5. TUBO 1……………1/80 TUBO 2…………..1/160 TUBO 3 ……….... 1/320 TUBO 4 ………… 1/640 TUBO 5 …………. 1/128 2. Utilizando un capilar o gotero, ponga una gota de cada dilución en las divisiones de la placa de vidrio previamente marcadas. 3. Añada una gota de látex anti proteína C reactiva a cada división.
4. Mezcle con un aplicador, desde la dilución más elevada hasta la más baja y extienda por toda el área del ovalo 5. Oscile suavemente la placa durante 2 minutos y observe si se presenta aglutinación macroscópica.
Interpretación La dilución más elevada del suero que muestre aglutinación visible, se considera como el titulo de proteína C reactiva en el suero plasma.
Conclusiones:
Investiga lo siguiente para el reporte de práctica 1.- ¿Para qué se realiza la determinación de la proteína C reactiva? 2.- ¿En qué casos pueden elevarse los niveles de PCR? 3.- ¿Cuáles son los niveles normales de PCR? 4.- ¿En qué órgano se sintetiza la PCR, y porque es tan importante este órgano?
