Practica n2 Efecto de Ph y t en Enzimas

INSTRUCTIVO DEMOSTRACION DEL EFECTO DEL pH Y LA TEMPERATURASOBRE LA VELOCIDAD VELOCIDAD DE LA REACCIÓN ENZIMÁTICA

Página: 1 de 13

1. OBJETI OBJETIVO VOS S 1.1 Demostrar Demostrar el efecto o influencia influencia del pH sobre la velocidad velocidad de reacción de la amilasa. 1.2 Demost Demostrar rar el efecto efecto o influen influencia cia de la temper temperatur aturaa sobre sobre la veloci velocidad dad de reacción de la amilasa. 2. INTRODUCC INTRODUCCION ION Las enzimas, en general, al actuar como biocatalizadores, aceleran reacciones químicas específicas, específicas, experimentando experimentando cambios cambios físicos durante ellas, pero recuperando recuperando su estado original cuando la reacción química a terminado. !in embargo dada la naturaleza proteica de la mol"cula enzim#tica, diferentes factores físicos $ químicos pueden modificar la actividad de una enzima, siendo lo m#s importante la temperatura $ el pH. Las enzimas transforman r#pidamente los sustratos a temperaturas $ a valores de pH óptimos característicos para cada una respectivamente. %esp %espect ecto o al pH, pH, las las enzi enzima mass requ requie ieren ren,, para para actua actuarr con con m#xim m#ximaa efici eficien enci cia, a, una una determinada concentración de iones idrogeno en el medio, por tanto, cada enzima tiene un pH óptimo de acción. &l efecto del pH se explica por la acción de la concentración de protones en la disociación de distintos grupos del sustrato $ en especial de la enzima, que participan tanto en la unión enzima'sustrato $ en el mecanismo catalítico mismo, como en el mantenimiento de la determinada conformación de la enzima. ( valores de pH por encima o por deba)o del pH optimo, disminu$e la actividad enzim#tica por lo que, generalmente se describe una curva en forma de campana. %especto a la temperatura, al igual que el pH, existe un rango, algunas veces mu$ peque*o, donde es m#xima la actividad enzim#tica, que est# determinado por la magnitud de las variaciones de la velocidad inicial en función de la temperatura del medi medio, o, lo que que sign signifi ifica ca que que la velo velocid cidad ad inic inicial ial de reacci reacción ón aume aument ntar# ar# con con la tempe temperat ratur uraa ast astaa que que se aga aga pr#c pr#ctic ticam amen ente te impo imposib sible le de medi medirr debi debido do a una una activación. La ma$oría de las enzimas son completamente inactivadas por encima de los + -. La temperatura óptima de reacción enzim#tica es el resultado de un balance entre el incremento en la actividad $ la velocidad de destrucción de la enzima. La temperatura óptima no es un valor constante para una enzima dada, sino que depende del tiempo durante el cual se ace la medición de la actividad. /ientras m#s corto sea el tiempo de medición, m#s alta ser# la temperatura óptima.

INSTRUCTIVO DEMOSTRACION DEL EFECTO DEL pH Y LA TEMPERATURASOBRE LA VELOCIDAD DE LA REACCIÓN ENZIMÁTICA

Página: 2 de 13

Las mol"culas deben poseer cierta energía de activación para que puedan reaccionar $ las enzimas act0an disminu$endo la energía de activación, permitiendo que la reacción avance r#pidamente. !e puede determinar f#cilmente el efecto de la temperatura, exponiendo la enzima a diferentes temperaturas $ se mide la cantidad de actividad residual. ara estudiar el efecto de estos factores sobre una reacción enzim#tica, se debe traba)ar en condiciones de operación bien determinadas. Los otros paramentos o factores, deben permanecer constante respecto al factor determinante. ara ello se traba)ar# como sustrato almidón $ se determinara las variaciones del almidón seg0n procedimiento de identificación $ cuantificación de sustrato residual, utilizando solución iodada.

3. MATERIAL METODOS .1 /aterial 3iológico 4 (milasa

.2 /ateriales4 ipetas 5ubos de ensa$os 3a*o maría ocina el"ctrica 3alanza

. reactivos !olución buffer acetato. !olución buffer fosfato. !olución buffer carbonato. !olución de almidón al 16.


Página: 3 de 13

!olución de enzima al 16. !olución 7al .1/ Hl .8 / !olución 9odada !ol. 0prico alcalino 4.

PROCEDIMIENTO:

4.1. OBTENCION DE ENZIMA AMILASA •

• • •

En un matraz colocar saliva aproximadamente 20 -30 mL Mezclar a la misma proporción con u!er "os"ato #on una gasa o algodón proceder a $ltrar la mezcla El $ltrado corresponde a la enzima

4.2. EFECTO DEL pH SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCION DE LA AMILASA SALIVAL. A. Sist!" # I$%&'"%i($) COMPONENTES Y 1

SISTEMA *T&'+s, 2

-

%oluc& 'lmidón 1(

1&0

1&0

1&0

)u!er p* 2&+

3&0

-

-

)u!er p* ,&

-

3&0

-

)u!er p* .&0

-

-

3&0

0&+

0&+

0&+

PROCESO

%oluc& de /a#l 0&1/

Mezclar  Pre-ncuar a 3 # por + minutos& %oluc& 'milasa 0&+ (

0&+

0&+

0&+

Mezclar  Pre-ncuar a 3 # por 1+ minutos& nmediatamente de transcurrido el tiempo respectivo para cada sistema4 prepara  seguir con el siguiente sistema&


Página: 5 de 13

B. V"+/"%i($ # " "%ti0i#"# $i!ti%" p+/  s&st/"t+ /si#&") COMPONENTES Y PROCESO

B"$%+

SISTEMA *T&'+s, 1 2

-

%oluc& *#l 0&+/

5&0

5&0

5&0

5&0

'gua destilada

0&+

-

-

-

-

0&+

0&+

0&+

0&+

0&+

0&+

0&+

6e los tuo 1-3 parte ' %olucion odada

Mezclar4 oservar  anotar los resultados en cada sistema4 ien de manera cualitativa 7de acuerdo a la intensidad del color resultante84 o ien de manera cuantitativa 7leer en el lapso de 30 minutos ien el "otocolor9metro con $ltro verde4 o ien en espectro"otómetro a ,,0 nm8&

4.-. EFECTO DE " TEMPERATURA SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCION DE LA AMILASA SALIVAL. A. Sist!" # I$%&'"%i($) COMPONENTES Y PROCESO

SISTEMA *T&'+s,

%oluc& /a#l 0&2/

1 0&+

2 0&+

3 0&+

%oluc& 'milasa salival&

0&+

0&+

0&+

Mezclar  colocar los tuo por 2 minutos en: )ao de agua ;elada

%

-

-

)ao mar9a a 3 #

-

%

-

)ao mar9a ,+ #

-

-

%

1&0

1&0

1&0

%oluc& 'lmidón 1(&

ncuar por 1+ minutos a las mismas temperaturas&


Página: + de 13

nmediatamente de transcurrido el tiempo respectivo para cada sistema4 prepara  seguir con el siguiente sistema&

B. V"+/"%i($ # " "%ti0i#"# $i!ti%" p+/  s&st/"t+ /si#&")

COMPONENTES Y PROCESO

B"$%+ 1

SISTEMA *T&'+s, B"$%+ 1 2 2

-

%oluc& *#l 0&+/

5&0

5&0

5&0

5&0

5&0

'gua destilada

0&+

-

-

-

-

%oluc& 'lmidón 1(

-

0&+

-

-

-

6e los tuo 1-3 parte '

-

-

0&+

0&+

0&+

0&+

0&+

0&+

0&+

0&+

%olucion odada

Mezclar4 oservar  anotar los resultados en cada sistema4 ien de manera cualitativa 7de acuerdo a la intensidad del color resultante84 o ien de manera cuantitativa 7leer en el lapso de 30 minutos ien el "otocolor9metro con $ltro verde4 o ien en espectro"otómetro a ,,0 nm8& 5. RESULTADOS:

INDICADOR

T1 pH 4

T2 pH 3

TpH

C++/ /s&t"$t

'marillo

'marillo

'marillo

INSTRUCTIVO DEMOSTRACION DEL EFECTO DEL pH Y LA TEMPERATURASOBRE LA VELOCIDAD DE LA REACCIÓN ENZIMÁTICA P/s$%i" #

Página: , de 13

/o

/o

/o

%i

%i

%i

s&st/"t+ /si#&" *A!i#($, A%ti0i#"# "!isi%"

5.1. C&"#/+ N671) pH

5.2. C&"#/+ N672) T!p/"t&/" 6C INDICADOR

T1 76C

T2 -36C

T1776C

C++/ /s&t"$t

'marillo -

'marillo

'zulado

%i

/o

%i

/o

%i

/o

azulado

P/s$%i" # "!i#($ /si#&" A%ti0i#"# "!isi%"


Página:  de 13

6. DISCUSIONES:

En la primera experimentación -amilasa ;uo un gran error& ?a sea por los resultados

Página:  de 13

en una experimentación correcta& Lo correcto
En la segunda experimentación -amilasa se dio resultados positivos a lo esperado& ?a sea por la teor9a
7. CONCLUSIONES

INSTRUCTIVO DEMOSTRACION DEL EFECTO DEL pH Y LA TEMPERATURASOBRE LA VELOCIDAD DE LA REACCIÓN ENZIMÁTICA •

•

Página: . de 13

%e logró demostrar
8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

•

•

Propiedades generales de las enzimas& BEn l9neaC& Decuperado el 12 de setiemre del 20154 de ;ttp:FFF&monogra$as&comtraaGos-pd".00actividadenzimatica-amilasaactividad-enzimatica-amilasa&pd" (ctividad enzim#tica de la amilasa. :&n línea;. %ecuperado el 11 de setiembre del 21<, desde ttp4==mazinger.sisib.ucile.cl=repositorio=lb=ciencias>quimicas>$>farmaceuticas= scmidt2=parte2=2.tml


Página: 10 de 13

CUESTIONARIO) 1& Expli
SOLUCION DEL CUESTIONARIO SOLUCIÓN CUESTIONARIO) 1. ' valores de p* por encima o por deaGo del p* optimo4 disminue la actividad enzimática por lo
La velocidad inicial de reacción de la enzima aumentará con la temperatura ;asta

Página: 11 de 13

2.

&fecto de pH

&fecto de 5emperatura

3.

Enzima

Rango óptimo de temperatura

Rango óptimo de PH

Función

Fitasa

30 - 52°C

4.4 - 5.5

Baja el PH del mash. Ninguna otra utilidad

Beta Glucanasa

37 - 45°C

4.5 - 5.0

-

Peptidasa

45 - 57°C

4.6 - 5.2

Produe Nitr!geno li"re de #mino$idos


Página: 12 de 13

Proteasa

45 - 57°C

4.6 - 5.2

%om&e grandes &rote'nas (ue &roduen tur"iedad

Beta Amylasa

54 - 66°C

5.0 - 5.6

Produe a)*ares altamente +ermenta"les

Alpha Amylasa

6, - 75°C

5.3 - 5.,

#)*ares menos +ermenta"les

4. -

-

-

La estailidad enzimática es la medida en
5. El Punto soelActrico está de$nido como el p* en el cual las cargas positivas igualan a las cargas negativas  no existe movimiento en un campo elActrico& Las "uncionalidades de las prote9nas se ven a"ectadas cuando se aproximan al p4 deido a la atracción electroestática de los grupos con carga opuesta& Las enzimas son activadas en una zona mu restringida de p*4  presenta un punto óptimo de p* donde su actividad es maor&

8. & Jn "enómeno "9sico importante es

Página: 13 de 13

programas

Practica n2 Efecto de Ph y t en Enzimas

Recommend Documents