Práctica de Bioquimica: Factores que alteran la reaccción enzimática

FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA INTRODUCCIÓN Las enzimas son compuestos de naturaleza proteica que tienen la propiedad de ace lerar las reacciones químicas sin modificar la constante de equilibrio del sistema . Su actividad es afectada por diversos factores: • Concentración de sustrato • pH • Concentración de enzima • Temperatura • Inhibidores • Fuerza iónica, constante dieléctrica, etc. Concentración del sustrato.- A mayor concentración del sustrato, a una concentración f ija de la enzima se obtiene la velocidad máxima. Después de que se alcanza esta velo cidad, un aumento en la concentración del sustrato no tiene efecto en la velocidad de la reacción. Concentración de la enzima.- Siempre y cuando haya sustrato disponible, un aumento en la concentración de la enzima aumenta la velocidad enzimática hacia cierto límite. Temperatura.- Un incremento de 10°C duplica la velocidad de reacción, hasta ciertos límites. El calor es un factor que desnaturaliza las proteínas por lo tanto si la te mperatura se eleva demasiada, la enzima pierde su actividad. pH.- El pH óptimo de la actividad enzimática es 7, excepto las enzimas del estómago cu yo pH óptimo es ácido. Presencia de cofactores.- Muchas enzimas dependen de los cofactores, sean activa dores o coenzimas para funcionar adecuadamente. Para las enzimas que tienen cofa ctores, la concentración del cofactor debe ser igual o mayor que la concentración de la enzima para obtener una actividad catalítica máxima. OBJETIVO: Establecer los factores que modifican la actividad enzimática MÉTODO : Estudio experimental MATERIALES : Almidón. Agua destilada. Ácido clorhídrico cc. Lugol. Amilasa salival o ptialina. 4 tubos de ensayo 1 Gradilla 2 vasos de precipitado de 100 ml 1 plumón indeleble 1 par de guantes Nº 7 Material para baño maría Equipo de Espectrofotómetro Cubetas para espectrofómetro 1 Pipeta de 5 ml 1 Balanza Digital 1 Termómetro Goteros PROCEDIMIENTO Rotular y agregar en 4 tubos de ensayo lo que se encuentra detallado en el sigui ente cuadro: Control A B

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C Almidón (gr) 0,02 0,02 0,02 0,02 Agua destilada (ml) 5 5 5 5 Amilasa salival (gota) 1 1 1 1 Hcl cc (2 gotas) 0 0 2 0 Incubación (15 min) 37 °C 37 °C 37 °C 50 °C Lugol (gota) 1 1 1 1 Absorvancia (a 456 nm)

Concentración

Colocar el contenido de los tubos de ensayo a las cubetas del espectrofotómetro pa ra su respectiva lectura. Determinar la Absorbancia en el espectrofotómetro y Hallar la concentración en cada tubo. Hacer la grafica absorbancia vs concentración. CUESTIONARIO: 1. ¿Como afectan la temperatura y el pH en el mecanismo de acción enzimática?. 2. ¿Qué otros factores alteran al mecanismo de acción enzimática?.