CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO, TECNOLÓGICO, industrial y de servicios servicios No. 37
PRACTICA DE BIOQUIMICA No. 3 ENZIMAS: HIDRÓLISIS DEL ALMIDON POR AMILASA SALIVAL
Equipo: Hernández Mercado Krisna Magdalena Hernández Velásquez Fco. Javier Núñez Gastelum Blanca Valeria Meza Espinoza Lizbeth Paulina Valencia Alatorre Ariel Alfonso Maestro: María Laura Vivas Franco Materia: Bioquímica Grupo: 6AmLC Especialidad: Laboratorio Clínico
Cd. Obregón, Son. Son. 29 de Marzo del 2017
PRACTICA DE BIOQUIMICA No. 3 ENZIMAS: HIDRÓLISIS DEL ALMIDON POR AMILASA SALIVAL Objetivo El alumno demostrara que ejerce la salival el constatando la reacción con la influencia del tiempo, temperatura y pH sobre la acción de enzima • Identificar la acción de la amilasa de la saliva sobre el almidón • Identificar los productos de la acción de la amilasa sobre el almidón • Caracterizar la digestión enzimática realizada por la secreción de las glándulas
salivales
Competencia Genérica/Disciplinaria Competencias genéricas: 6.- Sustenta una postura personal sobre temas de interés y relevancia general, considerando otros puntos de vista de manera crítica y reflexiva. 8.-Participa y colabora de manera efectiva en equipos diversos.
Hipótesis: El almidón es un polisacárido, las azúcares que lo moléculas de glucosa, de carbono, hidrógeno y oxígeno.
constituyen son
La amilasa hidroliza el 2-cloro-4-nitrofenil –a- D-maltotriósido (CNPG3) a 2-cloro-4nitrofenol (CNP) y forma 2-cloro-4-nitrofenil-a-D-maltoside (CNPG2), maltotriosa (G3) y glucosa (G). Es necesario que la amilasa actúe sobre el almidón porque los animales tienen lo equivalente al almidón que es una sustancia de reserva energética que recibe el nombre de glucógeno, la cual es digerida por la amilasa con el objetivo de formar azucares simples.
Información general Definición general: Las enzimas son proteínas que efectúan una acción catalítica, es decir, favorecen el que se produzca una reacción determinada. La presencia de las enzimas dentro del cuerpo de los animales, permite que muchas reacciones puedan llevarse a
cabo bajo condiciones de temperatura constante, y un pH con poca variación. Existiendo en el cuerpo una gran cantidad de enzimas y de acorde a la práctica detallaremos de la enzima amilasa a continuación: La amilasa Es una enzima que actúa en los procesos de digestión de carbohidratos, específicamente actúa sobre el almidón, es una enzima glucolitica. Función: Es hidrolizar los enlaces glucosídicos del tipo alfa 1,4 de la fracción amilosa de la molécula de almidón. La cual actúa desdoblando el almidón hasta alfa dextrinas, y luego estas hasta maltosa (aunque predominan las alfa dextrinas), en cierto punto de la hidrólisis, se producen eritrodextrinas (llamadas así porque se tiñen de rojo si se usa lugol). Producción: principalmente en el páncreas, y en el caso del hombre y del cerdo, se produce en cantidad mucho menor en las glándulas salivales. Fuera del cerdo, el resto de los animales domésticos, únicamente producen amilasa de origen pancreático. Medios óptimos para la actividad enzimática: La acción de la amilasa se efectúa mejor a un pH cercano a neutro. Además de la diferencia en concentración, esta es otra de las causas por las que la amilasa pancreática es más activa que la salival, ya que en el estómago el pH es muy ácido, pero a nivel del intestino delgado es alcalino ligero. La temperatura que permitirá la acción de la amilasa es de 37° C. Las enzimas son proteínas que afectan una acción catalítica, es decir, favorecen el que se produzca una reacción determinada. La presencia de las enzimas dentro del cuerpo de los animales, permite que muchas reacciones puedan llevarse a cabo bajo condiciones de temperatura constante, y un pH con poca variación. Recopilación
La amilasa es una enzima que actúa en los procesos de digestión de carbohidratos, específicamente actúa sobre el almidón, e una enzima glucolitica, su función es hidrolizar los enlaces glucosidico del tipo alfa 1,4 de la fracción a de la molécula de almidón. La actúa desdoblando el almidón hasta alfa luego hasta maltosa (aunque predominan las alfa dextrinas), en cierto punto de la hidrólisis, se producen eritrodextrinas (llamadas así porque se tiñen de rojo si se usa lugol). La amilasa se produce principalmente en el páncreas, y en el caso del hombre y del cerdo, se produce en una cantidad mucho menor en las glándulas salivales, fuera del cerdo, el resto de los animales domésticos, únicamente producen amilasa de origen pancreático. En el caso del hombre, la producción de saliva diaria, puede llegar a ser de hasta 1.5 litros al día. La acción de la amilasa se efectúa mejor a un pH cercano a neutro, además de la diferencia en concentración, esta es otra de las causas por las que la amilasa pancrática es más activa que la salival, ya que en el estómago el pH es muy acido, pero a nivel del intestino delgado es alcalino ligero.
Fundamento de la práctica Hará estudiar la hidrólisis del almidón (desdoblamiento) por acción de la amilasa, se aprovechará el hecho de que lugol específicamente el yodo que contiene el lugol), se incorpora a la fracción helicoidal del almidón, dando un color azul, a medida que la hidrólisis progresa, el color azul va desapareciendo y cambia a rojizo, o café claro. La baja temperatura inhibe el proceso hasta ser capaz de detenerlo. Un pH muy acido o muy claro aIcalino, también puede inhibir el proceso
MATERIALES 2 pipetas de 5 ml 2 pipetas e 1 ml 2 de p. p. de 100 ml 2 vasos de p. p. de 250 ml 6 tubos de ensayo 13 x 100 mm 1 Baño María
REACTIVOS Solución de Lugol Saliva Sol. Almidón al 2% HCL 0.25 N NaOH 0.25 N
1 gradilla 1 termómetro 1 embudo 1 Trozo de gasa Cubos de hielo 4 Tiras indicador pH universal
Métodos aplicados. Experimental; en el que consiste en provocar el fenómeno sometido a estudio para que pueda ser observado en condiciones óptimas, además de comprobarse las características de este hecho.
Observación; en el que consiste poner atención sobre los objetos, hechos o fenómenos para limitar los juicios o resultados. Demostración; para no dejar dudas de la conclusión o principio del método y por la parte educativa explicar de manera visual el tema previsto.
Desarrollo del experimento 1. Coloque un trozo de gasa sobre el embudo y haga pasar la saliva a través de la gasa, recibiéndola en un vaso de precipitado, cuidando que no haga espuma, complete 10 ml de saliva. 2. Prepare el T5 y colóquelo a baño María a temperatura de 60 grados centígrados por 10 min. 3. Rotule 4 tubos de ensayo y proceda según el siguiente esquema:
Sol almidón Lugol Sol. HCl
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
Tubo 5
2 ml
2 ml
2 ml
2 ml
2 ml
3 Gotas
3 Gotas
3 Gotas
3 Gotas
3 Gotas
2 ml
2 ml
2 ml
Hielo
80°/min
1 ml
Sol. NaOH Saliva T°
1 ml 2 ml
2 ml
4. Introduzca una tira indicadora de pH en cada tubo, anote los valores obtenidos.
5. Coloque los tubos 1, 2 y 3 en el baño María a 37 grados centígrados, el tubo 4 colóquelo en un vaso de precipitados con hielo picado. 6. Agite los tubos ocasionalmente y tome el tiempo necesario para que el color negro o azul desaparezca. Anote en que tubos desaparece el color violeta, y en cuáles no.
Resultados esperados El tubo 4 no debe cambiar, ya que la baja temperatura inhibe el desarrollo de la hidrólisis. Quizás se manifieste un poco de hidrólisis, que es mientras la temperatura no baja lo suficiente para inhibir a la amilasa. El tubo 3, el cual no tiene ni acido ni alcalino, y que además está a una temperatura adecuada, si el que más rápido cambia. En los tubos 1 (con pH muy acido) y tubo 2 (con pH muy alcalino), la reacción puede inhibirse totalmente, o llevarse a cabo solo un hidrolisis inicial. La velocidad a la que se manifieste la reacción de hidrólisis, es variable, depende de la concentración de la enzima en la saliva, y esta a su vez está muy ligada al tipo de saliva secretada (muy acuosa o mucosa), lo cual a la vez se relaciona con el hecho de ingestión de alimentos o ayuno antes de tomas la muestra de saliva.
Cálculos
Resultados Tubo
pH
Hidrolisis
Análisis
1
3
Párcialmente
Este es un tubo muy acido por lo que es muy poco probable inhibir la hidrolisis
2
8
Total
Este es un tubo muy alcalino, por lo que la reacción se inhibe por completo.
3
6
Párcialmente
Este tubo no debe de ser ni acido, ni alcalino por lo que puede observarse una probabilidad de inhibición.
4
6
No hodrilizo
Esta no inhibe el desarrollo de la hidrólisis por la baja temperatura a la que fue expuesta el tubo.
5
7
Total
Ademas de que este tuvo es alcalino inhibio por completo, podiendo concluir que todavia a 60°C la amilasa puede reaccionar en la saliva.
Conclusiones individuales. Hernández Mercado Krisna Magdalena: En la práctica se quiso buscar una enzima producida en las glándulas que producen la saliva, en ella se pretende buscar la amilasa, que es la enzima que se encarga de hidrolizar alimentos con la función de que se obtenga energía en ciertos organismos esto se hace por medio del hidrólisis formando azucares del
almidón o glucógeno, para posteriormente el organismo siga con sus funciones normales. La práctica fue hecha para conseguir la obtención de esta enzima y por medio de reactivos ver la hidrolización que se formaría en ella.
Hernández Velásquez Fco. Javier: Gracias a la práctica se logra comprender de manera experimental en el laboratorio sobre mecanismo de acción que tiene en el ser humano la amilasa salival, actuando en su digestión específicamente sobre el almidón. A lo largo de nuestra vida, ingerimos alimentos muy fríos o muy calientes, a veces muy ácidos o alcalinos, en la práctica se evidencia como estos repercuten para que la enzima cumpla con su función de hidrolizar. Es importante remarcar que en el ser humano la amilasa es producida por las glándulas salivales.
Meza Espinoza Lizbeth Paulina: En esta práctica se observó la acción que ejerce la amilasa salival en el almidón experimentando con la influencia del tiempo, temperatura y pH sobre la enzima, la cual en el cuerpo es la que favorece a que se produzca una reacción determinada. En este caso se trabajó con la amilasa la cual es la enzima que participa en los procesos de digestión de carbohidratos. Al observarse los resultados el tubo 4 no cambió debido a la temperatura; el tubo 3 cambio muy rápido; el tubo 2 y el 1 se inhibió la hidrolisis. Fue una práctica interesante ya que gracias a ésta es posible tener una idea de qué ocurre cuando se consumen alimentos con cierta acidez o alcalinidad, o a cierta temperatura.
Nuñez Gastélum Blanca Valeria La amilasa es una enzima que se produce en glándulas salivales (sobre todo en las glándulas parótidas), es de suma importancia en el proceso de degradación del almidón, se encarga de hidrolizar el alimento para romper los enlaces entre las moléculas de glucosa que constituyen a este polisacárido formando azúcares simples y gracias a esto los animales que consumen alimentos que contienen almidón pueden obtener energía y realizar sus actividades cotidianas. La amilasa es un enzima hidrolasa ya que cataliza la hidrolisis de los enlaces, tiene la función de digerir el glucógeno y el almidón para formar azúcares simples, se produce principalmente en las glándulas salivares (sobre todo en las glándulas parótidas) y en el páncreas.
Valencia Alatorre Ariel Alfonso: La función de la amilasa consiste en degradar el almidón para formar azúcares simples, la amilasa salival se encuentra en las saliva, cuando entra en contacto
con el almidón que es un polisacárido lo desdobla en unidades de monosacáridos llamados glucosa; en ese caso la amilasa actúa sobre el polisacárido que es el almidón hidrolizando el enlace O-glicosídico, por lo que el almidón se termina por transformarse en unidades de glucosa. Sin la amilasa las largas cadenas de azucares que conforman los almidones no serían absorbidas por los animales y se desecharían del cuerpo de estos sin brindar la energía que la glucosa del almidón proporcionan. Por lo que en los resultados se distingue que factores hacen que la amilasa hidrolice o degrade el almidón y cuales no inhiban la hidrólisis.
Bibliografía Vivas Franco ML, “Manual de Bioquímica” Consultado el día 21 de marzo de 2017. Lizbeth Dámazo Gálvez,
2014, “Hidrolisis de almidón por amilasa salival”
consultado el día 25 de marzo del 2017 en: https://es.slideshare.net/lizbethdamazogalvez/hidrlisis-del-almidn-por-la-amilasasalival Karen Aguilar, 2010 “Acción de amilasa”, biología, consultado el día 25 de marzo
del 2017 en: http://karenaguilar06.blogspot.mx/2010/11/accion-de-la-amilaso-sobre-elalmidon.html
Lista de cotejo P3: Tema Enzimas: ACTIVIDAD DE LA AMILASA SALIVAL Nombres:
Equipo:
Grupo: 6AmLC
Fecha: 29/03/17
Hernández Mercado Hernández Velásquez Meza Espinoza Nuñez Gastelum Valencia Alatorre REPORTE DE PRACTICA
EXTENSIÓN Espacio sencillo, tamaño 12 Arial o Calibri
Portada (Nombre de la Institución, Nombre y número de la práctica, número de equipo, nombre Una cuartilla de los participantes únicamente, grupo, nombre del Instructor, fecha y lugar ) Max. Media cuartilla Objetivo (que, como, donde o para que) Max. Media cuartilla Competencia Genérica o Disciplinar Marco Teórico Investigación Bibliográfica sobre el tema de la práctica (mínimo 3 referencias bibliográficas reportadas en el escrito). Es decir, cada párrafo que consultes debe referenciarse de cualquiera de estas Min Una cuartilla dos maneras: Max. Dos Cuartilla a) Antes de punto y aparte (Apellido Autor, año). b) Después del punto y aparte colocar el número de la bibliografía entre paréntesis. Material y reactivos. Max. una cuartilla Método/s (separado y explícito) Lo necesario Cálculos para hacer las sustancias Análisis de Resultados (de cada experimento) Se deben apoyar en (fotos, esquemas, mapas conceptuales, tablas clasificatorias, dibujo), pero Lo necesario debe haber un análisis de lo observado en la práctica. Conclusiones de cada miembro del equipo. Debe hacerse de tal manera que se note y confirme Max. media cuartilla que se entendió lo realizado en la práctica, se apoya c/u tanto en el marco teórico, como en el objetivo y los resultados esperados. Bibliografía (completa) Consultar la manera de hacer elaborar la Bibliografía al final de su manual. Total
VALOR 0.5 1 0.5
1
1 1 2
2
1 10
