PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO Pesquisa de Anticorpos Anticorpos Irregulares Irregulares (PAI). (PAI).
SETOR: LAB. DE IMUNOHEMATOLOGIA NÙMERO: N° 003
1 - SINONIMO - Coombs indireto, teste indireto de antiglobinas. 2 - INTRODUÇÃO INTRODUÇÃO - A pesquisa de anticorpos irregulares, demonstra anticorpos antieritrocitários irregulares, livres no soro ou plasma de doadores e pacientes, que possam provocar reações pós-transfusionais. Deve ser realizada também no soro de gestantes, como forma de prevenção da doença hemolítica do recém nascido. São utilizadas suspensões de hemácias de triagem do grupo sanguíneo “O”, previamente fenotipadas e que apresentam a maioria dos antígenos de importância na clínica transfusional. 3 - EXECUTANTES: EXECUTANTES: - Técnico de laboratório. 4 - INDICAÇÕES MÉDICA DO EXAME - Exame útil no pesquisa de anticorpos contra proteínas de membrana de eritrócitos (em especial D), em exames pré-transfusionais ou pré-natais. 5 - AMOSTRA - Soro. Plasma obtido do sangue total c/ EDTA. Volume mínimo de 0,5 mL. 6 - METODOLOGIA METODOLOGIA - Reação de aglutinação 7 - PREPARO DO PACIENTE - Jejum obrigatório de 8 horas. 8 - MATERIAIS NECESSÁRIOS: NECESSÁRIOS: - Estante de metal porta tubos - Pipetas 100μl e 2,0mL - Tubos de ensaio 120 x 100 mm - Solução salina à 0,9% - Soro Soro de Coombs 9 - EQUIPAMENTOS EQUIPAMENTOS - Centrifuga 10 - DESCRIÇÃO DO PROCEDIMENTO: a) Em um tubo de ensaio adicionar 100 µL de soro da paciente Rh negativo a ser testado, b) Adiciona Adicionarr em seguida seguida 100 µL de hemácias O Rh positivas; c) Incubar por 5 minutos a temperatura ambiente; d) Encher o tubo com aproximadamente 2,0mL de solução salina para retirar excesso de anticorpos não ligados; e) Centrifugar o tubo a 1.000rpm por 2 minutos à temperatura ambiente; f) Desprezar o sobrenadante na pia com cuidado para não jogar fora o botão de hemácias; g) Adicionar em seguida 100 µL de anti-IgG humana (soro de Coombs); h) Centrifugar o tubo a 1.000rpm por 2 minutos à temperatura ambiente; i) Para visualizar com maior precisão se houve aglutinação, derramar o sangue centrifugado em uma lâmina de microscópio. 11 - CÁLCULOS - Não se aplica 12 - RESULTADOS - Se aglutinar é sinal que a paciente tem anticorpos anti-D classe IgG em seu soro que estão de forma perigosa perigosa atrave atravessand ssandoo a placenta placenta e se ligando ligando às hemácia hemáciass Rh positivas positivas do bebê promovendo promovendo sua lise lise e fagocitose. Se não aglutinar, é porque não houve sensibilização da mãe com este antígeno em gestações ou transfusões anteriores. VERIFICADO POR: APROVADO POR: Página 1 de 3
PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO Pesquisa de Anticorpos Irregulares (PAI).
SETOR: LAB. DE IMUNOHEMATOLOGIA NÙMERO: N° 003
13 - AÇÕES CORRETIVAS EM CASO DE NÃO CONFORMIDADES - O soro de Coombs: verificar a sua potência, pois pode estar diminuída para a captação do anticorpo; além disso, poderá estar inespecífico, contendo uma contaminação para outro anticorpo. Isto acarreta um falso positivo, dependo o anticorpo contaminante. 14 - LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO - Resultados FALSO-NEGATIVOS podem ocorrer: Quando as hemácias não forem apropriadamente lavadas ou globulinas humanas estiverem presentes na vidraria, resultando numa neutralização das antiglobulinas humanas. Quando os anticorpos se eluem das hemácias durante incubação inadequada, não permitindo uma apropriada sensibilização dos glóbulos. Quando hemácias e/ou reagente não são adequadamente conservados na temperatura indicada, perdendo a reatividade. Quando o Soro AntiIgG (Soro de Coombs) foi omitido durante o teste. - Resultados FALSO-POSITIVOS podem ocorrer: Quando hemácias com teste de Coombs Direto positivo são usadas durante o procedimento técnico do teste de Coombs Indireto. Quando são utilizadas amostras de sangue contaminado. Quando for realizada uma centrifugação excessiva. Quando o soro, as hemácias e o Soro Anti-IgG(Soro de Coombs) estiverem excessivamente frios, detectando a presença de aglutininas frias. 15- SIGNIFICADO CLÍNICO - Anticorpos ditos irregulares são aqueles formados por imunização devido a transfusões, gestação ou ingestão constante de material imunogênico, sendo de classe IgG ou IgM. É um teste de triagem onde em casos de pesquisa positiva, deve-se identificar a classe e especificidade do anticorpo. O teste emprega um KIT contendo no mínimo duas suspensões de hemácias O (hemácias de triagem), as quais possuem a maioria dos antígenos estudados em rotina de banco de sangue. Havendo presença de anticorpos irregulares no soro a ser testado, estes reagiram com os antígenos correspondentes, presentes nas hemácias de triagem. Anticorpos da classe IgM são normalmente detectados em meio salino e temperatura ambiente, enquanto que anticorpos da classe IgG são detectados através da utilização do soro antiglobulina humana após a incubação a 37ºC. Quanto às enzimas proteolíticas, sabe-se que modificam os antígenos presentes na membrana eritrocitária, podendo retirá-los ou tornálos aglutináveis em suspensões salinas. Os antígenos sensíveis à ação enzimática são os dos sistemas MNS Duffy Xga. Os anticorpos cuja reatividade é aumentada pela ação de enzimas são os dos sistemas Rh, Kidd, Lewis e P. A ação enzimática inclui ainda modificações nas propriedades físicas da suspensão de hemácias, podendo causar auto-aglutinação sem presença de processos auto-imunes. As técnicas enzimáticas podem ser associadas ao soro anti-gama globulina humana (soro anti IgG) e podem ser utilizadas em técnicas de 1 ou 2 estágios. Na primeira adiciona-se a enzima diretamente à mistura soro + hemácias, sendo mais bem indicada para testes de triagem enquanto que no segundo procedimento as hemácias são previamente tratadas com enzimas e depois misturadas ao soro teste, sendo mais bem indicado para identificação de anticorpos. As principais enzimas utilizadas em testes imunohematológicos são: BROMELINA (abacaxi), PAPAINA (mamão), TRIPSINA (estômago de porco) e FICINA (ficus). As alíquotas de solução enzimáticas devem ser mantidas em freezer, devendo-se desprezá-las após o descongelamento e utilização. 16 - REFERÊNCIA
AGÊNCIA TRANSFUSIONAL - HOSPITAL UNIVERSITÁRIO JÚLIO MULLER Procedimento operacional padrão nas provas pré – transfunsionais. Disponivel em:< http://www.ufmt.br/ufmt/site/userfiles/file/hujm/Comissoes%20e%20Comites/POP%20-%20Provas %20pr%C3%A9%20-%20transfusionais.pdf >. Acessado em 02/07/2012. VERIFICADO POR: APROVADO POR:
Página 2 de 3
PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO Pesquisa de Anticorpos Irregulares (PAI).
SETOR: LAB. DE IMUNOHEMATOLOGIA NÙMERO: N° 003
HEMOCENTRO DE CAMPINAS. Manual básico de orientações transfunsionais. Disponivel em:< http://www.hemocentro.unicamp.br/pdfs/manualtecnicotransfusional-2010.pdf >. Acessado em 02/07/2012. LABORATORIO DE ANALISES CLINICAS SANTA CLARA. Manual de exames. Disponivel em:< http://www.laboratoriosantaclara.com/manual.aspx>. Acessado em 02/07/2012. Laboratório de Imuno-hematologia. Disponivel em:. Acessado em 02/07/2012. Normas e rotinas operacionais do laboratório de análises clínicas. Disponivel em:< http://pt.scribd.com/doc/28239025/Normas-e-Rotinas-Operacionais-Do>. Acessado em 02/07/2012. ELABORADO POR: NOVA VERSÃO POR:
VERSÃO: 1
DATA: 02/07/2012 DATA: 02/07/2012
VERIFICADO POR: APROVADO POR:
Página 3 de 3
