penggunaan metode LC.docx

 penggunaan metode LC-MS pada penentuan penentuan alkaloid daun mindi

Liquid Liquid Chromatograp Chromatography hy Mass

Spectrometry Spectrometry (LC-MS) (LC-MS) adalah teknik teknik analisis analisis

yang

mengga menggabun bungka gkan n kemamp kemampuan uan pemisah pemisahan an fisik fisik dari dari kromat kromatogr ografi afi cair cair dengan dengan spesifi spesifisita sitass deteksi spektrometri spektrometri massa. Kromatograf Kromatografii cair memisahkan memisahkan komponenkomponen-komp komponen onen sampel dan dan kemu kemudi dian an ion ion

berm bermua uata tan n

dide didete teks ksii

oleh oleh spek spektr trom omete eterr

diguna digunakan kan untuk untuk memberi memberikan kan inform informasi asi tentan tentang g berat berat

massa massa.. ata ata LC-M LC-MS S dapat dapat

moleku molekul! l! struktu struktur! r! identi identitas tas dan

kuantitas komponen sampel tertentu ("gilent #$$%). Keuntungan Keuntungan dari LC-MS yaitu

dapat menganalisis menganalisis lebih

luas berbagai berbagai komponen! komponen!

seperti seperti senya&a senya&a termal termal labil! labil! polarit polaritas as tinggi tinggi atau bermas bermassa sa moleku molekull tinggi tinggi!! bahkan bahkan 'uga 'uga  protein. Senya&a dipisahkan atas dasar interaksi rela tif dengan lapisan kimia partikel-partikel (fase (fase diam) diam) dan elusi elusi pelaru pelarutt melalui melalui kolom kolom (fase (fase gerak) gerak).. Kompon Komponen en elusi elusi dari dari kolom kolom kromatografi kemudian diteruskan ke spektrometer massa melalui antarmuka khusus (ates **+).

instrumentasi LC-MS a

,LC

Ker'a

,LC

pada

prinsipnya

adalah

pemisahan

analit-analit

berdasarkan

kepolarannya! alatnya terdiri atas kolom (sebagai fasa diam) dan larutan tertentu sebagai fasa geraknya. ang paling membedakan ,LC dengan kromatografi lainnya adalah pada ,LC digunakan tekanan tinggi untuk mendorong fasa gerak. Campuran analit akan terpisah  berdasarkan kepolarannya dan kecepatannya untuk sampai ke detektor (&aktu retensinya) akan berbeda! hal ini akan teramati pada spektrum yang puncak-puncaknya terpisah (,ima&an *#*). Keuntungan analisis menggunakan KCK/ adalah membutuhkan &aktu analisis yang relatif cepat! daya

pisah baik!

sensitif

hingga

kadar

nanogram

0mililiter!

 pemilihan kolom dan eluen ber1ariasi! kolom dapat dipakai kembali! dapat digunakan untuk  menganalisis senya&a dengan molekul besar dan kecil! dapat menganalisis sampel yang termolabil karena dilakukan pada suhu kamar! dan dapat menganalisis campuran yang mempunya titik didih sangat tinggi (,armita! **2). LANGKAH KERJA KCKT &adah fasa gerak berisi fase gerak yang akan memisahkan komponen sampel! adapun fase gerak yang digunakan adalah *!#3 as. format dalam air (fasa ") dan *!# 3 asam format dalam asetanitril (fase 4)! isolat alkaloid merupakan senya&a polar sehingga KCK/ yang digunakan adalah KCK/ fase terbalik dimana fasa diam yang digunakan bersifat polar dan fase gerak yang digunakan bersifat non polar.5mumnya fasa gerak yang digunakan dalam KCK/ fasa terbalik

metanol atau asetonitril dalam •

adalah

kombinasi

air dengan berbagai perbandingan.

ompa

ompa yang cocok digunakan untuk KCK/ adalah pompa yang mempunyai sebagaimana

syarat &adah pelarut yakni6 pompa harus inert terhadap fase gerak.

syarat 4ahan

yang umum dipakai untuk pompa adalah gelas! ba'a tahan karat! /eflon! dan batu nilam. ompa yang digunakan sebaiknya mampu memberikan tekanan sampai +*** psi dan mampu mengalirkan fase gerak dengan kecepatan alir 7 ml0menit. 5ntuk tu'uan

preparatif! pompa

yang digunakan harus mampu mengalirkan fase gerak dengan kecepatan * ml0menit. •

Sumber ion

Sumber ion yang digunakan "C8! alam "C8! melalui sebuah pemanas (umumnya

bersuhu

eluen

+*9C- :** 9C)!

LC

disemprotkan

proses

berlangsung

pada tekanan atmosfer. 5dara panas akan menguapkan

cairan. ;ase gas pelarut yang

dihasilkan akan terionisasi oleh elektron dari 'arum korona. 8on-ion pelarut kemudian mentransfer muatan pada molekul analit melalui reaksi kimia (ionisasi kimia). 8on-ion analit mele&ati pipa kapiler pengambilan sampel yang dilan'utkan

ke dalam analisis

massa.adapun kondisi dari sumber ion "C8 arus yang digunakan :<"! suhu penguapan +*oC! suhu kapiler 7**oC.

•

analyser

"nalyser massa massa

yang

digunakan

adalah

=uadrupole!

massa quadrupole terdiri dari empat batang paralel diatur

dalam

Sebuah persegi.

diarahkan ke bagian tengah persegi. /egangan yang dialirkan pada batang  bidang elektromagnetik. 4idang ini filter pada &aktu tertentu.

menentukan

=uadrupoles

rasio massa

cenderung merupakan

 paling sederhana dan paling murah.

•

etektor  detektor digunakan untuk mendeteksi senya&a

adapun proses atau langkah-langkah

Proses kerja

yang analisis

analisis 8on analit

menghasilkan dapat mele&ati massa yang

sampel isolat alkaoid disuntikkan sebanyak 
secara

menu'u kolom katup teflon yang

langsung ke dalam

menggunakan

fase gerak

yang mengalir

di ba&ah tekanan

alat penyuntik yang terbuat dari tembaga tahan karat dan

dilengkapi dengan keluk sampel (sample loop) internal

atau eksternal.

enyuntik ini mudah digunakan untuk otomatisasi dan sering digunakan untuk autosampler  "nalyte bersama dengan eluent dari syringe pump atau LC masuk ke dalam cappilary. i dalam kappilary terdapat anoda (kutup negatif) pada taylor cone dan katoda (kutup negatif) didekat masukkan analyte dan eluent. Kutup ini berfungsi agar muatan yang berkumpul pada taylor cone adalah muatan positif sehingga nantinya saat ter'adi penyemprotan dan terbentuk  droplet (tetes > tetes) tidak bergabung > gabung men'adi droplet yang lebih besar lagi. . "nalylet dan sol1en(eluent) di semprotkan (spray) melalui taylor cone. "kan terbentuk droplet > droplet dimana droplet > droplet itu akan mengalami tahap e1aporasi sol1en untuk mengurangi sol1en yang menempel di analyte. Karena suatu saat ! apabila ter'adi e1aporasi secara terus menerus maka sol1en yang meliputi analyte terkungkung dalam muatan positif yang berlebih! dalam bahasa inggris tahap seperti ini disebut the ?rayleigh@ limit is reached! maka akan ter'adi eAplosion yang disebut coulombic eAplosion dimana akan ter'adi pemecahan droplet (tetesan) tadi. "da beberapa kemungkinan yang ter'adi pada droplet > droplet tersebut .  proses setelah analit dipisahkan dari roplet yang mengalami coulombic eAsploison tersebut akan masuk ke dalam cone dimana di sisi kiri dan kanannya sudah mengalir gas Bitrogen (B). as ini berfungsi agar analyte yang ter'adi tadi stabil dalam bentuknya dan tidak terganggu oleh pengaruh gas oksigen. roplet masuk ke dalam cappilary transfer lalu akan di analisis melalui mass spectrometer.