Pembahasn Salmonella Shigella

Pada pratikum kali ini dilakukan pemeriksaan Salmonella dan Shigella. Dalam melakukan uji tersebut, dilakukan tahapan-tahapan untuk pemeriksaan ini , yaitu :

1.1 Preparasi Sampel

Pada praktikum kali ini, digunakan satu macam sampel, yaitu sampel padat saja. Sampel padat yang digunakan adalah kembang Gula yang di beli di Puputan. Untuk sampel padat, seharusnya digerus terlebih dahulu dengan mortal dan pestle steril. Namun, karena sampel gampang larut dalam air maka langsung saja dilarutkan dengan aquadest steril. Sampel tersebut harus ditimbang 5 g terlebih dahulu yang kemudian dilarutkan dengan 45 ml aquades steril. Dalam proses pelarutan ini harus dilakukan dengan cara yang aseptis. Agar tidak ada bakteri-bakteri dari luar yang ikut masuk ke sampel tersebut. 1.2 Homogenisasi

Homogenisasi atau pemerataan sangat penting dilakukan untuk memperoleh hasil  pengamatan yang baik. Homogenisasi dilakukan dengan cara menggoyanggoyangkan sampel pada erlenmeyer hingga merata. Penghomogenan yang baik akan didapatkan penyebaran bakteri secara merata dan maksimal. Homogenisasi dilakukan dalam setiap tahap dalam praktikum pemeriksaan Pemeriksaan Salmonella dan Shigella.

1.3 Pengkayaan (Penanaman pada media SCB)

Penanaman sampel pada media SCB dilakukan dengan cara pemipetan dari sampel ke media SCB. Hal yang perlu diperhatikan dalam melakukan penanaman sampel pada media adalah: 

Semua alat dan bahan yang akan digunakan harus dalam keadaan steril, agar semua alat tidak terkotaminasi oleh bakteri yang ada di luar alat misalnya udara, sehingga dapat mempengaruhi hasil pengamatan  pemeriksaan Salmonella dan Shigella.



Dalam memipet dan memindahkan sampel seharusnya diperhatikan :

-

Sebelum dan sesudah memipet, pipet difiksasi terlebih dahulu untuk menghindari adanya kontaminasi dari bakteri yang menempel pada  pipet.

-

Ketika akan memindahkan hasil pengenceran sampel ke dalam tabung,  pipet tidak boleh menyentuh media yang ada di dalam tabung. Sampel dipindahkan dari pipet dengan cara melewati dinding tabung.

-

Pipet tidak boleh menyentuh atau terlalu dekat dengan api bunsen, hal ini disebabkan karena kuman pada makanan dan minuman akan mati  jika terlalu dekat dengan sumber api.

-

Pipet diusahakan agar tidak menyentuh meja atau terkontaminasi sebelum maupun setelah digunakan (terutama ujung pipet).

-

Pipet yang masih steril sebaiknya dibuka dari kertas pembungkusnya saat akan digunakan, untuk mengindari kontaminasi dari kumankuman di dalam ruangan tempat praktikum.



Semua kegiatan dalam melakukan inokulasi harus selalu dilakukan secara aseptis atau harus berada dalam daerah steril yaitu di dekat api bunsen (dengan catatan tidak terlalu dekat dan tidak terlalu jauh).



Setelah sampel di masukkan ke dalam media, tabung digoyang-goyangkan agar sampel tersebar merata pada media.

Dalam isolasi ini, sampel padat dituang pada media Selenite Cystine Broth. Media Selenite Cystine  Broth ini merupakan salah satu media yang berdasarkan fungsinya merupakan media encrichment yaitu media yang dapat menunjang  pertumbuhan bakteri yang tidak dapat tumbuh pada media biasa karena memerlukan  beberapa nutrisi pengaya yang dapat menyokong pertumbuhannya. Media ini tergolong enrichment eksklusif media yaitu media penyubur eksklusif untuk bakteri gram negatif seperti Salmonella  sp. Media ini kemudian diinkubasi pada inkubator o

 pada suhu 37 C selama 1 X 24 jam untuk memberikan kesempatan kepada bakteri memanfaatkan media untuk pertumbuhannya. Pada isolasi media ini ternyata dihasilkan media yang positif terdapat bakteri karena dapat dilihat dari kejernihan media tersebut. Warna media sebelum diinubasi

adalah merah muda bening setelah diinkubasi menjadi merah muda keruh. Karena hasil yang positif ini maka dilakukan inokulasi ke media SSA dan MCA agar dapat menegtahui bakteri apa saja yang tumbuh. 1.4 Inokulasi (Penanaman Pada Media SSA dan MCA)

Teknik inokulasi atau penanaman bakteri merupakan kegiatan memindahkan  bakteri dari medium yang lama ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian yang sangat tinggi. Media yang baru harus mengandung nutrisi agar bakteri dapat tumbuh dengan baik. Pada uji ini dilakukan penanaman pada media MCA dan SSA . Media SCB diambil 1  –  2 ose jarum, lalu digoreskan pada media MCA dan SSA. Hal-hal yang perlu diperhatikan dalam melakukan penanaman bakteri ini adalah: 

Ose yang digunakan harus dalam keadaan steril, ose dibakar terlebih dahulu pada api bunsen.



Ose yang dimasukkan ke dalam media tidak dalam keadaan masih panas karena jika osenya masih panas dapat membunuh bakteri yang ada dalam sampel.



Semua kegiatan dalam melakukan inokulasi harus selalu dilakukan secara aseptis atau harus berada dalam daerah steril yaitu di dekat api bunsen (dengan catatan tiidak terlalu dekat dan tidak terlalu jauh.



Setelah sampel di masukkan ke dalam media, tabung digoyang-goyangkan agar sampel tersebar merata pada media. Pada inokuasi ini dilakukan penginokulasian kembali pada media

Salmonella Shigella Agar (SSA) dan  Mac Conkey Agar (MCA). Media  Mac Conkey Agar (MCA) merupakan media selektif deferensial bagi mikroba. Media ini menghambat pertumbuhan bakteri gram positif dengan adanya garam empedu yang akan membentuk kristal violet. Bakteri gram negatif yang tumbuh dapat dibedakan dalam kemampuannya memfermentasikan laktosa. Pertumbuhan koloni bakteri Salmonella pada Mac Conkey Agar   (MCA) adalah serupa dengan media yaitu berwarna merah bata. Sedangkan media Salmonella Shigella Agar

(SSA) adalah media yang digunakan untuk tumbuh kembang bakteri Salmonella dan Shigella. Media ini tergolong media selektif untuk pengisolasian bakteri Salmonella dan Shigella. Media ini mengandung bile salt, brilliant green, sitrat, dan thiosulfate yang bersifat selektif untuk mencegah pertumbuhan bakteri gram  positif, beberapa gram negatif lainnya, dan bakteri coliform. sehingga diharapkan  bakteri yang tumbuh hanya Salmonella dan Shigella. Pertumbuhan bakteri Salmonella  pada media ini muncul sebagai koloni tidak berwarna (bening) dan  jika terjadi produksi H2S oleh spesies Salmonella mengubah pusat koloni menjadi  berwarna hitam. Setelah bakteri dipidahkan pada media MCA dan SSA diinkubasi o

 pada suhu 37 C untuk mentukan adannya bakteri Salmonella dan Shigella selama 1 X 24 jam. Pada Inokulasi ini diperoleh hasil yang postif pada kedua media ( MCA dan SSA). Pada media SSa di tumbuhi koloni berwarna merah muda ( pink ) yang tumbuh merata di sekitar goresan. Koloni tersebut menonjol pada permukaan media. Berdasarkan cirri-ciri tersebut diperkirakan koloni yang tumbuh dalam E.coli. Sedangkan pada media SSA ditumbuhi koloni berwarna kuning dan koloni tersebut dapat merubah warna media dari yang berwarna merah menjadi warna kuning. Koloni tersebut juga menonjol pada permukaan media dan tumbuh  bergerombol pada sekitar goresan sehingga tidak dapat dilihat jelas bentuk koloni yang tumbuh. Dari ciri-ciri koloni yang tumbuh pada media tersebut diperkirakan yang tumbuh adalah Salmonella. Karena menurut Keputusan Badan POM No. HK.00.06.1.52.4011 Tahun 2009 batas maksimum jumlah Salmonella dan Shigella adalah 0/25 gram sampel.