ANEX06 E TO TO D
DE
M EM EM BR BR AN AN A F I
R AN AN T
1. Fundamento
if re membrana dire direct ct de lo coll collfo forr rrne ne
tu tota totalc lc
ti f ec ec al al e p re re s n te te s e n u n
t ra ra ve ve s u n frltro 105a c a d ia ia me me tr tr o d e p or or o n if if or or rn rn e d e d a e n l a s up up er er fi fi ei ei e d e J a m e b ra ra n f iill tr tr an an te te . ie p ro ro pi pi ad ad a c o m e i o d e c ul ul ti ti v s el el ec ec ti ti v loni lonias as cara caract cter eris istic ticas as de colli collior orme me tota totale le Capitulo
fi u es es tr tr a
ag
lu . 4 m ; l a b ac ac te te ri ri a s o r et et en en i C ua ua nd nd o [ a m em em br br a qu co te l, i f r en en ci ci al al , s e e sa sa rr rr ol ol la la n o feca fecale les, s, cuyo cuyo recu recuen ento to se pued pued
s. mtrada
Como Como el area area de filt filtra raci cion on es rela relati tiva varn rnen ente te pequ pequen ena, a, solo solo pued pued perm permit itir ir el crec crecim imie ient nt de un nume numero ro lirn lirnit itad ad de colo coloni nias as EInumer EInumer opti optimo mo es entr entr 20 8 0 c oi oi on on ia ia s c o u n a xi xi m d e 2 0 0 . Sise supe supera ra esta esta cifr cifra, a, pued pueden en desa desarr rroollars llars colo coloni nias as atip atipic icas as mu pequ pequef efia ias, s, desarr desarroll ollars ars coloni colonias as superp superpues uestas tas p ue ue d i nh nh ib ib ir ir s e l c r c im im ie ie nt nt o d e i d l a s ob ob r p o l ac ac io io n e le le cc cc io io n e l la ra le ie il tracion: T ip ip o l i
Ag
V ol ol um um e1 e1 l d e l a m ue ue st st r
tI£''''
t ra ra ta ta d
b u n a c al al id id a no trat tratad ad Agu superf superfici icial al
f il il lr lr a ( ml ml )
50-100
potabl bl Ag1l8 pota
IO-S0 I-to
Si no se cono conoce ce el orig origen en de la mucs mucstr tr Ysu prob probab able le cont conten enid id bact bacter eria iano no es inci incier erto to debe debera ra filt filtra rars rs difc difcre rent ntes es volu volume mene ne de agua agua qu difi difier eran an entr entr tu is lu tr l, colo coloca cars rs po filt filtro ro ante ante de empe empeza za la filt filtra raci cion on 11
120
U lA S
AR
LACALOA
DE
A GU A
OT BL
3. Equlpo Ademas de equipo basico lo utensilios de vidrio utilizados en el metodo TM (vease el Anex 5), se neeesita lo siguientes aparatos para i1evara cabo l a t e n ie a M F ( a A sp ir ad o a g a , b om b ad l ec tr i cualquier dispositiv a de cu ad o a r r od uc i a ci o a rc ia l d e p o 10 la sio atmosferica. ( b F r s c E rl e m ey e d e l it r ( co n r az o l at er al ) e q i pa d o n u n t ub o d e o m s uf ic ie nt em en t r ue s p ar a u e e l t ub a n o s e r om p c ua n s e a pl i qu el vacio. (c Soport delfiltro, f or m d o p o u n a s soport poroso para el filtro te ta to io j et a op tr lt forma separada esterilizada en la autoclav durant po 10 menos 15 minuto 21 C. (d Discos platillo Petr de vidrio pkistico, 15 mm (tambie puede utilizars lata para ungUento de mismo tamafio). (e Membrana fikranses, poro de 0.45 I'm. So mu convenientes la membrana previament esterilizadas e m a q e ta d i n i vi du al me nt e i n e m a rg o t am bi e s e p ue d utilizar membrana filtrantes no esterilizadas, la qu debe se envuelta en p a u et e p a e l e n n ti me r de ua ( de pe n i en d el nu er m ue s t ra s a gu a s e a n l iz ad as ) s e I e u e e st er il iz a e n l a a ut oc la v secar m e i an t c or t r a i d el ap r. (I Almohadillas absorbente nutrientes f 1I tr a t e d e a pr o i ma d m en t m m d e e sp e o r tienen el mism diametro u e l a membranas filtrantes. (g) Pinzas c o u n a mp li fi ea ci 6 para examinar efectuar el recuento de la colonias en la membrana filtrantes
ANEX06
st ue r es ul ta r o c r ac ti c a r u n I a o ra to ri o p e u ef io . P o tanto, serecomlend el us de medics deshidratados, Lo medics pueden prepararse utilizarsele junt ca la almohadillas de absorci6 de nutrlentes e n f or m p la ca s d e g a s 6l i a s c al d u e e n s e s ol id i ficado mediante la .2-1.50/0 de agar ante de hervido. manera de ejempl se describe continuaci6n e1 procedimient para prep ar a e q e na s c an ti d d e m ed io s ca M- nd cald FM de cald MFC. Disuelv 2. m e t o d e u lt i e sh i r at ad o e n 5 0 m l d e a gU R destilada agregue de alcoho etilico a1950/0. (ii) s te rl ll c c al e t an d l e t am e t e j us t a st a e l u nt a b ul li cion. (i)
EImedio pued guardars hast po dias en elrefrigerador: aproximada mente S O m l d e m e i o e s s uf i i en t p ar a u na s 2 S p ru e ba s , (b) Cald
MF
(0 D is ue lv a id
.9
d es hi dr at a
s od i
e n O m d e a gu a destisolucion de hidrex
. 2 m ol /l it r m ed i h as t e l u nt o d e e bu ll ic i n . de fueg enfrielo po debajo de lo 45"C (iii) Retire rapldament El medi preparad no debe se esterilizado POt autoclave; pued se guar ad a st a o r d ia s e l r ef ri g r ad or , ag d il u i o eb r ep ar ar s s eg u 10 descrito en la seccio 4.2. 5. Procedimientos
c o t i u ac i s e e sc ti be n p r c e i mi e t o g en er al es ; s i e mb ar g se a c n ot a u e e xi st e d if er e t e t i o s d e n id a e s equipo de filtracien, D et er mi na ci o
d e coliformes totales
ll
P ue d u ti li za rs e v ar io s m ed io s d e c ul ti v p ar a e l x am e d e r ga ni sm o o li fo rm e e di a t e m et o l a m em br an a f il tr an te , D e estos, lactos tergitoi, agar de lactos tergitolIT c al d o d e l ac to s c o s ul fa t d e ll il a r l o o r a ni sm o c ol if or me s f e a le s 4 °C . e di c d e t ip o E nd o s ol o debe utilizarse para el recuento de organismos coliformes 35°C 37°C el c al d F C 4 4 p ar a e l r ec ue nt o c ol if or me s f ec al es . A un qu e t od o s te s fe io la organisrno coliformes presuntivos, la reacciones caracteristica varian se gun eJ medio, EI caracterlstico brillo rnetalic de la colonias en lo medios de ti nd de en l a f or ma ci o l de ht do , Aunque es posibl preparar lo medics partir de su ingredientes basicos,
e l m ed i
(ii) C al ie nt e
5. lo
121
rl lateral)
meye (con un braz
gada) c ol oq u e n s u s it i e l soport poroso Si se utihza electrica. se c o s ej a p on e u n s eg u d o frasco entr el Erlenmeyer g un d
f ra sc o
electrica,
actua la
como
122
G U A S P AR A L A C A UD A
DE
12
A GU A P OT AB L
C ol o u e e l r ec ip ie nt e s u
B. Abra un platillo Petr coloqu el.
un
almohadilla en equipo).
ti
WH()S'1tI9 it rlfO
suo
c. t iv o a r dilla.
ip s at ur a
te il setecl a a lm o a -
afiadi po 10 de agua de diluci6n esteril al r ec i i en t s u e ri o a nt e la filtraci6n (vease seccio /{(
vacio.
NJJIO - - - - - - - - - - -
- - - - - - - - - - -
- - ~
Despue q u
f il tr o
l a m u s tr a
d es co ne ct e e l v a i o ic agua de dilun ju a u e tr cion e st er il ,
m em br an a f iI tr a t e e st er i so re s o o rt e o ro so , t i lizand para clio pinzas prefuego.
fiItro. WH
N5II
8! .J11
124
filtraci6n
G Ul A
y,
t il iz an d
AR
L A C AL ID A
DE
GV
AB
ANI:X06
L a o lo ni a d e b ac te ri a o li fo rm c f or m un me io o lo r r aj a rojo oscuro co un brillo dorado verdos metahc en la superficie Estc brillo ue b ar ca r t od a l a c ol on i tr colonias de otro tipo no debe se contadas EI recuento de la colonias puede h ac er s o n l a y u de na lu a. m im er o d e c ol if or m t ot al e o r 1 00 m l e st a d ad o p or :
la
b ra n f il tr an t e n e l p la ti ll o P et r s ob r l a l mo h d il la , o n e l l ad o r et ic ul ad o a ci a arriba
segurese
ai almohadilla
filtrante.
C ol it or me s t ot al e
5.
la membrana
Determinacio
po 10 ml
No de coloma cohforme N o d e r n d e m ue st r
10
de coliformes fecalc
para c ol if or me s f ec a e s e s simila al usado para la deterEI procedimient minacion de coliformes totales. Filtre la muestr como se dcscribi anterior mente c ol o u e l a e mb ra n f il tr a t e s o r e l a a lm o a di ll a s at ur a co p o j em pl o m e i o M FC .
A . C ol o u e l o 44
C ol oq u e l l at il l P et r e n p os ic io n i n e rt i p ar a l a incubacion,
I.
l at il lo s P e
O.soC durante
24 ho-
1I0s Petr
sellados con tapas firmement ajustadas en o ls a p la st ic a i mp er me abies para la incubacion.
J.
contadas I il tr ad a
Jrc
durante 18-24 horas con un
bafi Maria, manteniendolas 44 O.5°C durante 24 horas, La bolsas de plastico la
100%
garantizar esto coloque un e d z o d e a lg o o n h u e d dentro de la incubadora). Si
io
para ungUento platillos de plastico co tapa firmem en t a j s t d as , e s n ec e saria la humectacron.
": wHO §JJI1
·n..
24
in
c u d o p a j em pl o u n r a dtlla soport de metal. WI/08JJI.
126
G U A S P AR A L A C A UD A
DE
A GU A P OT AB L
a s o lo ni a d e l a a ct er ia s c ol i f r me s f ec al c s o d e c ol o a zu l a s c o lonias de coliforrue no fecale toma un colo gris c re m p ue d a ce r r ec u n t l a c ol on ia s c o l a y ud a d e u n l u a . i n l me nt e eI numero de o li fo rm e f e a le s p o 0 0 e st a a d ot C ol lf or me s f ec al e p o 1 0 m 1 " '
No de colonias de coliform" N o d e m l d e m ue st r
ANEX07 DETERMINACIO
fecale contada, f il lr ad a
DE
CLOR
LJBR
RESIDUAL
Pueden usarse do procedimientos para determinar el clor libr residual un sebas en un comparador visual comercia el otro comprend la inspec cio visual lo ensayo Se cuenta co do reactivo diferentcs para esto: N,N dietilparafenil en e i ar ni n ( DP D o rt ot ol i i n ( OT ) e l u lt im o t ie n l a e sv en ta j d e s e carcinogen y, 5i l I cuidado,
in t al l m id o y y o u r p ot as io . S i e m a r o . e st e m et o n o e s e s e ci fi c p ar a c1or Iibr residual y, po to tanto, pued brinda falsos resultados positives. es e st a l i i t c io n s e I e h a l nc lu id o d e i d Sll amplio us en muchos paises. 1. Tecnic 1.
de comparador visual comercia
Equipo
Lo comparadores comerciale so de do tipo basicos: (i) de tipo disco, (ii) de tipo dispositiv co ca un rued de pequefio vidrio coloreados p at ro ne s l iq ui do s a m o ll et a d e i dr io . Sin m b r go , m b t ie ne n l o m is m o r p o e nt es : n a c aj a c o l en t c ul a e n l a a rt e f r n ta l dos c el d s ; e l c o j u t o e st a d is pu es t d e t a l m an er a q u a m a s e ld a e st a e n e l camp de vision de lent ocular U n c el da , q u o nt en g u n m ue st r d e a g s i l o r ea ct iv os , s e c o l e a en line co lo vidrio colorcados grratorios co la ampolJetas qu COI1t ie n l o p at ro n l iq ui d s . r n e st r d e g u c o reactrvo se coloca en otra celda. Si existe c1or Iibr presente se desarrollara un color. La concen t ra ci o d e c 1o r s e e st im a c om p r an d l o c ol or e d e a m a s c el da s s eg u s e traves dcllente ocular Cada colo de disc ampolleta corrcspond eierta cantidad de c1or en el agua para cada un de lo reactivo especiflca dos, se nccesita diferentes discos ampolleta de calibracion. 1.
Reaetivo
C om o l a m ay or i d e o m a ra do re s e st a e c o s a r u sa rl o o n l o r ea c t iv o e l f ab ri ca nt e e b t en er s c ui da d d e a nt e e r u n u en a c a t t a d de estos. Esta es un desventaja pues implic un dependcnci de proveedo local y, l gu na s o ca si o e s u cd e u rg i r ob l m a i mp or ta ci o or t r l a o , u n v en ta j d e l a t e n ic a o ns i t e e n q u e s n ec es ar i p re pa ra r s ol u i on e p ar a a tr o e s d e c ol or , 1 0 qu e h a q u s e m u f a i l e fe ct ua r procedimient de comparacion. 127
128
Ul
. 3 D et er mi na ci o
AR
L A C AL I A I
OE
A GU A
OT BL
N I' X
d e c l r o l ib r
tr veces lueg llenel co la muestr
s eg un d c el d s e n n l a i ns trucciones de fabricante
pectiva.
WHO a:I112
celda (durante no de 3- segundos para mezcla el reactivo
E.
B.
lo patrones colore ados (B).
II'IW
ssin
WHO Sl171
C. celda agua.
F.
llenel co la mism
comparador.
WHO ~511]
WHO 85216
12q
130
G UA S
RA LA
AU AD
DE
A GU A
A BL E
ANEX07
potasio u e e l c ol o d e u n d e l o trones (B)
formo (0 manas.
a-
reactive Inmediata(A). ment (e decir, en rnenos de 20 segundos),
3.
g it e l a m ez cl a b as t ld id
Determinacio
la
q u e st e o rn pl et am e t e d is ue lt a io
G ua r
la
rm
de clor residual
el
valo de clor libr en mg/liaproximadament el Capitulo 6).
I°
(vease
A. Agrcgue 3-6 g ot a
s ol uc io n
2_ ee le e m a rg o
co tu os
EI mes e u e e n e m l ea r t u a s d e n sa y o m n e lo tu iv c ol o d e s ol uc io ne s t ip o p re viamente preparadas contenidas en tubo de ensayo sellados C om o l a m ay or i d e l a a gu a p ot a l e s e c lo r a r t e e r u n o n e nt ra c io n f i a l d e c lo r r es id ua l m en o m g/ li tr o l o p at ro ne s p er ma ne nt e d e c ol o s o p r p ar a o s s ol o a r u br i n a g a d e 0 .0 -1 . m g/ Ii tr o A l i g ua l qu co la tecnic de cornparado comercial, la rapide de la determinacio ( me n 2 0 s eg un do s a y d ar i v it a q u r ea c i v a ct u s o r e l or o c om bi n d o q u p ue d n c n tr ar s p re se nt e d e s t m an er a r e u ci r eI riesgo de obtene valore de clor libr equivoeadament elevados EIcnfriam ie nt o d e l a m u s tr a a st a a pr o i ma d m en t l C t am bi e i ni mi z e l e rr o r ov oe a o r l a p re s n ci a d e e lo r c om bi n d o ( ve as e e l C ap it ul o 6 ) L a a pl ic ac io n l a t ec ni c tu os e ns ay o r eq ui er e q u l ab or at o rio loca r e i on a r ep ar e l o a tr on e o lo r lo reactivos. EI equipo iv te tinentes sobr metodo de analisis (vease la Bibliografia).
3.
medici6n.
B. Mezcle completarnente
_)_)
y od ur o d e p ot as i 11'110
Equipo
Se requiere el siguient equipo il =-un pipeta cuentagotas. 3.
d e la yo-
ns yo
la ic en el am
M et od o d e B lm l o n
l mt do n
c o t en id o d e c lo r r es i u a l a u es tr a d e g u s e c al cu l colo obtenido de la siguient rnanera: CalQr
ReBctlv
is s ol uc io n
e je l e nf ri a
t em pe ra tu r
nJ04
a m i en te . A gr eq u
la
ie d e o du r
Color residuol Img/Iitro
lncoloro
0.0
Celeste
01-0.3
Azu oseuru
>0.
a rt i
de
