Metode Analisa Komponen Gula Dengan HPLC

metode analisa komponen gula dengan HPLC prinsip : untuk menentukan kadar komponen gula dari dari suatu sampel Cara Kerja: HPX-87H, 300 mm x 7,8 mm resin ion eksklusi Kolom : AMINEX Flow rate : 0,5 ml/menit Detektor : RID (Reflective Index Detector) 156 Mobile Phase : Aquadest Dmin Bebas Ion; atau Aquabides. Konsentrasi Asam Sulfat (H2SO4) 0,01 N Merk : Beckman C dengan tekanan pompa saat operasi 344 psiSuhu : Max 50 Sistem Elusi : Isokratik Waktu : 15 menit Preparasi Sampel: 1. Sampel ditimbang sebanyak 5 gram dan dipindahkan ke dalam tabung sentrifus polietilen sebanyak 50 ml 2. Sampel bebas lemak ditambahkan 20 ml campuran etanol absolut:air (80:20), dan dimasukkan ke dalam tabung sentrifus, kemudian dipanaskan C selama 30 menit. Selain itudalam penangas air pada suhu 80 disentrifus dengan kecepatan minimum 2000 rpm selama 10 menit 3. Supernatan yang didapat ditambahkan larutan Pb-asetat 10% sebanyak 2 ml. Kemudian disentrifus lagi dan dipisahkan supernatannya 4. Endapan yang didapat ditambah 20 ml campuran etanol absolut:air (80:20) dikocok dikocok dan disentrifus, supernatannya digabung dengan supernatan yang didapat sebelumnya 5. Gabungan supernatan diuapkan diuapkan dengan rotari evaporator 10 ml. Kelebihan Pb-asetat dihilangkan dihilangkan dengansampai volume menambahkan Na-oksalat 5% sampai tidak terjadi endapan 6. Larutan dimasukkan kedalam labu takar 25 ml lalu ditambahkan etanol absolut:air (80:20) (80:20) sampai tanda 7. Setelah dikocok sampai homogen, homogen, kemudian disaring dengan millex 8. Selanjutnya contoh siap diinjeksikan ke dalam HPLC l9. Dibuat kurva standar gula: sukrosa, glukosa, fruktosa masing-masing 1000; 750 dan 500 ppm, volume injeksi 10 10. Perhitungan kadar gula didasarkan pada interpolasi dari kurva standar dengan menggunakan menggunakan regresi linier Cara Kerja Alat: 1. Pasang kolom sesuai dengan komponen yang akan dianalisa 2. Siapkan eluen (mobile phase) H2SO4 0,01 N, yang akan digunakan dalam m)botol (eluen telah disaring dengan kertas saring 0,45 3. Masukkan selang inlet dari unit HPLC ke dalam botol eluen 4. Hidupkan stop kontak ke sumber arus bertegangan 220 V 5. Hidupkan unit alat (pompa, detektor, dan rekorder) dengan menekan tombol tombol ON 6. Atur program (flow rate) sesuai yang diinginkan dan hilangkan gelembung udara yang terikut dalam selang 7. Hidupkan lampu detektor dan atur panjang gelombang gelombang yang diinginkan 8. Berikan waktu untuk kondisioning sampai diperoleh garis dasar (bare line) yang rata

9. m) kedalamSuntikkan sampel (sudah disaring dengan filter 0,45 injektor port. Pada saat yang bersamaan tekan tombol start pada rekorder 10. Diamkan beberapa saat sampai semua komponen yang diinginkan keluar ke dalam kromatogram di dalam rekorder 11. Bandingkan dengan standar yang diinjeksikan dengan volume yang sama dengan volume sampel Cara Mematikan Alat: 1. Cuci kolom dengan cara mengalirkan eluen dengan flow rate 0,2 ml/menit selama 10 menit. Kemudian kolom dicuci dengan etanol selama 10 menit dengan flow rate yang sama. Kolom dilepas kemudian disimpan 2. Matikan lampu detektor 3. Matikan pompa 4. Matikan unit HPLC dengan menekan tombol OFF 5. Cabut semua stop kontak dengan sumber arus

millex

Kelebihan Dan Kekurangan Metode Analisis Dengan HPLC 1. 1. Kelebihan Ø Kerja lebih mudah dengan automatisasi dalam prosedur analisis dan pengolahan data Ø Volume sampel kecil Ø Daya pisah tinggi Ø Merupakan metode analitis: - Cepat - Peka - Akurat - Tepat - Reproducible Preparatif Ø Dapat digunakan untuk analisis sampel organic dan anorganik, bersifat volatile dan nonvolatil, stabil dan tidak stabil secara thermal. Ø Pilihan fasa diam dan fasa geraknya luas 1. 2. Kekurangan Ø Larutan harus dicari fase diamnya terlebih dahulu Ø Hanya bisa digunakan untuk asam organic Ø Harus mengetahui kombinasi yang optimum antara pelarut, analit, dan gradient elusi Ø Harganya mahal sehingga penggunaannya dalam lingkup penelitian yang terbatas