Makalah Analisis Instrument (GC , HPLC, FTIR, GC-MS)

KATA KAT A PENG PENGANTAR ANTAR Puji dan Syukur kami panjatkan ke Hadirat Tuhan Yang Maha Esa, karena berkat limpahan limpahan Rahmat dan Karunia-nya Karunia-nya sehingga sehingga kami dapat dapat menyusun menyusun makalah ini dengan dengan baik dan tepat pada waktunya !alam makalah ini kami menyajikan tentang alat-alat instrument seperti "T#R, $%, $%-MS, dan HP&% Makalah ini dibuat dari berbaga sumber dan beberapa bantuan dari berbagai pihak untuk membantu menyelesaikan tantangan dan hambatan selama mengerjakan makalah ini 'leh karena itu, kami mengu(apkan mengu(apkan terima kasih yang yang sebesar-besarnya kepada semua semua pihak yang telah membantu dalam penyusunan makalah ini Kami menyadari bahwa masih banyak banyak kekuranga kekurangan n yang mendasar pada makalah makalah ini 'leh karena itu kami mengundang pemba(a untuk memberikan saran serta kritik yang dapat memba embang ngun un kam kami Krit Kritik ik k)ns k)nstr truk ukti ti** dari dari pemb pemba( a(aa sang sangat at kami kami hara harapk pkan an untu untuk k penyempurnaan makalah selanjutnya selanjutnya +khir kata kami berharap berharap sem)ga sem)ga makalah makalah ini dapat dapat memberikan memberikan man*aat man*aat maupun maupun inpirasi terhadap pemba(a

)g)r, uly ./01

DAFTAR ISI

KAT KATA PENGANTAR......... PENGANTAR.................... ..................... ..................... ...................... ................................................ ..................................... 1 DAFTAR DAFTAR ISI................. ISI............................ ..................... ..................... ..................... ..................... ......................................... .............................. 2 PENDAHULUAN....... PENDAHULUAN.................. ..................... ..................... ...................... ..................... ....................................... ................................. .... 4 FTIR (FOURIER TRANSFORM TRANSFORM INFRA RED)......... RED) .................... ..................... ..................... .........................5 ..............5 PENDAHULUAN........ PENDAHULUAN................... ..................... ..................... ..................... ..................... ........................................ ............................. 5 PRINSIP.................. PRINSIP............................ ..................... ..................... ..................... ..................... ..................... ................................ ..................... 5

Maka Makalah lah An Anal ali ii i In! In!"# "#$%n $%n!! PKT PKT&5' &5'

i

#2STR3ME2T+S#..................... ............................... ..................... ...................... ..................... .................................... .......................... 

............................... ..................... ...................... ..................... ..................... ............................11 .................11 E2#S S+MPE&..................... MET'!E PREP+R+S# S+MPE&....................................................................11 MET'!E +2+&#S#S...................... ................................ ..................... ..................... ......................................... ............................... 12 MET'!E PE2$'&+H+2 !+T+ H+S#& +2+&#S#S...........................................14 $% 4$+S %HR'M+T'$R+PHY5......................................................................1

................................ ..................... ..................... .............................................. ................................... 1 PE2!+H3&3+2..................... PR#2S#P..................... ................................ ..................... ..................... ..................... ............................................... ..................................... 1 #2STR3ME2T+S#..................... ............................... ..................... ...................... ..................... .................................. ........................ 1* E2#S S+MPE&..................... ............................... ..................... ...................... ..................... ..................... ............................2 .................2 MET'!E PREP+R+S# S+MPE&....................................................................2

................................ ..................... ..................... ......................................... ............................... 2' MET'!E +2+&#S#S...................... MET'!E PE2$'&+H+2 !+T+ H+S#& +2+&#S#S...........................................+, $%-MS.................... .............................. ..................... ...................... ..................... ..................... ........................................... ................................ +2 PE2!+H3&3+2..................... ................................ ..................... ..................... .............................................. ................................... +2

................................ ..................... ..................... ..................... ............................................... ..................................... +2 PR#2S#P..................... ............................... ..................... ...................... ..................... .................................. ........................ ++ #2STR3ME2T+S#..................... E2#S S+MPE&..................... ............................... ..................... ...................... ..................... ..................... ............................+ .................+ MET'!E PREP+R+S# S+MPE&....................................................................+ MET'!E +2+&#S#S...................... ................................ ..................... ..................... ......................................... ............................... +* MET'!E PE2$'&+H+2 !+T+ H+S#& +2+&#S#S...........................................+* HP&% 4H#$H PER"'RM+2%E ?#! %HR'M+T'$R+PHY5 %HR'M+T'$R+PHY5..............................41

................................ ..................... ..................... .............................................. ................................... 41 PE2!+H3&3+2..................... PR#2S#P..................... ................................ ..................... ..................... ..................... ............................................... ..................................... 4+ Prinsip dasar HP&% .................... ............................... ..................... ..................... ...................... ..................... ..................... ........... 4+

............................... ..................... ..................... ........................................... ................................ 4+ Prinsip kerja HP&% .................... ............................... ..................... ...................... ..................... .................................. ........................ 44 #2STR3ME2T+S#..................... E2#S S+MPE&..................... ............................... ..................... ...................... ..................... ..................... ............................4* .................4* MET'!E PREP+R+S# S+MPE&....................................................................4* MET'!E +2+&#S#S...................... ................................ ..................... ..................... ......................................... ............................... 4' MET'!E PE2$'&+H+2 !+T+ H+S#& +2+&#S#S...........................................5,

................................ ..................... ..................... ...................... ..................... ........................ .............. 5+ !+"T+R P3ST+K+.....................


i

PENDAHULUAN Kr)ma Kr)mat)g t)gra* ra*ii adalah adalah suatu suatu teknik teknik pemisah pemisahan an m)lekul berdas berdasark arkan an perbed perbedaan aan p)la p)la pergerakan antara *ase gerak dan *ase diam untuk memisahkan k)mp)nen 4berupa m)lekul5 yang berada pada larutan M)lekul yang terlarut dalam *ase gerak, akan melewati k)l)m yang merupakan merupakan *ase diamTswet diamTswettt adalah penemu penemu kr)mat)gra kr)mat)gra*i *i pada tahun 07/8 Perkembanga Perkembangan n kr)mat)gra*i antara lain9 a kr)ma kr)mat)g t)gra* ra*ii (air-p (air-pada adatt 4K%P5 4K%P5 b Kemudian, pada akhir tahun 078/an dan pada awal tahun 07:/an, (ara ini mulai berkembang !asar kr)mat)gra*i lapis tipis 4K&T5 4K&T5 diletakkan )leh )leh #;mail)< ( S(hr S(hraaiber iber pada pada tahu tahun n 078= 78=, dan dan kemud emudia ian n diper iperha halu luss )leh leh Stah Stahll pad pada tahu tahun n 07>= 07>= Kary Karyaa Mart Martin in dan dan Syng Syngee yang yang pada pada tahu tahun n 0/:0 0/:0 memb membua uahk hkan an hadian hadian 2)bel, 2)bel, tidak hanya hanya mere<)lusik mere<)lusikan an kr)mat)gra kr)mat)gra*i *i (air, (air, tetapi juga se(ara umum meletakkan landasan bagi perkembangan kr)mat)gra*i gas dan kr)mat)gra*i kertas d Pada tahun 07>., 07>., Martindan Martindan ames mempublika mempublikasikan sikan makalah pertamanya pertamanya mengen mengenaim aim kr)m kr)mat)g at)gra* ra*ii gas gas +ntar +ntaraa tahun tahun 07>. 07>. dan akhir akhir tahun tahun 071/ 071/ an kr)mat)gra*i gas berkembang menjadi alat analisis yang (anggih e Hal ini menjadi menjadi dasar dasar ditemuka ditemukannya nnya kr)mat) kr)mat)gra*i gra*i yang yang (anggih (anggih yaitu yaitu kr)mat)gra kr)mat)gra*i *i (air kinerja tinggi 4High Per*)man(e &i?uid %hr)mat)gra*i5 Kr)mat)gra*i dibedakan menjadi . jenis yaitu9 Kr)mat)gra Kr)mat)gra*i *i (air 4&i?uid 4&i?uid %hr)mat)gra %hr)mat)graphy5 phy5 merupakan merupakan teknik yang tepat untuk untuk memisahkan i)n i)n atau atau m)lekul yang yang terlar terlarut ut dalam dalam suatu suatu laruta larutan n Terda Terdapat pat bebera beberapa pa jenis jenis kr)mat)gr kr)mat)gra*i a*i (air, (air, diantarany diantaranya9 a9 re

i

•

Re
•

memadukan memadukan si*at hidr)*)bik serta serta rendahnya rendahnya p)laritas p)laritas *ase stasi)ner stasi)ner yang terikat terikat se(ara kimia pada padatan inert inert seperti seperti silika silika High per*)rman(e li?uid (hr)mat)graphy 4HP&%5 mempunyai prinsip yang mirip

•

dengan dengan re
biasa biasa diguna digunakan kan untuk untuk memisah memisahkan kan dan

Kr)mat)gra*i pertukaran i)n 4i)n-e@(hange (hr)mat)graphy5 biasa digunakan untuk pemurnian materi bi)l)gis, seperti asam amin), amin), peptida peptida,, pr)tein pr)tein

FTIR (FOURIER TRANSFORM INFRA RED) PENDAHULUAN "T#R merupakan singkatan dari Forier dari Forier Transform Infra Red  !imana "T#R ini adalah teknik teknik yang yang diguna digunakan kan untuk untuk mendap mendapatk atkan an spektr spektrum um in*ram in*ramera erah h dari dari abs)rb abs)rbans ansi, i, emisi, emisi, *)t)k)ndukti
PRINSIP Spectrosc Spectroscopy opy "T#R menggunakan sistem )ptik dengan laser yang ber*ungsi sebagai sumber radiasi yang kemudian diinter*erensikan )leh radiasi in*ramerah agar sinyal radiasi yang diterima )leh detekt)r memiliki kualitas yang baik dan bersi*at utuh 4$iwangkara,.//15 Prinsi Prinsip p kerja kerja "T#R "T#R berupa berupa infrared yang melewati (elah kesampel, dimana (elah tersebut ber*ungsi meng)ntr)l jumlah energi ysng disampaikan kepada sampel Kemudian beberapa infrared diserap diserap )leh sampel dan yang lainnya lainnya ditransmisika ditransmisikan n melalui melalui permukaan permukaan sampel sehi sehing ngga ga sina sinarr infrared l)l)s l)l)s ke detek detekt) t)rr dan dan siny sinyal al yang yang teru teruku kurr kemu kemudi dian an diki dikirim rim kek)mputer seperti yang ditunjukkan pada $ambar 8 di bawah ini 4Therm), .//05 Prinsip kerja spektr)sk)pi "T#R adalah adanya interaksi energi dengan materi")urier mengemukakan deret persamaan gel)mbang elektr)nik sebagai 9 *4t5 B a / C a0 ()s w/t C a. ()s ()s .w/t C D C b0 ()s w/t C b. ()s ()s .w/t dimana 9 - a dan b merupakan suatu tetapan - t adalah adalah waktu - ω adalah *rekwensi sudut 4radian per detik5 4 ω = 2 Π f dan f adalah *rekwensi dalam Hert;5 +t)m-at)m dalam suatu m)lekul tidak diam melainkan ber

i

´=

ѵ

1 2 πc

√

K ( m1 + m2) m1 m2

atau

´= ѵ

4,12

√

K µ

!imana9

´

ѵ

B jumlah gel)mbang 4(m -05

( B ke(epatan (ahaya 4ms -05 m0 B massa at)m 0 4g5 m0 B massa at)m . 4g5 K B tetapan gaya 4dyne 4dyne (m-0 B g s-.5

m 1+ ¿ m µ=

2

m1 m 2 ¿

P)sisi relati* suatu at)m dengan at)m lainnya dalam suatu m)lekul selalu berubah-ubah akibat dari gerakan , sedangkan untuk m)lekul n)n linier B 8n G 1, dengan n B banyaknya at)m


i

+nal +nalisi isiss meng menggu guna naka kan n spek spektr tr)m )met eter er "T#R "T#R dibandingkan dengan met)de k)n
memi memilik likii

bebe bebera rapa pa

kele kelebi biha han n

utam utamaa

a !apat !apat digunaka digunakan n pada semua *rekuen *rekuensi si dari sumber sumber (ahaya (ahaya se(ara se(ara simultan simultan,, sehing sehingga ga analisis dapat dilakukan lebih (epat dari pada menggunakan (ara scanning. b Sensiti
x

:

0 .

+

Keterangan 9

>

0

Sumb Sumber er (aha (ahay ya #R #R p)li p)likr kr)m )mat atik ik

.

Beam splitter

3.

%ermin tetap 4%ermin 05

4.

%ermin dapat digerakkan naikHturun 4%ermin .5

5. Sampel 1

6.

!etekt)r dengan PMT 4 Photomltiplier Photomltiplier 5

Beam Splitter Beam splitter digunakan digunakan untuk meme(ah meme(ah dan menyatukan menyatukan kembali berkas berkas sinar karena si*atnya dapat meneruskan 4transmisi5 dan memantulkan 4re*leksi5 sinar yang yang mengen mengenainy ainya a erkas erkas sinar sinar hasil hasil pengga penggamb mbung ungan an dan . berkas berkas yang yang telah telah


i

dipe(a dipe(ah h akan akan terjad terjadii inter* inter*ere erensi nsi dengan dengan men ( m Perancangan Perangkat Elektronik Ele ktronika a Rangkaian Rangkaian elektr)nik elektr)nik terdiri terdiri dari beberapa bagian utama, yaitu po"er spply sebagai penyedia tegangan pada semua perangkat elektr)nik, penguat tegangan pada detekt)r #R, +!% 4 #nalog to $igital %on&erter 5 /=/: untuk mengubah data anal)g dari detekt)r menjadi data digital

Peran(angan sistem peralatan se(ara keseluruhan pada penelitian ini dapat digambarkan lagi menurut jenis sinyal yang dihasilkan seperti pada gambar : Keterangan jalur keluaran tiap bagian sistem peralatan yaitu sumber (ahaya #R menghasilkan (ahaya p)likr)matik daerah in*ramerah, setelah melewati inter*er)meter diubah menjadi sinyal inter*er)gram, sinyal tersebut diserap sampel, yang diteruskan meng mengen enai ai sens) sens)rr diub diubah ah dalam dalam bent bentuk uk tega tegang ngan an yang yang seban sebandi ding ng deng dengan an p)la p)la inter*er)g inter*er)gram ram juga, nantinya setelah setelah dilakukan dilakukan pr)ses pr)ses di k)mputer k)mputer menggunaka menggunakan n perhitungan ""T akan diper)leh gra*ik spektrum hubungan antara intensitas serapan sampel dan panjang gel)mbang

S#$-%"

In!%"0%"/

%$Sa$

D%!%k!/"

K/$#! %" FFT

S %k!"#

Sumber radiasi

Prinsip dari sumber radiasi #R adalah dipan(arkannya sinar )leh padatan lembam yang dipanaskan sampai pijar dengan aliran li strik +da 8 ma(am sumber radiasi yaitu 9 

$l)bar s)ur(e 9 tabung sili(a (arbida dengan ukuran diameter >mm dan panjang >(m



2ernst $l)wer 9 senyawa-senyawa )ksida



Tungsten "ilament & 9 untuk analisis dengan nir-#R



#n(andes(ent Iire Iire 9 merupakan lilitan kawat nikr)m


i

Pada sistim )ptik "T#R digunakan radiasi &+SER 4 'ight 4 'ight #mplification !y Stimlated (mmission of Radiation5 Radiation5 yang ber*ungsi sebagai radiasi yang diinter*erensikan dengan radiasi in*ra merah agar sinyal radiasi in*ra merah yang diterima )leh detekt)r se(ara utuh dan lebih baik Sampel kompartemen .

%uplika %uplikan n atau atau sampel sampel yang yang dianali dianalisis sis dapat dapat berupa berupa (airan (airan,, padata padatan n atau atau pun gas gas Karena energi
M)n)kr)mat)r merupakan suatu alat yang ber*ungsi untuk mendispersikan sinar dari sinar p)likr)matik menjadi sinar m)n)kr)matik +da dua ma(am tipe m)n)kr)mat)r yaitu m)n)kr)mat)r prisma dan m)n)kr)mat)r gratting 4kisi di*raksi5

Detektor

!etekt !etekt)r )r ber*un ber*ungsi gsi mengu mengubah bah sinyal sinyal radiasi radiasi #R menjad menjadii sinyal sinyal listrik listrik Selain Selain itu detekt detekt)r )r dapat dapat mendete mendeteksi ksi adany adanyaa peruba perubahan han panas panas yang yang terjad terjadii karena karena adanya adanya pergerakan m)lekul !etekt)r spelktr)*)t)meter yang bersi*at menggandakan elektr)n tidak dapat dipakai pada spektr)*)t)meter #R sebab radiasi #R sanngat lemah dan tidak dapat melepaskan elektr)n dari kat)da yang ada pada system detekt)r +da tiga tipe detekt)r yang dapat digunakan pada spektr)*)t)meter #R, yaitu 9 T!ermal transducer

Terdiri dari dua l)gam ber(abang dimana suhu tergantung pada p)tensialnya #ntrumen yang menggunakan detekt)r ini harus disimpan pada tempat yang ber-+% atau bersuhu k)nstan karena dapat dipengaruhi )leh suhu sehingga dapat terjadi kesalahan kesalahan dalam mendeteksi mendeteksi suatu senyawa senyawa Resp)nnya lambat sehingga sehingga jarang jarang digunakan P"roelectric transducer

erupa kristal (airan dari triglisin sul*at 4T$S5 dimana temperatur dipengaruhi )leh )leh p)lari p)laritas tas senyawa senyawa Memilik Memilikii resp)n resp)n yang yang (epat (epat dalam dalam mengan menganali alisis sis suatu suatu senyawa P!otoconducting transducer

Terbuat dari bahan semik)ndukt)r seperti timbal sul*ida, eaksa telurida, dan (admium telurida, indium antim)nida Harus menggunakan pendingin gas nitr)gen sehingga resp)nnya (epat


i

!etekt)r yang digunakan dalam Spektr)*)t)meter "T#R adalah T$S 4 Tetra )lycerine Slphate5 Slphate5 atau M%T 4 *ercry %admim Tellride Tellride5 5 !etekt)r M%T lebih banyak digunakan karena memiliki me miliki beberapa kelebihan dibandingkan detekt)r T$S, yaitu memberikan memberikan resp)n resp)n yang lebih baik pada *rekuensi *rekuensi m)dulasi tinggi, lebih sensiti*, sensiti*, lebih (epat, tidak dipengaruhi dipengaruhi )leh temperatur, temperatur, sangat selekti* selekti* terhadap terhadap energi
Penguat dalam sistem )ptik spektr)*)t)meter #R sangat diperlukan karena sinyal radiasi #R sangat ke(il atau lemah Penguat berhubungan erat dengan derau instrumen serta (elah m)n)kr)mat)r, jadi keduanya harus diselaraskan dengan tujuan mendapatkan res)lusi pun(ak spektrum yang baik dengan derau maksimal Sedangkan pen(atat atau read )ut harus mampu mengamati spektrum #R se(ara keseluruhan pada setiap *rekuensi dengan seimbang Rentang bilangan gel)mbang :/// (m -0 sampai 1>/ (m-0 dalam keadaan n)rmal harus dapat teramati dalam selang waktu 0/ G 0> menit 3ntuk maksud pengamatan pengamatan pendahulua pendahuluan n selang waktu tersebut tersebut dapat dipersingkat dipersingkat ataupun diperlambat untuk mendapatkan hasil res)lusi pun(ak s pektrum #R yang baik

Perangkat )ptik spektr)sk)pi "T#R berupa inter*er)meter pada !ox p)sisi !ox p)sisi terbuka

S%n/" IR

%"$in %%"

S#$-%"

Beam splitter

P%nahan %"$in T%!a T%!a

Tem at!ox

Hasil inter*er)gram menggunakan laser He-2e P)la-p)la inter*erensi untuk laju pergeseran (ermin sebesar .: ms 4a5 k)ndisi awal, 4b5 k)ndisi saat beda lintasan )ptis sebesar kira-kira :,/ mm


i

A

3

3ntuk menguji kualitas inter*er)gram yang dihasilkan, sumber #R diganti dengan laser He-2e 4panjang gel)mbang 18.,= nm5 Semua k)mp)nen )ptik diatur sehingga p)sisi awal diper)leh p)la inter*erensi maksimal Kemudian, (ermin geser digerakkan sampai k)ndisi akhir berjarak sekitar :,/ mm dari p)sisi awal $ambar di atas menampilkan k)ndisi awal dan akhir dari inter*er)gram menggunakan laser He-2e !ari gambar tersebut dapat disimpulkan bahwa k)ndisi inter*er)gram berhasil dengan baik, meskipun p)la inter*erensi tidak berupa lingkaran k)nsentris sempurna arak pergeseran (ermin yang maksimum :,/ mm menghasilkan res)lusi spektrum kira-kira sebesar .,> (m -0 Meskipun res)lusi spektr)meter "T#R pada umumnya terletak antara /,/0 (m -0 sampai . (m-0 

#ENIS SAMPE$ Senyawa )rganik yang memiliki gugus *ungsi)nal yang p)k)k yaitu %B', '-H, 2-H,

%-', %B%, % ≡%, %≡ 2, dan 2'.

MET%DE PREPARASI SAMPE$ Sampel yang digunakan dalam analisis menggunakan spektr)*)t)meter #R dapat berupa sampel (air, gas dan padatan •

•

$as Sampel Sampel berben berbentuk tuk gas dimasuk dimasukkan kan ke dalam dalam sel gas, gas, sel ini mengha menghadap dap langsung pada berkas sinar !alam bentuk yang dim)di*ikasi, (ermin internal yang diguna digunakan kan dapat dapat memant memantulk ulkan an berkas berkas sinar sinar berula berulang ng kali kali melalu melaluii sampel sampel untuk untuk menaikkan sensiti

i

•

pelarut seperti t)luene, kl)r)*)rm, dan sebagainya 2a%l harus di jaga tetap kering dan selalu selalu dipega dipegang ng pada pada ujung ujung-uj -ujung ungnya nya 3ntuk 3ntuk spektr spektraa di bawah bawah .>/ (m-0, (m-0, maka maka digunakan %s#, untuk sampel yang mengandung air dapat digunakan %a". Sampel (airan dapat juga ditentukan dalam larutan Padatan Iujud Iujud sampel sampel padat dapat berma(am-m berma(am-ma(am a(am di antaranya antaranya kristal, am)r*, am)r*, serbuk, serbuk, gel dan lain-lain lain-lain Padatan Padatan juga dapat ditentukan dalam larutan tetapi spektra spektra larutan mungkin memberikan kenampakan yang berbeda dari spektra bentuk padat, karena gaya-gaya interm)lekul akan berubah erma(am met)da telah dikembangkan untuk penyediaan sampel padat hingga dapat langsung diukur +da beberapa (ara yang umum untuk penyiapan sampel bentuk padatan 9 o Pelet Pelet Kr, Kr, dibu dibuat at deng dengan an menum menumbu buk k sampe sampell 4/,0 4/,0G. G.,/ ,/J5 J5 deng dengan an Kr Kr

o

kemudian ditekan hingga diper)leh pellet Kr, (ampuran harus kering dan akan akan baik baik bila bila penumb penumbuka ukan n dilaku dilakukan kan dibawa dibawah h lampu lampu in*ram in*ramera erah h untuk untuk men(egah terjadinya k)ndensasi uap dari atm)s*er yang akan memberikan serapan lebar pada 8>// (m-0 Mull atau pasta, dibuat dengan men(ampursam men(ampursampel pel dengan dengan setetes minyak,

o

pasta kemudian dilapiskan di antara dua keeping keeping 2a%l yang transparan ahan pasta harus transparan terhadap in*ramerah, tetapi hal ini tidak pernah ada dan struktur yang dihasilkan selalu menunjukkan serapan yang berasal dari bahan pasta adalah para*in (air (air &apisan &apisan tipis tipis padata padatan, n, dilapi dilapiska skan n pada pada keping keping-ke -kepin ping g 2a%l 2a%l dengan dengan (ara (ara

o

meneteskan meneteskan larutan dalam pelarut yang mudah menguap pada permukaan permukaan keping kepingan an 2a%l 2a%l dan dibiar dibiarkan kan hingga hingga pelaru pelarutt mengua menguap p P)lime P)limer-p r-p)li )limer mer berbagai lilin atau bahan-bahan lemak sering memberikan hasil yang baik, tetapi ada juga yang membentuk kristal yang tajam hingga tidak memberikan serapan &arutan, sampel dilarutkan dalam pelarut seperti karb)n tetrakl)rida, karb)n disul* disul*ide ide atau atau kl)r)* kl)r)*)rm )rm,, dan spektr spektrum um dari dari laruta larutan n ini di(ata di(atat t &aruta &arutan n 4biasan 4biasanya ya 0G>J5 0G>J5 ditemp ditempatk atkan an dalam dalam sel laruta larutan n yang yang terdir terdirii dari dari bahan bahan transparan Sel yang kedua berisi pelarut murni yang ditempatkan pada berkas sinar standari, sehingga serapan dari pelarut dapat dihilangkan dan spektrum yang yang di(atat di(atat merupa merupakan kan senyawan senyawanya ya sendir sendiri i Meskipu Meskipun n demikia demikian n untuk untuk meyakinkan meyakinkan bahwa serapan serapan dari pelarut tidak mengganggu mengganggu spektrum dari sampel, maka sebaiknya perlu dibuat spektrum dari pelarut yang digunakan untuk mengetahui serapan-serapan yang diberikan

MET%DE ANA$ISIS "T#R digunakan untuk melakukan analisa kualitati* yaitu untuk mengetahui ikatan kimia yang dapat ditentukan ditentukan dari spektra
ada tidaknya gugus *ungsi)nal yang p)k)k yaitu %B', '-H, 2-H, %-', %B%, % ≡%, %≡ 2, dan 2'., kemudian kemudian menginterp menginterpretasik retasikanny annyaa dengan dengan menggunaka menggunakan n bagan k)relasi dan tabel, sehing sehingga ga peak-p peak-peak eak yang yang ada dapat dapat dianal dianalisi isis s Selain Selain itu diguna digunakan kan juga juga untuk untuk analis analisaa kuan kuanti tita tati ti** yaitu aitu mela melaku kuka kan n perh perhit itun unga gan n tert terten entu tu deng dengan an meng menggu guna naka kan n inte intens nsit itas as berdasarkan gugus "ungsi yang dimiliki dimiliki )leh suatu sampel !alam met)de menganalisis suatu spektra yang tak diketahui, perhatian harus dipusatkan pada penentuan ada atau tidaknya tidakn ya beberapa gugus *ungsi)nal utama seperti %B', '-H, 2-2H, %-', %B%, , dan 2' . anganlah membuat analisis yang detail terhadap pita serapan %H dekat


i

8/// (m-0 48,88 m5 Hampir semua senyawa mempunyai pita serapan pada daerah tersebut Tidak perlu risau terhadap adanya suatu lingkungan yang tepat dari gugus *ungsi)nal yang diper)leh erikut ini langkah umum untuk memeriksa pita-pita yang penting $ugus %B' terdapat pada daerah 0=./ G 01// (m -0 4>,1 G 1,0 m5 Pun(ak ini biasanya yang terkuat dengan lebar mediun dalam spektrum Serapan tersebut sangat karakteristik 0

ila ila gugu guguss %B' ada ada,, ujila ujilah h da*t da*tar ar ber berik ikut ut +sa m

9

+pakah

ada

G'H

Serapa Serapan n meleba melebarr dideka didekatt 8://-. 8://-.:// :// (m -0 4biasanya tumpang tindih dengan %GH5 +mida

9

+pakah

ada

G2H

Serapan medium didekat 8>// (m -0 4.,=> m5 kadangkadang pun(ak rangkap, dengan perubahan yang sama Ester

9

+pakah

ada

%-'H

atau

%-'R

Serapan kuat didekat 08// G 0/// (m -0 4, G 0/ m5

+nhidrida

9

Mempunyai du dua se serapan %B %B' di didekat 0= 0=/ da dan 0 0// (m-0 4>,> dan >, m5

+ldehida

9

+pakah

ada

%H

aldehida

!ua serapan lemah didekat .=>/ dan .>/ (m -0 48,>/ m dan 8,1> m5, yaitu disebelah kanan serapan %H Ket)n

.

9

ila kelima kemungkinan diatas tidak ada

ila ila gugu guguss %B' %B' tida tidak k ada ada +lk)h)l

9

3jilah

untuk

'H

- Serapan melebar didekat 81// G 88// (m -0 4.,1 m 8,/ m5 - Pembuk Pembuktian tian selanju selanjutny tnyaa yaitu yaitu adanya adanya serapa serapan n %-' didekat 08// G 0/// (m -0 4, -0/ m5 +mida

9

3jilah

untuk

2H

Serapan medium didekat 8>// (m -0 4.,=> m5 Ester

9

3jilah se serapan %%-' 4s 4serapan 'H 'H ti t idak ad ada5 di didekat 08// G 0/// (m -0 4, m - 0/ m5


i

8

#katan #katan rangka rangkap p dua dua danata danatau u (in( (in(in in ar)ma ar)matik tik %B% memiliki serapan lemah didekat 01>/ (m -0 41,0 m5 -0 Sera Serapa pan n mediu edium m tin tinggi ggi kuat kuat pada ada daera aerah h 01> 01>/-0: /-0:>/ >/ (m 41, m5 m5 uktika uktikanla nlah h kemung kemungkin kinan an diatas diatas dengan dengan memper memperhat hatika ikan n serapa serapan n didaer didaerah ah %H -0 +r)matik dan
:

#kat #katan an rangk angkap ap tiga tiga Mem Memilik ilikii ser serapan apan mediu edium m dan taja tajam m did didekat ekat ..>/ ..>/ (m-0 4:,> 4:,> m5 -0 memiliki serapan lemah tapi tajam didekat .0>/ (m 4:,1> m5 -0 3jilah %H asetilenik didekat 88// (m 48,8/ m5

>

$ugus 2i 2itr) !ua serapan kuat pada 01// G 0>// (m -0 41,.> G 1,15 dan 087/ G 08// (m -0 4,. m - , m5

1

Hidr)karb)n Serapan utama untuk %H didekat 8/// (m -0 48,8 m5 Spektrumnya sangat sederhana, hanya terdapat serapan lain-lain didekat 0:>/ (m -0 41,7/ m5 dan 08> (m -0 4,. m5 &angkah-langkah pada waktu menginterpretasi data in*ramerah a5 Kebanyakan senyawa dapat di(atat pada serapan di atas 0:// (m -0 dan dibawah 7// (m-0 4!aerah *inger print, 7//-0:// (m -0, mengandung banyak serapan yang tidak dapat ditelaah5 b5 $uguskel)mp)k *ungsi)nal jauh lebih berguna dari pada pita-pita tunggal !engan perkataan lain, gugus *ungsi)nal yang memberikan banyak serapan karakteristik biasanya dapat diidenti*ikasi lebih tepat dari pada gugus *ungsi)nal yang memberikan hanya satu serapan karakteristik adi ket)n 4%B' str5 lebih sukardiidenti*ikasi dari pada ester 4%B' str dan %G' str5 ester lebih sukar diidenti*ikasi dari pada amida 4%B' str, 2 G H str, 2 G H de*, dan sebagainya5 (5 Kerangka karb)n harus diperhatikan paling awal 9 lihat apakah alkana, alkena, alkuna alkuna atau ar)matik ar)matik 4$unakan 4$unakan %GH str, %GH de* dan berbagai *rekuensi *rekuensi rentangan rentangan ikatan karb)n-karb) karb)n-karb)n5 n5 Kenyataan Kenyataan bahwa spektrum spektrum 2MR sangat sangat membantu membantu &ihat apakah ada %B' str, jika ada ia mungkin berhubungan dengan %GH str dalam aldehida, 2GH str s tr dalam amida, %-' str dalam ester dan sebagainya %arilah '-H str atau 2-H str demikian juga %B2 str !alam senyawa belerang amati adanya S-H str, SB' str, dan GS'. GstrA dalam senyawa *)s*)r lihat adanya PG' str

MET%DE PEN&%$A'AN DAT DATA A 'ASI$ ANA$ISIS ANA$ISIS !ari !ari hasil hasil penguj pengujian ian sampel sampel pada pada "T#R "T#R didapa didapatka tkan n hasil hasil berupa berupa spektr spektraa masing masing-masing sampel Maka dari data tersebut dapat diketahui gugus *ungsi dari senyawa sehingga dapat ditentukan senyawa yang terdapat pada sampel, seperti ()nt)h Daera! (rekuensi

#enis ikatan


i

81//-8/// 81//-88// .://-./// 0//-0>// 08//-0/// 0///-// //->// L>//

'-H 2-H "en)l, ikatan H %B% stret(hing %-' %-% Fibrasi %-H bending !ianggap *inger print

Sedangkan data analisa dari garam k)mpleks adalah sebagai berikut 9 Daera! (rekuensi 81//-88// .://-./// 0//-0>// 0>//-0.>/ 08//-0.// 0///-// //->// L>//

#enis ikatan 2-H "en)l, ikatan H %B% stret(hing %-H %-2 %-% Fibrasi %-H bending !ianggap *inger print

!ari data tersebut dapat dilihat perbedaan antara sepktra dari garam rangkap dan juga garam k)mpleks Salah satunya adalah gugus '-H yang terdapat pada garam rangkap tetapi tidak terdapat pada garam k)mpleks Selain itu ditemukan serapan %-' pada 08// G 0/// (m0 Sedan Sedangk gkan an pada pada garam garam k)mp k)mplek leks, s, sera serapa pan n 81// 81//-8 -8// /// / (m-0 (m-0 bent bentuk ukny nyaa tida tidak k lebar lebar melainkan merun(ing yang diperkirakan adalah 2-H $aram k)mpleks memiliki harga serapan 0:/.,.> 0:/.,.> sedangkan sedangkan pada garam rangkap 0://,8. 0://,8. pada serapan 0>//-0.>/ 0>//-0.>/ (m-0 (m-0 +danya +danya beberapa perbedaan serapan antara garam rangkap dan juga garam k)mpleks dapat disebabkan )leh adanya perbedaan interaksi yang terjadi antara at)m pusat m)lekul ligan erdasarkan spe(tr spe(traa yang yang diper) diper)leh leh ada serapa serapan n yang yang kurang kurang sesuai sesuai yaitu yaitu gugus gugus %-H, %-H, karena karena dalam dalam senyawa sampel yang digunakan tidak terdapat ikatan %-H Hal ini mungkin dapat terjadi yang disebabkan adanya ganguan dari luar ataupun saat pembuatan sampel yang kurang sempurna, sehingga sampel yang terbentuk telah terk)ntaminasi yang mengakibatkan adanya pergeseran spektra Hasil analisa "T#R hanya dapat digunakan untuk mengetahui ikatan yang terdapat dalam dalam suatu suatu senyawa senyawa sampel sampel Hasil Hasil ini tidak tidak dapat dapat digun digunaka akan n untuk untuk menentu menentukan kan bentuk bentuk struktur dari sampel tersebut adi untuk analisa suatu senyawa perlu didukung dengan analisa lain seperti H-2MR, %-2MR, dan MS


i

&C )&AS C'R%MAT%&RAP'*+ PENDA'U$UAN erbagai teknik pemisahan (ampuran ;at (air yang banyak digunakan diantaranya, destilasi 4 *raksi)nasi, destilasi uap5 dan ekstraksi Kr)mat)gra*i merupakan teknik pemisahan yang lebih baik dan lebih (epat dari kedua teknik tersebut di atas, teknik ini telah dikenal sejak abad ke-07

!asar pemisahan pada kr)mat)gra*i adalah pendistribusian sampel di antara dua *ase, yaitu *ase diam dan *ase gerak erdasarkan pemakaian *ase gerak, kr)mat)gra*i dapat dibagi menjadi 9 Kr)mat)gra*i %air da Kr)mat)gra*i $as Kr)mat)gra*i gas adalah teknik pemisahan yang didasarkan atas sampel di antara suatu *ase gerak yang bisa berupa gas dan *ase diam yang juga bisa berupa (aira ataupun suatu padatan Sedangkan kr)mat)gra*i (air merupakan teknik pemisahan yang didasarkan atas sampel di antara suatu *ase gerak berupa (airan dan *ase diam yang juga didasarkan atas sampel di antara suatu *ase gerak yang bisa berupa gas dan *ase diam yang juga bisa berupa (aira ataupun suatu padatan Hal ini dikarenakan adanya perbedaan p)laritas dar *ase diam dan *ase gerak anyaknya ma(am-ma(am kr)mat)gra*i yang salah satunya adalah kr)mat)gra*i gas, yang merupakan met)de kr)mat)gra*i pertama yang dikembangkan pada ;aman instrumen dan elek elektr) tr)ni nika ka Kr)m Kr)mat at)g )gra ra*i *i gas gas dapa dapatt dipa dipaka kaii untu untuk k setia setiap p (amp (ampur uran an diman dimanaa semua semua k)mp)nennya mempunyai tekanan uap yang berarti, suhu tekanan uap yang dipakai untuk pr)ses pemisahan Tekanan Tekanan uap memungkinkan k)mp)nen menguap dan bergerak bersamasama dengan *ase gerak berupa gas Kr)mat)gra*i gas met)de yang tepat dan (epat untuk memisahkan (amputan yang sangat rumit Iaktu yang dibutuhkan beragam, mulai dari beberapa detik untuk (ampuran sederh sederhana ana sampai sampai berjam berjam-jam -jam untuk untuk (ampur (ampuran an yang yang mengan mengandun dung g >//-0/ >//-0/// // k)mp)n k)mp)nen en Met)de Met)de ini sangat sangat baik baik untuk untuk analisi analisiss senyawa senyawa )rgan )rganik ik yang yang mudah mudah mengua menguap p sepert sepertii


i

hidr)karb)n dan eter E*isiensi pemisahan ditentukan dengan besarnya interaksi antara sampel dan (airan (airan,, dengan dengan menggu menggunak nakan an *ase(a *ase(air ir standa standarr yang yang diketa diketahui hui e*ekti e*ekti** untuk untuk berbag berbagai ai senyawa Kr)m Kr)mat at)g )gra ra*i *i gas gas 4$%5 4$%5 adal adalah ah jeni jeniss umum umum dari dari kr)mat)gra*i yang digunakan dalam kimia analitikuntuk memisahkan u ntuk memisahkan dan menganalisis senyawa yang dapat menguap tanpa dek)mp)sisi dek)mp)sisi $% dapat digunakan digunakan untuk penguj pengujian ian kemurn kemurnian ian ;at tertentu, atau memisahkan k)mp)nen yang berbeda dari (ampuran 4jumlah relati* k)mp)nen tersebut juga dapat ditentukan5 $% dapat digunakan dalam mengidenti*ikasi suatu senyawa Kr)mat)gra*i gas, berdasarkan *asa gerak dan *asa diamnya merupakan kr)mat)gra*i gas-(air !imana *asa geraknya berupa gas yang yang bersi*at inert, sedangkan *asa diamnya berupa (airan yang inert pula, dapat berupa p)limer ataupun larutan +dapun gambaran umum dari $% adalah sebagai berikut 9

Penger Pengertia tian n kr)ma kr)mat)g t)gra* ra*ii menyangk menyangkut ut met)d met)dee pemisah pemisahan an yang yang didasa didasarka rkan n atas atas distribusi de*erensial diantara dua *asa menga(u pada beberapa si*at k)mp)nen sampel, yaitu 9  Melarut dalam (airan  Melekat pada permukaan padatan padatan halus  ereaksi se(ara kimia Si*atSi*at-si* si*at at terseb tersebutl utlah ah yang yang diman* diman*aat aatkan kan dalam dalam met)de met)de kr)mat kr)mat)gr )gra*i a*i ini, ini, yaitu yaitu perbedaan migrasi k)mp)nen-k)mp)nen k)mp)nen-k)mp)nen di dalam sampel Pada prinsipnya prinsipnya pemisahan pemisahan dalam $% adalah adalah disisebabka disisebabkan n )leh perbedaan perbedaan dalam kemampuan distribusi analit diantara *ase gerak dan *ase diam di dalam k)l)m pada ke(epatan dan waktu yang berbeda Kr)mat Kr)mat)gr )gra*i a*i gas terdir terdirii dari dari . yaitu yaitu kr)ma kr)mat)g t)gra* ra*ii gas (airan (airan dengan dengan mekani mekanisme sme pemisahan partisi, yaitu9 0 Kr)mat)gra*i gasG(air 4K$%5, "ase diamnya berupa (airan yang diikatkan pada suatu pendukung sehingga s)lut akan terlarut dalam *ase diam Partisi k)mp)nen (uplikan didasarkan atas kelarutan uap k)mp)nen bersangkutan pada ;at (air 4*asa diam5 diam5 . Kr)mat)gra*i gas-padat 4K$P5 "ase "ase diam diamny nyaa beru berupa pa pada padata tan n dan dan kada kadang ng-k -kad adan ang g beru berup pa p)li p)lim merik erik Pada Pada kr)mat)gra*i gas-padat, partisi k)mp)nen (uplikan didasarkan atas *en)mena ads)rpsi pada permukaan ;at padat 4*asa diam5 2amun K$P jarang digunakan sehingga pada umumnya yang disebut dengan $% saat ini adalah K$%

PRINSIP Kr)mat)gra*i gas mempunyai prinsip yang sama dengan kr)mat)gra*i lainnya, tapi memilik memilikii bebera beberapa pa perbed perbedaan aan misalny misalnyaa pr)ses pr)ses pemisah pemisahan an (ampur (ampuran an dilaku dilakukan kan antara antara stasi)nary *ase (air dan gas *ase gerak dan pada )

i

Kr)mat)gra*i gas merupakan teknik pemisahan yang mana s)lut-s)lut yang mudah menguap 4dan stabil terhadap panas5 bermigrasi melalui k)l)m yang mengandung *ase diam deng dengan an suat suatu u ke(e ke(epa pata tan n yang yang terg tergan antu tung ng pada pada rasi) rasi) dist distri ribu busi siny nya a Pemisa Pemisaha han n pada pada kr)mat)gra*i gas didasarkan pada titik didih suatu senyawa dikurangi dengan semua interaksi yang mungkin terjadi antara s)lute dengan *ase diam Selain itu juga penyebaran (uplikan diantara dua *ase Salah satu *ase ialah *ase diam yang permukaannya nisbi luas dan *ase yang lain yaitu gas yang mengelusi *ase diam "ase gerak yang berupa gas akan mengelusi s)lute dari dari ujung ujung k)l)m k)l)m lalu lalu mengha menghanta ntarka rkanny nnyaa ke dete(t dete(t)r )r , Prinsip tama pemisahan dalam +romatog +romatografi rafi gas adalah adalah !erdasar+a !erdasar+an n per!edaan per!edaan la, migrasi migrasi masing-masin masing-masing g +omponen +omponen dalam melali +olom. omponen-+omponen yang terelsi di+enali /analisa +alitatif0 dari nilai "a+t retensinya /Tr0. $as pembawa 4biasanya digunakan Helium, +rg)n atau 2itr)gen5 dengan tekanan tertentu dialirkan se(ara k)nstan melalui k)l)m yang berisi *ase diam Selanjutnya sampel di injeksikan kedalam injekt)r 4 In,ection Port 5 yang suhunya dapat diatur K)mp)nen-k)mp)nen dalam sampel akan segera menjadi uap dan akan dibawa )leh aliran gas pembawa menuju k)l)m K)mp)nen- k)mp)nen akan terad)psi )leh *ase diam pada k)l)m kemudian akan meramb merambat at dengan dengan ke(epa ke(epatan tan berbed berbedaa sesuai sesuai dengan dengan nilai nilai Kd masing masing-- masing masing k)mp)n k)mp)nen en sehingga terjadi pemisahan K)mp)nen yang terpisah menuju detekt)r dan akan terbakar menghasilkan sinyal listrik yang besarnya pr)p)rsi)nal pr)p)rsi)nal dengan dengan k)mp)nen k)mp)nen tersebut Sinyal lau diperkuat )leh ampli*ier dan selanjutnya )leh pen(atat 4 recorder 5 dituliskan sebagai kr)mat)gram berupa pun(ak Pun(ak k)nsentrasi yang diper)leh diper)leh menggambarkan arus detekt)r terhadap terhadap waktu Se(ara Se(ara sederhana sederhana prinsip prinsip kr)mat)gra kr)mat)gra*i *i gas adalah adalah udara udara dilewatkan dilewatkan melalui nyala hydr)gen 4hydrogen 4 hydrogen flame5 flame 5 selanjutnya uap )rganik tersebut akan teri)nisasi dan menginduksi terjadinya aliran listrik pada detekt)r, kuantitas aliran l istrik sebanding dengan i)n INSTRUMENTASI Sistem peralatan dari kr)mat)gra*i gas terdiri dari 1 bagian utama diantaranya9

0

Tabung bung gas gas pemba embaw wa

.

Peng)n Peng)ntr) tr)lan lan aliran aliran dan regula regulat)r t)r tekana tekanan n

8

#nje #nje(t (ti)n i)n p)r p)rtt 4temp 4tempat at inje injeks ksii (upli (uplika kan5 n5

:

K)l)m

>

!etekt)r

1

Rek Rek)rde )rderr 4pen 4pen(a (ata tat5 t5


i

%ara pemisahan dari sistem ini sangat sederhana sekali, (uplikan yang akan dipisahkan diinjeksikan kedalam injekt)r, aliran gas pembawa yang inert akan membawa uap (uplikan keda kedalam lam k)l) k)l)m m K)l)m K)l)m akan akan memi memisah sahka kan n k)mp k)mp)n )nen en-k -k)m )mp)n p)nen en (upl (uplik ikan an ters terseb ebut ut K)mp)n K)mp)nenen-k)m k)mp)n p)nen en yang yang telah telah terpisa terpisah h tadi tadi dapat dapat didete dideteksi ksi )leh )leh detekt) detekt)rr sehing sehingga ga memb member erika ikan n siny sinyal al yang yang kemu kemudi dian an di(a di(ata tatt pada pada rek) rek)rd rder er dan dan beru berupa pa pun( pun(ak ak-p -pun un(a (ak k 4kr)mat)gram5 -

&as Pemba.a

$as pembawa ditempatkan dalam dalam tabung bertekanan bertekanan tinggi iasanya tekanan dari silinder sebesar 0>/ atm Tetapi tekanan ini sangat besar untuk digunakan se(ara #ansung  3ntuk memperke(il memperke(il tekanan tekanan tersebut tersebut agar memenuhi k)ndisi pemisahan maka digunakan digunakan drager yang dapat mengurangi tekanan dan mengalirkan gas dengan laju tetap +liran gas akan mengelusi k)mp)nen-k)mp)nen dengan waktu yang karaterisitik terhadap k)mp)nen tersebut 4waktu retensi5 Karena ke(epatan gas tetap maka k)mp)nen juga mempunyai <)lume yang karateristik untuk gas pembawa 4<)lume retensi5 +dapun persyaratan-persyaratan yang harus dipenuhi )leh gas pembawa adalah 9 0

#nert, #nert, agar agar tidak tidak terja terjadi di intera interaksi ksi dengan dengan pela pelarut rut

.

Murni, Murni, mudah mudah didapa didapatt dan dan murah murah hargan harganya ya

8

!apa !apatt meng mengur uran angi gi di*u di*usi si dari dari gas gas

:

%)() %)()k k untu untuk k detek detekt) t)rr yang yang dig digun unak akan an

$as-gas $as-gas yang yang sering sering dipaka dipakaii adalah adalah 9 helium helium,, arg)n, arg)n, nitr)g nitr)gen, en, karb)n karb)n di)ksi di)ksida da dan hidr)gen$as helium dan arg)n sangat baik, tidak mudah terbakar, tetapi sangat mahal H. mudah terbakar, sehingga harus berhati-hati dalam pemakaiannya Kadang-kadang digunakan juga %'. Pemilih Pemilihan an gas pengan pengangku gkutt atau atau pembaw pembawaa ditent ditentuka ukan n )leh detekt detekt)r )r yang yang diguna digunakan kan Tabung Tabung gas pembawa dilengkapi dilengkapi dengan pengatur pengatur tekanan keluaran dan pengukur pengukur tekanan tekanan Sebelum masuk ke kr)mat)gra*i, 4harusnya5 ada pengukur ke(epatan aliran gas serta sistem penapis m)lekuler untuk memisahkan me misahkan air dan peng)t)r gas lainnya Pada dasarnya ke(epatan alir gas diatur melalui pengatur tekanan dua tingkat yaitu pengatur kasar 4 coarse5 coarse5 pada tabung gas dan pengatur halus 4 fine5 fine5 pada kr)mat)gra* Tekanan gas masuk ke kr)mat)gra* 4yaitu teka tekana nan n dari dari tabu tabung ng gas5 gas5 diat diatur ur pada pada 0/ sd sd >/ psi psi 4di 4di atas atas teka tekana nan n ruan ruanga gan5 n5 untu untuk k memungkinkan aliran gas .> sd 0>/ m&menit pada k)l)m terpaket dan 0 sd .> m&menit untuk k)l)m kapiler


i

&aju alir gas pembawa mempengaruhi res)lusi &aju alir yang minimum diperlukan untuk res)lu res)lusi si maksim maksimum um 2amun, 2amun, perlu perlu diketa diketahui hui bahwa bahwa pada pada laju alir alir yang yang sangat sangat lambat lambat res)lusinya se(ara dramatis menurun )leh karena *akt)r-*akt)r9 pa(king tidak teratur, ukuran partikel, diameter k)l)m, dan lain-lain lain-lain &aju alir harus dik)ntr)l dengan tepat Tekanan dari silinder gas bertekanan pada gas pembawa harus (ukup untuk mend)r)ng gas melewati k)l)m pac+ing  Flo" controller atau needle &al&e harus ada pada sistem $% dan sering disatukan dalam bagian depan instrumen &aju &aju alir alir harus harus dapat dapat diatur diatur se(ara se(ara hati-h hati-hati ati sehing sehingga ga dapat dapat diketah diketahui ui berapa berapa laju laju alir alir )ptimumny )ptimumnyaa dan harus dapat disamakan disamakan dalam per()baan per()baan berikutnya berikutnya erbagai erbagai flo" meter tersedia, dan kadang-kadang )leh pabrik pembuat instrumen disatukan di dalam instrumen sehingga laju alir terpantau se(ara k)ntinyu dan dapat diatur lagi 4bila perlu5 dengan memutar needle &al&e &al&e ila tidak ada flo" ada flo" meter maka flo" maka flo" meter gelembung sabun sering digunakan, flo" meter gelembung gelembung sabun tersusun dari pipet ukur 4 measring pipet 5, 5, tabung gelas 4 glass 4 glass t!ing 5, 5, dan pipet bulb !engan perangkat flo" meter gelembung sabun, stop sabun, stop "atch digunakan untuk mengukur waktu pada gelembung yang bergerak di antara dua tanda garis, misalnya /G. ml !engan demikian laju alir gas pembawa 4mlmenit5 dapat dihitung /

Tempat In0eksi !alam !alam pemisah pemisahan an dengan dengan $&% (uplik (uplikan an harus harus dalam dalam bentuk bentuk *ase *ase uap uap $as dan uap dapatdimasukkan se(ara langsung Tetapi kebanyakan senyawa )rganik berbentuk (airan dan padatan Hingga dengan demikian de mikian senyawa sen yawa yang berbentuk (airan dan padatan pertama-tama harus diuapkan #ni membutuhkan pemanasan sebelum masuk dalam k)l)m Panas itu terdapat pada tempat injeksi seperti pada gambar 7 bagan bagan injekt)r

Tempat injeksi dari alat $&% selalu dipanaskan !alam kebanyakan alat, suhu dari tempat injeksi dapat diatur +turan pertama untuk pengaturan suhu ini adalah bahwa suhu tempat injeksi sekitar >/N% lebih tinggi dari titik didih (ampuran dari (uplikan yang mempunyai titik didih yang paling tinggi ila kita tidak mengetahui titik didih k)mp)nen dari (uplikan maka kita kita harus harus men()b men()ba-( a-()ba )ba Sebaga Sebagaii tindak tindak lanjut lanjut suhu suhu dari dari tempat tempat injeks injeksii dinaik dinaikkan kan ika pun(ak-pun(ak yang diper)leh lebih baik, ini berarti bahwa suhu per()baan pertama terlalu rendah 2amun demikian suhu tempat injeksi tidak b)leh terlalu tinggi, sebab kemungkinan akan terjadi perubahan karena panas atau penguraian dari senyawa yang akan dianalisa

%uplik %uplikan an dimasu dimasukka kkan n ke dalam dalam k)l)m k)l)m dengan dengan (ara (ara mengin menginjek jeksik sikan an melalu melaluii tempat tempat injeksiHal injeksiHal ini dapat dilakukan dilakukan dengan dengan pert)l)ngan pert)l)ngan jarum injeksi yang sering disebut disebut O a gas tight syringeO syringeO


i

Perlu diperhatikan bahwa kita tidak b)leh menginjeksikan (uplikan terlalu banyak, karena $% sangat sensiti* iasanya jumlah (uplikan yang diinjeksikan pada waktu kita mengadakan analisa /,> ->/ ml gas dan /,. - ./ ml untuk (airan Ketepatan <)lum injeksi menjadi sangat penting untuk analisa kuantitati* di mana jumlah analit yang diukur )leh detekt)r tergantung pada k)nsentrasi analit dalam (uplikan +pabila pr)sedur dikehendaki hanya untuk identi*ikasi 4analisis kualitati*5, maka ketepatan <)lum injeksi menjadi kurang penting 3ntuk mengisi alat injeksi dapat dipakai teknik sebagai berikut9 - +lat injeksi injeksi dibersih dibersihkan kan - +lat injeksi dikuras dikuras dengan menghisap menghisap (uplikan beberapa beberapa kali 4dan mengeluarkan mengeluarkan isinya isinya di luar tempat (uplikan5 - umlah (uplikan (uplikan yang diperlukan diperlukan dihisap dihisap %ara untuk mengeluarkan mengeluarkan gelembung-gelem gelembung-gelembung bung udara yang masih tertinggal pada tabung injeksi adalah dengan jalan menekan t)rak injeksi se(epatnya beberapa kali dan ujung jarum harus selalu berada di dalam (airan - 3dara 00/ dari dari <)lum maksimum maksimum dihisap lagi lagi - arum bagian luar dibersihkan dengan kain kain yang tidak mudah mudah lepas serat- seratnya - %upl %uplik ikan an diin diinjek jeksi sika kan n deng dengan an menus menusuk ukka kan n jaru jarum m menem menembu buss sept septum um,, dan dan mene meneka kan n penghisap sampai ujungnya dengan gerakan yang (epat dan tidak terputus-putus, kemudian tarik jarum keluar dari septum - T)rak T)rak injeksi ditarik kembali sedikit dan lihat berapa banyak banyak (airan yang masih tertinggal - !iameter !iameter k)l)m yang digunakan digunakan tetap tetap diperhatikan diperhatikan dalam melakuka melakukan n pemisahan pemisahan agar sesuai dengan batasan <)lum penyuntikan pen yuntikan Tabel Tabel berikut memperlihatkan hal itu

Tabel 1 Batasan 2olum Pen"untikan

F)lum #njeksi !iameter K)l)m

Maksimum

 in 4 pac+ed colmn5 colmn5

0// Ql

0= in 4 pac+ed colmn5 colmn5

./ Ql

Kapiler 4open 4open t!lar 5

/,0 Ql


i

3

4olom K)l)m merupakan jantung dari kr)mat)gra*i gas entuk dari k)l)m dapat lurus, bengk)k, misal berbentuk F atau I, dan kumparanspiral iasanya bentuk dari k)l)m adalah kumparan K)l)m ini dapat terbuat dari 9

a

Tembaga 4m 4murah dan mu mudah di diper)leh5

b

Plastik 4te*l)n5, dipakai pada suhu yang yang tidak terlalu tinggi

(

aja 4 stainless stainless steel 5, 5, 4mahal5

d

+lumunium

e

$elas

Panjang k)l)m dapat dari 0 m sampai 8 m !iameter k)l)m mempunyai berbagai ukuran, biasanya pengukuran berdasarkan diameter dalam dari k)l)m gelas yaitu antara /,8 mm hingga > min Kebanyakan k)l)m yang digunakan berupa stainles steel dengan dengan diameter luar 4'!5 dari #S atau 0: inch 4/,8 inch 4/,8 atau /,1 (m5 Pada $S% k)l)m diisi dengan penyerap 4adsor!ent 5, 5, sedangkan pada $&% k)l)m diisi dengan O solid O solid spport O 4padatan pendukung5 yang diikat )leh *ase diam #nstrumen $% didisain supaya k)l)m dapat diganti se(ara mudah dengan melepaskan *ittin *itting g di dalam dalam )

i

+da . jenis k)l)m tubuler terbuka, yaitu I%'T 4 1all %oated 2pen T!lar %olmns5 %olmns 5 dan S%'T 4Spport 4 Spport %oated 2pen T!lar %olmns 5

5

Detektor

!etekt)r ber*ungsi sebagai pendeteksi k)mp)nen-k)mp)nen yang telah dipisahkan dari k)l)m se(ara terus-menerus, (epat, akurat, dan dapat melakukan pada suhu yang lebih tinggi !etekt)r harus dapat diper(aya dan mudah digunakan "ungsi umumnya mengubah si*at-si*at m)lekul dari senyawa )rganik menjadi arus listrik kemudian arus listrik tersebut diteruskan ke rek)rder untuk menghasilkan kr)mat)gram !etekt)r yang diinginkan adalah detekt)r yang mempunyai mempunyai sensiti*itas sensiti*itas yang tinggi, tinggi, n)isenya n)isenya rendah, rendah, resp)nnya resp)nnya linear, linear, dapat memberikan memberikan resp)n dengan setiap senyawa, tidak sensiti* terhadap perubahan temperatur dan ke(epatan aliran dan juga tidak mahal harganya !etekt)r dalam $% digunakan untuk memun(ulkan sinyal listrik hasil elusi gas pembawa dari k)l)m erbagai jenis detekt)r detekt)r dibuat untuk melakukan melakukan deteksi deteksi Tidak Tidak hanya hanya berupa berupa

i

!etekt)r yang umum digunakan9



!etekt)r hantaran panas 4Thermal 4 Thermal %ondcti&ity $etector T%!5 T%!5

Prinsip kerja T%! 9 erdas erdasark arkan an perbed perbedaan aan daya daya hantar hantar panas, panas, relati* relati* terhad terhadap ap gas pembawa pembawa "ilame "ilament nt dipanaskan, dimana suhu *ilament tergantung pada k)ndukti
!etekt)r i)nisasi nyala 4 Flame Ioniation $etector  "#!5

Prinsip kerja dete(t)r "#! 9 Senyawa yang terbawa *asa gerak dii)nisasi dengan nyala 4H. C '.  udara5 Perubahan arus arus akibat akibat i)nisa i)nisasi si diukur diukur sebaga sebagaii resp)n resp)n analit analit Tidak Tidak sensti sensti** terhad terhadap ap karb)n karb)n yang yang ter)ksidasi penuh "#! merupakan detekt)r yang paling luas penggunaannya, bahkan dianggap sebagai detekt)r yang uni
!etekt)r penangkap elektr)n 4Ele(tr)n %apture !ete(t)r E%!5


i

Prinsip kerja dete(t)r E%! 9 Meka Mekani nism smee detek deteksi si meli meliba batka tkan n emisi emisi part partik ikel el radi radi)a )akt kti* i* 45 dari dari 182i 182i Part Partik ikel el  menghasilkan elektr)n termal dari gas pembawa erdasarkan penangkapan elektr)n termal )leh m)lekul sampel Pada E%! terdapat peman(ar radi)akti* , seperti 8H atau 182i yang akan mengi)nisasi gas pembawa +liran elektr)n sebagai hasil i)nisasi gas pembawa 4nitr)gen atau arg)nmethan5 dalam E%! memberikan sinyal yang berupa baseline suatu kr)mat)gram ila kemudian suatu senyawa masuk ke dalam detekt)r, sebagian dari elektr)n tersebut akan ditangkap )leh senyawa sebelum mereka men(apai plat detekt)r #ni mengakibatkan aliran arus listrik dalam detekt)r berkurang, yang )leh rek)rder akan di(atat sebagai suatu peak 

!etekt)r *)t)metrik nyala 4 Falame Photomertic $etector "P!5 "P!5



!etekt)r nyala alkali



!etekt)r spektr)sk)pi massa

!etekt)r yang peka terhadap senyawa )rganik yang mengandung *)s*)r adalah "#!, E%!, dan "P! !etekt)r penangkap elektr)n 4 (lectron 4 (lectron %aptre $etector G G E%!5 Pada penetapan ini, digunakan detekt)r penangkap elektr)n !etekt)r ini merupakan m)di*ikasi dari "#! yaitu pada bagian tabung i)nisasi !asar dari E%! ialah terjadinya abs)rbsi e- )leh senyawa yang mempunyai a*initas terhadap e- bebas 4senyawa-senyawa elektr)negati*5 !alam detekt)r gas teri)nisasi )leh partikel yang dihasilkan dari 8H atau 182i !etekt)r ini mengukur kehilangan sinyal ketika analit terelusi dari k)l)m kr)mat)gra*i !etekt)r ini peka terhadap senyawa hal)gen, karb)nil terk)yugasi, nitril, nitr), dan )rgan) l)gam, namun tidak peka terhadap hidr)karb)n, ket)ne, dan alk)h)l Tabel Tabel 9 eberapa jenis detekt)r $% Detectable compounds

Minimum detectable

)Selekti6itas+

amount )Sensiti6itas+

#enis Detector #enis Detector

Thermal

%ondcti&ity

#ll componds other than the

0/ ppm

$etector 4T%!5

carrier gas

40/ ng5

Flame Ioniation $etector

2rganic componds componds

Ppm

4"#!5

4/0 ng5

(lectron %aptre %aptre $etector

2rganic halogen componds

Ppb

4E%!5

2rganic metal componds

4/0 pg5

2rganic nitrogen nitrogen componds

0ppb 40 pg5

Flame

Thermionic


i

$etector 4"T!5

2rganic

phosphoros

/0 ppb 4/0 pg5

organic

0/ ppb

componds

Flame

Photometric

$etector 4"P!5

Inorganic componds

slfr

40/ pg5

Inorganic

organic

phosphoros componds componds

Srface $etector 4S#!5

Ioniation

'e&el 3 amine componds

ppb 4/0 pg5

Polycyclic aromatics

0 ppb 40 pg5

7

Recor ecord der )penca encata tatt+ Re()rder ber*ungsi sebagai pengubah sinyal dari detekt)r yang diperkuat melalui elektr)meter menjadi bentuk kr)mat)gram !ari kr)mat)gram yang diper)leh dapat dilakukan analisis kualitati* dan kuantitati* +nalisis kualitati* dengan (ara membandingkan waktu retensi sampel dengan standar +nalisis +nalisis kuantitati* dengan menghitung luas area data Sebuah rek)rder bekerja dengan menggerakkan kertas dengan ke(epatan tertentu di atas kertas tersebut dipasangkan dipasangkan pena yang digerakkan digerakkan )leh sinyal keluaran keluaran detekt)r sehingga p)sisinya akan berubah-ubah sesuai dengan dinamika keluaran penguat sinyal detekt)r Hasil rek)rder adalah sebuah kr)mat)gram kr)mat)gram berbentuk berbentuk pik-pik dengan p)la yang sesuai dengan k)ndisi sampel dan jenis detekt)r yang digunakan

Rek)rder biasanya dihubungkan dengan sebuah elektr)meter yang dihubungkan dengan sirkuit pengintregrasi yang bekerja dengan menghitung jumlah muatan atau jumlah energi listrik yang dihasilkan )leh detekt)r Elektr)meter akan melengkapi pik-pik kr)mat)gram dengan data luas pik atau tinggi pik lengkap dengan biasnya Sistem data merupakan pengembangan lebih lanjut dari rek)rder dan elektr)meter dengan melan melanju jutk tkan an siny sinyal al dari dari rek) rek)rd rder er dan dan elek elektr tr)m )met eter er ke sebua sebuah h unit unit peng peng)l )lah ah pusat pusat 4%P%ent ral Procesing nit 5 5


i

#ENIS SAMPE$

$as-li?uid $as-li?uid (hr)mat)graphy (hr)mat)graphy 4$&%5, atau sering disebut $as %hr)mat)gra %hr)mat)graphy phy 4$%5 saja, merupakan tipe umum kr)mat)gra*i yang digunakan dalam kimia )rganik untuk memisahkan dan menganalisa menganalisa k)mp)nen yang bisa diuapkan diuapkan 4/ )% atau di bawahnya, dan semuanya tidak terurai pada suhu tersebut, $% mungkin bisa dipakai untuk menganalisa !eri
!eri
Senyawa-senyawa tersebut tidak memungkinkan dilakukan analisis dengan $% terkait dengan <)latilitas dan stabilitasnya

•

3ntuk 3nt uk men mening ingkatk katkan an bat batas as det deteks eksii dan ben bentuk tuk kr) kr)mat mat)gr )gram am eb ebera erapa pa seny senyawa awa tid tidak ak menghasilkan bentuk kr)mat)gram yang bagus 4misal pun(ak kr)mat)gram saling tumpang tindih5 atau sampel yang dituju tidak terdeteksi, karenanya diperlukan deri
•

Mening Men ingkat katkan kan <)l <)lati atilita litas, s, misa misall seny senyawa awa gul gula a Tu Tujua juan n utam utamaa der deri
•

Meningkatkan deteksi, misal untuk k)lester)l dan senyawa-senyawa ster)id

•

Meningkatkan stabilitas eberapa senyawa <)latil mengalami dek)mp)sisi parsial karena panas sehingga diperlukan deri
•

Meningkatkan batas deteksi pada penggunaan detekt)r tangkap elektr)n 4E%!5

#nilah ()nt)h deri
%aranya9 Sirup dek)ngestan dibasakan dengan am)nia dan diekstraksi ke dalam etil asetat sehingga akan menjamin bahwa semua k)mp)nen yang terekstraksi berada dalam bentuk basa bebasnya daripada bentuk garamnya entuk basa inilah yang bertanggungjawab pada bagusnya bentuk pun(ak

kr)mat)gra*i $aram-garam atau basa-basa akan terurai karena adanya panas pada lubang suntik $%, sehingga dengan adanya pr)ses ini akan dapat menyebabkan terjadinya peruraian

ika ekstrak pada sirup dek)ngestan di lakukan kr)mat)gra*i gas se(ara langsung maka kr)mat)gram yang dihasilkan seperti gambar dibawah asa bebas tripr)lidin dan dekstr)met)r*an menunjukkan bentuk pun(ak yang bagus, akan tetapi pesud)e*edrin yang merupakan basa yang lebih kuat karena adanya gugus hidr)ksil dan gugus amin memberikan bentuk pun(ak yang kurang bagus Hal ini dapat diatasi dengan menutup gugus p)lar 4gugus hidr)ksi dan amin5 pada pseud)e*edrin dengan (ara mereaksikannya menggunakan tri*lu)r)asetat anhidrida 4T"+5 Perlakuan dengan T"+ ini tidak menghasilkan senyawa deri
Sementara ini merupakan kr)mat)gram sesudah dilakukan deri
MET%DE ANA$ISIS ila <)lum atau k)nsentrasi dari masing-masing k)mp)nen yang terpisah sudah tertentu, hal itu disebu disebutt penent penentuan uan <)lumetri <)lumetrik k /&olmetric /&olmetric determinatio determination0 n0 $% dida didasar sarka kan n pada pada prin prinsip sip bahw bahwaa k)mp)nen target yang terdeteksi adalah murni karena sudah dipisahkan dari k)mp)nen-k)mp)nen lain dalam (uplikan (uplikan ila pemisahan pemisahan ini betul-betu betul-betull sempurna, sempurna, <)lumnya <)lumnya 4k)nsentra 4k)nsentrasinya sinya55 dapat ditentukan dengan tingkat keakuratan yang sangat tinggi

erikut : p)k)k met)da analisis 4penentuan <)lumetrik5 yang digunakan dalam $%9 0

Met) Met)da da perse persent ntase ase luas luas perm permuk ukaa aan n /srface area percentage method0

.

Met)da Met)da pengat pengatura uran n pers persenta entase se luas luas perm permuka ukaan an /ad,sted srface area percentage method0

8

Met) Met)da da kur< kur
:

Met) Met)da da inte intern rnal al stan standa dard rd /internal standard method0

Keuntungan dan kekurangan masing-masing met)da di atas dan pemilihan met)danya menjadi penting dalam mempertimbangkan analisis yang ingin dihasilkan

4elebi!an

0

Iaktu Ia ktu analisis analisis yang yang singka singkatt dan dan ketajam ketajaman an pemisah pemisahan an yang tinggi tinggi

.

!apa !apatt meng menggu guna naka kan n k)l)m k)l)m lebi lebih h panj panjan ang g untu untuk k meng mengha hasi silk lkan an e*isi e*isien ensi si pemisa pemisaha han n yang yang tinggi

8

$as $as mem mempu puny nyai ai
:

Kesetimbanga Kesetimbangan n partisi partisi antara antara gas dan (airan (airan berlang berlangsung sung (epat (epat sehingg sehinggaa analisis analisis relati* relati* (epat (epat dan sensiti*itasnya tinggi

>

Pemak Pemakaia aian n *ase *ase (air (air memu memung ngki kink nkan an kita memili memilih h dari dari sejum sejumlah lah *ase *ase diam diam yang yang sangat sangat beragam yang akan memisahkan hampir hampir segala ma(am (ampuran

4ekurangan

0

Tekn Teknik ik Kr)mat) Kr)mat)gra gra*i *i gas terba terbatas tas untuk untuk ;at ;at yang mudah mudah meng menguap uap

.

Kr)mat Kr)mat)gr )gra*i a*i gas tidak tidak mudah dipaka dipakaii untuk memisa memisahka hkan n (ampuran (ampuran dalam dalam jumlah jumlah besar besar Pemisahan pada tingkat mgU mudah dilakukan, pemisahan pada tingkat gramU mungkin dilakukan, tetapi pemisahan dalam tingkat p)nU atau t)nU sukar dilakukan ke(uali jika ada met)de lain

8

"ase gas gas dibandin dibandingk gkan an sebagian sebagian besar besar *ase *ase (air tidak tidak bersi*a bersi*att reakti* reakti* terhada terhadap p *ase diam dan dan ;at terlarut

MET%DE PEN&%$A'AN DAT DATA A 'ASI$ ANA$ISIS ANA$ISIS

+nalisis kuantitati* !engan asumsi bahwa luas pun(ak berbanding lurus dengan kadar senyawa pada k)ndisi elusi yang sama, maka kadar sample dapat dihitung sama dengan luas pun(ak sample dibagi luas pun(ak senyawa pembanding kali kadar senyawa pembanding %ara demikian tentunya menanggung banyak ralat, )leh karena itu akan lebih baik bila dibuat kur
pun(ak sample dibagi luas standar internal pada )rdinat dan bila ditarik garis sejajar absis mem)t)ng garis regresi, selanjutnya selanjutnya ditarik garis sejajar sejajar )rdinat )rdinat maka akan mem)t)ng mem)t)ng absis, pada titik p)t)ng p)t)ng dengan absis inilah diketahui kadar sample

Standar internal Syarat sebagai standar internal sama dengan syarat senyawa untuk dapat dipakai sebagai standar eksternal %ara kerja penetapan kadar menggunakan Standar internal adalah sebagai berikut9 Misalnya menambahkan standar internal 4+5 sebanyak /,8=1 gram kepada sample 4%5 berat /,>.70 gram, (ampuran ini dilarutkan dalam pelarut yang sesuai hingga <)lume tertentu Kemudian 0 Vil diinjeksikan dan di(atat luas pun(ak + dan % Pada prinsipnya pada penetapan ini adalah membandingkan dua senyawa berbeda Satu diantaranya adalah diketahui beratnya Resp)n detekt)r akan berbeda untuk senyawa berbeda, jelasnya a gram senyawa + dan a gram senyawa  tidak memberikan luas pun(ak yang sama 'leh karena itu perlu adanya *akt)r k)reksi Perhitungan *akt)r k)reksi dapat dilihat pada Tabel berikut

Sen"a.a

Berat

+

/,8=1

Perbandinga n Berat C8A

$uas Puncak

Perbandingan $uas

0,8:>

/,71.

:.80 0,87=

%

Perbandinga n $uas Puncak C8A

/,>.70

Luas Puncak C x Berat A erat % B Luas Puncak A x Faktor Koreksi Koreksi B

>10

5671 x 0,3786 4231 x 0,962

B /,>.>

Kadar % B /,>.>/,>.70 @ 0//J B 77,17 J Met)da Penambahan /#ddition method0 Met)da penambahan adalah menambahkan senyawa murni yang dianalisis itu sendiri dengan jumlah terukur ke dalam sample Supaya lebih jelas diambil ()nt)h k)ngkrit pada penetapan metil salisilat salisilat dalam minyak g)s)k g)s)k !iperlukan !iperlukan is)pr)pan) is)pr)pan)ll digunakan digunakan sebagai sebagai pelarut pelarut &angkah-lan &angkah-langkah gkah adalah sebagai berikut9 0 Kedalam 8 4tiga5 4tiga5 labu takar 0/,/ ml dimasukka dimasukkan n masing-ma masing-masing sing >,/ >,/ ml minyak minyak g)s)k g)s)k 4sampl 4sample5 e5 .

Ke dalam dalam . 4!ua 4!ua55 labu labu takar takar yang yang beri berisi si sample sample ditam ditamba bahk hkan an metil metil sali salisil silat at murn murnii 4stan 4standa dar5 r5 masing-masing /,8 ml dan /,1 ml

8

Ke tiga tiga labu labu 4 beri berisi si99 samp sample le,, samp sample le C /,8m /,8mll meti metils lsal alis isil ilat at murni murni dan sam sample ple C /,1 /,1 ml metilsalisilat murni5 dien(erkan dengan is )pr)pan)l hingga tanda

:

!ari !ari ke tiga tiga labu labu takar takar ini ini diinj diinjeks eksika ikan n masing masing-ma -masin sing g 0Q0 0Q0

>

Selanju Selanjutny tnyaa dihitung dihitung kadar kadar metil metil salisilat salisilat dalam dalam sample sample dengan dengan rumus rumus dibawah dibawah ini ini !ua kali pengukuran, kadar dihitung rata-rata rata-rata hx .Cs .Cs

%@ B

hx + s −hx

Keterangan 9 %@ B kadar 4J<)l sample5 %s B J <)lume standar yang ditambahkan h@ B luas pun(ak sample h@Cs B luas pun(ak 4sample C standar yang ditambahkan

&CMS PENDA'U$UAN $as %hr)mat)graphy dan $as %hr)mat)graphy-Mass Spe(tr)*)t)metri( adalah dua alat yang memliki memliki dete(t)r yang berbeda, meskipun meskipun namanya berawalan berawalan W$as %hr)mat)gra %hr)mat)graphyX phyX !etekt)r !etekt)r yang ber*ungsi untuk mengubah sinyal-sinyal radiasi menjadi energy listrik yang kemudian dapat diba(a )leh alat

3ntuk $%, menggunaka menggunakan n detekt)r detekt)r Thermal Thermal %)ndu(ti
PRINSIP $%-MS terdiri terdiri dari dua bagian yaitu gas yaitu gas chromatography 4$%5 dan mass spectrometry 4MS5 yang masing-masing mempunyai *ungsi berbeda $% ber*ungsi untuk memisahkan senyawa-senyawa dalam sampel Pemisahan terjadi terjadi pada bagian k)l)m k)l)m Prinsip pemisahan pemisahan berdasarka berdasarkan n perbedaan perbedaan tingkat <)latilitas dari senyawa dan juga berdasarkan interaksi dengan *ase diam 4 stationary 4 stationary phase5 phase5 Pada k)l)m diberlakukan gradien suhu dan holding untuk untuk meng)ptimalkan pr)ses pemisahan sen yawa tersebut

Senyawa-senyawa yang sudah terpisah pada k)l)m $%, akan memasuki MS MS terdiri dari tiga tiga bagian bagian yaitu yaitu sumber sumber i)n, i)n, mass analyer analyer dan dan detekt detekt)r )r Senyawa Senyawa yang yang masuk masuk ke MS akan akan mengalami i)nisasi dan *ragmentasi menjadi i)n-i)n *ragmen #)nisasi terjadi karena adanya elektr)n yang berasal dari sumber i)n #)n-i)n #)n-i)n *ragmen *ragmen akan memasuki mass analyer analyer dan dan akan dipisahkan dipisahkan berdasarkan berdasarkan nilai m;nya #)n *ragmen yang mempunyai nilai m; ke(il akan memasuki detekt)r lebih (epat dibandingkan i)n *ragmen yang mempunyai nilai m; besar 'utput dari detekt)r berupa diagram hubungan antara nilai m; dengan intensitas relati* i)n-i)n *ragmen dari suatu senyawa Setiap senyawa mempunyai p)la m; yang berbeda-beda, sehingga kita dapat mengidenti*ikasi suatu senyawa dengan membandingkan dengan p)la spektra yang ada pada li!rary li!rary

INSTRUMENTASI -, &as Pengangkut $as pengangkut pemas)k gas 4(arrier gas5 ditempatkan dalam silinder bertekanan tinggi iasanya tekanan dari silinder sebesar 0>/ atm Tetapi tekanan ini sangat besar untuk digunakan se(ara #ansung $as pengangkut harus memenuhi persyaratan 9 a Harus Harus inert, inert, tidak bereaks bereaksii dengan dengan (uplika (uplikan, n, (uplikan (uplikan-pe -pelar larut, ut, dan material material dalam k)l)m b Murni dan mudah diper)leh, diper)leh, serta murah ( Sesu Sesuai ai() ()() ()k k untuk untuk det detek ekt) t)r r d Haru Haruss meng mengur uran angi gi di* di*us usii gas gas

$as-gas yang sering dipakai adalah 9 helium, arg)n, nitr)gen, karb)n di)ksida dan hidr)gen $as helium dan arg)n sangat sangat baik, tidak mudah terbakar, terbakar, tetapi tetapi sangat mahal H . mudah terbakar, sehingga harus berhati-hati dalam pemakaiannya Kadang-kadang digunakan juga %' . Pemilihan gas pengangkut atau pembawa ditentukan )leh ditekt)r yang digunakan Tabung Tabung gas pembawa dilengkapi dengan pengatur tekanan keluaran dan pengukur tekanan Sebelum masuk ke kr)mat)gra*i, ada pengukur ke(epatan aliran gas serta sistem penapis m)lekuler untuk memisahkan air dan peng)t)r gas lainnya Pada dasarnya ke(epatan ke(epatan alir gas diatur melalui pengatur tekanan dua tingkat yaitu pengatur kasar 4()arse5 pada tabung gas dan pengatur halus 4*ine5 pada kr)mat)gra*i Tekanan gas masuk ke kr)mat)gra* 4yaitu tekanan dari tabung gas5 diatur pada 0/->/ psi 4di atas tekanan ruangan5 untuk memungkinkan aliran gas .>-0>/ m&menit pada k)l)m terpaket dan 0-.> m&menit untuk k)l)m kapiler /,

Tempat in0eksi ) in0ection port+

!alam !alam kr)m kr)mat) at)gr gra* a*ii gas gas (upl (uplik ikan an haru haruss dalam dalam bent bentuk uk *ase *ase uap uap $as $as dan dan uap uap dapa dapatt dimasukkan dimasukkan se(ara langsung langsung Tetapi Tetapi kebanyakan kebanyakan senyawa senyawa )rganik )rganik berbentuk berbentuk (airan dan padatan padatan Hingga dengan demikian senyawa yang berbentuk (airan dan padatan pertama-tama harus diuapkan #ni membutuhkan pemanasan sebelum masuk dalam k)l)m Tempat injeksi dari alat $&%K$% selalu dipanaskan !alam kebanyakan alat, suhu dari tempat injeksi dapat diatur +turan pertama untuk pengaturan suhu ini adalah batiwa suhu tempat injeksi injeksi sekitar >/N% lebih tinggi dari titik didih (ampuran (ampuran dari (uplikan (uplikan yang mempunyai mempunyai titik didih yang paling tinggi ila kita tidak mengetahui titik didih k)mp)nen dari (uplikan maka kita harus men()ba-()ba Sebagai tindak lanjut suhu dari tempat injeksi dinaikkan ika pun(ak-pun(ak yang diper)leh lebih baik, ini berarti bahwa suhu per()baan pertama terlalu rendah 2amun demikian suhu tempat injeksi tidak b)leh terlalu tinggi, sebab ke mungkinan akan terjadi perubahan karena panas atau penguraian dari senyawa yang akan dianalisa %uplikan dimasukkan ke dalam k)l)m dengan (ara menginjeksikan melalui tempat injeksi Hal ini dapat dilakukan dengan pert)l)ngan jarum injeksi yang sering disebut Oa gas tight syringeO Perlu diperhatikan bahwa kita tidak b)leh menginjeksikan (uplikan terlalu banyak, karena $% sangat sensiti* iasanya jumlah (uplikan yang diinjeksikan pada waktu kita mengadakan analisa /,> ->/ ml untuk gas dan /,. - ./ ml ml untuk (airan seperti pada gambar di bawah

3,

4olom %)ul)m, ada dua jenis k)l)m yang digunakan dalam $% Yang pertama adalah kolom kemas, yaitu berupa tabung yang terbuat dari gelas atau steinstless berisi suatu padatan padatan inert yang dikemas se(ara rapi K)l)m ini memiliki ukuran panjang 0,>-0/ m dan diameter .,.-: nm

Yang ang kedua kedua adalah adalah kolom kapiler yang bias biasany anyaa terb terbua uatt dari dari sili( sili(aa deng dengan an lapis lapisan an kapiler, yang p)liamida K)l)m jenis ini biasanya memiliki ukuran panjang ./-.1 m dengan diameter yang sangant ke(il

5,

Detektor !etekt)r !etekt)r ber*ungsi ber*ungsi sebagai sebagai pendeteksi pendeteksi k)mp)nenk)mp)nen-k)mp) k)mp)nen nen yang telah dipisahkan dari k)l)m se(ara terus-menerus, (epat, akurat, dan dapat melakukan pada suhu yang lebih tinggi "ungsi umumnya mengubah si*at-si*at m)lekul dari senyawa )rganik menjadi arus listrik kemudian arus listrik tersebut diteruskan diteruskan ke rek)rder rek)rder untuk menghasilka menghasilkan n kr)mat)gram kr)mat)gram !etekt)r !etekt)r yang umum digunakan9 a !etekt)r hantaran panas 4Thermal %)ndu(ti
7,

%6en kolom K)l)m terletak didalam sebuah )
Recorder Rek) Rek)rd rder er ber* ber*un ungs gsii seba sebaga gaii peng pengub ubah ah sinya sinyall dari dari dete detekt kt)r )r yang yang dipe diperk rkua uatt mela melalu luii elektr)mete elektr)meterr menjadi menjadi bentuk bentuk kr)mat)gram kr)mat)gram !ari kr)mat)gram kr)mat)gram yang diper)leh diper)leh dapat dapat dilakukan dilakukan analisis analisis kualitati* kualitati* dan kuantitati* kuantitati* +nalisis +nalisis kualitati* kualitati* dengan dengan (ara membanding membandingkan kan waktu retensi sampel sampel dengan dengan standa standar r +nali +nalisis sis kuanti kuantitat tati* i* dengan dengan menghi menghitun tung g luas luas area area maupun maupun tinggi tinggi dari dari kr)mat)gram kr)mat)gram Sinyal analitik analitik yang dihasilkan dihasilkan detekt)r detekt)r disambungkan disambungkan )leh rangkaian rangkaian elektr)nik elektr)nik agar bisa bisa di)lah )leh rek)rder atau sistem data

Sebuah rek)rder bekerja dengan menggerakkan kertas dengan ke(epatan tertentu di atas kertas tersebut dipasangkan pena yang digerakkan )leh sinyal keluaran detekt)r sehingga p)sisinya akan berubah-ubah sesuai dengan dinamika keluaran penguat sinyal detekt)r Hasil rek)rder adalah sebuah kr)mat)gram kr)mat)gram berbentu berbentuk k pik-pik dengan p)la yang sesuai dengan k)ndisi k)ndisi sampel dan jenis detekt)r yang digunakan +da beberapa detekt)r yang dapat digunakan dalam kr)mat)gra*i gas !etekt)r yang berbeda akan memberikan berbagai jenis selekti
#nstrumentasi Spektr)*)t)meter Massa Sistem instrumen spektr)meter massa terbagi menjadi > bagian yaitu 9 -,

Sistem penanganan cuplikan

#ni meliputi alat untuk memasukan (uplikan, mikr)man)meter untuk menentukan jumlah (uplikan yang masuk, alat 4lubang m)lekul5 pengukur (uplikan yang masuk ruang pengi)nan serta sistem pem)mpaan Pemasukan gas biasanya mudah, pemindahan dari dari tabung ke alat meter lalu ke ruang pengi)nan %airan dimasukan dengan menyentuh pipet mikr) ke piringan gelas WsinteredX atau lubang tertentu terbuat dari air raksa atau galium atau dengan suntikan jarum hip)dermis Tabung Tabung berisi (upikan dip)mpa dengan es kering 4dry 4dr y i(e5, lalu dihangatkan untuk menguapkan (uplikan ke sistem masukan 4inlet5 Sistem masukan yang dipanaskan dipakai untuk (airan se(ara langsung ke ruang pengi)nan mengurangi batasa yang disebabkan )leh keatsirian dan kemantapan termal Teknik Teknik pemasukan langsung ini mengurangi derajat keatsirian yang diperluakn untuk analisis Karena Karena pengi) pengi)nan nan berlang berlangsun sung g dalam dalam keadaa keadaan n uap, uap, memang memang masih masih diperl diperluka ukan n sediki sedikitt deraja derajatt keatsirian dan kemantapan termal tertentu P)la peme(ahan m)lekul terulang dapat di(apai bagi berbagai senyawa berb)b)t m)lekul tinggi seperti terpen)id, ster)id, p)lisakarida, peptida, dan alkal)id ahkan dengan teknik-teknik khusus ini, senyawa harus mantap pada suhu tatkala tekanan uapnya pada sekitar harga 0/- hingga 0/-1 T)rr T)rr 3ntuk (airan dan padatan berkisar dari harga berapa miligram hingga kurang daripada saru mikr)gram, tergantung pada (ara pemasukan s erta detekt)rnya /,

Ruang pengionan dan pemercepat

+liran gas dari lubang m)lekul masuk ke dalam ruang pengi)nan 4berkerja pada tekanan 0/-1 hingga 0/-> T)rr5 dan disini ditembaki pada arah tegak lurus )leh berkas elektr)n dari suatu *ilamen panas #)n-i)n p)siti* yang terbentuk karena antaraksi berkas elektr)n itu terd)r)ng lewat lubang 4slit5 pemer(epat )leh suatu medan elektr)statik lemah antara pen)lak 4repeller5 dan lubang pemer(epat pertama tadi Kemudian suatu medan elektr)statik kuat antara lubang pemer(epat pertama dan kedua tadi makin memper(epat laju layangan i)n-i)n tersebut !iantara lubang-lubang memper(epat tadi juga dialakukan pumpun tambahan tambahan 3ntuk 3ntuk memper memper)le )leh h spektr spektrum, um, medan medan magnet magnet pada pada tabung tabung pengan penganali alisis sis atau atau tegang tegangan an pemer(epat antara lubang pertama dan kedua diubah-ubah !engan demikian i)n-i)n se(ara berurutan dipumpun ke lubang pengumpul sebagai *ungsi massa Pada kebanyakan radas, sapuan dari massa 0. sampai massa >// dapat dialkukan hanya dalam waktu 0 hingga : menit Meskipun demikian, laju sapuan sampai beberapa detik saja digunakan untuk memper)leh spektra *raksi-*raksi kr)mat)gra*i gas 3,

Tabung Tabung penganalisis penganali sis dan mengnet Tabun Tabung g l)gam l)gam yang yang dihamp dihampaka akan n 40/- 40/- hingg hinggaa 0/-= 0/-= T)rr5 T)rr5 berben berbentuk tuk lengkun lengkung g tempat tempat melayangnya berkas i)n dari sumber i)n ke pengumpul Kutub-kutub magnet dipasang tegak lurus bidang Yang Yang terpenting terpenting disini adalah terdapatnya medan magnet yang yang amat pengganda elektr)n 5,

Pengumpul ion dan penguat

Pengumpul i)n terdiri atas satu atau lebih lubang pengumpul 4k)limasi5 serta satu atau lebih lubang pengumpul 4k)limasi5 serta suatu silinder "araday, berkas i)n menumbuk pengumpul dalam arah tegak lurus, kemudian isyarat is yarat diperkuat )leh suatu pengganda elektr)n 7,

Pencatat Pen(at Pen(atat at yang yang diguna digunakan kan se(ara se(ara luas luas memaka memakaii lima lima buah buah gal
Hal ini a(ap kali dapat dilakukan dilakukan karena gal
#ENIS SAMPE$ Se(ara umum, penggunaan met)de $%MS hanya terbatas untuk senyawa dengan tekanan uap berkisar0/ 0/ t)rr Kebanyakan senyawa dengan tekanan lebih rendah hanya dapat dianalisis jika senyawa tersebut merupakan senyawa turunan 4()nt)h , trimetilsili eter5 Penentuan penentuan gugus *ungsi)nal *ungsi)nal pada (in(in ar)mati( ar)mati( masih sulit 3ntuk senyawa is)mer tidak dapat dibedakan dibedakan )leh spket)meter 4sebagai ()nt)h 9 na*talena
MET%DE ANA$ISIS $%MS digunakan untuk identi*ikasi kualitati* dan pengukuran kuantitati* dari k)mp)nen indi
4Katherine K Steners)n, Rep)rter 3S F)lume F)lume .>,85

iasanya, kr)mat)gra*i (air kinerja tinggi 4HP&%5 digunakan untuk analisis asam amin) 2amun, $% juga dapat digunakan, dan dalam beberapa kasus ketersediaan instrumentasi atau )perasi biaya dapat membuat pilihan yang lebih baik Si*at p)lar asam amin) memerlukan deri
$ambar 0 Struktur MTST"+ MTST"+ deri
Eksperimental

Sebuah aliku)t >/ u& larutan yang mengandung (ampuran asam &-amin) pada 70 ug  m& di /,0 2 H%l dikeringkan, dan 0// u& rapi MTST"+, MTST"+, diikuti )leh 0// u& aset)nitril, ditambahkan %ampuran dipanaskan pada 0// N % selama : jam Sampel kemudian dinetralkan dengan natrium bikarb)nat dan sasaran analisis $%-MS pada n)m)r pembayar ./ m @ /,0= mm @ /,0= m S&  ->ms k)l)m kapiler •

Hasil

Sebuah kr)mat)gram deri5, %:H7 4M->5, %:H7 C %' 4M-=>5, dan %'-'-T!MS 4M-0>75 $ambar 8 menunjukkan ()nt)h p)la *ragmentasi ini dalam spektrum T!MS-
$ambar . $%-MS +nalisis !erims 4.=>1:-35

$ambar 8 Mass Spe(trum dari T!MS !eri5 Pada k)ndisi reaksi yang digunakan, sebagian besar asam amin) menghasilkan satu turunan, dengan hidr)gen akti* di hidr)ksil, amina, dan kel)mp)k ti)l 4dalam kasus sistein5 digantikan )leh T!MS eberapa asam amin) yang dihasilkan beberapa deri
Kesimpulan

Studi ini menunjukkan bahwa dengan penggunaan yang tepat dari reagen derims dianjurkan

'P$C )'I&' PER:%RMANCE $I;UID C'R%MAT%&RAP'*+

PENDA'U$UAN

HP&% HP&% 4Hig 4High h Per* Per*)r )rma man( n(ee &i?u &i?uid id %hr)m %hr)mat) at)gr grap aphy hy55 atau atau bias biasaa juga juga dise disebu butt deng dengan an Kr)mat)gra*i (air kinerja tinggi 4K%KT5 dikembangkan pada akhir tahun 071/-an dan awal tahun 07/-an Saat ini, HP&% merupakan teknik pemisahan yang diterima se(ara luas untuk analisis bahan )bat, baik dalam bulk atau dalam sediaan *armasetik, analisis dan pemurnian senyawa tertentu dalam suatu sampel dalam sebidang, sebidang, antara lain 9 *armasi, *armasi, lingkungan, lingkungan, bi)tekn)l) bi)tekn)l)gi, gi, p)limer dan industriindustri makanan eberapa perkembangan K%KT terbaru antra lain 9 miniaturisasiZsistem K%KT, penggunaan K%KT untuk analisis asam-asam nukleat, analisis pr)tein, analisis karb)hidrat dan analisisi senyawa-senyawa kiral

Kr)mat Kr)mat)gr )gra*i a*i (air (air kinerja kinerja tingg tinggii 4HP&%, 4HP&%, High High Per*)r Per*)rman man(e (e &i?uid &i?uid %hr)ma %hr)mat)g t)grap raphy hy55 merupakan suatu tekhnis analisis )bat yang paling (epat berkembang %ara ini ideal untuk analisis beragam )bat dalam sediaan dan (airan bi)l)gi, bi)l)gi, karena sederhana dan kepekaannya kepekaannya tinggi K%KT paling sering digunakan digunakan untuk menetapkan menetapkan kadar senyawa-seny senyawa-senyawa awa tertentu tertentu seperti seperti asam-asam amin), asam-asam nukleat, dan pr)tein-pr)tein dalam (airan *isi)l)gisA menentukan kadar senyawa-senyawa akti* )bat, pr)duk hasil samping pr)ses sintetis, atau pr)duk-pr)duk degradasi dalam dalam sediaa sediaan n *armas *armasiA iA mem)nit mem)nit)r )r sampel sampel-sam -sampel pel yang yang berasa berasall dari dari lingku lingkunga ngan n A memurn memurnika ikan n senyawa-senyawa dalam suatu (ampuran A memisahkan p)limer dan menentukan distribusi berat m)lekulnya dalam suatu (ampuranA k)ntr)l kualitas dan mengikuti jalannya reaksi sintetis Kete Keterb rbat atas asan an met) met)de de K%KT K%KT adal adalah ah untu untuk k ide ident nti*i i*ika kasi si seny senyaw awa, a, ke(u ke(ual alii jik jikaa K%K K%KT T dihubungka dihubungkan n dengan dengan spektr)mete spektr)meterr massa 4MS5 Keterbatasan Keterbatasan lainnya lainnya adalah adalah jika sampelnya sangat k)mpleks, maka res)lusi yang baik sulit diper)leh enis-jenis HP&% Pemisahan dengan HP&% dapat dilakukan dengan *ase n)rmal 4jika *ase diamnya lebih p)lar dibanding dengan *ase geraknya5 atau *ase terbalik 4jika *ase diamnya kurang n)n p)lar dibanding dengan *ase geraknya5 erdasarkan pada kedua pemisahan ini, sering kali HP&% dikel)mp)kkan menjadi menjadi HP&% *ase n)rmal n)rmal dan HP&% *ase terbalik terbalik Selain klasi*ikasi di atas, HP&% juga dapat dikel)mp)kkan berdasarkan pada si*at *ase diam dan atau berdasarkan pada mekanisme s)rpsi s)lut, dengan jenis-jenis HP&% sebagai berikut9 a

Kr)m Kr)mat at)g )grra*i a*i +ds)rb s)rbsi si Prinsip kr)mat)gra*i ads)rpsi telah diketahui sebagaimana dalam kr)mat)gra*i k)l)m dan kr)mat)gra*i lapis tipis Pemisahan kr)mat)gra*i ads)rbsi biasanya menggunakan *ase n)rmal dengan menggunakan *ase diam silika gel dan alumina, meskipun demikian sekitar sekitar 7/J kr)ma kr)mat)g t)gra* ra*ii ini memaka memakaii silika silika sebaga sebagaii *ase *ase diamny diamnya a Pada Pada silika silika dan alumina terdapat gugus hidr)ksi yang akan berinteraksi dengan s)lut $ugus silan)l pada silika mempunyai mempunyai reakti*itas reakti*itas yang berbeda, berbeda, karenanya s)lut dapat terikat se(ara kuat sehingga dapat menyebabkan pun(ak yang berek)r b Kr)mat)gra*i *ase terikat Kebany Kebanyaka akan n *ase *ase diam kr)mat kr)mat)gr )gra*i a*i ini adalah adalah silika silika yang yang dim)di dim)di*ik *ikasi asi se(ara se(ara kimiawi atau *ase terikat Sejauh ini yang digunakan untuk mem)di*ikasi silika adalah hidr)k hidr)karb arb)n)n-hid hidr)k r)karb arb)n )n n)n-p) n)n-p)lar lar sepert sepertii dengan dengan )ktade )ktadesils silsila ilan n atau )ktasi )ktasilan lana a Sebagai *ase gerak adalah (ampuran metan)l atau aset)nitril dengan air atau dengan larutan bu*er 3ntuk s)lut yang bersi*at asam lemah atau basa lemah, peranan pH sangat krusial karena kalau pH *ase gerak tidak diatur maka s)lut akan mengalami i)nisasi atau pr)t)nasi Terbentuknya Terbentuknya spesies s pesies yang teri)nisasi ini menyebabkan ikatannya dengan *ase diam diam menj menjad adii lebi lebih h lemah lemah diba diband ndin ing g jika jika s)lu s)lutt dalam dalam bent bentuk uk spesi spesies es yang yang tida tidak k teri)nisasi karenanya spesies yang mengalami i)nisasi akan terelusi lebih (epat ( Kr)m Kr)mat) at)gr gra* a*ii pen penuk ukar ar i)n i)n K%KT penukar i)n menggunakan *ase diam yang dapat menukar kati)n atau ani)n dengan suatu *ase gerak +da banyak penukar i)n yang beredar di pasaran, meskipun

demik demikia ian n yang yang palin paling g luas luas peng penggu guna naan anny nyaa adal adalah ah p)li p)listi stire ren n resin resin Keba Kebany nyaka akan n pemisahan kr)mat)gra*i i)n dilakukan dengan menggunakan media air karena si*at i)nisasinya !alam beberapa hal digunakan pelarut (ampuran misalnya air-alk)h)l dan juga pelarut )rganik Kr)mat)gra*i penukar i)n dengan *ase gerak air, retensi pun(ak dipeng dipengaru aruhi hi )leh )leh kadar kadar garam garam t)tal t)tal atau atau kekuat kekuatan an i)nik i)nik serta serta )leh )leh pH *ase *ase gerak gerak Kenaikan kadar garam dalam *ase gerak menurunkan retensi s)lut Hal ini disebabkan )leh penurunan kemampuan i)n sampel bersaing dengan i)n *ase gerak untuk gugus penukar i)n pada resin d Kr)m Kr)mat) at)gr gra* a*ii Pasan Pasanga gan n i)n i)n Kr)mat)gra*i pasangan i)n juga dapat digunakan untuk pemisahan sampel-sampel i)nik dan mengatasi masalah-masalah yang melekat pada met)de penukaran i)n Sampel i)nik ditutup dengan i)n yang mempunyai me mpunyai muatan yang berlawanan e Kr)m Kr)mat) at)gr gra* a*ii Eksk Eksklu lusi si 3ku 3kura ran n Kr)mat)gra*i ini disebut juga dengan kr)mat)gra*i permiasi gel dan dapat digunakan untuk memisahkan atau menganalisis senyawa dengan berat m)lekul [ ./// dalt)n "ase diam yang digunakan dapat berupa silika atau p)limer yang bersi*at p)rus sehingga s)lut dapat melewati p)rus 4lewat diantara partikel5, atau berdi*usi lewat *ase diam M)lekul s)lut yang mempunyai M yang jauh lebih besar, akan terelusi terlebih dahulu, kemudian m)lekul-m)l m)lekul-m)lekul ekul yang ukuran ukuran medium, medium, dan terakhir adalah m)lekul m)lekul yang jauh lebih ke(il Hal ini disebabkan s)lut dengan M yang besar tidak melewati p)rus, akan tetapi lewat diantara partikel *ase diam !engan demikian, dalam pemisahan dengan eksklusi ukur ukuran an ini ini tidak tidak terj terjad adii inter interak aksi si kimia kimia anta antara ra s)lut s)lut dan dan *ase *ase diam diam seper seperti ti tipe tipe kr)mat)gra*i yang lain

*

Kr)m Kr)mat at)g )gra ra*i *i +*ini *inita tass !alam kasus ini, pemisahan terjadi karena interaksi-interaksi bi)kimiawi yang sangat spesi*ik spesi*ik "ase diam mengandun mengandung g gugus-gugu gugus-guguss m)lekul m)lekul yang hanya dapat menyerap menyerap sampel jika ada k)ndisi-k)ndisi yang terkait dengan muatan dan sterik tertentu pada sampe sampell yang yang sesu sesuai ai 4seb 4sebag agai aima mana na dalam dalam inter interak aksi si anta antara ra antig antigen en dan dan antib antib)d )di5 i5 Kr)mat)gra*i jenis ini dapat digunakan untuk mengis)lasi pr)tein 4en;im5 dari (ampuran yang sangat k)mpleks

PRINSIP Prinsip dasar 'P$C

Prinsip dasar dari HP&% adalah pemisahan pemisahan analit-anal analit-analit it berdasarkan berdasarkan kep)laranny kep)larannya a +dapun +dapun prinsip kerja dari alat HP&% adalah ketika suatu sampel yang akan diuji diinjeksikan ke dalam k)l)m maka sampel tersebut kemudian akan terurai dan terpisah menjadi senyawa-senyawa kimia 4 analit 5 sesuai dengan perbedaan a*initasnya Hasil pemisahan tersebut kemudian akan dideteksi )leh dete(t)r 4spektr)*)t)meter 3F, *lu)r)meter atau indeks bias5 pada panjang gel)mbang tertentu, hasil yang mun(ul mun(ul dari detekt)r tersebut selanjutnya selanjutnya di(atat di(atat )leh re()rder yang biasanya biasanya dapat ditampilkan ditampilkan menggunaka menggunakan n integrat)r integrat)r atau menggunaka menggunakan n pers)nal pers)nal ()mputer ()mputer 4P%5 yang terhubung )nline dengan dengan alat HP&% tersebut

Prinsip ker0a 'P$C

Pada prinsipnya kerja HP&% adalah sama yaitu pemisahan analit-analit berdasarkan kep)larannya, alatnya terdiri dari k)l)m 4sebagai *asa diam5 dan larutan tertentu sebagai *asa geraknya Yang paling membedakan HP&% dengan kr)mat)gra*i lainnya adalah pada HP&% digunakan tekanan tinggi untuk mend)r)ng *asa gerak %ampuran analit akan terpisah berdasarkan kep)larannya dan ke(epatannya untuk sampai kedektet)r 4waktu retensinya5 akan berbeda, hal ini akan teramati pada spe(trum yang pun(ak-pun(aknya terpisah 3kuran skala p)laritas 9 g)l)ngan *lu)r)(arb)n L g)l)ngan hidr)karb)n L senyawa terhal)genasi L g)l)ngan eter L g)l)ngan ester L g)l)ngan ket)n L g)l)ngan al()h)l L g)l)ngan asam a

#njeksi sam sampel

#njeksi sample seluruhnya dilakukan se(ara )t)matis sehingga tidak bisa mengetahui yang terjadi pada keadaan tingkat dasar Karena pr)ses ini meliputi tekanan, tidak sama halnya dengan kr)mat)gra*i gas b Ia Iaktu ktu retensi Iaktu yang dibutuhkan )leh senyawa untuk bergerak melalui k)l)m menuju detekt)r disebut sebagai waktu retensiIaktu retensi diukur berdasarkan waktu dimana sampel diinjeksikan sampai sampel menunjukkan ketinggian pun(ak yang maksimum dari senyawa itu Senyawa-senyawa yang berbeda memiliki waktu retensi yang berbeda pula 3ntuk beberapa senyawa, waktu retensi akan sangat ber
yang digunakan 4karena itu akan berpengaruh pada laju alir dari pelarut5 K)ndisi dari *ase diam 4tidak hanya terbuat dari material apa, tetapi juga pada ukuran partikel5  K)mp)sisi yang tepat dari pelarut Temperatur pada k)l)m (

!ete(t)r

+da beberapa (ara untuk mendeteksi substansi yang telah melewati k)l)m Met)de umum yang mudah dipakai untuk menjelaskan yaitu penggunaan serapan ultra-
d #nterp #nterpret retasi asi )utput )utput dari dari dete dete(t) (t)r r 'utput akan direkam sebagai rangkaian pun(ak-pun(ak, dimana masing-masing pun(ak mewakili satu senyawa senyawa dalam dalam (ampur (ampuran an yang yang melalui melalui detekt detekt)r )r dan menera menerap p sinar sinar 3F 3F Sepanj Sepanjang ang anda anda meng)ntr)l meng)ntr)l k)ndisi k)ndisi k)l)m,dapa k)l)m,dapatt menggunaka menggunakan n waktu retensi retensi untuk membantu mengidenti* mengidenti*ikasi ikasi senyawa yang diper)leh

 +rea yang berada dibawah pun(ak sebanding dengan jumlah \ yang melalui detekt)r, dan area ini dapat dihitung se(ara )t)matis melalui layar k)mputer+rea dihitung sebagai bagian yang berwarna hijau dalam gambar 4sangat sederhana5 sederhana5

INSTRUMENTASI

#nstrumentasi HP&% terdiri dari *ase *as e gerak, p)mpa, injekt)r, k)l)m, detekt)r dan peng)lah data

Terdapat Terdapat > k)mp)nen dasar HP&% yaitu9 00 Ia Iadah dah "ase gerak gerak dan dan "ase gerak gerak

Iadah adah *ase gerak gerak harus harus bersih bersih dan lembam lembam 4inert 4inert5 5 Iadah adah pelaru pelarutt k)s)ng k)s)ng ataupu ataupun n labu labu lab)rat)rium dapat digunakan sebagai wadah *ase gerak Iadah ini biasanya dapat menampung *ase gerak antara 0 sampai . liter pelarut "ase gerak atau eluen biasanya terdiri atas (ampuran pelarut yang dapat ber(ampur yang se(ara keseluruhan berperan dalam daya elusi dan res)lusi !aya elusi dan res)lu res)lusi si ini ditent ditentuka ukan n )leh )leh p)lari p)laritas tas keselu keseluruh ruhan an pelaru pelarut, t, p)lari p)laritas tas *ase *ase diam, diam, dan si*at si*at k)mp)n k)mp)nenen-k)m k)mp)n p)nen en sampel sampel 3ntuk 3ntuk *ase *ase n)rma n)rmall 4*ase 4*ase diam lebih lebih p)lar p)lar daripa daripada da *ase *ase gerak5 gerak5,, kemampuan kemampuan elusi meningkat meningkat dengan meningkatny meningkatnyaa p)laritas p)laritas pelarut pelarut Sementara Sementara untuk *ase terbalik terbalik 4*ase diam kurang kurang p)lar daripada daripada *ase gerak5, gerak5, kemampuan kemampuan elusi menurun menurun dengan dengan meningkatny meningkatnyaa p)laritas pelarut "ase gerak sebelum digunakan harus disaring terlebih dahulu untuk menghindari partikel-partikel ke(il ini Selain itu, adanya gas dalam *ase gerak juga harus dihilangkan, sebab adanya gas akan berkumpul dengan k)mp)nen lain terutama di p)mpa dan detekt)r sehingga akan menga(aukan analisis analisis Elusi Elusi dapat dilakukan dilakukan dengan dengan (ara is)kratik 4k)mp)sisi 4k)mp)sisi *ase gerak tetap selama elusi5 elusi5 atau dengan dengan (ara bergradien bergradien 4k)mp)sisi 4k)mp)sisi *ase gerak berubah-ubah berubah-ubah selama elusi5 yang anal)g dengan pemr)graman suhu pada kr)mat)gra*i gas Elusi bergradien digunakan untuk meningkatkan res)lusi (ampuran yang k)mpleks terutama jika sampel mempunyai kisaran p)laritas yang luas "ase erak yang paling sering digunakan untuk pemisahan dengan *ase terbalik adalah (ampuran larutan bu*er dengan metan)l atau (ampuran air dengan aset)nitril 3ntuk pemisahan dengan *ase n)rmal, *ase gerak yang paling sering digunakan adalah (ampuran pelarut-pelarut hidr)karb)n dengan pelarut yang terkl)risasi atau menggunakan pelarut-pelarut jenis alk)h)l Pemisahan dengan *ase n)rmal ini kurang umum dibanding dengan *ase terbalik "ase gerak 4eluen5 berupa ;at (air "ase gerak selain sebagai pembawa sen yawa (ampuran menuju detekt)r, *ase gerak juga dapat berinteraksi dengan s)lut-s)lut eberapa persyaratan HP&% antara lain 9 • •

• • • •

Harus bertindak sebagai pelarut yang baik untuk sampel yang akan dianalisis ]at (air harus murni dan jernih untuk menghindari k)t)ran yang dapat mengganggu interpretasi kr)mat)gram dan menghindarkan penyumbatan k)l)m Mudah diper)leh, murah, tidak mudah terbakar dan tidak bera(un Memiliki
0. 0. P)m P)mpa P)mpa yang ()()k digunakan untuk HP&% adalah p)mpa yang mempunyai syarat sebagaimana syarat wadah pelarut yakni9 p)mpa harus inert terhadap *ase gerak ahan yang umum dipakai untuk p)mpa adalah gelas, baja tahan karat, Te*l)n, Te*l)n, dan batu nilam P)mpa yang digunakan sebaiknya mampu memberikan tekanan sampai >/// psi dan mampu mengalirkan *ase gerak dengan ke(epatan alir 8 m&menit 3ntuk tujuan preparati*, p)mpa yang digunakan harus mampu mengalirkan *ase gerak dengan ke(epatan ./ m&menit Tujuan penggunaan p)mpa atau sistem penghantaran *ase gerak adalah untuk menjamin pr)ses penghantaran *ase gerak berlangsung se(ara tepat, repr)dusibel, k)nstan, dan bebas dari gangguan +da . jenis p)mpa dalam HP&% yaitu9 p)mpa dengan tekanan

k)nstan, dan p)mpa dengan aliran *ase gerak yang k)nstan Tipe p)mpa dengan aliran *ase gerak yang k)nstan sejauh ini lebih umum dibandingkan dengan tipe p)mpa dengan tekanan k)nstan 08 Tempa Tempatt penyuntika penyuntikan n sampel sampel Sampel-sampel (air dan larutan disuntikkan se(ara langsung ke dalam *ase gerak yang mengalir di bawah tekanan menuju k)l)m menggunakan alat penyuntik yang terbuat dari tembaga tahan karat dan katup te*l)n yang dilengkapi dengan keluk sampel 4sample l))p5 internal atau eksternal

0: 0: K)l)m K)l)m dan dan "ase "ase diam +da . jenis k)l)m pada HP&% yaitu k)l)m k)n
K)nsum K)nsumsi si *ase *ase gerak gerak k)l)m k)l)m mikr)b mikr)b)r )r hanya hanya =/J atau atau lebih lebih ke(il ke(il diband dibanding ing dengan dengan k)l)m k)l)m

•

k)n
•

dengan spektr)meter massa Sensiti
Kebanyakan *ase diam pada HP&% berupa silika yang dim)di*ikasi se(ara kimiawi, silika yang tidak dim)di*ikasi, atau p)limer-p)limer stiren dan di 0> !etekt) !etekt)rr HP&% HP&%

!etekt)r pada HP&% dikel)mp)kkan menjadi . g)l)ngan yaitu9 detekt)r uni
Mempunyai resp)n terhadap s)lut yang (epat dan repr)dusibel



Mempunyai sensiti*itas yang tinggi, yakni mampu mendeteksi s)lut pada kadar yang sangat ke(il



Stabil dalam peng)persiannya



Mempunyai sel <)lume yang ke(il sehingga mampu meminimalkan pelebaran pita



Signal yang dihasilkan berbanding lurus dengan k)nsentrasi s)lut pada kisaran yang luas 4kisaran dinamis linier5



Tidak peka terhadap perubahan suhu dan ke(epatan alir *ase gerak

eberapa detekt)r yang paling sering digunakan pada HP&% dengan karakteristik detekt)r seperti berikut 9

!etekt)r

Sensiti*itas 4gml5

Kisaran linier

Karakteristik

Absorbansi U66is ")t)meter *ilter Spektr)*)t)meter spektr)meterph)t)-di)de array

> @ 0/-0/ > @ 0/-0/ [ . @ 0/ -0/

0/: 0/> 0/>

"lu)resensi

0/-0.

0/:

#ndeks bias

> @ 0/-

0/:

Sensiti
Elektrokimia K)nduktimetri

0/-=

0/:

Peka terhadap terhadap perubahan perubahan suhu

+mper)metri

0/-0.

0/>

dan ke(epa ke(epatan tan alir alir *ase *ase gerak, gerak, tidak dapat digunakan pada elusi bergradien Hanya mendeteksi s)lu s)lut-s t-s)l )lut ut i)nik i)nik Sensit Sensiti*i i*ita tass sang sangat at bagu bagus, s, sele selekt kti* i* teta tetapi pi timbul timbul masalah masalah dengan dengan adanya adanya k)ntaminasi elektr)da

#ENIS SAMPE$ -, /, 3, 5, 7, 9, <,

HP&% dengan prinsip kr)mat)gra*i banyak digunakan pada industry *armasi dan pestisida ]at- ;at dengan kep)laran berbeda yaitu antara sedikit p)lar sampai p)lar dapat dipisahkan dengan HP&% berdasarkan partisi (air-(air +sam-asam +sam-asam nukleat nukleat dapat dipisahkan dipisahkan dengan dengan k)l)m penukar i)n yang dik)mbinasikan dik)mbinasikan dengan k)l)m butiran berlapis ;at berp)ri M)r*in, her)in dan sema(amnya telah dapat dipisahkan dengan re;in ]ipa@-S+\ !apat memisahkan
MET%DE PREPARASI SAMPE$ Sampel Sampel harus harus dalam dalam bentuk bentuk laruta larutan n 3ntuk 3ntuk skala skala analisi analisiss sampel sampel dalam dalam ^&, k)nsen k)nsentra trasi si sampel yang diinjeksikan tidak b)leh terlalu pekat karena dapat menyumbat k)l)m K)nsentrasi maksimal adalah sekitar :/ ppm MET%DE ANA$ISIS Met)de HP&% dapat digunakan untuk analisa kuantitati* dan sekaliguskualitati* 3ntuk analisa kualitati* kualitati* dengan dengan membanding membandingkan kan kr)mat)gram kr)mat)gram sampel dengan dengan kr)mat)gr kr)mat)gram am baku pembandin pembanding g berdasarkan waktu retensinya

Sedangkan untuk analisa kuatitati* dapat digunakan dengan persamaan 9 %@ B +@  +p \ %p Keterangan 9 + B Peak area B &uas pun(ak %B K)nsentrasi \ B sampel P B pembanding +tau jika ingin mendapatkan mendapatkan data yang lebih
Pr)sedur Kerja

0 Pembuatan pelarut dan *asa gerak

Metan)l disaring dengan PT"E dan air disaring dengan selul)sa nitrat &alu di(ampur masing-masing dengan perbandingan >9.> dengan <)lume t)tal sebanyak >// m&

. Pembuatan larutan induk parasetam)l parasetam)l Sebanyak 1,.> mg parasetam)l ditimbang dengan nera(a analitik dalam b)t)l timbang Parasetam)l terseb tersebut ut dilaru dilarutka tkan n dengan dengan sediki sedikitt pelaru pelarut, t, dipind dipindahk ahkan an ke dalam dalam labu labu ukur ukur .> m& Setela Setelah h itu, itu, dih)m)genkan dan ditambahkan pelarut sampai tanda batas 8 Pembuatan larutan standar parasetam)l &arutan induk parasetam)l masing-masing dipipet sebanyak 0 m&, . m&, 8 m&, : m& dan > m& yang masing-masing dimasukkan ke dalam labu ukur 0/ m& Setelah itu ditambahkan pelarut masingmasin masing g seba sebany nyak ak > m& dan dan dih) dih)m) m)ge genk nkan an Kemud Kemudia ian n ditam ditambah bah lagi lagi pela pelaru rutt sampa sampaii tand tandaa batasSelanjutnya disaring dengan PT"E dan disimpan dalam b)t)l b)t)l m&, sampel dih)m)genkan dalam ultras)ni( menit Setelah itu, sampel siap untuk diinjeksikan > Pr)sedur HP&% +lat dan eluen yang akan digunakan dik)ndisikan sehingga setimbang C- 8/ menit Kelima standar parasetam)l diinjeksikan, diikuti dengan sampel yang diinjeksikan sebanyak . kali pengulangan Rata-rata area sampel dihitung dan kadar parasetam)l dalam sampel ditentukan dengan met)de kur9.> "asa gerak dalam HP&% ini selain ber*ungsi sebagai pelarut, juga bersi*at interakti* sehingga bisa berinteraksi dengan k)mp)nen-k)mp)nen (uplikan "asa gerak dalam hal ini bertindak sebagai pelarut sangat mempengaruhi waktu retensi, sehingga pelarut yang digunakan harus benar-benar jernih dan murni 'leh sebab itu, metan)l metan)l dan air terlebih dahulu disaring

!alam pembuatan larutan induk parasetam)l, pembuatannya harus dilakukan dalam satu kali pengerjaan, artinya untuk membuat larutan standar parasetam)l dan untuk keperluan pengen(eran sampel harus menggunakan menggunakan larutan larutan induk parasetam)l parasetam)l yang sama Hal tersebut tersebut dilakukan untuk menjaga menjaga agar peak yang ditunjukkan ditunjukkan kr)mat)gram kr)mat)gram sampel memungkinkan memungkinkan masih berada berada dalam rentang k)nsentrasi larutan standar yang dibuat

Selain itu, baik dalam pembuatan larutan induk parasetam)l, larutan standar parasetam)l maupun sampel harus dih)m)genka dih)m)genkan, n, supaya supaya larutan larutan benar-bena benar-benarr ber(ampur ber(ampur sempurna sempurna 4merata5 4merata5 &arutan &arutan standar dan sampel juga harus didegassing untuk menghilangkan gas-gas yang kemungkinan ada dalam larutan tersebut Hal itu dilakukan karena gas dapat mengganggu baseline pada kr)mat)gram, sehingga peak yang dihasilkan tidak sesuai +kibat perbedaan interaksi antara s)lut dengan *asa gerak dan *asa diam yang terjadi mulai dari k)l)m sampai terdeteksi )leh detekt)r, maka hasil yang diper)leh adalah dalam bentuk kr)mat)gram yang diperlihatkan )leh rek)rder !eret larutan standar yang dibuat mulai dari k)nsentrasi .>, >/, >, 0// dan 0.> ppm

erikut tabel data deret larutan standar yang diper)leh9 K)nsentrasi 4ppm5

&uas +rea

Iaktu retensi

.>

.:==88>

0,>0

>/

:0.1:00

0,>/

>

1::.=>

0,>0

0//

=7/081/

0,>0

0.>

0/11:=

0,>0

+nalisis terhadap (uplikan atau sampel )bat dilakukan setelah semua deret larutan standar telah dianalisis Sampel diinjeksikan sebanyak . kali injeksi untuk memper)leh luas area rata-rata yang nantinya akan digunakan untuk menghitung kadar parasetam)l yang terdapat dalam sampel )bat tersebut erikut tabel data sampel yang diper)leh9 !ata Sampel Penginjeksian 0

Iaktu Retensi 4min5

+ re a

Peak 0

0,>0

1.:.:

Peak .

.,80

080:8

/,/1

0//

Penginjeksian . Peak 0

Peak .

/,.1

>11>

Peak 8

0,>0

=01

Peak :

.,8/

1=::

Kr)mat)gram sampel yang diper)leh dari masing-masing penginjeksian menunjukkan adanya . peak dan : peak Hal tersebut dikarenakan kandungan dalam sampel )bat tidak hanya mengandung parasetam)l saja, tetapi juga mengandung bahan lain seperti pr)pane;)n, dekl)r*enilamina maleat dan ka*ein ka*ein,, sehing sehingga ga peak peak lainnya lainnya yang yang ditunj ditunjukk ukkan an dalam dalam kr)mat kr)mat)gr )gram am adalah adalah bahan bahan lain lain yang yang terkandung terkandung dalam sampel )bat tersebut tersebut Peak yang dianggap dianggap sebagai peak parasetam)l parasetam)l adalah peak yang pertama 4penginjeksian pertama5 dan peak yang yang ketiga 4penginjeksian kedua5 karena dilihat dari waktu retensi yang sama atau hampir sama dengan waktu retensi deret larutan standar 3ntuk menentukan kadar parasetam)l yang terkandung dalam sampel )bat tersebut, maka dibuat terlebih dahulu kur 8>@ =:>8>@ C .:>:7, .:>:7, sehing sehingga ga setela setelah h dilakukan perhitungan menggunakan persamaan garis, maka kadar parasetam)l dalam sampel adalah =:,=8J dalam . mg sampel )bat Kesimpulan 9 erdasarkan per()baan, diper)leh kadar parasetam)l dalam . mg s ampel )bat sebesar =:,=8J

DA:TAR PUSTA4A http9nakhdiahsaisalbl)gsp)t()id./000.kr)mat)gra*i-(air-kinerja-tinggi-hpl(html http9www)mjarjit@y;./0800prin http9www)m jarjit@y;./0800prinsip-dasar-dan-prinsip-kerja-hp sip-dasar-dan-prinsip-kerja-hpl(html l(html https9ary(h)w)rdpress()m./0./:/=>8 http9pustakaunpada(idwp-()ntentupl)ads.//70.diktatpelatihanhpl(.//pd* http9n)
Silgas-kr)mat)gra*ihtml http9wwws)diy(@a(unwebid./0//0kr)mat)gra*i-gashtml http9yi.n()kiyutebl)gsp)t()m./0/0.kr)mat)gra*i-gashtml http9apryshinsetsub)ybl)gsp)t()m./0/0.kr)mat)gra*i-g http9apryshinsetsub)y bl)gsp)t()m./0/0.kr)mat)gra*i-gas-dan-aplikasinya-padahtml as-dan-aplikasinya-padahtml http9ari**adh)libl)gsp)t()m.//70/)leh-najiullah-.//-kr)mat)gra*i-gas-ihtml http9sanag)rybl)gsp)t()m./0./.sejarah-kr)mat)gra*ihtml http9kuliahitukerenbl)gsp)t()m./00/0sejarah-penemuan-dan http9kuliahitukerenbl)gsp)t()m./0 0/0sejarah-penemuan-dan-perkembangan-alathtml -perkembangan-alathtml http9helnidanaingg)lanbl)gsp)t()m./0.0.<-beha>1017Kr)mat)gra* http9wwws(ribd ()md)(0.>>1017Kr)mat)gra*i-!an-+plikasinya-Pada-idangi-!an-+plikasinya-Pada-idang-&ain`d)wnl)ad http9ra(hmakimhunterbl)gsp)t()mpkimia-analitikhtml http9www*big)<h?lab*s(ba(kissuapril.//0mmillerhtml http9mdnmaini(himsn()jpnati)nalnews.///0/7p.a//m/na/.1///(html http9wwwt)s)hbi)s(ien(e()mbi)h)mehtml http9wwwmetr)hm-peak()m http9www0di)ne@()men-usinde@html

http9wwwkri(trekrenglishee?uipee?ua//php

Makalah Analisis Instrument (GC , HPLC, FTIR, GC-MS)

Recommend Documents