ESTUDIO CITOQUÍMICO DE LIQUIDOS SEROSOS Lic. Merc Mercedes edes Catani Dr. Isido Isidoro ro Prude Prudente nte
Dra. Rosari Rosarioo San Martín Dra. Silv Silvia ia Zuni Zunino no Torr Torres es
Hospital de Clínicas. Departamento de Laboratorio Laborato rio Clínico. Clínico. Repartición Hematología y Citología.
LÍQUIDO
SEROSO:
Se denomina así al líquido que normalmente se encuentra en las cavidades serosas: -Cavidad pleural: 10-20 ml -Cavidad peritoneal: 50 ml -Cavidad pericárdica: 100 ml
LÍQUIDO
SEROSO:
Se denomina así al líquido que normalmente se encuentra en las cavidades serosas: -Cavidad pleural: 10-20 ml -Cavidad peritoneal: 50 ml -Cavidad pericárdica: 100 ml
DERRAME
SEROSO:
cumulación patológica de líquido en una cavidad serosa
A
Pleural (derrame pleural) Pericárdica (derrame pericárdico) Peritoneal (ascitis)
c. linfático Presión hidrostática
Capilar sistémico
Capilar pulmonar
Presión coloidosmótica
serosa parietal
serosa visceral
MECANISMOS DE FORMACIÓN DE DERRAMES D ERRAMES SEROSOS
p. hidrostática
Insuficiencia Cardíaca Congestiva
p. coloidosmótica
S.nefrótico Cirrosis
permeabilidad capilar
TRASUDADO
Infecciones E.. Inflamatorias Neoplasias
obstrucción del drenaje linfático Neoplasias Traumatismo
EXUDADO
Los derrames serosos pueden presentarse como complicación de distintas patologías. Su estudio citoquímico y bacteriológico no sólo proporciona una orientación diagnóstica sino que en algunas situaciones determina conductas terapéuticas.
Examen macroscópico A
SPECTO
Hemorrágico Hemático o serohemático Turbio
Opalescente, lechoso
Punción traumática, derrames neoplásicos, traumatismos, TEP No tiene valor diagnóstico Sobrenadante límpido: células Sobrenadante turbio: bacterias lípidos Derrames quilosos y seudoquilosos.
Examen químico 1.
Parámetros bioquímicos utilizados para diferenciar trasudados y exudados
2.
Parámetros bioquímicos para determinar la etiología de un exudado
Criterios de Light
Proteínas líquido pleural Proteínas séricas LDH liquído pleural LDH sérica
> 0.5
> 0.6
LDH en líquido pleural
> 200 UI / L
Se considera que el líquido es un exudado cuando cumple uno o más de estos criterios
PARÁMETROS BIOQUÍMICOS UTILIZADOS PAR A DIFERENCIAR TR ASUDADOS de EXUDADOS PLEUR ALES Trasudado Exudado Proteínas LDH Colesterol *
30 g / L
u
30 g / L
200 U / L
u
200 U / L
60 mg / dl
u
60 mg / dl
* Sólo en líquidos pleurales , en líquidos de ascitis se
utiliza como criterio para diferenciar derrames neoplásicos de no neoplásicos
PAR AMETROS UTILIZADOS EN LIQUIDOS DE ASCITIS
Gradiente de Albúmina
Albúmina sér ica ± albúmina líquido : >= 1.1 g/l = HTTP < 1.1 g/l = no HTP
Etiología de un exudado pleural Parámetros bioquímicos UCOSA
GL
pH TRIGLICÉRIDOS AMILASA CREATININA
GLUCOSA
Su concentración es similar a la plasmática en los trasudados y en la mayoría de los exudados Valores 60 mg/dl pueden verse: DERR AMES PAR ANEUMÓNICOS COMPLICADOS BK ENF. REUMÁTICAS NEOPLASIAS
pH
Sólo tiene valor diagnóstico cuando se determina en las mismas condiciones que el pH arterial Valores 7.2 pueden observarse en: DERR AMES PAR ANEUMÓNICOS COMPLICADOS BK Enf. Reumáticas Neoplasias A
cidosis sistémica
Triglicéridos
Su determinación está indicada en líquidos de aspecto opalescente o lechoso y en aquellos con sobrenadante turbio. Permite diferenciar: - derrames quilosos (obstrucción del drenaje linfático con acumulación de linfa ±neoplasias-) -seudoquilosos ( por acumulación de colesterol ± BK, AR-).
quiloso TG
"
110 mg/dl
seudoquiloso
50 mg/dl
Valores entre 50-110 mg/dl : estudio de quilomicrones
Líquido de Ascitis Parámetros Bioquímicos adiente de Albúmina
Gr
Albúmina sér ica ± albúmina líquido : >= 1.1 g/l = HTTP < 1.1 g/l = no HTP
Amilasa
Valores de amilasa mayores al límite superior normal en suero pueden verse en derrames causados por: Pancreatitis Rotura esofágica Neoplasias
Urea
y creatinina
Su determinación está indicada ante la sospecha de presencia de orina en la cavidad serosa
(estallido vesical, posoperatorio de cirugía abdominal).
Se encuentran valores aumentados de urea y creatinina en el líquido seroso y valores normales de creatinina en sangre.
Citología de líquidos de cavidades serosas
Citología de líquidos de cavidades serosas Normalmente procedentes de: r evestimiento ser oso : célula mesotelial sistema monocítico / macr ofágico
capilar es subser osos
Célula mesotelial NORMAL Redondeada 18 a 40 u (25 u) Núcleo centr al ovoide 2 a 3 nucléolos Citoplasma denso adelgazado en per ifer ia Aisladas o en gr upos de menos de 12 células (ventana)
Célula mesotelial REACTIVA Mayor basofilia citoplásmica Bor des bien delimitados Discr eto gr ado de anisocar iosis
Célula mesotelial INVOLUTIVA Derr ames crónicos Degener ación vacuolar
Macrófago 45 % células nor males en per itoneo. (CD68+) 15 ± 100 u (30 u)
Núcleo excéntr ico arr iñonado Citop. clar o,finamente vacuolado (encaje) Mater ial fagocitado For mas multinucleadas y gigantes sólo en ser ositis r eumática
Células procedentes de capilares subserosos Glóbulos rojos. Punción (1 ul/mm3) Hemorr agia. PMN. % var iable. Inflamación. Infar to. Linfocitos. Pr ocesos benignos: For mas T NA. vir al, TBC, neoplasias Eosinófilos. (10%) Infección vir al, par asitar ia, mesenquimopatías, TEP, Ntx, Htx.
Cuadros citológicos patológicos Células en pr opor ciones var iables dependiendo de la causa, dur ación y complicaciones del derr ame.
Inflamación . Ines pecífica . Es pecífica TBC TEP Cirrosis hepática Derrames neoplásicos
Inflamación Inespecífica. -células mesoteliales y PMN - IC - NA - sobr einfecci ón
PMN +50%: - pleur a: empiema - ascitis: PBE : r ecuento en cámar a de Neubauer PMN > 250/ mm3 - DPCA: GB > 100/ mm3 50% PMN
Inflamación - AR - macrófagos - m. gigantes multinucleados - mater ial necrótico gr anular Específica. eosinófilo. - LES - cél.LE 30% pleur itis lúpica. - cél. mesoteliales y eosinófilos
TBC En pleur a
- infiltr ado linfocitar io crónico sin r eacción mesotelial.
En per itoneo - infiltr ado linfocitar io crónico con r eacción mesotelial y macr ofágica.
TEP Necrosis hemorrágica subpleural con reacción inflamatoria perilesional.
Citología pleomórfica : - fondo hemorrágico. - reacción mesotelial a/v con alt. citomorfológicas. - macrófagos con gránulos de hemosiderina. - PMN y linfocitos.
Cirrosis hepática Celular idad pleomór fica: células mesoteliales, macrófagos, linfocitos, y PMN. Puede obser varse hepatocitos como células epiteliales poliédr icas con núcleo centr al y dis posición acinar (no debe confundirse con metástasis)
Derrame neoplásico Mayor f r ecuencia corr es ponde a adenocar cinomas de pulmón, mama, ovar io. Tendencia a for mar gr upos celular es cohesivos, tr idimensionales o seudoacinos, cuyas células pr esentan var iadas atipías citomor fológicas. El mesotelioma ( neoplasia de la ser osa ) es muy poco f r ecuente.
MARC ADORES
TUMORALES
MARC ADORES
TUMORALES Sustancia pr oducida por la célula neoplásica que r efleja su cr ecimiento y/o actividad, y per mite conocer la pr esencia, evolución o r es puesta ter apéutica de un tumor maligno. Incluye: 1)pr oductos detectables in situ en el tumor o sus metástasis y 2) pr oductos liber ados a la sangr e y detectables en suer o. Al 1º gr upo dedicar emos nuestr a atención.
INMUNOCITOQUIMIC A .Definición: técnica que hace visible una po en muestr as r eacción antígeno - anticuer citológicas. .Inmunohistoquímica (IHQ): si dicha r eacción se r ealiza sobr e tejidos. .Apor ta mayor sensibilidad diagnóstica a los cr iter ios exclusivamente mor fológicos.
METODOLOGI A
Se utilizan Ac Monoclonales (Moabs): poseen alta homogeneidad de lugar es es pecíficos de unión con el antígeno. Los antígenos no deben ser destr uidos ni enmascar ados por los pr ocedimientos técnicos. Fijador: debe estar en función de los gr upos r eactivos antigénicos que se pr etende demostr ar .
METODOLOGI A
ijador: debe buscar un equilibr io entr e la pr eser vación de la mor fología y la inmunor eactividad. Se clasifican: 1) actúan por pr ecipitación 2) actúan estableciendo uniones cr uzadas. Sistemas de r evelado: hacen visible la r eacción (IFD, IFI). Aplicable a PAAF, derr ames, bloques celular es, impr ontas, etc. F
P ANELES DE
ANTICUERPOS Los paneles de Moabs se r ealizan siguiendo 2 líneas: 1) por ANTIGENOS a estudiar 2) por TUMORES a detectar. 1)Por Antígenos a detectar: Ag Oncofetales : AFP, CEA. Mucinas: MUC1, MUC2, MUC3A, (CA-125, CA15-3, CA 27-29). Citoquer atinas: 8, 18, 19, (CIFRA, TPS, TPA). Enzimas e inhibidor es: NSE, SCC.
Tumores a estudiar CQ VM
LCA
HMB 45
Car cinoma +
-
-
-
Linfoma
-
+
+
-
Sar coma
-
+
+
-
Melanoma -
+
+
+
Adenocarcinoma vs Mesotelioma AdenoC
Mesotel.
+
-
+
+
-
+
+
-
72.3
+
-
Desmina
-
+
CEA CQ B Peso CQ A Peso CD 15 B
PROTOCOLO DE PROCESAMIENTO DE LIQUIDOS SEROSOS
PROTOCOLO DE PROCESAMIENTO DE LIQUIDOS SEROSOS Recepción de la muestra L os
líquidos obtenidos por punción ser án r emitidos r ápidamente al labor ator io en 4 tubos a) tubo estér il par a estudio bacter iológico. b) tubo seco sin anticoagulante par a estudio bioquímico. c) tubo con anticoagulante par a estudio citológico. d) tubo en anaer obiosis par a deter minación de pH.
Procesamiento 1) Macroscopía color as pecto pr esencia o no de coágulo pr esencia de r estos tisular es 2) Centrifugación convencional 2500 r pm 10¶
Procesamiento 3) Postcentrifugado sobrenadante
- color - as pecto
sedimento
- volumen - car acter ísticas -hemático - capa blanca celular
Procesamiento 4
) Estudio bioquímico del sobrenadante glucosa pr oteínas totales colester ol LDH Tg (sobr enadante tur bio) otr as deter minaciones - amilasa, ur ea, iones, etc.
Procesamiento 5) Citología Fr otis del sedimento r esus pendido de centr ifugación convencional. Citocentr ifugación Se r ealiza de r utina excepto en líquidos muy hemorr ágicos o pur ulentos, o con una gr an capa celular en el sedimento convencional. Se r esus pende el sedimento en 250ul de sobr enadante y se carga la cápsula.
Ventajas
de la citocentrifugación
Mayor concentr ación celular. Dis posición celular en monocapa evitando el solapamiento. Conser va intacta la mor fología celular. Per mite r ealización de técnicas inmunocitoquímicas.
La
citocentr ifugación siempr e debe ser r ealizada en for ma par alela a la centr ifugación convencional que apor ta la noción cuantitativa de los elementos celular es. De una ser ie de citologías de líquidos ser osos que fuer on negativas par a atipías citomor fológicas mediante centr ifugación convencional , 36 % r esultar on positivos par a citocentr ifugación.
Procesamiento 6 ) Secado de lo f r otis al air e y tinción con MGG. Los tiempos de tinción son similar es a los empleados en extendidos hematológicos, debiéndose acor tar a la mitad la etapa de Giemsa.
