Laporan Bioteknolgi_Pembuatan Media Kultur Jaringan PDF

LAPORAN PRAKTIKUM BIOTEKNOLOGI “PEMBUATAN MEDIA KULTUR JARINGAN”

Disusun Oleh :

Nama

: Frelyta A. Z.

NIM

: 115040201111290 115040201111290

Kelompok

: Selasa, (06.00 WIB)

Asisten

: Dita Pahlevi

PROGRAM STUDI AGROEKOTEKNOLOGI FAKULTAS PERTANIAN UNIVERSITAS BRAWIJAYA MALANG 2012

BAB I PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang

Kultur jaringan tanaman merupakan bagian suatu teknik perbanyakan vegetatif nonkonvensional. Perbedaan teknik ini dibandingkan dengan teknik perbanyakan vegetative konvensional biasanya terletak dalam situasi dan lokasi yang berbeda. Penerapan teknikkultur jaringan tanaman mensyaratkan kondisi di dalam ruangan (laboratorium) dan sifatnya aseptik (steril dari patogen). Media merupakan faktor utama dalam perbanyakan dengan kultur jaringan. Keberhasilan perbanyakan dan perkembangbiaka perkembangbiakan n tanaman dengan metode kultur jaringan secara umum sangat tergantung pada jenis media. Media tumbuh pada kultur jaringan sangat besar pengaruhnya terhadap pertumbuhan dan perkembangan eksplan serta bibit yang dihasilkannya. di hasilkannya. Oleh karena itu, berbagai komposisi media kultur telah diformulasikan untuk mengoptimalkan pertumbuhan pertumbuhan dan perkemba perkembangan ngan tanaman tanaman yang dikulturkan. dikulturkan. 1.2 Tujuan Tujuan dari praktikum ini adalah sebagai berikut :  Untuk mengetahui jenis jenis media kultur jaringan dan aplikasi penggunannya  Untuk mengetahui komposisi dan unsur dalam media MS  Untuk mengetahui teknik teknik aseptic pembuatan media  Untuk mengetahui dan memahami rumus perhitungan larutan stok

1.3 Manfaat

Manfaat yang dapat diperoleh dari praktikum ini adalah sebagai berikut :  Agar memahami jenis-jenis media pada kultur jaringan.  Agar memahami Komposisi dan Fungsi Unsur Dalam media MS  Agar mengetahui teknik-teknik aseptik dalam pembuatan mediaRumus perhitungan larutan stok .

BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Jenis-jenis Media Kutur Jaringan serta Aplikasi Kegunaannya

Formulasi media kultur jaringan pertama kali dibuat berdasarkan berdasarkan komposisi komposisi larutan yang digunakan digunakan untuk hidroponik, khususnya komposisi unsur-unsur makronya. Unsur-unsur hara diberikan dalam bentuk garam-garam anorganik. Beberapa media dasar yang banyak digunakan antara lain: a) Media Knop

Dapat juga digunakan untuk menumbuhkan kalus wortel. Kultur kalus, biasanya ditumbuhkan pada media dengan kosentrasi garam-garam yang rendah seperti dalam kultur akar dengan penambahan penambahan suplemen suplemen seperti glucosa, gelatine, thiamine, cysteine-HCl cysteine-HCl dan IAA. b) Media White

Dikembangkan oleh Hildebrant untuk keperluan kultur jaringan tumor bunga matahari, ditemukan bahwa unsur makro yang dibutuhkan kultur tersebut, lebih tinggi dari pada yang dibutuhkan oleh kultur tembakau. Unsur F, Ca, Hg dan S pada media untuk tumor bunga matahari ini, sama dengan media untuk jaringan normal yang dikembangkan kemudian. Konsentrasi NO3- dan K+ yang digunakan Hildebrant ini lebih tinggi dari media white, tetapi masih lebih rendah dari pada media-media lain yang umum digunakan sekarang.

c) Media Knudson dan media Vacin and Went

Media ini dikembangkan khusus untuk kultur anggrek. Tanaman yang ditanam di kebun dapat tumbuh dengan baik dengan pemupukan pemupukan yang hanya mengandung mengandung N dari Nitrat. Knudson pada tahun 1922, menemukan menemukan penambahan penambahan 7.6 mM NH4+ disamping 8.5 mM NO3-, sangat baik untuk perkencambahan dan pertumbuhan biji anggrek. Penambahan NH4+ ternyata dibutuhkan untuk perkembangan protocorm. Media Nitsch & Nitsch, menggunakan menggunakan NO3- dan K+ dengan kadar yang cukup tinggi untuk mengkulturkan jaringan tanaman artichoke Jerussalem. Penambahan ammonium khlorida sebanyak 0.1 mM, menghasilkan pertumbuhan jaringan yang menurun. Pertumbuhan sel dari jaringan suatu organ dibandingkan dengan jaringan tumor tanaman Venca rosea (Catharanthus roseus), menunjukkan bahwa penambahan ammonium ke dalam media White yang sudah dimodifikasi, mempunyai pertumbuhan yang lebih baik. Konsentrasi NO3-, NH4-, K+ dan H2PO4- yang diperoleh, hampir sama dengan yang dikembangkan oleh Miller. d) Media Murashige & Skoog (media MS)

Merupakan perbaikan komposisi media Skoog, terutama kebutuhan garam anorganik yang mendukung pertumbuhan optimum pada kultur jaringan tembakau. Media MS mengandung 40 mM N dalam bentuk NO3 dan 29 mM N dalam bentuk NH4+. Kandungan N ini, lima kali lebih tinggi dari N total yang terdapat pada media Miller, 15 kali lebih tinggi dari media tembakau Hildebrant, dan 19 kali lebih tinggi dari media White. Kalium juga ditingkatkan sampai 20 mM, sedangkan P, 1.25 mM. Unsur makro lainnya konsentrasinya dinaikkan sedikit. Pertama kali unsur-unsur makro dalam media MS dibuat untuk kultur kalus tembakau, tetapi komposisi MS ini sudah umum digunakan untuk kultur jaringan jenis tanaman lain.

Media MS paling banyak digunakan untuk berbagai tujuan kultur pada tahun-tahun sesudah penemuan media MS, sehingga dikembangkan media-media lain berdasarkan media MS tersebut, antara lain media : 1. Lin & Staba, menggunakan media dengan setengah dari komposisi unsur makro MS, dan memodifikasi : 9 mM ammonium nitrat yang seharusnya 10mM, sedangkan KH2 PO4 yang dikurangi menjadi 0.5 Mm, tidak 0.625 mM. Larutan senyawa makro dari media Lin & Staba, kemudian digunakan oleh Halperin untuk penelitian embryogenesis kultur jaringan wortel dan juga digunakan oleh Bourgin & Nitsch (1967 dalam Gunawan 1988) serta Nitsch & Nitsch (1969 dalam Gunawan 1988) dalam penelitian kultur anther. 2. Modifikasi media MS yang lain dibuat oleh Durzan et alI (1973 dalam Gunawan 1988) untuk kultur suspensi suspensi sel white spruce dengan cara mengurangi konsentrasi K+ dan NO3-, dan menambah konsentrasi Ca2+ nya. 3. Chaturvedi et al (1978) mengubah media MS dengan menurunkan konsentrasi NO3-, K+, Ca2+, Mg2+ dan SO4-2 untuk keperluan kultur pucuk Bougainvillea glabra. 4. Senyawa-senyawa di dalam media MS dapat terjadi pengendapan pengendapan persenyawaan, persenyawaan, ini terlihat jelas pada media cair. Kebanyakan dari persenyawaan yang mengendap adalah fosfat dan besi, kemudian dalam jumlah yang lebih sedikit adalah Ca, K, N, Zn dan Mn. Senyawa paling sedikit adalah senyawa yang mengandung unsur C, Mg, H, Si, Mo, S, Ca dan Co. Setelah tujuh hari dibiarkan, maka kira-kira 50% dari Fe dan 13% dari PO4+, mengendap (Dalton et al, 1983). Pengendapan unsurunsur tersebut mungkin tidak penting, karena unsur-unsur tersebut masih tersedia bagi jaringan tanaman dan pengaruh

pengendapannya pengendapannya belum diketahui. Untuk mengatasi mengatasi pengendapan pengendapan Fe, Dalton dan grupnya grupnya menganjurkan menganjurkan supaya konsentrasi Fe dikurangi sampai 1/3 dengan EDTA yang tetap. 5.Media Gamborg B5 (media B5)

Pertama kali dikembangkan untuk kultur kalus kedelai dengan konsentrasi nitrat dan amonium lebih rendah dibandingkan media MS. Untuk selanjutnya media B5 dikembangkan untuk kultur kalus dan suspensi, serta sangat baik sebagai media dasar untuk meregenerasi seluruh bagian tanaman.. Pada masa ini media B5 juga digunakan untuk kultur-kultur lain. Media ini dikembangkan dari komposisi PRL-4, media ini menggunakan konsentrasi NH4+ yang rendah, karena konsentrasi yang lebih tinggi dari 2 mM menghambat pertumbuhan sel kedelai. Fosfat yang diberikan setelah 1 mM, Ca2+ antara 1-4 mM, sedangkan Mg2+ antara 0.5-3 mM (Gamborg et al, 1968). 6.Media Schenk & Hildebrant (media SH)

Merupakan media yang juga cukup terkenal, untuk kultur kalus tanaman monokotil dan dikotil. Konsentrasi ion-ion dalam komposisi media SH sangat mirip dengan komposisi pada media Gamborg dengan perbedaan kecil yaitu level Ca2+, Mg2+, dan PO4-3 yang lebih tinggi. Schenk & Hildebrant mempelajari pertumbuhan pertumbuhan jaringan dari 37 jenis tanaman dalam media SH dan mendapatkan bahwa: 32 % dari spesies yang dicobakan, tumbuh dengan sangat baik, 19% baik, 30% sedang, 14% kurang baik, dan 5% buruk pertumbuhannya. Tetapi karena zat tumbuh yang diberikan pada tiap jenis tanaman tersebut berbeda. Media SH ini cukup luas penggunaannya, penggunaannya, terutama untuk tanaman legume.

7.Media WPM (Woody Plant Medium)

Yang dikembangkan oleh Lioyd & Mc Coen pada tahun 1981, merupakan media dengan konsentrasi ion yang lebih rendah dari media MS. Media diperuntukkan khusus tanaman berkayu, dan dikembangkan oleh ahli lain, tetapi sulfat yang digunakan lebih tinggi dari sulfat pada media WPM. Saat ini WPM banyak digunakan untuk perbanyakan tanaman hias berperawakan perdu dan pohonpohon-pohon. pohon. 8.Media N6

Media N6 mempunyai ciri perbandingan NH₄⁺ dan NO₃⁻ yang jauh perbandinganya. perbandinganya. Amonium yang diberikan dalam bentuk (NH₄)SO₄ hanya sebanyak 363 mg/l, sedangkan KNO₃ 2830 mg/l. (Suryowinoto, M. 1991) 2.2 Komposisi dan Fungsi Unsur Dalam Media MS (Murashige & Skogg)

Media Murashige & Skoog (MS) merupakan perbaikan komposisi media Skoog, terutama kebutuhan garam anorganik yang mendukung pertumbuhan optimum pada kultur jaringan tembakau. Media MS mengandung 40 mM N dalam bentuk NO3 dan 29 mM N dalam bentuk NH4+. NH4+. Kandungan Kandungan N ini, lima lima kali lebih tinggi dari N total yang terdapat pada media Miller, 15 kali lebih tinggi dari media tembakau Hildebrant, dan 19 kali lebih tinggi dari media White. Kalium juga ditingkatkan sampai 20 mM, sedangkan P, 1.25 mM. Unsur makro lainnya konsentrasinya dinaikkan sedikit. Pertama kali unsur-unsur makro dalam media MS dibuat untuk kultur kalus tembakau, tetapi komposisi MS ini sudah umum digunakan untuk kultur jaringan

jenis

tanaman

lain.

(Madigan,

M.T.2003).

Media MS paling banyak digunakan untuk berbagai tujuan kultur pada tahun-tahun tahun-tahun sesudah sesudah penemuan penemuan media MS, sehingga sehingga dikembangkan media-media lain berdasarkan media MS tersebut, antara lain media Lin & Staba, menggunakan media dengan setengah dari komposisi unsur makro MS, dan memodifikasi : 9 mM ammonium nitrat yang seharusnya 10mM, sedangkan KH2 PO4 yang dikurangi menjadi 0.5 Mm, tidak 0.625 mM. (Hendaryono dan Wijayani, 1994). Adapun kompisisi medium kultur jaringan tanaman adalah sebagai berikut: 1) Air

Air merupakan komponen yang penting di dalam pengkulturan eksplan karena 95% dari medium mengandung air. Untuk tujuan penelitian, digunakan digunakan air destilasi, dan untuk penelitian dengan materi eksplan dari protoplas, meristem dan sel sebaiknya digunakan aquabides . Dimana air destilasi (air suling) tersebut telah steril dari kontaminasi mikroorganisme atau substansi yang dapat merusak proses perkembangan eksplan (Madigan, M.T.2003). 2) Larutan Garam Anorganik

Tiap tanaman memerlukan setidaknya 6 elemen makronutrien, yaitu unsur yang diperlukan dalam jumlah besar meliputi N, K, Mg, Ca, S, P dan 7 elemen mikronutrien, yaitu unsur yang diperlukan dalam jumlah kecil meliputi Fe, Mn, B, Mo, Cl (Wetherell, 1976). Unsur-unsur makro biasanya diberikan dalam bentuk NH4NO3, KNO3, CaCl2.2H2O, CaCl2.2H2O, MgSO4.7H2O MgSO4.7H2O dan KH2PO4, sedangkan unsur mikro biasanya diberikan dalam bentuk MnSO4.4H2O, MnSO4.4H2O, ZnSO4.4H2O, ZnSO4.4H2O, H3BO3, KI, Na2MoO4. 2H2O5,CuSO4.5H2O dan CoCl2.6H2O.

(Hendaryono dan Wijayani, 1994).

pereduksi pereduksi yang berfungsi mereduksi mereduksi indikator-indikator indikator-indikator seperti ion kupri (Cu2+) menjadi bentuk kupro (Cu+) yang bermanfaat pada perkembangan perkembangan dan perbaikan . Vitamin adalah bahan yang perlu ditambahkan ditambahkan dalam medium kultur in vitro, sebab sel bagian tanaman yang dikulturkan secara in vitro belum belum mampu membuat vitamin sendiri untuk kehidupannya. Vitamin yang sering ditambahkan ke dalam medium adalah tiamin (vitamin B1), asam nikotinat (niasin), piridoksin (vitamin B6). (Indra.2008). 3) Zat-zat organik

Senyawa kimia organik yang biasa dipakai sebagai sumber energi dalam kultur in vitro adalah karbohidrat. Karbohidrat tersusun atas unsur-unsur C, H, O sebagai elemen penyusun utama. Bahan-bahan organik yang termasuk karbohidrat meliputi gula, pati dan selulosa. Karbohidrat mempunyai dua fungsi utama yaitu sebagai sumber energi untuk jaringan dan untuk keseimbangan tekanan osmotik dalam medium. Karbohidrat yang sering digunakan adalah sukrosa meskipun kadang-kadang diganti dengan glukosa dan fruktosa dapat digunakan tetapi harganya lebih mahal hasilnya tidak selalu lebih baik daripada sukrosa. Konsentrasi sukrosa yang digunakan berkisar 1 – 5% (10 - 15 g/l), tetapi untuk kebanyakan pengkulturan konsentrasi optimum sukrosa adalah 2 - 3%. Sedangkan kadar sukrosa untuk keperluan pengkulturan berkisar antara 2 - 4%. Dan kadar sukrosa sukrosa yang digunakan digunakan sebagai sumber energi untuk menginduksi pertumbuhan eksplan dalam medium adalah 2 - 7%. Hendaryanto menyatakan bahwa sukrosa bersifat labil terhadap suhu tinggi sehingga apabila disterilkan dalam autoklaf bersama-sama zat lain akan mengakibatkan penguraian sukrosa menjadi kombinasi antara

sukrosa, D-glukosa, dan D-fruktosa. Keuntungan dari penguraian ini adalah terbentuknya terbentuknya aldosa (D-glukosa) dan ketosa (D-fruktosa) yang melimpah ruah. (Hendaryono dan Wijayani, 1994). Jadi apabila disimpulkan menjadi seperti berikut : 1. UnsurMakro NH4 NO3 KNO3 MgSO47H2O KH2PO4 CaCl22H2O 









: 14,85 g : 17,1 g : 3,33 g : 1,53 g : 3,96 g

2. UnsurMikro A H3BO3 : 0,038 g MnSO44H2O : 0,2007 g ZnSO47H2O : 0,0774 g 



Sebagaipembuat 300 ml media kulturlarutanmakro kulturlarut anmakro Untukmedaikultur Untukmedaikult ur (3 ml)

Untukpembuatan 300 ml media kulturdiambil 3 ml



3. UnsurMikro B KI 







: 0,083 g Na2MoO47H2O : 0,025 g CuSO45H2O : 0,0025 g CoCl6H2O : 0,0025 g

Untukpembuatan 300 ml diambillarutan diambilla rutan 0,3 ml

4. FeEDTA 



FeSO47H2O Na2EDTA

: 2,503 g : 3,357 g

Untukpembuatan 300 ml diambillarutan diambilla rutan 3 ml

5. Vitamin 







TiaminHCl

: 0,001 g PeridoksinHCl : 0,005 g AsamNikotinat : 0,005 g Olycine : 0,02 g

Untukpembuatan 300ml diambil 0,3 larutan vitamin (Anonymousa, 2012)

2.3 Teknik-teknik Aseptis Dalam Pembuatan Media Kultur Jaringan

Tahapan yang dilakukan dalam perbanyakan tanaman dengan teknik kultur jaringan adalah: 1) Pembuatan media 2) Inisiasi 3) Sterilisasi 4) Multiplikasi 5) Pengakaran 6) Aklimatisasi  Media merupakan faktor penentu dalam perbanyakan dengan kultur jaringan. Komposisi media media yang yang digunakan tergantung dengan jenis tanaman yang akan diperbanyak. Media yang digunakan biasanya terdiri dari garam mineral, vitamin, dan hormon. Selain itu, diperlukan juga bahan tambahan seperti agar, gula, dan lain-lain. lain-lain . Zat pengatur tumbuh (hormon) yang ditambahkan juga bervariasi, baik jenisnya maupun jumlahnya, jumlahnya, tergantung dengan tujuan dari kultur jaringan yang dilakukan. Media yang sudah jadi ditempatkan pada tabung reaksi atau botol-botol kaca. Media yang digunakan juga harus disterilkan dengan cara memanaskannya dengan autoklaf.  Inisiasi adalah pengambilan eksplan dari bagian tanaman yang akan dikulturkan. Bagian tanaman yang sering digunakan untuk kegiatan kultur jaringan adalah tunas.  Sterilisasi adalah bahwa segala kegiatan dalam kultur jaringan harus dilakukan dilakukan di tempat yang steril, yaitu di laminar flow dan menggunakan alat-alat alat-al at yang juga j uga steril. Sterilisasi juga dilakukan terhadap peralatan, yaitu menggunakan etanol yang disemprotkan secara merata pada peralatan yang digunakan. Teknisi yang melakukan kultur jaringan juga harus steril.  Multiplikasi adalah kegiatan memperbanyak calon tanaman dengan menanam eksplan pada media. Kegiatan

ini dilakukan di laminar flow flow untuk menghindari adanya kontaminasi yang menyebabkan gagalnya pertumbuhan eksplan. Tabung reaksi yang telah ditanami ekplan diletakkan pada rak-rak dan ditempatkan di tempat yang steril dengan suhu kamar.  Pengakaran adalah fase dimana eksplan akan menunjukkan adanya pertumbuhan akar yang menandai bahwa proses kultur jaringan yang dilakukan mulai berjalan dengan baik. Pengamatan Pengamatan dilakukan dilakukan setiap hari untuk melihat pertumbuhan dan perkembangan akar serta untuk melihat adanya kontaminasi oleh bakteri ataupun jamur. Eksplan yang terkontaminasi terkontaminasi akan menunjukkan menunjukkan gejala seperti berwarna putih atau biru (disebabkan jamur) atau busuk (disebabkan (disebabkan bakteri). bakteri).  Aklimatisasi adalah kegiatan memindahkan eksplan keluar dari ruangan aseptic ke bedeng. Pemindahan dilakukan secara hati-hati dan bertahap, yaitu dengan memberikan sungkup. Sungkup digunakan untuk melindungi bibit dari udara luar dan serangan hama penyakit penyakit karena bibit hasil kultur jaringan sangat rentan terhadap serangan hama penyakit dan udara luar. Setelah bibit mampu mampu beradaptasi dengan lingkungan lingkungan barunya barunya maka secara bertahap sungkup dilepaskan dan pemeliharaan bibit dilakukan dilakukan dengan cara yang sama dengan pemeliharaan bibit generatif. Keunggulan inilah yang menarik bagi produsen bibit untuk mulai mengembangkan usaha kultur jaringan ini. Saat ini sudah terdapat beberapa tanaman kehutanan yang dikembangbiakkan dengan teknik kultur jaringan, antara lain adalah: jati, sengon, akasia, dll. Bibit hasil kultur jaringan yang ditanam di beberapa areal menunjukkan menunjukkan pertumbuhan pertumbuhan yang baik, bahkan jati j ati hasil kultur jaringa j aringan n yang sering disebut dengan jati emas dapat dipanen dalam jangka waktu yang relatif lebih pendek dibandingkan dengan tanaman jati yang berasal dari benih generatif, terlepas dari kualitas kayunya kayunya yang belum teruji teruji di Indonesia. Indonesia. (Machmud, M. 2008)

2.4 Rumus Perhitungan Larutan Stok

Volume stok untuk setiap pembuatan media q liter. V1 X M1 = V2 x M2

Ket: V1 = Volume V olume stok yang dicari. V2 = Volume larutan stok M1 = Konsentrasi Konsentrasi larutan stok M2 = Konsentrasi yang diinginkan. (Hemawan dan Na”em, 2006)

BAB III METODOLOGI 3.1 Alat, Bahan dan Fungsi 3.1.1 Alat

1. 4 botol kultur : berfungsi sebagai tempat media kultur 2. 1 pak karet gelang : berfungsi untuk penutup atau tali penutup plastik dan alumunium 3. Plastik tahan tanas (untuk 8 botol, dengan ukuran pxl; 12 x 13 cm) : sebagai penutup botol kultur (perlakuan a) 4. Gelas ukur : untuk mengukur cairan yang di butuhkan 5. Mikro pipet : untuk mengambil larutan stok dengan ukuran terkecil mikro meter 6. Beaker glass : untuk tempat pembuatan larutan stok 7. pH universal (indikator pH) : untuk mengukur pH larutan 8. sitter : megaduk larutan 9. microwave : untuk memasak larutan hingga larutan mengental 10. alumanium foil (unutk 6 botol, dengan ukuran pxl; 24 x 15, kertas di lipat/rangkap) : sebagai penutup botol kultur (perlakuan b) 11. autoclave : sterilisasi botol kultur sebelum di masukkan ke ruangan pengamatan 12. Timbangan analitik : untuk menimbang berat bahan yang yang diperlukan diperlukan

13. Oven kultur

:

sterilisasi

kering

botol

3.1.2 Bahan Aquades

: 50 ml (bahan tambahan pada larutan stok)

Makro

: 30 ml

Mikro A

: 3 ml

Mikro B

: 0,3 ml sebagai bahan

FeEDTA

: 3 ml pembuatan larutan stok

Vitamin

: 0,3 ml

CaCl2

: 3 ml

Sukrosa : untuk 300 ml. Larutan media digunakan 9 gram gula. (untuk membuat larutan menjadi tercampur rata) Agar-agar : unutk 300 ml. Larutan Laruta n media digunakan 2,1 gram agar-agar (untuk mengentalkan larutan)

3.2 Cara Kerja Pembuatan Media Kultur

Timbang agar-agar 2,1 gram

Timbang sukrosa 9 gram

Pada labu erlenmeyer (diisi dengan : - makro: 30 mL, CaCl2: 3 mL, mikro A: 3 mL, - mikro B: 0,3 mL, FeEDTA FeEDTA:: 3 mL mL - Vitam Vitamin: in: 0 3 mL. mL.

Ditambahkan aquades (H2O) hingga 300 mL.

Ukuran pH larutan stock sampai 5,5-5,8 NB: +NaOH :apabila terlalu asam +HCL :apabila terlalu basa

Campur dan stiter (tanpa dipanaskan) sampai tampak pusaran.

Masukan microwave selama 7 menit

Masukkan ke botol kultur @20 mL.

Di autoclave dengan tekanan 1,5atm, suhu 121°C selama 15 menit

3.3 Analisa Perlakuan

Sebelum pembuatan media hal yang pertama kali dilakukan adalah mensterilkan semua peralatan yang akan digunakan dengan alcohol 95% serta diiuti dengan pembakaran kemudian didinginkan, hal ini bertujuan agar alat tidak terkontaminasi dengan jamur atau bakteri. Isi breaker glas dengan larutan aquades kurang lebih 50 ml. Setelah itu, tambahkan unsur-unsur larutan yang sudah di stok, yaitu : makro (30 ml), mikro A (3 ml), mikro B (0,3 ml), Fe EDTA (3 ml), Vitamin (0,3 ml) dan CaCl2 (3 ml). Setelah semua larutan selesai ditambahkan, tambahkan lagi aquades hingga volume mencapai 300 ml. Stirer (aduk) larutan dan ukut pH larutan menggunakan indikator pH hingga mencapai pH sekitar 5 – 6. Masukkan sukrosa (9 gram) dan agar-agar (2,1 gram) yang bertujuan untuk melarutkan melarutkan larutan dan mengentalkan mengentalkan larutan. Stirer kembali sampai larutan berwarna putih bening. Setelah selesai, tutup breaker glas dengan plastik wrap dan masukkan ke dalam microwave selama 7 menit setelah selesai, masukkan larutan ke dalam botol kultur dengan 8 botol di tutup plastik, dan 6 botol ditutup alumunium. Masukkan ke autoclave untuk sterilisasi akhir, dan amati selama 2 minggu, apakah terjadi kontaminasi kontaminasi atau tidak, catat hasil.

BAB IV HASIL dan PEMBAHASAN 4.1 Hasil a. Tabel Media Kultur Dengan Penutup Plastik Hari Jenis No Pengamatan Botol KeKontaminan Ke1 Hari ke-2 (16 1 Tidak ada Oktober 2012) 2 Tidak ada 3 Tidak ada 4 Tidak ada 5 Tidak ada 6 Tidak ada 7 Tidak ada 8 Tidak ada

Ket Tidak terjadi kontamina n dengan warna yang masih putih dan sudah mengental

2

Hari ke 4 (22 Oktober 2012)

1 2 3 4 5 6 7 8

Tidak ada Tidak ada Tidak ada Tidak ada Tidak ada Tidak ada Tidak ada Tidak ada

Tidak terjadi kontamina n dengan warna yang masih putih dan sudah mengental

3


1 2 3 4 5 6

Tidak ada Tidak ada Tidak ada Tidak ada Tidak ada Tidak ada

Tidak terjadi kontamina n dengan warna yang

7 8

Tidak ada Tidak ada

masih putih dan sudah mengental

4


1 2 3 4 5 6 7 8



5

Hari ke 10 *(29 Oktober 2012)

1 2 3 4 5 6 7 8



6

Hari ke 12 (31Oktober 2012)

1 2 3 4 5 6 7 8



7

Hari ke 14 (2 November November 2012)

1 2 3 4 5 6 7 8



* Sehar usnya tanggal 26 dan 28 Oktobe Okt oberr 2012 ada pengamatan pengamatan tetap tetapii h ari li bur j adi adi penga pengamata matan n dil akukan l ebih maju 1 har har i t gl 25 oktober oktober dan dan dimun di mun dur kan pada pada tanggal tanggal 29 Oktobe Oktoberr 2012. 2012.

b. Tabel Media KulturDenganPenutupAlumunium Foil Hari Jenis Ket No Pengamatan Botol KeKontaminan Ke1 Hari ke-2 (16 1 Tidak ada Tidak Oktober 2012) 2 Tidak ada terjadi 3 Tidak ada kontamina 4 Tidak ada n dengan 5 Tidak ada warna 6 Tidak ada yang masih putih dan sudah mengental

2


1 2 3 4

Tidak ada Tidak ada Tidak ada Tidak ada

Tidak terjadi kontamina n dengan

5 6

Tidak ada Tidak ada

warna yang masih putih dan sudah mengental

3


1 2 3 4 5 6



4


1 2 3 4 5 6



5

Hari ke 10 *(29 Oktober 2012)

1 2 3 4 5 6


Tidak terjadi kontamina n dengan warna yang masih putih dan sudah

mengental 6

Hari ke 12 (31Oktober 2012)

1 2 3 4 5 6



7

Hari ke 14 (2 November November 2012)

1 2 3 4 5 6



* Sehar usnya tanggal 26 dan 28 Oktobe Okt oberr 2012 ada pengamatan pengamatan tetap tetapii h ari li bur j adi adi penga pengamata matan n dil akukan l ebih maju 1 hari t gl 25 oktober oktober dan dan dimun di mun dur kan pada pada tanggal tanggal 29 Oktobe Oktober 2012. 2012.

4.2 Pembahasan

Pada praktikum kali ini kita kita mencoba membuat media kultur jaringan dengan bahan-bahan bahan-bahan yang sudah dijelaskan di atas, setelah di autoklaf kita mengamati perkembangan media pada hari kamis tanggal 20 oktber, disana terlihat bahwa media yang ditutup dengan plastic dan alumunium poli keadaan semuanya semuanya masih baik, dengan tanda-tanda tidak ada perubahan warna (tetap putih) dan juga masih

kelihatan stabil dengan kata lain tidak terlihat danya jamur pathogen yang masuk. Kemudian pada hari kamis tanggal 25 oktober kita mengamati lagi dan ternyata tidak jauh berbeda dengan yang pengamatan pertama jadi semua media baik 8 sample yang ditutpi plastic dan 6 sample yang ditutupi alumunium tidak ada tanda-tanda terkontaminasi, tetapi disini ada satu media yang tertutupi alumunium yang kelihatan warnanya agak kekuningan tetapi menurut saya masih dalam keadaan tidak terkontaminasi karena ketika begitu sample didekatkan warnanya masih putih sebenarnya cuma memang dari jauh kelihatan agar sedikit kekuningan, seandainya itu termasuk dalam tanda kontaminasi tidak mungkin sebab saya melihat sample praktikan lain ada yang kuning tetapi disitu ada jamur yang menggelembung (membentuk bundaran) yang berwarna hitam ke abu-abuan, sedangkan pada sample kami tidak sedemikian itu. Begitupun pada pengamatan ke-3 pada hari selasa tanggal 29 oktober 2012 kami menyimpulkan tidak ada yang terkontaminasi, begitu juga pada saat pengamatan pengamatan ke-4 hari rabu, tanggal 31 oct 2012. Hingga pada pengamatan pengamatan yang terakhir pada hari jum’at tanggal 02 nop 2012, ke 8 sample media kultur jaringan yang ditutupi plastic tidak terlihat adanya kontainasi begitupun ke 6 sample yang ditutupi alumunium. Seperti apa yang dikemukakan oleh Andria bin Muhayat bahwa “eksplan yang terkontaminasi akan menunjukkan gejala seperti berwarna putih sampai biru (disebabkanjamur) (disebabkanjamur) atau busuk (disebabkan bakteri) ( Sriyanti, Daisy P. 1994 .)

BAB V PENUTUP 5.1 Kesimpulan

Media merupakan faktor utama dalam perbanyakan dengan kultur jaringan. Keberhasilan perbanyakan dan perkembangbiakan tanaman dengan metode kultur jaringan secara umum sangat tergantung pada jenis media. Media MS mengandung 40 mM N dalam bentuk NO3 dan 29 mM N dalam bentuk NH4+. Dan Media MS inilah yang paling banyak digunakan untuk berbagai tujuan kultur pada tahun-tahun sesudah penemuan media MS. Pada praktikum kali ini kita mencoba membuat media tanam kultur jaringan dengan jenis media MS tersebut, dan akhirnya dapat ditarik kesimpulan ketika kita sudah melakukan beberapa kali pengamatan, pengamatan, media kultur jaringan yang ditutup dengan plastic biasa tepatnya ada 8 sampel dan 6 sampel yang ditutupi alumunium foil semuanya tidak terkontaminasi, masih putih normal Dari data hasil praktikum yang telah didapatkan, diketahui bahwa pembuatan pembuatan media kultur kultur yang telah dilakukan dilakukan dapat dikatakan dikatakan berhasil. Hal ini diketahui dari pengamatan pengamatan yang telah dilaksanakan dilaksanakan selama 2 minggu pengamatan (dengan selang waktu 2 hari sekali), yaitu warna dari larutan yang berada di dalam botol kultur tutup plastik maupun tutup alumunium alumunium berwarna putih dan sudah mengental. 5.2 Saran 



Untuk praktikum saran saya agar mahasiswanya dikurangi lagi sebab terlalu kebanyakan jadi kaya ga efektif Untuk Asisten Good Job.. saya suka gaya mbak mega mengajar..enak mudah dipahami namun ada 1 yang saya nilai pas praktikum yaitu yang lebih teliti dalam melakukan praktikum dan mengajari praktikannya..

DAFTAR PUSTAKA Anonymousa,2012.http://www.blog.ub.ac.id/fitafitriya/2012/10/06/la poran-bioteknologi-pem poran-bio teknologi-pembuatan-m buatan-media-kultur edia-kultur-jaringa -jaringan/. n/. Diaksestanggal 30 Oktober 2012. Gamborg et al, 1968 . Molekuler Biotechnology, Principles and applications of Recombinan DNA. ASM Press. Washinton D.C. Hendaryono.D.P.S., dan Wijayani 1994 .Teknik Kultur Jaringan, Pengenalan dan Petunjuk Perbanyakan Secara Vegetatif Modern. Kansius:Yogyakarta. Herawan, T dan M. Na’iem. 2006. Pengaruh Pengaruh Jenis Media Media dan Konsentrasi Konsentrasi Zat Pengatur Pengatur Tumbuh Terhadap Terhadap Perakara Perakaran n pada Kultur Jaringan Jaringan Cendana Cendana (Santalum (Santalum album album Linn.). Linn.). Jurnal Agrosains 19(2) : 103-109. Indra.2008. Media Pengembangan Pengembangan dan media Tanam dan Pertumbuhan Pertumbuhan..http://ekmonsaurus.com/data/media.PDF .Diakses pada tanggal tanggal 30 Oktober Oktober 2010 Machmud,M,2008. Teknik Penyimpanan dan Pemeliharaan

Mikroba. Balai Penelitian Bioteknologi Tanaman Pangan,Bogor. http://anekaplanta.wordpress.com/2008 /03/02/teknik-penyimpanan-dan-pemeliharaan-mikroba/ . Diakses pada tanggal tanggal 30 Oktober Oktober 2012 Madigan, M.T.2003. Brock Biology Of Microorganism. Pearson

Education, Inc: Amerika Sriyanti, Daisy P. 1994. Teknik Kultur Jaringan. Jaringan. Kanisius. Yogyakarta.

LAMPIRAN

Dokumentasi hari ke-2 (16 Oktober 2012) Plastik

Alumunium

Tidak terjadi kontaminasi



Alumunium




Alumunium




Alumunium



Dokumentasi hari ke-8 dan 10 (25 Oktober 2012) Plastik

Alumunium




Alumunium



Dokumentasi hari ke-14 (02 November 2012)

Plastik

Alumunium



Laporan Bioteknolgi_Pembuatan Media Kultur Jaringan PDF

Recommend Documents