Laporan Kultur Jaringan Hewan

LAPORAN KULTUR JARINGAN HEWAN ISOLASI MAKROFAG MAKROFAG DARI PERITONEAL MENCIT

A. Tujuan Mengatahui cara pengisolasi mekrofag mencit dari peritonial tikus ( Rattus  Rattus norvegicus)  Alat dan Bahan

:

Mikroskop cahaya Spluit 10 cc dan needle 26 G sentrifuge tube dan Sentrifuge Mikropipet 1,5 ml Hemositometer Dissecting set steril Kapas Bak paraffin Incubator CO2  Neutral red PBS (phospat Buffer Saline) RPMI dingin Alkohol 70% Lar.tripan blue Mikrowell dan cover slip Latex bead LB30 sigma CARA KERJA 1. Isolasi dan Kultur Sel Makrofag Peritoneum Mencit.  Mencit dibunuh dengan narkose menggunakan kloroform. Mencit diletakkan dalam

 posisi terlentang, kulit bagian perut dibuka dan dibersihkan selubung peritoneumnya dengan alkohol 70%.  Suntikkan  10 ml medium RPMI dingin ke dalam rongga peritoneum, tunggu  3 menit

sambil ditekan-tekan secara perlahan.

 Cairan peritoneal diaspirasi dari rongga peritoneum dengan cara menekan organ dalam

dengan 2 jari, cairan diaspirasi dengan spuit injeksi, dipilih pada bagian yang tidak  berlemak dan jauh dari usus. Aspirat yang didapat ditampung dalam tabung sentrifus dan disentrifus pada 1.200 rpm, 4C selama 10 menit.  Supernatan dibuang, kemudian ditambahkan 3 ml medium RPMI komplit (mengandung

FBS 10%) pada pellet yang didapat.  Jumlah sel yang didapat dihitung dengan menggunakan hemositometer, kemudian

diresuspensikan lagi dengan medium RPMI komplet sehingga didapat suspensi sel 6

dengan kepadatan 2,5 x 10 /ml.  Suspensi sel yang telah dihitung dikultur pada sumuran microplate 24 yang telah diberi 5

cover slips bulat, setiap sumuran 200l (5 x 10  sel).  Inkubasikan dalam inkubator CO2  5%, 37C selama 30 menit. Kemudian ditambahkan

medium RPMI komplit 1 ml/ sumuran dan diinkubasikan lagi selama 2 jam. Sel dicuci dengan RPMI 2x kemudian ditambahkan medium komplit 1 ml/ sumuran dan inkubasi dilanjutkan sampai 24 jam.

2.

PENGAMATAN AKTI FI TAS FA GOSI TOSI S M AKROFAG

1. Amati preparat yang sudah disediakan pada perbesaran 100x. 2. Gambar dan identifikasi keberadaan makrofag yang teraktifasi.