BAB I PENDAHULUAN A.
LATAR BELAKANG
Cholera Cholera umumnya merupakan penyakit yang menyebar karna sanitasi yang buruk yang menyebabkan kontaminasi sumber air. Cara ini jelas merupakan mekanisme utama penyebaran penyakit cholera dalam lingkungan masyarakat miskin di Amerika selatan. Kasus-kasus sporadic muncul karna kerang yang diambil dari perairan pantai yang tercemar oleh kotoran, dimakan mentah. Cholera dapat juga ditularkan oleh kerang yang dipanen dari air yang tidak tercemar karena V. cholera O1 merupakan bagian dari Mikrobiota penghuni alami perairan pantai. Vibrio Cholera memproduksi Cholera memproduksi racun Cholera, Cholera, model untuk Enteretoksin, yang tindakan pada epitel mukosa bertanggung jawab atas diare karakteristik penyakit kolera. Dalam masnifestasi exterm, kolera adalah salah satu penyakit fatal cepat paling dikenal seseorang yang sehat dapat menjadi hipotensi satu jam setelah timbulnya gejala dan mungkin meninggal dalam waktu 2-3 jam jika pengobatan tidak disediakan lebih umum, penyakit ini berlangsung dari bangku cair pertama yang mengejutkan di 4-12 jam, dengan kematian berikut dalam 18 jam untuk beberapa hari.
B.
RUMUSAN MASALAH
Bagaimana identifikasi bakteri Vibrio Cholera
C.
TUJUAN
Untuk mengetahui identifikasi bakteri Vibrio Cholera
1
BAB II TINJAUAN PUSTAKA A. Vibrio Cholerae
Vibrio cholerae adalah salah satu bakteri yang masuk dalam family Vibrionaceae selain dari Aeromonas dan Plesiomonas, dan merupakan bagian dari genus Vibrio. Bakteri ini pertama kali ditemukan oleh Robert Koch pada tahun 1884 dan sangat penting dalam dunia kedokteran karena menyebabkan penyakit kolera. Vibrio cholerae banyak ditemui di permukaan air yang terkontaminasi dengan feces yang mengandung kuman tersebut, oleh karena itu penularan penyakit kolera ini dapat melalui air, makanan dan sanitasi yang buruk. Vibrio cholerae merupakan bakteri gram negatif , berbentuk basil (batang) dan bersifat motil (dapat bergerak), memiliki struktur antogenik dari antigen flagelar H dan antigen somatik O, gamma-proteobacteria, mesofilik dan kemoorganotrof , berhabitat alami di lingkungan akuatik dan umumnya berasosiasi dengan eukariot. Klasifikasi dari Vibrio cholerae adalah sebagai berikut : Kingdom
: Bacteria
Phylum
: Proteobacteria
Class
: Gamma Proteobacteria
Order
: Vibrionales
Family
: Vibrionaceae
Genus
: Vibrio
Spesies
: Vibrio cholerae
B. Morfologi Bakteri Vibrio cholera
Vibrio cholerae termasuk bakteri gram negative, berbentuk batang bengkok seperti koma dengan ukuran panjang 2-4 um(Gambar 1) Pada isolasi, Vibrio cholerae menghasilkan katalase dan oksidase ,dan bergerak dengan satu flagel pada ujung sel. Tidak memiliki kapsul dan tidak berspora
Koch
menamakannya“kommabacillus”,
Tapi
bila
biakan
diperpanjang , kuman ini bisa menjadi batang yang lurus yang mirip
2
dengan bakteri enteric gram negative. Kuman ini dapat bergerak sangat aktif karena mempunyai satu buah flagella polar yang halus (monotrikh). Kuman ini tidak membentuk spora. Pada kultur dijumpai koloni yang cembung (convex), halus dan bulat yang keruh (opaque) dan bergranul bila disinari. C. Fisiologi
Vibrio cholerae bersifat aerob atau anaerob fakultatif. Suhu optimum untuk pertumbuhan pada suhu 18-37°C. Dapat tumbuh pada berbagai jenis media, termasuk media tertentu yang mengandung garam mineral dan asparagin sebagai sumber karbon dan nitrogen. V. cholerae ini tumbuh baik pada agar Thiosulfate-citrate-bile-sucrose (TCBS), yang menghasilkan koloni berwarna kuning (Gambar 2) dan pada media TTGA (Telurite-taurocholate-gelatin-agar). D. Ciri Umum Vibrio cholerae
1.
Organisme multiselluler
2.
Prokariot (tidak memiliki membran inti sel )
3.
Tidak memiliki klorofil
4.
Memiliki ukuran tubuh yang bervariasi antara 0,12 s/d ratusan mikron umumnya memiliki ukuran rata-rata 1 s/d 5 mikron.
5.
Memiliki bentuk tubuh basil (batang)
6.
Hidup bebas atau parasite
7.
Yang hidup di lingkungan ekstrim seperti pada mata air panas,kawah atau gambut dinding selnya tidak mengandung peptidoglikan
8.
Yang hidupnya kosmopolit diberbagai lingkungan dinding seln ya mengandung peptidoglikan
3
BAB III METODE PENELITIAN A. TANGGAL
Senin s.d Kamis , 19 s.d 22 Maret 2018
B. JUDUL
Indentifikasi bakteri Vibrio cholera sp.
C. TUJUAN
1. Mengetahui alat-alat dan bahan serta media yang digunakan untuk identifikasi Vibrio cholera 2. Mengetahui morfologi Vibrio cholera secara makroskopis dan mikroskopis. 3. Mengetahui prinsip dan prosedur identifikasi Vibrio cholera
D. PRINSIP
Sampel ditanam pada media Alkali Pepton dan diinkubasi selama 24 jam, lanjutkan penanaman pada media MCA dan TCBS dengan cara inokulasi kemudian inkubasi selama 24 jam. Ambil koloni yang dicurigai
Vibrio
cholera pada salah satu media dan tanam dan lakukan pewarnaan gram kemudian tanam pada media KIA , untuk memastikan bakteri yang tumbuh merupakan Vibrio cholera lanjutkan penanaman pada media biokimia reaksi.
E. ALAT
Alat-alat yang digunakan untuk identifikasi Vibrio cholera sp. : 1. Neraca teknis
7. Lampu spiritus
2. Kertas timbang
8. Kaca objek
3. Spatula
9. Pipet ukur 10 ml
4. Batang pengaduk
10. Ose bulat
5. Erlen meyer 100 ml
11. Ose lurus
6. Gelas beker 250 ml
12. Swab steril
4
13. Inkubator
16. Mikroskop
14. Tabung reaksi
17. Gelas ukur 100 ml
15. Rak tabung reaksi
F. BAHAN
Bahan yang digunakan untuk identifikasi Vibrio cholera sp. : 1. Media Alkali pepton 1 % 2. Media TCBS 3. Media MCA (MacConkey Agar) 4. Media
biokimia reaksi (TSIA, MR,
sitrat,
motil, glukosa, maltosa,
laktosa, sukrosa) 5. Minyak emersi 6. Aquadest 7. Pewarnaan gram (kristal violet, lugol 2 %, alkohol 96%, dan safranin) 8. Methyl Red 9. Sampel 10. NaCl 0,9%
G. PROSEDUR KERJA
A. Naskah : Hari Pertama : a. Homogenkan sampel lalu ambil sampel sebanyak 1-3 ose dan tanam pada media Alkali pepton 1% b. Inkubasi 37°C selama 6 jam
Hari Kedua : a. Lakukan pengamatan terhadap media Alkali Pepton 1% kemudian lanjutkan penanaman pada media TCBS dan MCA b. Ambil sampel sebanyak 1 ose kemudian inokulasikan pada media c. Inkubasi 37°C selama 24 jam
5
Hari Ketiga : a. Lakukan pengamatan terhadap media TCBS dan MCA b. Ambil koloni yang dicurigai Vibrio cholera sp. sebanyak 1 koloni dan inokulasikan pada media TCBS dan MCA c. Inkubasi 37°C selama 24 jam
Hari Keempat : a.
Lakukan pengamatan terhadap media TCBS dan MCA
b.
Ambil salah satu koloni yang dicurigai Vibrio cholera sp, lakukan pewarnaan gram dan amati hasil pewarnaan menggunakan mikroskop dengan perbesaran 100x.
c.
Apabila hasil pengamatan mengarah pada morfologi Vibrio cholera sp., lanjutkan penanaman pada media KIA
d.
Ambil koloni sebanyak 1 ose (koloni yang dicurigai Vibrio cholera sp.) dan inokulasikan pada media KIA
e.
Inkubasi 37°C selama 24 jam
Hari Kelima : a.
Lakukan pengamatan terhadap media KIA
b.
Ambil koloni sebanyak 1 koloni dan lakukan penanaman pada media biokimia reaksi
c.
Inkubasi 37°C selama 24 jam
Hari Keenam : a.
Lakukan pengamatan terhadap media biokimia reaksi
b.
Ambil sampel yang dicurigai Vibrio cholera sp. dari media biokimia reaksi sebanyak 1 koloni dan tanam pada media IMVIC
c.
Inkubasi 37°C selama 24 jam
d.
Lakukan pengamatan terhadap media setelah 24 jam
6
B. Skema pemeriksaan Sampel
Pepton Alkali 1 % Inkubasi 37°C selama 6 jam (bila lebih pH akan asam)
Mac conkey
Soda agar
TCBS Inkubasi 37°C selama 24 jam Koloni : Halus Warna koloni : Kuning
Koloni : Halus Warna Koloni : Jernih
Laktosa (-)
Koloni : Halus Warna koloni : Abu-abu Warna media : kuning
Sukrosa (+)
Sukrosa (+)
Pewarnaan gram Aglutinasi Polivalen (untuk mengetahui genus)
Positif
Negatif
Skrinning test
Positif
KIA
TCBS
Inkubasi 37°C selama 24 jam Lereng : Alkalis Dasar : Asam Gas : H2S : -
Negatif
KIA Inkubasi 37°C selama 24 jam Lereng : Alkalis Dasar : Asam Gas : H2S : -
Biokimia reaksi Inkubasi 37°C selama 24 jam
Biokimia reaksi Inkubasi 37°C selama 24 jam
Tes Agulutinasi monovalet dari KIA
Tes Agulutinasi monovalet dari KIA Identifikasi IMVIC : + + - -
Identifikasi IMVIC : + + - -
7
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN A. MAKROSKOPIK 1. Hasil pengamatan media Alkali pepton 1%
Adanya Kekeruhan + endapan
Pembahasan : APW digunakan sebagai media enrichment bakteri Vibrio. Merupakan modifikasi dari air pepyon yang biasa digunakan untuk menguktur bakteri Enterobactericia dan yang dapat tumbuh di nedia ini adalah bakeri Vibrio
2. Hasil pengamatan media TCBS dan MCA
Bentuk koloni Warna koloni Tepi koloni Permukaan Konsistensi sampel kesimpulan
MCA Bulat Jernih Rata Cembung Semi mukoid KIA Meragikan sukrosa 8
Bentuk koloni Warna koloni Tepi koloni Permukaan Konsistensi sampel kesimpulan
TCBS Bulat Kuning Rata Cembung Semi mukoid KIA Meragikan sukrosa
Pembahasan : TCBS Media selektif untuk mengisolasi bakteri Virio Cholera dan Vibrio Parahaemolyticus. Vibrio adalah bakteri penyebab Kolera, direa, dan keracunan makanan. TBCS mengandung garam empedu dan sodium cholate untuk menghambat pertumbuhan bakteri gram positif.
Mac Concey Agar Mengandung laktosa sehingga membedakan bakteri pergi lktosa dengan bukan peragi laktosa dari gram negatif .
3. Hasil pengamatan KIA
KIA Lereng : Alkalis Dasar : Asam Gas : H2S : -
Pembahasan : Triple Sugar Iron Agar Mendetrminasi kemampuan bakteri yang mampu memecahkan gulagula menjadi asam/ asam +gas yang terdapat didalam basal medium dengan kemungkinan adanya produksi H 2S
9
4. Hasil pengamatan Biokimia Reaksi a. IMVIC 1
2
3
4
1
Indol
+
2
MR
+
3
VP
-
4
Citrat
-
Pembahasan : 1.
Indol sebagai Media Pergerakan
2.
MR sebagai determinasi bakteri memecah glukosa mejadi asam
3.
Vp mendeterminasi kemampuan bakteri menghasilkan asetoin yang bersifat netral
4.
SCA Mendeterminasi kemampuan bakteri yang menggunkan sitrat sebagai sumber karbon dengan ooduk akhir basa
10
b. Gula-gula
1
2
3
4
Glu. Lak. Mal. Suk. 1
Glukosa
+
2
Laktosa
+
3
Maltosa
+
4
Sukrosa
+
MIKROSKOPIK
1 . Hasil pengamatan pewarnaan gram
Bentuk
: Batang , cocobacil
Warna
: Merah
Susunan
: Menyebar, Menggerombol
Sifat
: Gram -
11
BAB IV PENUTUP
A. Kesimpulan Berdasarkan hasil praktikum identifikasi Vibrio cholera menggunakan sampel KIA ditemukan bakteri Vibrio cholera
B. Saran 1. Praktikkan disarankan menggunakan APD lengkap pada saat praktikum 2. Proses identifikasi disarankan mengikuti prosedur kerja standar 3. Jagalah kebersihan diri dan lingkungan kerja setelah praktikum selesa
12
DAFTAR PUSTAKA
Tyar. 2010. Vibrio Cholerae. Diakses pada tanggal 1 April 2018 pada http://analiskesehatanmakassar.blogspot.co.id/2010/06/vibrio.html Jawetz, Melnick, dan Adelberg’s. 2007. Mikrobiologi Kedokteran. Surabaya: Salemba Medika Entjang I. 2003. Mikrobiologi dan Parasitologi. Bandung : PT. Citra Aditya Bakti Jawetz dkk, 2007. Mikrobiologi Kedokteran edisi 23.Jakarta: Kedokteran EGC. Anomi, 2005. Gambar Vibrio Sp. Jawetz, Melnick, dan Adelberg’s. 2007. Mikr obiologi Kedokteran. Surabaya: Salemba Medika Manos,J, Wagner, GE. Mycobacteria in Microbiologi and Infectious Disease.1997
13
LAMPIRAN
1. Pembuatan Media TSB
Tanggal
: Rabu, 07 Maret 2018
Kelompok
:1
Nama
Anggota
: Albert Handy W., Audina Ulfah, dan Yolanda Herliati
Perhitungan Media: a. TSB @ 14 tabung @ 1 tabung
: 10 ml
@ aquadest
: 10 ml x 14 = 140 ml
@ media
: 30/100 x 140 ml = 4,2 gr
Peralatan yang digunakan
beaker
glass (1) dan tabung reaksi (14)
2. Pembuatan Media MCAdan Biokimia Reaksi
Tanggal
: Jum’at, 09 Maret 2018
Kelompok
:1
Nama
Anggota
: Albert Handy W., Audina Ulfah, dan Yolanda Herliati
Perhitungan Media: a. MCA @ 4 plate @ 4 plate x 2 = 8 plate @ 1 plate = 10 ml @ aquadest = 10 ml x 8 = 80 ml
100
ml
@ media = 50/1000 x 100 ml = 5 gr Peralatan yang digunakan
cawan
petri (8) dan erlen meyer 250 ml (1)
b. MR/VP @ 8 tabung x 2 = 16 tabung @ 1 tabung 4 ml x 2 = 8 ml ; 8 x 2 pertemuan = 16 ml @ aquadest = 2 x 16 ml = 32 ml
40
ml
@ media = 17/1000 x 40 ml = 0,68 gr Peralatan yang digunakan
beaker
(16)
14
glass 100 ml (1) dab tabung reaksi
c. Gula-gula 1) Glukosa @ 8 tabung @ 1 tabung = 5 ml @ indol = 5 ml x 8 = 40 ml @ media = 1/100 x 40 ml = 0,4 gr Peralatan yang digunakan
beaker
glass 100 ml (1) dan tabung reaksi
(8) 2) Laktosa @ 8 tabung @ 1 tabung = 5 ml @ indol = 5 ml x 8 = 40 ml @ media = 1/100 x 40 ml = 0,4 gr Peralatan yang digunakan
beaker
glass 100 ml (1) dan tabung reaksi
(8) 3) Maltosa @ 8 tabung @ 1 tabung = 5 ml @ indol = 5 ml x 8 = 40 ml @ media = 1/100 x 40 ml = 0,4 gr Peralatan yang digunakan
beaker
glass 100 ml (1) dan tabung reaksi
(8) 4) Sukrosa @ 8 tabung @ 1 tabung = 5 ml @ indol = 5 ml x 8 = 40 ml @ media = 1/100 x 40 ml = 0,4 gr Peralatan yang digunakan
beaker
glass 100 ml (1) dan tabung reaksi
(8) d. Indol gula-gula (pelarut gula-gula) @ 32 tabung @ aquadest = 5 ml x 4 = 20 ml x 4 = 80 ml x 2 = 160 ml @ pepton = 25,5/1000 x 160 ml = 4,08 gr @ NaCl = 5/1000 x 160 ml = 4,08 gr Peralatan yang digunakan
beaker
(32)
15
glass 250 ml (1) dan tabung reaksi
e. Urea @ 8 tabung @ 1 tabung = 3 ml @ indol = 3 ml x 8 = 24 ml
30
ml
@ media urea = 4/100 x 30 ml = 0,63 gr @ R/urea = 4/1000 x 8 = 0,032 gr f. Motil @ 8 tabung @ 1 tabung = 2 ml @ aquadest = 2 ml x 8 tabung = 16 ml @ pepton = 25,5/1000 x 8 = 0,204 gr
0,2
gr
@ NaCl = 5/1000 x 8 = 0,04 gr @ agar = 4/1000 x 8 = 0,032 gr Peralatan yang digunakan
beaker
glass 100 ml (1) dan tabung reaksi (8)
g. Citrat @ 8 tabung @ 1 tabung = 3 ml @ aquadest = 3 ml x 8 = 24 ml @ media = 22,5/1000 x 24 ml = 0,54 gr Peralatan yang digunakan
beaker
16
glass 100 ml (1) dab tabung reaksi (8)
