LAPORAN AKHIR PRAKTIKUM BIOFARMASETIKA
ABSORPSI PERKUTAN OBAT SECARA I N V I T R O
Disusun oleh: Kelompok 4
Nama
NPM
Pria Gutama
260110130041
Yunike Karunia P.
260110130073
Susan Susanti
260110130074
Ghiza F. Syifa
260110130075
Citra Ayu A.
260110130076
Rizki Pundari
260110130077
Nuni Nurul Husna
260110130078
Evariani Dwi W.
260110130079
Uly Aulia
260110130080
Mega Hijriawati.
260110130121
FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS PADJADJARAN JATINANGOR 2016
I.
TUJUAN Mempelajari absorpsi obat secara perkutan secara in vitro.
II.
PRINSIP
1. Difusi pasif menyangkut senyawa yang larut dalam komponen penyusun membran. Penembusan terjadi karena adanya perbedaan konsentrasi atau elektrokimia tanpa memerlukan energi, sehingga mencapai keseimbangan dikedua sisi membran. Waktu yang diperlukan untuk mencapai keseimbangan tersebut mengikuti hukum difusi Fick (Syukri, 2002). 2. Derajat ionisasi tergantung pada dua faktor, (persamaan Henderson Hasselbach) yaitu: a. Tetapan ionisasi dari suatu senyawa atau pK a b. pH cairan dimana terdapat molekul zat aktif Untuk asam : pH = pKa + log Untuk basa : pH = pKa + log
Karakteristik fisiko-kimia sebagian besar molekul (polaritas, ukuran molekul, dan sebagainya) merupakan hambatan penembusan transmembran oleh mekanisme pasif secara filtrasi dan difusi. Pengikutsertaan proses aktif dapat menjelaskan perjalanan obat yang kadang-kadang melintasi membran sel dengan sangat cepat (Underwood, 2002). 3. Absorpsi perkutan adalah masuknya obat atau zat aktif dari luar kulit ke dalam jaringan kulit dengan melewati membrane sebagai pembatas. Membran pembatas ini adalah stratum adalah stratum corneum yang corneum yang bersifat tidak permeable terutama zat larut air, dibandingkan terhadap zat yang larut dalam lemak. Ada dua tahap dalam absorpsi perkutan, yaitu pelepasan zat aktif dari pembawa untuk
diabsorbsi di atas permukaan stratum corneum dan difusi molekul zat aktif ke dalam lapisan bawah kulit (Troy, 2006).
III.
TEORI DASAR
Absorbsi perkutan dapat didefinisikan sebagai absorpsi obat ke dalam stratum corneum ( lapisan tanduk ) dan berlanjut obat menembus lapisan dibawahnya serta akhirnya obat masuk ke dalam sirkulasi darah. Kulit merupakan perintang yang paling efektif terhadap penetrasi perkutan obat atau senyawa eksternal. Absorpsi obat secara perkutan dipengaruhi oleh sifat fisikokimiawi obat dan pembawa serta kondisi kulit pada pemakain obat secara topikal. Obat berdifusi dalam pembawanya dan kontak dengan permukaan kulit ( stratum corneum dan setum ) serta obat selanjutnya menembus epidermis ( Syukri, 2002 ).
Fungsi Kulit - Secara umum kulit mempunyai fungsi. Fungsi kulit adalah sebagai
berikut..
Fungsi Proteksi. Kulit berfungsi dalam menjaga bagian dalam tubuh terhadap
gangguan fisik yang berada diluar tubuh. Seperti gesekan, tekanan, tarikan, dan zat-zat kimia terutama yang bersifat iritan. Gangguan yang bersifat panas seperti sengatan UV, radiasi, gangguan infeksi luar terutama kuman maupun jamur.
Fungsi Absorbsi. Kulit lebih mudah menyerap yang menguap dari pada
benda cair atau padat, begitu pun yang larut seperti lemak.
Fungsi Ekskresi. Kelenjar-kelenjar kulit akan mengeluarkan zat-zat yang
tidak berguna sebagai hasil dari metabolisme dalam tubuh yang berupa asam urat, NaCl, ammonia dan urea.
Fungsi Persepsi. Kulit yang mengandung ujung-ujung saraf sensorik di
dermis dan subkutis. Terhadap rangsangan panas yang diperankan oleh badan badan ruffini didermis dan subkutis
Fungsi Pengaturan suhu tubuh
Fungsi Pembentukan Pigmen. Sel pembentuk pigmen (melanosoit yang
terletak pada lapisan basal dan sel yang berasal dari rigi saraf.
Fungsi Keratinisasi. Pada lapisan epidermis dewasa terdapat tiga lapisan
yaitu lapisan melanosoit, keratinosit, dan sel langerhans
Bagian-Bagian Lapisan Kulit
1. Kulit Ari (Epidermis)
Kulit ari adalah bagian terluar yang sangat tipis Fungsi kulit ari (epidermis) adalah melindungi tubuh dari berbagai zat kimia yang terdapat diluar tubuh, melindungi tubuh dari sinar UV, melindungi tubuh dari bakteri . Di Permukaan kulit ari (epidermis) terdapat pori-pori yang merupakan tempat kelenjar minyak dan yang ditumbuhi rambut, kecuali pada kulit ari (epidermis) yang terdapat di telapak tangan dan kaki tidak tumbuhi rambut. Kulit ari (epidermis) pada telapak tangan dan kaki terdapat empat lapisan. Lapisan-lapisan pada telapak tangan dan kaki adalah sebagai berikut...
Stratum Korneum adalah lapisan kulit yang paling luar. Stratum korneum,
lapisan yang paling tebal di telapak kaki dan paling tipis pada dahi, pipi dan pelupuk mata
Stratum Granulosum adalah lapisan yang mengandung dua atau empat
lapisan sel yang disatukan oleh desmodom. Sel-sel ini mengandung granula keratohialin yang memiliki pengaruh dalam pembentukan keratin pada lapisan atas epidermis.
Stratum Lusidum adalah lapisan yang mengandung dua sampai tiga lapisan
sel yang tidak memiliki inti yang biasanya terdapat pada kulit yang tebal yaitu telapak tangan dan tumit kaki.
Stratum Germinalis adalah lapisan sel yang mengandung satu lapisan sel
piral yang secara aktif yang membelah diri secara mitosis untuk menghasilkan sel-sel yang berpindah ke dalam lapisan-lapisan atas epidermis dan akhirnya ke permukaan kulit.
2. Kulit Jangat (Dermis)
Kulit jangant atau dermis adalah lapisan kedua dari kulit. Batas dengan epidermis dilapisi dari membran basalis. Dermis atau lapisan jangat lebih tebal dari pada epidermis. Dermis mempunyai serabut yang elastik dengan memun gkinkan kulit dapat merenggang pada saat orang tersebut bertambah gemuk, dan kulit dapat bergelambir disaat orang menjadi kurus.
3. Jaringan Ikat Bawah Kulit (Hypodermis)
Jaringan ikat bawah kulit berada dibawah dermis. Jaringan ini tidak memiliki pembatas yang jelas dengan dermis, sebagai patokan dalam batasannya adalah mulainya terdapat sel lemak. Pada lapisan kulit ini banyak terdapat lemak. Fungsi lapisan lemak adalah untuk melindungi tubuh dari benturan, sebagai sumber energi cadangan dan menahan panas tubuh. Penetrasi Obat melalui kulit dapat terjadi dengan dua cara : 1. Rute transdermal : yaitu difusi obat menembus stratum corneum 2. Rute transfolikuler : yaitu difusi obat melewati pori kelenjar keringat dan sebum
Sebelum obat dapat memberikan efek, obat perlu dilepaskan dari basisnya setelah obat kontak dengan stratum corneum maka obat akan menembus epidermis dan masuk ke dalam sirkulasi sistemik secara difusi pasif. Laju absorbs melintasi kulit tidak segera tunak tetapi selalu teramati adanya waktu laten. Waktu laten mencerminkan perbedaan penembusan senyawa kebgaian dalam struktur tanduk dan pencapaian gradient difusi ( Syukri, 2002 ). Hambatan utama dari sistem penghantaran obat transdermal adalah sifat halangan intrinsic dari kulit. Halangan ini dapat secara kimiawi di modifikasi dengan tujuan menurunkan resistensi difusi menggunakan peningkat penetrasi. Strategi penggunaan peningkat penetrasi memungkinkan lebih banyak obat dapat diberikan melalui sistem penghantaran transdermal ( Agoes, 2008 ). Faktor yang mempengaruhi absorbs kuat yaitu penetrasi dan cara pemakaian , temperature, dari kulit, dan sifat fisikokimia obatnya, pengaruh dari sifat dasar salep , lama pemakaian, kondisi atau keadaan kulit ( Ansel, 1989 ). Absorpsi melalui kulit ( permukaan ) bila obat digunakan secara topikal maka obat akan keluar dari pembawanya dan berdifusi ke permukaan jaringan kulit. Ada 3 jalan masuk yang utama melalui daerah kantong rambut, melalui kelenjar keringat dan kantong rambut ( Lachman, 1989 ).
IV.
ALAT DAN BAHAN 1. Alat
Sel difusi tipe horizontal ( side by side) atau sel difusi tipe vertical
Spektrofotometer
2. Bahan
Asam salisilat
Membran Milipore yang diimpregnasi dengan isopropyl miristat (atau
kulit tikus)
V.
PROSEDUR
Awalnya, dibuat salep asam salisilat 4 % dengan menghaluskan serbuk asam salisilat yang sudah diteteskan beberapa tetes etanol menggunakan mortir dan stamper, lalu dicampur dengan vaselin dan ditimbang sebanyak 20 gram. Ditentukan panjang gelombang maksimum asam salisilat dan dibuat kurva baku asam salisilat. Selanjutnya, rambut pada tikus (yang telah dikorbankan) dipotong dengan electric clipper secara hati-hati agar stratum korneum tidak tergores. Kemudian, kulit tikus bagian dorsal (punggung) dipisahkan dengan hati-hati menggunakan pisau bedah. Jika ada lemak subkutan, dibuang dengan scalpel . Kulit bagian punggung dipotong berbentuk lingkaran sesuai dengan bentuk dan luas kontak sel difusi. Lalu, kulit tikus direndam pada larutan dapar fosfat untuk proses hidrasi membran selama 30 menit. Kulit yang telah direndam, diambil dan ditempatkan diantara kompartemen donor dan aseptor. Untuk mencegah kebocoran, dipasang ring karet atau silikon diantara kompartemen donor dan aseptor. Setelah itu, sel difusi dipasang dengan mengencangkan mur hingga terbentuk suatu system sel side by side (tipe vertikal). Larutan donor asam salisilat ditempatkan pada kompartemen donor. Kemudian, magnetic stirrer dimasukkan dan dibiarkan berputar di dalam alat Sel difusi tipe horizontal ( side by side). Lakukan pengukuran transfort obat ke kompartemen aseptor pada rentang waktu 5, 10, 15, 45 dan 60 menit. Lalu, dibuat profil hubungan antara kumulatif transfort terhadap waktu dan ditentukan flux berdasarkan nilai slope pada daerah linier berdasarkan persamaan Q(t) = flux x luas membrane x waktu. Dilakukan penentuan lag time, flux asam salisilat dari donor ke aseptor dan ditentukan luas area difusi.
VI.
DATA PENGAMATAN DAN PERHITUNGAN
6.1 Data Pengamatan 1. Pembuatan Kurva Baku Asam Salisilat dalam dapar fosfat pH 7,4
Konsentrasi
Absorbansi
(µg/mL)
1
10
0.2972
20
Absorbansi 2
Absorbansi
Rata-rata
3
Absorbansi
0.2967
0.2961
0.296667
0.4958
0.494
0.4944
0.494733
30
0.7824
0.7803
0.7818
0.7815
40
0.987
0.99
0.9915
0.9895
50
1.1958
1.1985
1.2016
1.198633
Kurva Baku Asam Salisilat dalam dapar fosfat pH 7,4
1.2
1.198633
1.1 1
y = 0.023x + 0.0626 R² = 0.9965 Absorbansi
0.9895
) 0.9 A ( i 0.8 s n a 0.7 b r o s 0.6 b A
0.7815
0.5
Linear (Absorbansi)
lamda max 296nm
0.494733
0.4 0.3
0.296667
0.2 0
20
40 Konsentrasi (ppm)
60
Gambar 1. Kurva Baku Asam Salisilat dalam dapar fosfat pH 7,4
2.
Penentuan transport obat ke kompartemen aseptor mengacu pada kurva baku dengan persamaan y = 0.023x + 0.0626
Waktu (menit)
Waktu
Absorbansi
Absorbansi
Absorbansi
Rata-rata
(menit)
1
2
3
Absorbansi
5
0.042
0.0412
0.0411
0.0414
10
0.0525
0.0529
0.053
0.0528
15
0.0663
0.0664
0.0665
0.0664
30
0.0708
0.0714
0.0709
0.0710
45
0.0872
0.0873
0.0874
0.0873
60
0.1004
0.1004
0.1018
0.1009
X (µg/mL)
x.faktor pengenceran
total obat dalam media
faktor total obat
% Kadar
koreksi
dalam
( µg/mL)
media+faktor koreksi ( µg) 5
10
-0.09207
-0.04263
-
-
0.460345078
7.825866319
-
-
0.213136146
3.623314485
-7.825866319
-
-0.00164409
0.368276062 -3.991590547
-
-
0.187839555
0.000838569
15
0.016529
0.082644628
1.404958678
1.217119123
0.057276194
0.000255697
30
0.036683
0.183413078
3.118022329
3.175298523
0.149425813
0.00066708
45
0.107438
0.537190083
9.132231405
9.281657218
0.436783869
0.001949928
60
0.166449
0.832245904
14.14818037
14.58496424
0.686351258
0.003064068
% Kadar Asam Salisilat 0.004 y = 0.0009x - 0.0027 R² = 0.9869
0.003 0.002
% terabsorpsi
0.001
Linear (% terabsorpsi)
0 0
2
4
6
8
-0.001 -0.002
Gambar 2. Kurva % Kadar Asam Salisilat
6.2 Perhitungan 1. Pembuatan Larutan Baku
Konsentrasi Larutan Baku =
,
x 1000 = 1000 ppm
mL
2. Pengenceran Larutan Baku
V1 . N1 = V2 . N2
V1 . N1 = V2 . N2
V1 . N1 = V2 . N2
V1 . 1000 = 50. 25
V1 . 1000 = 40 . 25
V1 . 1000 = 30 . 25
V2 = 1 mL
V2 = 1,5 mL
V1 = 1,25 mL
V1 . N1 = V2 . N2 V1 . 1000 = 20 . 50 V2 = 1 mL
V1 . N1 = V2 . N2 V1 . 50 = 10 . 25 V2 = 5 mL
Konsentrasi Asam Salisilat
Y = ax + b Dimana : Y = absorbansi X = konsentrasi a = 0,023 b = 0,0626 Faktor Pengenceran =
,
=5
Salep asam salisilat = 20 g x 4% = 800.000 µg = 11,9/20 x 800.000 = 476.000 µg
Untuk t = 5 menit
Y = ax + b 0.0414 = 0,023X + 0,0626 X=
. − , ,
X = -0.09207 ppm
Dikali faktor pengenceran: X = -0.09207 µg/mL x 5 = -0.460345078 µg/mL X = -0.460345078 µg/mL x 17 mL X = -7.825866319 µg
Jadi, % kadar =
−. .
Faktor Koreksi =
0.368276062 µg
100 % = 0.00164409 %
,
7.825866319 µg =
Untuk t = 10 menit
Y = ax + b 0.0528 = 0,023X + 0,0626 X=
. − , ,
X = -0.04263 ppm
Dikali faktor pengenceran: X = -0.04263 µg/mL x 5 = -0.213136146 µg/mL X = -0.213136146 µg/mL x 17 mL X = -3.623314485 µg
Jadi, -3.623314485 µg + -0.368276062 = -3.991590547 µg % kadar =
−. .
Faktor Koreksi =
,
100 % = 0.000838569 %
3.991590547 µg = 0.187839555 µg
Untuk t = 15 menit
Y = ax + b 0.0664 = 0,023X + 0,0626 X=
. − , ,
X = 0.016529 ppm
Dikali faktor pengenceran: X = 0.016529 µg/mL x 5 = 0.082644628 µg/mL X = 0.082644628 µg/mL x 17 mL X = 1.404958678 µg
Jadi, 1.404958678 µg + -0.187839555 = 1.217119123 µg % kadar =
Faktor Koreksi =
. .
,
100 % = 0.000255697 %
1.217119123 µg = 0.057276194 µg
Untuk t = 30 menit
Y = ax + b 0.0710 = 0,023X + 0,0626 X=
. − , ,
X = 0.036683 ppm
Dikali faktor pengenceran: X = 0.036683 µg/mL x 5 = 0.183413078 µg/mL X = 0.183413078 µg/mL x 17 mL X = 3.118022329 µg
Jadi, 3.118022329 µg + 0.057276194 = 3.175298523 µg % kadar =
.
Faktor Koreksi =
.
,
Untuk t = 45 menit
Y = ax + b 0.0873 = 0,023X + 0,0626
100 % = 0.00066708 %
3.175298523 µg = 0.149425813 µg
X=
. −, ,
X = 0.107438 ppm
Dikali faktor pengenceran: X = 0.107438 µg/mL x 5 = 0.537190083 µg/mL X = 0.537190083 µg/mL x 17 mL X = 9.132231405 µg Jadi, 9.132231405 µg + 0.149425813 µg = 9.281657218 µg % kadar =
. .
,
Faktor Koreksi =
100 % = 0.001949928 %
9.281657218 µg = 0.436783869 µg
Untuk t = 60 menit
Y = ax + b 0.1009 = 0,023X + 0,0626 X=
. −, ,
X = 0.166449 ppm
Dikali faktor pengenceran: X = 0.166449 µg/mL x 5 = 0.832245904 µg/mL X = 0.832245904 µg/mL x 17 mL X = 14.14818037 µg
Jadi, 14.14818037 µg + 0.436783869 µg = 14.58496424 µg % kadar =
. .
100 % = 0.003064068 %
Faktor Koreksi =
,
14.58496424 µg = 0.686351258 µg
Penentuan Lag Time
Dari persamaan : y = 0.0009x - 0.0027 Lag time: saat y = 0, maka: y = 0.0009x - 0.0027 0 = 0.0009x - 0.0027 0.0027 = 0.0009x X=
. .
X = 3 menit Jadi, lag time-nya adalah 3 menit.
VII. PEMBAHASAN
Pada praktikum kali ini diujikan absorpsi obat secara perkutan dengan tujuan untuk mengetahui pengaruh stratum korneum (lapisan tanduk) sebagai penghalang absorpsi secara perkutan. Untuk mencapai tempat kerja suatu obat di jaringan atau organ, obat tersebut harus melewati berbagai membran sel. Pada umumnya membran sel mempunyai struktur lipoprotein yang bertindak sebagai membran lipid yang semipermeabel. Kelarutan molekul obat dalam lipid inilah yang merupakan faktor utama absorbsi obat dalam tubuh. Adapun bahan aktif yang digunakan adalah asam salisilat. Pertama dibuat salep asam salisilat 4% dengan menghaluskan serbuk asam salisilat yang sudah diteteskan beberapa tetes etanol menggunakan mortir dan stamper, lalu dicampur
dengan vaselin dan ditimbang sebanyak 20 gram. Ditentukan panjang gelombang maksimum asam salisilat dan dibuat kurva baku asam salisilat. Didapatkan panjang gelombang asam salisilat sebesar 296 nm. Pada praktikum kali ini, dibuat variasi konsentrasi asam salisilat standar sebesar 10 ppm, 20 ppm, 30 ppm, 40 ppm dan 50 ppm. Setelah semua variasi konsentrasi selesai dibuat maka dilakukan pengukuran serapan/absorbansi dengan spektroskopi sinar UV. Pada saat pengukuran sampel dengan spektrofotometer ultraviolet, kuvet yang akan digunakan dikalibrasi terlebih dahulu. Pertama, kuvet diisi dengan aquadest, kemudian disesuaikan nilai absorbansinya hingga menunjukkan angka nol. Tujuan melakukan kalibrasi adalah untuk menghindari kesalahan perhitungan konsentrasi. Setelah itu, kuvet dibilas dengan larutan yang akan dihitung konsentrasinya sebanyak tiga kali, sehingga kuvet hanya berisi larutan uji tanpa pengotor. Adanya pengotor dapat menyamarkan perhitungan konsentrasi karena pengotor dapat memberikan absorbansi. Sebelum dimasukkan ke dalam spektrofotometer ultraviolet, kuvet dibersihkan menggunakan kertas tissue bersih. Jika tidak dibersihkan, mungkin pengotor yang berasal dari praktikan. Untuk melakukan pengukuran dengan metode spektrofotometri UV, sampel dimasukkan ke dalam kuvet. Alat spektrofotometri yang digunakan memiliki dua tempat kuvet (double beam). Kuvet pertama berfungsi untuk tempat blanko. Kuvet
kedua
berfungsi
untuk
tempat
sampel.
Sampel
kemudian
diukur
absorbansinya. Pengukuran absorbansi hendaknya dimulai dari sampel yang konsentrasinya kecil agar tidak mempengaruhi pengukuran konsentrasinya lainnya, maka dilakukan pengukuran dari sampel dengan konsentrasi 10 ppm. Setiap akan mengganti sampel dengan konsentrasi yang berbeda, kuvet hendaknya dibilas dengan larutan sampel agar tidak ada sisa sampel yang sebelumnya yang dapat mempengaruhi nilai dari absorbansi. Pengukuran absorbansi dari asam salisilat dengan spektrofotometer UV-Vis dilakukan pada panjang gelombang maksimum karena pada panjang gelombang maksimum, kepekaannya juga maksimum karena pada panjang gelombang
maksimum tersebut, perubahan absorbansi untuk setiap satuan konsentrasi adalah yang paling besar. Di sekitar panjang gelombang maksimum juga, bentuk kurva absorbansi datar dan pada kondisi tersebut hukum Lambert Beer terpenuhi. Selain itu, jika dilakukan pengukuran ulang maka kesalahan yang disebabkan oleh pemasangan ulang panjang gelombang akan kecil sekali ketika digunakan panjang gelombang maksimum. Panjang gelombang maksimum yang didapat dari percobaan dan digunakan untuk pengukuran asam salisilat adalah 296 nm. Setelah dilakukan pengukuran absorbansi dengan berbagai variasi konsentrasi standar asam salisilat, maka dari data yang ada dibuat kurva yang merupakan hubungan antara absorbansi (sumbu y) dengan konsentrasi (sumbu x). Pada konsentrasi 10 µg/mL, absorbansi sampel rata-rata adalah 0,296667 , pada konsentrasi 20 µg/mL, absorbansinya 0,494733 , pada konsentrasi 30 µg/mL, absorbansi sampel 0,7815 , pada konsentrasi 40 ppm, absorbansi 0,9895 dan pada konsentrasi 50 µg/mL, absorbansinya 1,198633. Dari data absorbansi dan konsentrasi asam salisilat, persamaan regresi linear yang didapat dari hasil pengukuran adalah y = 0,023X + 0,0626 dengan r = 0,9965 dimana y merupakan absorbansi dan x merupakan konsentrasi, nilai r yang didapat menunjukkan bahwa kurva yang didapat memiliki korelasi yang tinggi (hubungan sangat kuat dan positif). Persamaan regresi linear yang diperoleh ini selanjutnya akan digunakan untuk mencari konsentrasi asam salisilat sampel yang telah diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV. Selanjutnya disiapkan kulit tikus sebagai membran difusi. Rambut pada tikus (yang telah dikorbankan) dipotong dengan electric clipper secara hati-hati agar stratum korneum tidak tergores. Kemudian kulit tikus bagian dorsal (punggung) dipisahkan dengan hati-hati menggunakan pisau bedah. Lemak subkutan dibuang dengan scalpel . Kulit bagian punggung dipotong berbentuk lingkaran sesuai dengan bentuk dan luas kontak sel difusi. Lalu dilakukan uji difusi suatu obat dengan menggunakan metode difusi tipe vertikal yang merupakan percobaan pada uji difusi terhadap suatu zat tertentu dimana
dibuat suatu mekanisme kerja layaknya difusi didalam membrane sel tubuh manusia. Metode pengujian transport dengan sel difusi tipe vertikal mempunyai beberapa keuntungan yaitu membutuhkan volume kompartemen donor
yang lebih kecil,
membutuhkan luas membran transport lebih kecil, dan kemungkinan kebocoran membran kulit asli lebih kecil. Sedangkan kerugiannya adalah tidak adanya pengadukan dikompartemen donor dan pengadukan di kompartemen reseptor kadangkadang kurang homogen. Pada pelaksanaan uji difusi, kulit tikus direndam pada larutan dapar fosfat untuk proses hidrasi membran selama 30 menit. Kulit yang telah direndam, diambil dan ditempatkan diantara kompartemen donor dan aseptor. Dipasang ring karet atau silikon diantara kompartemen donor dan aseptor untuk mencegah kebocoran. Setelah itu, sel difusi dipasang dengan mengencangkan mur yang ada sehingga terbentuk suatu sistem sel side by side (tipe vertikal). Salep asam salisilat ditempatkan pada kompartemen donor dengan konsentrasi 4% sebanyak 11,9 gram. Kemudian magnetic stirer dijalankan pada kecepatan 120 rpm pada sisi donor dan aseptor . Pada alat diisi buffer fosfat sebanyak 17 ml lalu dilakukan pengukuran transport obat ke kompartemen aseptor pada rentang waktu 5, 10, 15, dan 45 menit di mana diambil larutan sebanyak 0,8 ml dari alat lalu dimasukkan kedalam vial dan ditambahkan larutan buffer fosfat kedalam vial sebanyak 3,2 ml untuk setiap rentang waktu tersebut. Pada tahapan ini larutan sampel yang ada pada masing-masing vial dilakukan pengukuran absorbansi menggunakan spektrofotometri UV pada panjang gelombang maksimum yakni 296 nm. Alasan memilih panjang gelombang maksimum adalah karena panjang gelombang maksimum memiliki kepekaan maksimal karena terjadi perubahan absorbansi yang paling besar dan pada panjang gelombang maksimum, bentuk
kurva
absorbansi
terhadap
konsentrasi
memenuhi
hukum Lambert-
Beer . Pengukuran diawali dari vial menit ke 5, lalu menit ke 10, lalu menit ke 15 dan terakhir menit ke 45. Langkah pertama yaitu mengnolkan blanko yaitu pelarut, dan setelah itu melakukan pengukuran absorbansi sampel dengan cara di ambil 3 mL larutan buffer fosfat kemudian disesuaikan nilai absorbansinya hingga menunjukkan
angka nol. Kemudian, dimasukkan laritan sampel menit ke 5 ke dalam kuvet dan diukur absorbansinya, sehingga didapatkan konsentrasi sampel. Setelah semua cuplikan sampel diukur absorbansinya, maka hasil absorbansi yang didapat diplotkan ke dalam persamaan regresi linier untuk dicari konsentrasi pada masing-masing cuplikan sampel. Nilai X yang didapatkan dari persamaan regresi linear sebagai konsentrasi sampel, dikalikan terlebih dahulu dengan faktor pengenceran. Besarnya faktor pengenceran yaitu 5x karena setiap 0,8 mL larutan sampel yang diambil dari alat ditambahkan 3,2 mL larutan buffer fosfat, hal ini bertujuan sampel yang dimasukkan ke dalam kuvet saat melakukan analisis spektrofotometri tidak boleh terlalu sedikit. Lalu persen kadar dapat ditentukan dengan rumus
X . faktor penenceran kadar asam salisilat awal
100 %.
Setelah itu harus ditentukan juga faktor koreksi pada setiap menit pengambilan sampel yang akan ditambahkan pada saat menghitung persen kadar di menit selanjutnya. Faktor koreksi ini perlu dicari karena larutan yang berada di alat selalu dilakukan pengantian larutan, dalm praktikum ini yaitu selalu dilakukan penggantian larutan buffer fosfat
sebesar 0,8 mL dalam alat pada rentang waktu yang telah
ditentukan. Dari hasil pengujian absorbansi asam salisilat, diperoleh persen kadar asam salisilat yang terabsorbsi yaitu pada t = 5 menit -0.00164409%, t = 10 menit 0.000838569% , t = 15 menit
0.000255697%,
t = 30 menit
-
0.00066708%, t =
45 menit 0.001949928% dan t = 60 menit 0.003064068%. Dari data pengamatan terlihat bahwa data yang didapatkan tersebut sesuai dengan literature bahwa nilai absorbansinya naik seiring dengan pertambahan waktu. Hal ini didasari karena semakin lama waktunya, maka absorbansinya semakin tinggi, karena seharusnya semakin banyak obat yang terabsorpsi. Cara pemberian juga dapat mempengaruhi kecepatan absorbsi obat yang berpengaruh juga terhadap onset dan durasi. Pada literature dijelaskan bahwa onset paling cepat adalah intraperitonial, intramuscular, subkutan, peroral. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian obat melalui
subkutan memiliki keuntungan yakni absorbsi yang terjadi relatif cepat, sedangkan kerugian pada subkutan adalah hanya digunakkan untuk obat yang tidak mengiritasi jaringan.
VIII.
KESIMPULAN
Absorpsi perkutan adalah masuknya obat atau zat aktif dari luar kulit ke dalam jaringan kulit dengan melewati membrane sebagai pembatas. Menurut literatur, nilai absorbansinya naik seiring dengan pertambahan waktu. Hal ini didasari karena semakin lama waktunya, maka absorbansinya semakin tinggi. Dari hasil pengujian absorbansi asam salisilat, diperoleh persen kadar asam salisilat yang terabsorbsi yaitu pada t = 5 menit -0.00164409%, t = 10 menit -0.000838569% , t = 15 menit 0.000255697%, t = 30 menit 0.00066708%, t = 45 menit 0.001949928% dan t = 60 menit
0.003064068%.
Dari data pengamatan dan hasil terlihat bahwa data
yang didapatkan tersebut sesuai dengan literatur.
DAFTAR PUSTAKA
Agoes, Goeswin. (2008). Pengembangan Sediaan Farmasi. Bandung: Penerbit ITB. Ansel, Howard C. (1989). Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi. Jakarta: Universitas Indonesia Press. Lachman, L., Lieberman, H.A., and Kanig, J.L. (1994). Teori dan Praktik Industri Farmasi, 643-705, diterjemahkan oleh Suyatmi, S. Jakarta : UI Press. Syukri, Y. (2002). Biofarmasetik a. Yogyakarta : UII Press. Troy. (2006 ). Remington’s The Science and Practice of Pharmacy. Baltimore Maryland: Lippincott Williams & Wilkins. Underwood A.L. & Day, R.A. (2002). Analisis Kimia Kuantitatif , diterjemahkan oleh Iis Sopyan. Jakarta: Erlangga..
