Pr ac t i c as deI nmunol ogí a
E. PMedi c i naHumana PRACTICA N° 7 INMUNOAGLUTINACION
DETERMINACION DEL FACTOR REUMATOIDEO (FR) 1.
OBJ ETIVO
•
ocer ocer el fundamen fundamento to de la técnic técnica a de Inmuno Inmunoag aglut lutina inacio cion n diagnostico medico.
Con y sus aplicac aplicacio iones nes en el
Dete
•
rminar el Factor Reumatoideo en suero, utilizando la técnica de Inmunoaglutinación.
1
INTRODUCCION La artritis reumatoidea es un síndrome crónico de etiología desconocida, caracterizado por una inflamación inespecífica y generalmente simétrica de las articulaciones, que a eces eoluciona !acia la destrucción de las estructuras articulares y periarticulares. "n la articulación enferma se o#sera un engrosamiento engrosamiento de la mem#rana mem#rana sinoial con formación de pliegu pliegues es y proli prolifer feraci ación ón de linfoc linfocito itos. s. "stas "stas célula células, s, que que forma forman n folícu folículos los linfoi linfoides des,, son son las responsa#les de la síntesis de factores reumatoideos $FR% y otras inmunoglo#ulinas. Los FR son generalmente de tipo Ig& anti'Ig(, es decir que reaccionan con las fracciones Fc de las Ig(. )am#ién se !an encontrado FR de tipo Ig(, aunque en menor proporción de casos. Los FR de tipo Ig& est*n presentes en el +'-/ de los adultos con artritis reumatoidea reumatoidea aunque no es específico de la enfermedad puesto que tam#ién se !an encontrado en indiiduos sanos $en un 0 a / de los casos%. 1or tal moti motio, o, cuand cuando o se sospe sospec! c!a a la e2iste e2istenci ncia a de una una enfer enferme meda dad d disti distinta nta de la artri artritis tis reumatoidea, frente a una reacción de aglutinación positia es aconse3a#le realizar la precipitación de las glo#ulinas con sulfato de amonio. De tal forma, se asegura la precipitación completa de los FR y se mantiene en solución cualquier aglutinina responsa#le de una falsa reacción positia, como así tam#ién alg4n posi#le in!i#idor.
2.
FU NDAMENTO DEL METODO La prue#a r*pida de late2 esta #asada en una reacción inmunológica entre el Factor Reumatoideo $FR% presente presente en el suero suero pro#lem pro#lema a y la correspond correspondient iente e Ig( !umana !umana ligada ligada a partícul partículas as de poliesti poliestireno reno.. Cuando Cuando se mezcla mezcla el suero suero pro#lem pro#lema a conteni conteniendo endo el Factor Factor reumatoi reumatoideo deo con el reactio RF late2, se puede isualizar una aglutinación.
3.
REA CTIVOS Y MATERIALES
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0.5. 6C)I789
•
R"
L6) ": RF ; 9uspensión de partículas de late2 sensi#ilizadas con Ig( !umano en #uffer salino de glicina. <=F
•
F"R 96LI>8; 9olución salina fisiológica $>aCl8, -/%. Listo para usar. •
•
C8 >)R8L 189I)I78; 9uero ?umano prediluido y esta#ilizado conteniendo RF que aglutina con el reactio late2. C8 >)R8L >"(6)I78; 9uero ?umano prediluido y esta#ilizado, no reactio en el test de aglutinación. 9olu
•
cion fisiológica.
5.5.
&6) "RI6L"9
&ue
•
stra de 9angre )u#
•
os 7acutainer 9eco $)apa ro3a% 6lg
•
odón "tan
•
ol al @/ Liga
•
dura Aeri
•
ngas de 0 cc Des
•
cartador de punzocortantes )im
•
er Fue
•
nte de luz
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•
opipetas 6utom*ticas de Bul, Bul a 5ul. )ips
•
para micropipetas de Bul, Bul a 5ul 5
•
placa de fondo oscuro con 0 o *reas de reacción. 7arill
•
as mezcladoras
1
METODOLOGIA
0.B.
Rec olección de la &uestra •
"2t raer la muestra de sangre por 7enopunción del ante#razo, tom*ndose todas las medidas de
•
colectar 0ml de 9angre con la ayuda de una 3eringa. •
1
De positar la muestra dentro del tu#o seco $tapa ro3a%, centrifugar y separar la sangre del suero.
DESARROLLO
0.0.
&ét odo Cualitatio en 1laca
5.
De3a r que los reactios y muestras alcancen la temperatura am#iente.
B.
1on er Bul del suero en las *reas marcadas en la l*mina.
0.
Colo car Bul del suero control positio $% y negatio $'% en las *reas marcadas de la lamina.
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E.
&ez clar el reactio de late2 FR !asta o#tener una suspensión !omogénea y aadir Bul de reactio de late2 a cada uno de los sueros controles y muestras.
.
&ez clar con aplicadores diferentes por cada *rea.
.
&o er en un *ngulo de EG la laminilla por 0 minutos.
@.
8#s erar inmediatamente la aglutinación utilizando una fuente de luz directa, comparar las reacciones del suero y de los controles.
Interpretación;
➢
La aglutinación de las partículas de late2 indica una reacción positia $%. 9i es asi, realizar la prue#a 9emicuantitatia.
➢
La >o aglutinación o una ligera aparición de granulosidad que no e2ceda a la o#serada en el control negatio $'%, indica un resultado $'%.
5.5.
&ét odo 9emicuantitatio o )itulación
Los
•
sueros positios pueden titularse efectuando diluciones seriadas, en tu#os de ensayo. 5.
Colo car 5ul de solución Fisiologica en cada uno de los tu#os.
B.
6gre gar 5ul de suero al tu#o >G 5 y !omogenizar cuidadosamente. )ransferir 5ul de esta dilución al tu#o >G B y !omogenizar, continuando de esta forma las diluciones !asta el ultimo tu#o. Las diluciones asi o#tenidas equialen a ; 5; B, 5;E, 5;+, 5;5, 5;0B, 5;E.
0.
)ran sferir Bul de cada tu#o y proceder de acuerdo a la prue#a Cualitatia.
Interpretación de los Resultados
>eg
➢
atio; 9uspensión !omogénea $sin aglutinación%
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➢
tio; 6glutinación que aparece dentro de los B minutos ➢
)itul o; "s la inersa de la m*2ima dilución a la que se produce aglutinación is#le macroscópicamente. La concentración del Factor Reumatoideo en la muestra puede ser calculada con la siguiente formula;
FR $I=Hml% )itulo 2 9ensi#ilidad de la reacción $+ I=Hml%
Not! L "#$"%&%'% #' #*t%+o #" # , IU-'. 1
CUESTIONARIO
5.
Defi ne que es Factor Reumatoideo. "s una prue#a serológica inmunológica. "sta prue#a a menudo $@ al +/% es positia en personas con artritis reumatoide, 6R. =n resultado de m*s de E =I 1=DI"R6 considerarse anormal, los resultados pueden llegar !asta las B =I o m*s, o pueden e2presarse con un n4mero menor indicando la dilución de la sangre a la cual se midió el FR.
B.
J1or qué no es aconse3a#le tra#a3ar con sueros con alto contenido de lípidos, o que el plasma tenga fi#rinaK De#ido a que es posi#le que se alteren los resultados por la presencia de una asta ariedad de compuestos que afecten la sensi#ilidad de la reacción
0.
J1or qué la artritis reumatoide se considera una enfermedad autoinmuneK La artritis reumatoide $6R% es una enfermedad inflamatoria crónica, de naturaleza autoinmune, caracterizada por la afectación simétrica de m4ltiples articulaciones y la presentación de diersos síntomas generales inespecíficos y manifestaciones e2traarticulares. Li#rada a su eolución natural y en ausencia de tratamiento adecuado, la enfermedad puede causar, en fases aanzadas, importantes limitaciones físicas, así como un marcado deterioro de la calidad de ida. La 6R se manifiesta típicamente por dolor, tumefacción y rigidez o dificultad de moimiento en diersas articulaciones pequeas y grandes. Los síntomas generales, que a eces preceden a las manifestaciones articulares y tienden a persistir durante toda la eolución del trastorno, incluyen #*sicamente cansancio, sensación de malestar, fie#re ligera, inapetencia y pérdida de peso corporal. Las posi#les manifestaciones e2traarticulares, que suelen presentarse cuando la enfermedad ya est* esta#lecida, afectan principalmente a la piel, los asos sanguíneos, el corazón, los pulmones, los o3os y la sangre. La 6R es muc!o m*s frecuente en el se2o femenino que en el masculino y suele aparecer en personas adultas mayores, pero puede iniciarse en cualquier etapa de la ida y afectar a cualquier persona, con independencia de la raza, el se2o y la ocupación.
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Las enfermedades autoinmunes constituyen un numeroso grupo de trastornos en los que, por razones a4n no #ien esclarecidas, el sistema inmunitario, encargado de la defensa del organismo, reacciona contra te3idos del propio cuerpo a los que erróneamente identifica como e2traos, como si representaran una amenaza. 6unque el trastorno es de causa desconocida, la autoinmunidad 3uega un papel primordial en su origen, en su cronicidad y en la progresión de la enfermedad. La enfermedad se asocia con la presencia de auto anticuerpos $particularmente el factor reumatoide y los anticuerpos antipéptidos cíclicos citrulinados%.
E.
Calc ular la )itulación de una muestra positia para FR, teniendo positiidad en la dilución 5;+
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