qwertyuiopasdfghjklzxcvbnmqwerty uiopasdfghjklzxcvbnmqwertyuiopasd fghjklzxcvbnmqwertyuiopasdfghjklzx cvbnmqwertyuiopasdfghjklzxcvbnmq Resultados de prácticas de wertyuiopasdfghjklzxcvb wertyuiopas dfghjklzxcvbnmqwertyui nmqwertyui Química Analítica IV opasdfghjklzxcvbnmqwert opasdfghjk lzxcvbnmqwertyuiopasdfg yuiopasdfg hjklzxcvbnmqwertyuiopasdfghjklzxc vbnmqwertyuiopasdfghjklzxcvbnmq wertyuiopasdfghjklzxcvb wertyuiopas dfghjklzxcvbnmqwertyui nmqwertyui opasdfghjklzxcvbnmqwert opasdfghjk lzxcvbnmqwertyuiopasdfg yuiopasdfg hjklzxcvbnmqwertyuiopasdfghjklzxc vbnmqwertyuiopasdfghjklzxcvbnmq wertyuiopasdfghjklzxcvb wertyuiopas dfghjklzxcvbnmqwertyui nmqwertyui opasdfghjklzxcvbnmqwert opasdfghjk lzxcvbnmqwertyuiopasdfg yuiopasdfg hjklzxcvbnmrtyuiopasdfghjklzxcvbn mqwertyuiopasdfghjklzxcvbnmqwert yuiopasdfghjklzxcvbnmqwertyuiopas Práctica 1. Separación de cationes por cromatografía de papel Práctica 2. Cromatografía en capa fina de pigmentos de algas marinas 21/03/2012 Mario J. Rosado Rodríguez
Resultados de prácticas de Química Analítica IV Autor del informe: Mario J. Rosado Rodríguez Título de la práctica: 1. Separación de cationes por cromatografía el papel Fecha de realización de la práctica: 21 de marzo de 2012 Fecha de entrega de la práctica: 28 de marzo de 2012 Asignatura: Química Analítica IV Profesores responsables: Dña. Laura Cubillana, D. Gerardo Fernández 1. Introducción
E
n nuestra primera práctica de Química Analítica IV se ha realizado una cromatografía sobre papel de filtro que nos van a servir parar separar iones diferentes, en la que van a utilizar para la separación de tres iones: cobre, hierro y níquel. La cromatografía se trata de un método de separación de uno o varios componente de una solución, que se distrubuye entre dos fases no miscibles, una de las cuales se desplaza (fase móvil) y otra que queda retenida y adsorbe los componentes (fase estacionaria). Los componentes se desplazan pues a diferente rapidez siguiendo el movimiento de la fase móvil. En el experimento, la fase móvil es la mezcla de disolventes de agua y etanol. La fase sólida, es el papel de filtro que posee poro pequeño. El líquido se va a desplazar por el papel a causa de la acción capilar que depende de la atracción importante entre el líquido y la celulosa del papel húmedo en el mismo grado. En nuestra práctica vamos a considerar aplicaciones de carácter cualitativo (de identificación de iones) y de carácter semicuantitativo (de estimación visual de la intensidad del color, así como el cálculo de los Rf). Como consecuencia de que el cobre (II), el hierro (III) y el níquel (II) se desplazan con distinta rapidez a lo largo del papel, es patente que no son atraídos por el papel Vamos a utilizar tres tipos de eluyentes diferentes, van a utilizarse dos diferentes: Eluyente número 1. Se va a preparar a través de una mezcla etanol:agua en una eproporción 7:3 Eluyente número 2. Se utilizará un eluyente igual al número 1, también en la misma proporción etanol:agua, pero a la que añadiremos dimetilglioxima en 10%, que correspondería a un 10%, por tanto, le añadiríamos 0,15 g de dimetilglioxima y a la que añadieriamos unas gotas de NH 3. Se realizarán un total de 3 experiencias diferentes de cromatografía de papel, que va a presentar diferencias entre ellos. La descripción pormenorizada de cada una de ellos sería: Experiencia 1. La cromatografía se realizará en tres puntos diferentes del papel, originando tres puntos con cada una de las disoluciones de Cu 2+, Ni 2+ y de Fe3+. El eluyente provocará un desplazamiento de cada uno de los puntos por separado. Se usarán los dos eluyentes para su separación observando los efectos de cada uno de ellos. Experiencia 2. Se colocarán las tres disoluciones en un mismo punto, que por la utilización de cada uno de los eluyentes, estudiaremos los efectos producidos en la separación de los iones, estudiando sus Rf, el desplazamiento de los iones… Experiencia 3. En la última, se nos proporcionará una muestra problema en la que a través de una cromatografía de papel debemos de identificar los iones que constituyen a la misma debida a su separación. Sin embargo, el problema en este caso sería qué eluyente tendríamos que escoger observando el efecto de los eluyentes utilizados en las experiencias anteriores.
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Resultados de prácticas de Química Analítica IV 2. Procedimiento experimental 1. Preparamos las disoluciones que van a utilizarse para cr omatografía que son: a. Disolución 0,05 M de cloruro de cobre (II), CuCl 2. b. Disolución 0,05 M de nitrato de hierro (III), Fe(NO 3)3. c. Disolución 0,05 M de nitrato de níquel (II), NiNO 3. 2. Se preparan seis círculos de papel de filtro de mayor radio que la placa de Petri en la que se recorta una pestaña en forma de triángulo. Se aplican tres gotas pequeñas de la cada uno de las disoluciones, bien en tres puntos diferentes (experiencia 1), o sobre el mismo punto (experiencia 2). 3. Se preparan los eluyentes utilizados con anterioridad. 4. Se incorporan las disoluciones tal y como se indican y se introduce en una placa de Petri, en la que la pestaña doblada estará en contacto con el eluyente y el resto del papel sobre la tapa de la placa de Petri, de tal forma que el eluyente pueda ascender por capilaridad por el papel. 5. Se realizan las experiencias, tanto con el eluyente 1 como con el eluyente 2. Sin embargo para el eluyente 1, se va a requerir de un revelador de dimetilglioxima para observar las manchas por cromatografía. Es necesario que el eluyentes se desplace uniformemente por el papel; en consecuencia el espacio gaseoso debe de estar cerrado y saturado con el vapor del líquido que evitará pérdidas desiguales por evaporación. No se tocará el conjunto hasta que el frente de disolvente se ha desplazado al bordde del recipiente. 6. Una vez que el frente de disolvente se encuentra cercana al extremo del papel se retira el disolvente 7. Con un lápiz se marca el límite del frente del disolvente. Y para el primer eluyente se utiliza la un revelador de dimetilglioxima que nos revela a los componentes, en tanto, que usando el segundo eluyente, ya se revelan de manera directa.
Cálculos realizados para las disoluciones Tabla de datos para preparar las disoluciones Disolución Peso molecular (g/mol) Fe(NO3)3 · 9H2O 404,0
98
CuCl2 · 6H2O
170,48
100
NiNO3 · 6H2O
182,81
99
Disolución 0,05 M de cloruro de cobre (II), CuCl 2.
Molaridad =
→
n = M· V → n = 0,05 moles/L · 0,025 L = 1,25 · 10 -3 moles
1,25 · 10-3 moles de CuCl 2 · 6H2O ·
Pureza (%)
= 0,5153 g
Disolución 0,05 M de nitrato de hierro (III), Fe(NO 3)3.
Molaridad =
→
n = M· V → n = 0,05 moles/L · 0,025 L = 1,25 · 10 -3 moles
3
Resultados de prácticas de Química Analítica IV 1,25 · 10-3 moles de Fe(NO3)3 · 9H2O ·
·
= 0,5153 g
Disolución 0,05 M de nitrato de níquel (II), NiNO 3.
Molaridad =
→
n = M· V → n = 0,05 moles/L · 0,025 L = 1,25 · 10 -3 moles
1,25 · 10-3 moles de NiNO3 · 6H2O ·
·
= 0,2131 g
3. Resultados EXPERIENCIA 1
Cromatografía en papel 1.1
Cromatografía en papel 1.2
CROMATOGRAFÍA EN PAPEL 1.1. Para este primer caso se observa un desplazamiento de todos y cada uno de los iones: Ni, Cu, y Fe. Se observan tres colores: Cu (II). Se observa de un color grisáceo-azulado, aunque realmente debería de haber aparecido de color azul intenso. Es el compuesto que tiene menor Rf. Fe (III). El desplazamiento observado es bastante similar al Cu(II), de color arenoso o marrón. Presenta un Rf mayor de los tres. Ni (II). De color fucsia-rosáceo, de desplazamiento similar a los anteriores. Tiene un Rf intermedio a los dos anteriores.
CROMATOGRAFÍA EN PAPEL 1.2. No va a necesitar d revelador como el anterior, en este caso no existe desplazamiento del Fe (III). Cu (II). La forma de la mancha es de elíptica de color marrón umbroso. Es la mancha de mayor Rf, y que por tanto mayor afinidad tiene por el disolvente Fe (III). La mancha muestra un contorno redondeado en la que no tiene Rf, puesto que no se provoca desplazamiento por el mismo, con lo que el Fe (III) no tiene ninguna afinidad por el disolvente. Ni (II). Como ocurrían en el eluyente 1, de color rosáceo con un Rf intermedio con mancha redondeada.
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Resultados de prácticas de Química Analítica IV EXPERIENCIA 2
Cromatografía en papel 2.1
Cromatografía en papel 2.2
CROMATOGRAFÍA EN PAPEL 2.1. En este caso obtuvimos una separación más deficiente de los iones, pues los Rf obtenidos en cada uno de los casos eran bastantes similares. Obtuvimos las diferentes manchas obtenidas en la primera experiencia, pero todas ellas alineadas en la que según mayor o menor Rf tenemos: Ni (II) > Cu (II) > Fe (II).
CROMATOGRAFÍA EN PAPEL 2.2. Ahora se produce una mayor separación de los componentes, que por orden de afinidad por el disolvente, es decir, mayor Rf, sería: Fe (III) > Cu (II) > Ni (II). Como podemos observar se produce una modificación en el orden de separación de los componentes.
EXPERIENCIA 3 La muestra que se nos proporcionó fue la muestra nº 9, en la cual debíamos identificar los componentes. Se debía de elegir uno de los dos eluyentes propuestos en las experiencias anteriores. En un inicio, consideramos que sería más más adecuado utilizar el eluyente 2, puesto que no necesitaba de revelador y se realizaba con más rapidez. Sine embargo, no se daba una separación adecuada de los iones cuando se realizó, por lo que se optó por utilizar el eluyente 1. El eluyente 2 a pesar de que se trataba de un eluyente que requería de mayor tiempo sí que nos permitía realizar una separación de iones más adecuada. Con lo cual la diferencia entre los Rf de los componentes no eran tan cercanos como los que encontrábamos con el primer eluyente. Por este motivo, únicamente se han incluido los datos pertenecientes a la elección d el eluyente 1. En la cromatografía de papel ha observado que tenemos un par de puntos diferentes en la cromatografía en papel, por lo cual, podemos decir que existen dos iones
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Resultados de prácticas de Química Analítica IV diferentes (Figura 5). Estos iones eran Fe (III) de color marrón-amarillento y Cu (II) de color azul-grisáceo. Se calcularon sus Rf, dando como resultado los datos mostrados en hoja de resultados.
HOJA DE RESULTADOS A continuación van a incluirse los datos de los Rf de cada uno de los iones en la cromatografía de papel. Se trabajó a temperatura y presión ambiento, obteniéndose las manchas de los esquemas anteriores, que indican una identificación satisfactoria. Como parámetro para permitir caracterizar la posición de los iones vamos a utilizar la relación de frentes (Rf), a través de la fórmula:
Rf =
Frente de avance del soluto individual ------------------------------------------Frente de avance de la fase móvil
Los cálculos de cada uno de ellos se encuentran identificados en las siguientes tablas:
Tabla 1 Elemento Eluyente 1
Cu (II) Distancia 1,0
Rf
Ni (II) Distancia
Rf
1,0/2 =
1,0
1,0/1,5
0,5 Eluyente 2
1,3
1,3/2,1
Fe (III) Distancia = 1,4
0,67 = 1,2
0,62
1,2/2 =
Rf 1,4/1,9
0
0,74 0
Fe (III) Distancia
Rf
=
0,6
Tabla 2 Elemento Eluyente 1
Cu (II) Distancia
Rf
1,4
1,4/2,5
Ni (II) Distancia = 1,8
0,56 Eluyente 2
1,2
1,2/2,4
Rf 1,8/2,5
= 0,8
0,72 = 0,1
0,5
0,1/2,9
0,8/ 2,5 =
0,32 = ,18
0,03
1,8/2,4
=
0,75
Tabla 3 Elemento Eluyente 1
Cu (II) Distancia
Rf
1,4
1,4/2,1
0,67
Ni (II) Distancia = -
Rf
Fe (III) Distancia
Rf
-
0,5
0,5/2,1
=
0,24
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Resultados de prácticas de Química Analítica IV
4. Discusión de los resultados Explicación de los colores aparecidos en cromatografía Las manchas que aparecen en la cromatografía son de tres colores dependiendo del tipo de ion que nos encontremos: Cu (II). Los iones de Cu (II) con etanol reaccionan con amoníaco (NH 3), y forman complejos de tetraamincobre [Cu(NH 3)4]2+, que producen un color azul oscuro. Por este motivo, el papel de la cromatografía presentará un color azul cuando se expone a los gases con amoníaco. Consecuentemente puede identificarse a estos iones en la cromatografía según la reacción: Cu2+ (aq) + 4NH 3 (g) → [Cu(NH3)4]2+ Ni (II). Los iones de Ni (II) reacción con un reactivo orgánico, la dimetilglioxima (presente en el revelador) junto con los vapores de amoníaco producen un complejo color rojo-rosa fucsia característico. Este complejo coloreado suele utilizarse para identificar los iones. El complejo formado es la butanodioxima, que se trata de una estructura quelato que presenta la siguiente reacción:
Fe (III). Para este último caso lo que ocurre es que tenemos la formación de un complejo de color herrumbroso de color marrón claro. Este se produce como consecuencia la formación de un hidróxido de hierro, según la reacción: Fe3+ (aq) + 3OH - (aq) → Fe(OH)3
Como podemos observar unos de los factores que va a controlar la separación cromatográfica de los iones va a ser el eluyente utilizado. Como se puede observar si utilizamos el eluyente 1, obtenemos mejores resultados en la separación pues los Rf obtenidos son más dispares. Por otro lado, la mayor o menor afinidad de los iones por el disolvente y por tanto, va a repercutir sobre el valor de Rf. Tenemos dos factores que van a intervenir en la mayor o menor polaridad de los iones por el disolvente que es de carácter polar: Carga del ión. Tenemos tres iones, en las que los iones de Cu y Ni tiene carga 2+, mientras que el ion de Fe tiene carga 3+. Radio de los iones. El radio de los iones van a influir también, recordemos que por su posición en la tabla periódica el Fe será el compuesto que tenga menor radio, mientras que níquel y cobre tienen radios de mayor tamaño. Esto nos va hacer llegar hasta que la separación de los iones va a depender de la relación carga/radio, o lo que es lo mismo la densidad de carga. Los compuesto iónicos son solubles en disolventes polares, como ocurre con la fase móvil (etanol/agua),El Fe (III) al tener una densidad de carga elevada y un pequeño radio hacen que presente una elevada densidad de carga. Este tipo de iones se trata de iones muy poco polarizables y muy polarizables por lo cual ello explica porqué se obtienen Rf superiores en el caso del eluyente 2, originando la formanción del complejo. Mientras que para el eluyente 1, debido a que no aparece la dimentilglioxima nos e produce la formación del mismo y por tanto se desplaza más. En cambio con los otros iones de Cu (II) y Ni (II), al presentar un mayor radio y menor carga hace que tengan una densidad de carga más pequeña, y que va a repercutir de manera
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Resultados de prácticas de Química Analítica IV directa en la cromatografía. Estos al contrario de lo que ocurre con el Fe (III) son iones miuy polarizables y poco polarizantes por lo cual se explica la posición que ocupa en la cromatografía de papel.
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Resultados de prácticas de Química Analítica IV
Autor del informe: Mario J. Rosado Rodríguez Título de la práctica: 2. Cromatografía en capa fina de pigmentos de algas marinas Fecha de realización de la práctica: 22 de marzo de 2012 Fecha de entrega de la práctica: 28 de marzo de 2012 Asignatura: Química Analítica IV Profesores responsables: Dña. Laura Cubillana, Dña. Estrella Espada 1. Introducción
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a cromatografía puede utilizarse para multitud de diferentes aplicaciones entre las que se puede aplicar a la separación de pigmentos de algas marinas. A través de esta práctica aplicaremos la técnica de cromatografía de capa fina (CCF), con sus aplicaciones en la que estudiaremos los pigmentos de dichas presentes en dichas algas. Para ello necesitaremos de un método a partir del cual vamos a extraer los diferentes pigmentos en las algas, para lo cual realizaremos una extracción sólido-líquida. Las dos algas que vamos a utilizar para la extracción son de dos ti pos: Algas verdes. En ellas predominan las clorofilas a y b así como lutína y α- y βcarotenos. Algas pardas. Tiene clorofilas a y c, además de β- carotenos y xantofilas. Vamos a utilizar diferentes tipos de eluyentes, hasta un total de tres, puesto que dependiendo del eluyente utilizado se va a producir una separación de diferentes pigmentos de las algas. Se van a utilizar tres tipos de eluyentes de diferente proporción: Eluyente 1. 35% hexano – 65% acetona Eluyente 2. 50% hexano – 50% acetona Eluyente 3. 65% hexano – 35% acetona Se estudiarán la separación de los pigmentos tras la extracción por CCF y como varía dependiendo del tipo de eluyente utilizado. También se identificarán los pigmentos que se separaron por cromatografía y se calcularán los Rf de cada uno de ellos.
2. Procedimiento experimental 1ª parte. Extracción. En primer lugar se procede a la extracción de los pigmentos por lo que se lavan las algas con metanol desechando este primer extracto puesto que además de los pigmentos se han extraído otra serie de distintos compuestos que provocaría que la cromatografía no se llevara a cabo correctamente. Posteriormente, se procedió a relizar 4 extracciones en el mortero de cristal añadiendo 5 ml de metanol en cada extracción. Entre extracción y extracción se añade la mitad de la punta de una espátula de MgCO 3. Estas fracciones 10 y 10 mL son separadas del resto sólido que queda en el mortero y son llevadas hasta dos tubos de ensayo. Estos tubos de ensayos, posteriormente son llevados hasta a un centrifugador durante un minuto donde se elimina el resto sólido de calcio y el MgCO 3. En un inicio teníamos una solución verde de aspecto opaco, que sigue siendo verde, pero transparente y no opaco Nota: los tubos de ensayo en los que se recolecta el pigmento debe de encontrarse envuelto por papel de aluminio con el fin de protegerlo de la luz. Los pigmentos que han sido extraídos son fotosensibles, y con el simple contacto de la luz, estos se descomponen. Se recolectan el producto de la centrifugación en frascos ambas y se homogeinizan protegiéndolos de la luz con papel de aluminio también. Por último, a oscuridad se realizan las cromatografías de capa fina para la separación de los componentes con cada uno de los diferentes eluyentes y se observan a ultravioleta.
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Resultados de prácticas de Química Analítica IV
3. Resultados Los resultados de las placas CCF que se obtuvieron son los que aparecen a continuación:
Placa 1. En la placa hexano/acetona 35% se observaron dos manchas con un Rf
bastante similar y de color verde Placa 2. Es la placa hexano/acetona 50%, presenta un Rf mayor que el anterior observándose nuevamente dos manchas. En este caso, cabría destacar que podríamos observar en el extracto perteneciente al alga parda dos manchas una amarilla y otra verde, sin embargo, la mancha verde impedía que pudiese verse pues tenía un Rf bastante similar. Placa 3. En la placa hecano/acetona 65%, sí que pudo obtenerse una mejor separación de los compuestos, tanto es así que para el alga parda se pudieron ver dos manchas diferentes. Una amarilla de mayor Rf, y otra de color verde de menor Rf . Mientras que en la verde seguía observándose la verde. Los Rf obtenidos en comparación con los anteriores son más pequeños, que con los eluyentes anteriores. Los Rf que han sido obtenidos en cada placa son los que se presentan en las siguientes tablas, atendiendo a la fórmula:
Rf =
Frente de avance del soluto individual ------------------------------------------Frente de avance de la fase móvil
Hexano/Acetona 35% Alga 1 (verde) Nº Recorrido Rf (mm) 1 67 0,95 Hexano/Acetona 50% Alga 1 (verde) Nº Recorrido Rf (mm) 1 67 0,98
Color
Alga 2 (rojiza) Recorrido Rf (mm)
Color
verde
65
amarillo
Color
Alga 2 (rojiza) Recorrido Rf (mm)
Color
verde
67
amarillo
0,92
0,98
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Resultados de prácticas de Química Analítica IV
Hexano/Acetona 65% Alga 1 (verde) Nº Recorrido Rf (mm) 1 27 0,5 2
Color verde
Alga 2 (rojiza) Recorrido Rf (mm)
Color
28 32
verde amarillo
0,52 0,60
4. Discusión de los resultados Explicación de la tonalidad de los extractos durante la extracción Se observó que la intensidad y tono de los extractos en metanol en las sucesivas etapas de extracción eran cada vez menos intensos y coloreados, es decir, iban disminuyendo a medida que avanzaba la extracción. Ello es debido a que el metanol era capaz de extraer del alga las diferentes los pigmentos que formaban parte del mismo. Con lo cual como cada vez existía menor cantidad de los mismos, los extractos obtenidos que se iban obteniendo eran más claros para ambas algas. Un esquema de la coloración podría ser:
Identificación de los pigmentos
Observando las placas de CCF, podemos observar que a partir de las tablas de pigmentos del guión. Por este motivo, atendiendo a los pigmentos mayoritarios que nos encontramos en las algas podemos identificar un total de hasta cuatro pigmentos diferentes, a saber: Luteína, cuya presencia será de color amarillo-naranja tratándose de un computo de polaridad intermedia. Astaxantina, de color rojo y también de polaridad intermedia. Clorofila a, de color verde azulado y que emite fluorescencia rosa a 254 nm. También presenta alta polaridad. Clorofila b, de color verde amarillo y como el anterior emite fluorescencia rosa, con alta polaridad Por este motivo podríamos aventurarnos a decir que los pigmentos que han sido extraídos y que posteriormente, se han separado por CCF son la clorofila a (de color verde) y que se encuentran presentes en ambos tipos de algas. Asimismo también se ha podido identificar la clorofila b de color amarillento y cuya separación ha podido realizarse en el alga parda (roja). Otra posibilidad es que el pigmento extraído del alga parda sea la luteína, el compuesto de degradación, clorofila b, coincide con el mismo color que tenemos. Este pigmento sería característico de las algas pardas lo que lo diferenciaría de las algas verdes.
Selección del eluyente.
De los tres eluyentes que se han utilizado en la práctica:
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Resultados de prácticas de Química Analítica IV
Eluyente 1. 35% hexano – 65% acetona Eluyente 2. 50% hexano – 50% acetona Eluyente 3. 65% hexano – 35% acetona
Aquel con el que se obtiene una mejor separación de los pigmentos sería el eluyente 3, (65% hexano-acetona), puesto que gracias a él se ha conseguido realizar una separación por CCF de los componentes que forman parte de la misma en el alga verde. Ello es debido a que se ha aumentado la proporción del componente más apolar, haciendo que la fase móvil tenga una menor afinidad por el compuesto, aunque ello signifique que tengamos que elegir un eluyente que dé lugar a un Rf que sea menor
Cuestiones sobre la práctica 1. ¿Cuál es el papel del MgCO 3 durante la extracción de pigmentos con metanol? El MgCO3, es una sal que se utilizó con una doble función durante el proceso de extracción: a) Se utilizó para poder eliminar el agua que pudiese presentar el agua, pues esta es absorbida por el MgCO 3. b) Evitar o realentizar el proceso de descomposición frente a la exposición a la luz de los pigmentos que han sido extraídos.
2. ¿Por qué ha de permanecer el tanque de elución cerrado antes y durante la cromatografía? El tanque de lución se mantiene siempre cerrado puesto que si se abriera, debido a que como los eluyentes utilizados son muy volátiles se produciría una pérdida del mismo, comenzando siempre por el más volátil de los dos que constituyen la muestra. Esto provocaría finalmente que la proporción entre los eluyentes se viese modificada y obtendríamos resultados de separación equívocos para esa proporción de eluyentes.
3. La identificación de los compuestos separados en el laboratorio se llevó a cabo mediante comparación con datos bibliográficos de pigmentos, método poco habitual en la práctica real ¿Qué metodología de identificación de bandas se usa habitualmente en CCF? Para identificar las bandas a partir de la cromatografía de CCF se utilizan los valores de los de Rf y no a paritr de las tablas bi
4. Si dos compuestos tienen un valor de 0.30 y 0.32 respectivamente ¿se separarán en una placa de capa fina si el disolvente recorre 5 cm? ¿Qué podría modificarse para lograr la separación? Compuesto A. Tenemos Rf= 0,3 Compuesto B . Rf = 0,32 Si la distancia recorrida por el eluyente es de 5 cm, de la fórmula despejamos:
Rf =
Frente de avance del soluto individual ------------------------------------------Frente de avance de la fase móvil
Rf · Frente de avance de la fase móvil = Frente de avance del soluto individual Compuesto A. 0,3 · 5 cm = 1,5 cm Compuesto B. 0,32 · 5 cm = 1,6 cm
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Resultados de prácticas de Química Analítica IV Con lo cual no tendríamos una separación completa de los componentes y lo que más posiblemente ocurrirá es que se produzca un solapamiento entre los diferentes componentes. Por este mismo motivo deberíamos de poder tomar dos factores para lograr la separación: Modificar la polaridad del eluyente, utilizar un componente más polar que provocara una mayor separación del componente más polar que sería el que presenta menor Rf, es decir, el compuesto A. Aumentar la distancia del frente de avance de la fase móvil, para lo cual en lugar de utilizar los 5 cm, llevarlo a 10 cm, con lo que conseguiríamos una separación diez veces más grande, es decir, de 1 cm.
5. ¿Podría aplicarse con fines cuantitativos o semicuantitativos la metodología analítica ensayada en el laboratorio? En caso afirmativo, indique las modificaciones necesarias. La práctica se encuentra enfocada con la obtención de datos de carácter cualitativo y semicuantitativo (observando la intensidad de las manchas). Sin embargo, si quisiésemos cuantificar la cantidad o abundancia relativa de dichos pigmentos, no deberíamos recurrir a una cromatografía de capa fina. Más bien deberíamos recurrir a otro tipo de cromatografía, como podría ser una columna de cromatografía, o incluso un HPLC. Sí podríamos aplicarle fines semicuantitativos, observando y estudiando la intensidad de las manchas obtenidas por cromatografía.
6. Para el análisis cuantitativo de los compuestos separados por CCF y desorbidos mediante disolvente adecuado podría utilizarse la técnica de espectrofotometría de absorción molecular, seleccionando para ello como longitudes de onda de medida para clorofila a y luteína 460 y 445 nm, respectivamente. (Observar espectros de absorción de luz visible).
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