Infecciones de vías respiratorias (cultivo faríngeo)

Universidad​ ​Autónoma​ ​de​ ​Querétaro Facultad​ ​de​ ​Química Laboratorio​ ​de​ ​Bacteriología Reporte​ ​5.​ ​“Neisseria​ ​y​ ​Moraxella”​ ​e​ ​“Infecciones​ ​de​ ​vías respiratorias​ ​(Cultivo​ ​faríngeo)” Grecia​ ​Alejandra​ ​Ortiz​ ​Cano/​ ​Arturo​ ​Torres​ ​Zamora/​ ​José​ ​Manuel Alvarez​ ​Baltazar.

Fecha​ ​de​ ​realización:​ ​25/09/2017​​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​Fecha​ ​de​ ​entrega:​ ​02/10/2017

ÍNDICE

l.​ ​RESUMEN………………………………………………………………………..​ ​2 II.​ ​INTRODUCCIÓN​ ​………………………………………………………………​ ​2 III.​ ​OBJETIVOS……………………………………………………………...…….​ ​3 IV.​ ​METODOLOGÍA……………………………………………………………….​ ​4 V.​ ​RESULTADOS​ ​Y​ ​DISCUSIÓN……………………………………………..…​ ​6 Vl.​ ​CONCLUSIÓN…………………………………………………………………..​ ​7 Vll.​ ​BIBLIOGRAFÍA………………………………………………………………..​ ​8

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I. RESUMEN Este reporte incluye las dos prácticas realizadas en la misma sesión de laboratorio: “Neisseria y Moraxella” e “Infecciones de vías respiratorias (Cultivo faríngeo)”. Se estudiaron las características microscópicas y macroscópicas de los organismos que componen los géneros​ ​Neisseria​ ​y​ ​Moraxella. II.

INTRODUCCIÓN A. Neisseria​ ​y​ ​Moraxella La familia Neisseriaceae está compuesta por cuatro géneros: Neisseria, Moraxella, Kingella y Acinetobacter. Todos los miembros de la familia excepto Acinetobacter, habitan en la superficie de las mucosas de animales de sangre caliente. Con tinción de Gram aparecen como diplococos gramnegativos, todas las especies son citocromo oxidasa positivos y catalasa positivos e inmóviles. Algunas especies de microorganismos son exigentes se inhiben en presencia de ácidos grasos y sales. No resisten la desecación, ni la exposición a la luz. Muchas especies de Neisseria requieren de humedad elevada y presencia de CO2, se consideran aerobios estrictos. Algunas Neisserias producen pigmento amarillo de naturaleza carotenoide. Contienen una capa de peptidoglicano y una membrana externa que contiene polisacáridos, también contiene proteínas llamadas porinas que permiten el paso de pequeñas moléculas, existen otras proteínas membranales que se presentan en las especies y sirven para realizar pruebas de aglutinación, serotipificación y desarrollo de vacunas. Algunas especies, como Neisseria meningitidis tienen cápsula que les confieren cierta serotipificación y susceptibilidad a vacunas. Las especies N. gonorrhoeae y N. meningitidis se consideran patógenas e infectan exclusivamente al hombre. N. meningitidis (meningococo) causa meningitis, mientras que N. gonorrhoeae causa gonorrea una enfermedad del tracto genital. Ambas especies poseen pili, que media la unión entre el microorganismo y las células susceptibles, facilitando de esta forma la adhesión e infección. Se cree que el pili evita la fagocitosis y destrucción por parte de los neutrófilos. Es importante realizar un frotis directo de​ ​la​ ​muestra​ ​ya​ ​que​ ​estos​ ​microorganismos​ ​pueden​ ​no​ ​crecer​ ​en​ ​los​ ​medios​ ​selectivos. B. Infecciones​ ​de​ ​vías​ ​respiratorias Las vías respiratorias inician con la nariz y boca y se extienden a través de la nasofaringe y orofarínge respectivamente, siguiendo con la tráquea y terminando en los pulmones. La tráquea se divide en bronquios que a su vez se dividen en bronquiolos, cuyas ramificaciones​ ​terminan​ ​en​ ​los​ ​alveolos.

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Fig​ ​1.​​ ​Aparato​ ​respiratorio Un mecanismo no especifico es el que protege al tracto respiratorio de las infecciones, entre ellos se encuentran los pelos, las mucosas y pasajes contorneados, también hay diversas sustancias antibacterianas como la lizosima y anticuerpos. En esta actividad de protección también se incluye a la flora normal, la cual previene la colonización de bacterias patógenas. El estudio del exudado faríngeo es de gran importancia para el diagnóstico de ciertas enfermedades o infecciones, entre ellas la estafilocócica, la difteria, tos ferina, así como establecer un foco de infección de enfermedades como la fiebre escarlatina, fiebre reumática, glomerulonefritis, y la demostración de portadores sanos de estreptococos β hemolíticos, Neisseria y Corynebacterium. Las muestras de exudado faríngeo constituyen uno de los estudios más solicitados en la comunidad, especialmente en niños, debido en gran​ ​medida​ ​a​ ​la​ ​facilidad​ ​de​ ​su​ ​obtención. Criterios​ ​epidemiológicos​ ​importantes​ ​en​ ​la​ ​realización​ ​de​ ​cultivo​ ​de​ ​exudado​ ​faríngeo: ● La​ ​edad​ ​del​ ​paciente​ ​es​ ​un​ ​elemento​ ​importante​ ​de​ ​apoyo. ● En​ ​los​ ​niños​ ​menores​ ​de​ ​3​ ​años,​ ​la​ ​gran​ ​mayoría​ ​de​ ​las​ ​faringitis​ ​agudas​ ​con​ ​víricas. ● Entre​ ​los​ ​6​ ​y​ ​los​ ​15​ ​años​ ​la​ ​etiología​ ​estreptocócica​ ​puede​ ​llegar​ ​hasta​ ​el​ ​50%. ● En​ ​mayores​ ​de​ ​18​ ​años,​ ​entre​ ​el​ ​15​ ​y​ ​el​ ​25%​ ​es​ ​estreptocócica. ● El​ ​cultivo​ ​tiene​ ​una​ ​sensibilidad​ ​del​ ​95%​ ​y​ ​la​ ​especificidad​ ​del​ ​95​ ​al​ ​99%. ● El​ ​resultado​ ​preliminar​ ​se​ ​obtiene​ ​entre​ ​24​ ​y​ ​48​ ​horas. III. ● ● ●

OBJETIVOS A. Neisseria​ ​y​ ​Moraxella Conocer​ ​las​ ​especies​ ​más​ ​importantes​ ​que​ ​forman​ ​la​ ​familia​ ​Neisseriaceae Realizar​ ​las​ ​pruebas​ ​bioquímicas​ ​para​ ​identificar​ ​a​ ​la​ ​Neisseria​ ​y​ ​Moraxella catarrhalis Conocer​ ​la​ ​situación​ ​taxonomía​ ​de​ ​Moraxella​ ​Catarrhalis

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● ● ● ● IV.

B. Infecciones​ ​de​ ​vías​ ​respiratorias Conocer​ ​la​ ​importancia​ ​del​ ​exudado​ ​faríngeo​ ​como​ ​estudio​ ​de​ ​un​ ​laboratorio​ ​clínico Establecer​ ​las​ ​metodologías​ ​para​ ​realizar​ ​una​ ​buena​ ​toma​ ​de​ ​muestra Conocer los microorganismos presentes como flora habitual en las vías respiratorias altas. ​ ​Conocer​ ​e​ ​identificar​ ​las​ ​bacterias​ ​patógenas​ ​en​ ​las​ ​vías​ ​respiratorias. METODOLOGÍA A. Material 1. Asas​ ​bacteriológicas 2. Asas​ ​bacteriológicas​ ​rectas. 3. Portaobjetos 4. Mechero 5. Cajas​ ​petri 6. Hisopos​ ​para​ ​exudado B. Reactivos 1. Medio​ ​de​ ​transporte​ ​Stuart 2. Reactivo​ ​de​ ​oxidasa 3. Equipo​ ​de​ ​tinción​ ​Gram 4. Reactivo​ ​para​ ​prueba​ ​de​ ​catalasa 5. Discos​ ​de​ ​optoquina 6. Discos​ ​de​ ​bacitracina 7. Discos​ ​de​ ​Trimetoprim/sulfametoxazol 8. Agar​ ​chocolate 9. Agar​ ​Mueller-Hinton​ ​sangre​ ​5% 10. 5 tubos con Agar Cistina Tripticasa adicionados con Glu, Mal, Lac, Sac​ ​y​ ​Fruc. C. Procedimiento 1. Toma​ ​de​ ​muestra a) Los​ ​pacientes​ ​necesitan​ ​estar​ ​en​ ​ayuno​ ​y​ ​con​ ​aseo​ ​de​ ​boca b) Con la ayuda de un abatelenguas y un hisopo realizar la toma de​ ​muestra​ ​de​ ​la​ ​cavidad​ ​faríngea c) Sumergir los hisopos con la muestra en tubos de ensayo con medio​ ​de​ ​transporte​ ​Stuart d) Almacenar​ ​hasta​ ​el​ ​cultivo 2. Cajas​ ​con​ ​agar a) Por​ ​cada​ ​uno​ ​de​ ​los​ ​agares​ ​preparar​ ​dos​ ​cajas​ ​petri b) Sembrar​ ​cada​ ​muestra​ ​en​ ​el​ ​agar​ ​chocolate c) Incubar​ ​a​ ​37°C​ ​por​ ​24​ ​h d) Notar crecimiento, morfología de colonias y cambios de coloración 3. Antibiograma a) Sembrar las distintas colinas que hayan crecido en el agar chocolate​ ​en​ ​cajas​ ​con​ ​agar​ ​Mueller-Hinton​ ​sangre​ ​5% 4

b) Colocar discos de optoquina, bacitracina, SXT y/o novobiocina,​ ​según​ ​sea​ ​el​ ​caso 4. Tinción​ ​de​ ​Gram a) Realizar el procedimiento estándar para tinción de Gram en todas​ ​las​ ​cepas​ ​proporcionadas. b) Observar al microscopio e identificar si la prueba resulta negativa​ ​o​ ​positiva. 5. Catalasa a) Realizar​ ​el​ ​frotis​ ​de​ ​las​ ​dos​ ​cepas​ ​en​ ​un​ ​portaobjetos b) Agregar​ ​una​ ​gota​ ​de​ ​H​2​O​2​​ ​a​ ​cada​ ​frotis c) Notar​ ​si​ ​hay​ ​efervescencia​ ​o​ ​no 6. Oxidasa a) Con​ ​aplicadores​ ​de​ ​madera​ ​tomar​ ​una​ ​colonia​ ​de​ ​cada​ ​cepa b) Colocar las muestras en una tira reactiva y notar si hay cambio de​ ​coloración​ ​o​ ​no.

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V.

RESULTADOS​ ​Y​ ​DISCUSIÓN

Tabla​ ​1.​ ​Resultados​ ​de​ ​las​ ​distintas​ ​colonias​ ​de​ ​la​ ​cepa​ ​del​ ​paciente​ ​1. Cepa​ ​Paciente​ ​1

Tinción​ ​Gram

Catalasa

Oxidasa

Colonias​ ​cafés (agar​ ​chocolate)

Diplococos​ ​Gram​ ​(-)

(+)

(+)

Colonias​ ​verdes (agar​ ​chocolate)

Cocos​ ​Gram(-)

(-)

No​ ​se​ ​realizó

Colonias​ ​cafés (agar​ ​sangre)

Cocos​ ​Gram(-)

(-)

No​ ​se​ ​realizó

Tabla​ ​2.​ ​Resultados​ ​de​ ​las​ ​distintas​ ​colonias​ ​de​ ​la​ ​cepa​ ​del​ ​paciente​ ​2. Cepa​ ​Paciente​ ​2

Tinción​ ​Gram

Catalasa

Oxidasa

Colonias​ ​verdes (agar​ ​chocolate)

Cocos​ ​Gram(+)

(-)

No​ ​se​ ​realizó

Colonias​ ​café-amarillas (agar​ ​sangre)

Cocos​ ​Gram​ ​(-)

(-)

No​ ​se​ ​realizó

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​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​ Fig​ ​1.​ ​Antibiograma​ ​cepa​ ​café​ ​(agar​ ​chocolate)​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ F ​ ig​ ​2.​ ​Antibiograma​ ​paciente​ ​2 ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​paciente​ ​1.​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​cepa​ ​café​ ​(agar​ ​sangre). La​ ​cepa​ ​del​ ​paciente​ ​1​ ​mostró​ ​resistencia​ ​a​ ​Trimetoprim/sulfametoxazol​ ​y​ ​sensibilidad​ ​a Optoquina​ ​y​ ​Bacitracina,​ ​mientras​ ​que​ ​en​ ​el​ ​paciente​ ​2​ ​fue​ ​sensible​ ​en​ ​los​ ​tres​ ​casos. Teniendo​ ​en​ ​cuenta​ ​las​ ​características​ ​de​ ​la​ ​cepa​ ​de​ ​diplococos​ ​Gram​ ​(-)​ ​del​ ​paciente​ ​uno, estes​ ​se​ ​sometió​ ​a​ ​una​ ​prueba​ ​de​ ​fermentación​ ​de​ ​carbohidratos. Tabla​ ​3.​ ​Pruebas​ ​de​ ​fermentación​ ​de​ ​carbohidratos​ ​de​ ​las​ ​colonia​ ​café​ ​encontrada​ ​en el​ ​paciente​ ​1. Lactosa

Maltosa

Sacarosa

Fructosa

Dextrosa

No​ ​hubo​ ​fermentación​ ​de​ ​carbohidratos,​ ​lo​ ​cual​ ​junto​ ​con​ ​las​ ​otras​ ​pruebas​ ​indican​ ​que​ ​la cepa​ ​encontrada​ ​en​ ​el​ ​paciente​ ​1​ ​es​ ​una​ ​Moraxella. VI. CONCLUSIÓN Se identificaron las cepas obtenidas de la muestra de exudado faríngeo en ambos pacientes, se conocieron las especies más importantes que forman la familia Neisseriaceae y se conocieron los microorganismos presentes como flora habitual en las vías respiratorias altas. 7

VII.

BIBLIOGRAFÍA ❖ Patrick​ ​R.​ ​M.​ ​(2014).​ ​Microbiología​ ​Medica​ ​7ª.​ ​Edición.​ ​Editorial​ ​Elsevier.​ ​8. ❖ Romero​ C ​ .​ ​R.​ ​(2007)​ ​Microbiología​ ​y​ ​parasitología​ ​humana.​ ​3a.​ ​Edición.​ ​Editorial Médica​ ​Panamericana.​ ​9. ❖ Stephen​ ​J.C.​ ​(2005).​ ​Manual​ ​de​ ​pruebas​ ​de​ ​susceptibilidad

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