Importancia biológica de las bandas cromosómicas El descu descubr brim imie ient nto o de las las técn técnic icas as de band bandeo eo crom cromos osóm ómic ico o ha signi signifi fica cado do un considerable progreso tanto en citogenética humana como en citogenética general ya que, al poder obtenerse imágenes reproducibles de la existencia de estructuras crom cromos osóm ómic icas as tran transv sver ersa sale les s (ban (banda das) s) de dife diferen rente te tama tamaño ño a lo larg largo o de los los cromosomas, fue posible disponer de una herramienta de identificación de cada cromosoma humano, como as los de un importante n!mero de otros organismos tanto animales como vegetales" #dicionalmente, esta metodologa permitió locali$ar con certe$a los puntos de fractura observ ervados en la mayora ra de los reordenamientos estructurales y establecer qué cromosomas estaban involucrados en dichas aberraciones" Estas posibilidades citológicas produ%eron un gran impacto especialmente a nivel clnico ya que permitieron diferenciar y caracteri$ar citogenéticamente un elevado n!mero n!mero de nue nuevos vos sndrom sndromes es de malfor malformac mación ión y retard retardo o men mental tal congén congénito itos" s" #simismo, la más reciente y significativa aplicación de las bandas cromosómicas ha sido en el programa del genoma humano ya que, tanto genes como sndromes génicos, son ahora ubicados habitualmente en los mapas de bandas cromosómicas" El gran gran valor valor de los diversos diversos patrones patrones de bandeo bandeo es que caracte caracteri$ ri$an an a cada cada cromosoma de diversas especies de entidades biológicas superiores, excepto los verteb ver tebrad rados os inferio inferiores res que no las poseen" poseen" En los vertebra vertebrados dos y en las plantas plantas super superio iores res las las band bandas as se orig origin inar aron on a trav través és de prol prolon onga gad dsi simo mos s proc proces esos os evol evoluc ucio iona nari rios os acae acaeci cidos dos a dist distin into tos s nive nivele les s evol evolut utiv ivos os cons consti titu tuye yend ndo o los los componentes cromosómicos observables actualmente" &u estabilidad estructural es tan elevada que, cualquier cambio inducido o espontáneo ocurrido en ellos, se expresa como una mutación indeseable la cual, en el ser humano, o se elimina por muer mu erte te del del indi indivi vidu duo, o, o impi impide de su rep repro rodu ducc cció ión, n, u orig origin ina a un una a enfe enferm rmed edad ad hered heredit itar aria ia"" 'odos dos esto estos s son son me meca cani nism smos os evol evoluc ucio iona nari rios os que que aseg asegur uran an la elimin eliminaci ación ón de la poblac población ión de indivi individuos duos portado portadores res de altera alteracio ciones nes genétic genéticas as per%udiciales" #simismo, estos extraordinarios avances citogenéticos han ocurrido en me meno nos s de cuat uatro déca década das s de inv nves esti tiga gaci cion ones es y perf perfec ecc cion ionamie amient ntos os metodológic metodológicos os revolucion revolucionando ando profundamen profundamente te la genética genética humana humana al esclarece esclarecerr racionalmente el origen de un enorme n!mero de enfermedades hereditarias" La era prebande prebandeo o y el proble problema ma de la clasif clasifica icació ción n de los cromosoma cromosomas s humanos. Dos escuelas en pugna espués del descubrimiento reali$ado por '%io y evan(* evan( *) del n!mero correcto del cariotipo humano, logrado cuando ellos aplicaron, en células humanas normales, un n!mero de refinamientos metodológicos desarrollados previamente en citogenética" Estos procedimientos permitieron la acumulación del n!mero de metafases, una efectiva separación de los cromosomas y su adhesión al portaob%eto en un !nico plano óptico" En esa época, +érme e%eune (figura ( figura *a), *a), un médico de la -linique des .aladies /nfant /nfantile iles s del 0pita 0pitall 1ec2er 1ec2er3En 3Enfan fants ts .alade .alades s de 4ars 4ars,, dirigi dirigida da por el profeso profesorr 5aymond 'urpin, estaba reali$ando detenidos estudios clnicos de niños con retardo mental y malformaciones congénitas, particularmente sobre pacientes portadores del sndrome de o6n" 7no de los elementos que más intrigaba a e%eune era la curiosa seme%an$a fenotpica de los pacientes, que ya haba sido señalada mucho tiempo tiempo atrás atrás por &eg &eguin uin((8) y desp despué ués s por por ang angdo don n-o6n(9 o6n(9)" El hall halla$ a$go go de e%eune de la primera trisoma cromosómica del ser humano reali$ado en este tipo de paci pacien ente tes s no ocur ocurri rió ó por por casu casual alid idad ad"" a capa capaci cida dad d cln clnic ica, a, el prof profun undo do
conocimiento del problema y el extraordinario talento de e%eune lo indu%eron a considerar como muy plausible la hipótesis de :aardenburg( ;) de que el sndrome estaba determinado probablemente por una aberración cromosómica" Esta suposición ya imperaba en ese tiempo en el servicio de 'urpin, quien anali$ando las diversas concepciones etiológicas de la enfermedad, supuso que la más probable era la de )" Es, entonces, que e%eune decide asociarse con una pediatra con grandes conocimientos sobre cultivos celulares, .arta ?authier, comen$ando a emplear la misma metodologa utili$ada por '%io y evan pero, en ve$ de usar fibroblastos embrionarios, comen$aron a cultivar fibroblastos de adultos obtenidos a partir de pequeñas biopsias cutáneas" @bviamente no se dispona, en la época, de la instrumentación actual para cultivar células a largo pla$o (por e%emplo, estufas de -@8 , cámaras de flu%o laminar, frascos para cultivo, etcétera) por lo que la técnica empleada se limitaba a depositar pequeños fragmentos de te%idos (explantos), en particular de fascia lata, sobre cubreob%etos untados con plasma de pollo, introducirlos en pequeños tubos que contenan el medio de cultivo, e inmovili$arlos in situ mediante coagulación por el agregado de una gota de extracto embrionario" Este simple pero ingenioso método de cultivo de fibroblastos humanos fue empleado por primera ve$ en nuestro pas en el diagnóstico diferencial de un caso de sndrome de Alinefelter(B)" urante la clase inaugural de la -átedra de ?enética Cundamental, que fuera creada especialmente para e%eune por la Cacultad de .edicina de 4ars, él se refirió a las heroicas condiciones en las cuales desarrolló su labor precursora""" "El cuarto destinado al estudio citológico era soberbio. Poseía dos grandes agujeros abiertos al cielo y no había agua, ni gas, ni mesa de trabajo. Nuestro microscopio, que fuera orgullo del Hospital rousseau en los a!os #, se comportaba bastante $alientemente a pesar de los desgastados dientes de su cremallera que estaban recubiertos con una hoja de papel de chocolate cuidadosamente insertada entre los engranajes. Esta mara$illa óptica tenía su trono sobre una camilla de enfermo que hacía de mesa de trabajo. %na silla alta, bastante parecida a aquellas que se $en a&n en las iglesias de campa!a detr's del $iejo armonio, completaba el mobiliario" """(D)" En este increble e inhóspito ámbito, e%eune y ?authier logran un activo crecimiento celular de fibroblastos a los pocos das a partir de los explantos, el cual apareca en forma de una y el F, pero la clasificación de los miembros de los pares ;3=, >3 *8 inclusive el G, *93*=, *B3*D, *38H y 8*388, resultaba muchsimo más problemática" 1o obstante, e%eune nos manifestó personalmente que "aunque era algo ilusoria la tarea de identificar esos grupos de cromosomas $alía la pena esfor(arse en diferenciarlos",aconse%ándonos observar detenidamente pequeñas variaciones morfológicas orientadoras"
a minuciosa y exacta clasificación usada por e%eu3ne(*H) fue reiteradamente rebatida por muchos autores de aquella época" Es absolutamente sorprendente, en el contexto actual, la extensa polémica (*88 páginas) que originó una de las presentaciones de e%eune(**) controvertida particularmente por Alaus 4atau, el descubridor de la trisoma *9 (figura *c) (*83*=)" urante la mencionada presentación, e%eune expuso un nuevo método para identificar en particular cada par del grupo >3*8 cuyos pares carecan de marcadores cromosómicos especiales (a excepción del par 1I que porta una constricción secundaria muy clara) empleando la longitud relativa y el ndice centromérico" e%eune empleó una técnica fotográfica de desenfoque de los puntos obtenidos pensando que las áreas de mayor concentración de dichos puntos representaban las locali$aciones medias correspondientes a cada par inclusive el G" #unque algunos de los fundamentos matemáticos que 4atau empleó para oponerse a los puntos de vista de e%eune eran en parte ciertos, debe señalarse que sus errores de apreciación se originaron principalmente por el empleo de cromosomas sumamente acortados debido al uso de dosis elevadas de colcemid (una colchicina sintética sumamente activa), lo cual le impeda detectar pequeñas variaciones morfológicas existentes entre los distintos pares cromosómicos (figura *d)" Era claro que en ese tiempo dos >, hasta el presente, adoptamos en nuestro laboratorio la
0abiendo logrado tal perfeccionamiento tecnológico tanto en materia de cultivos de fibroblastos obtenidos de pequeñas biopsias como la identificación precisa de todos
los pares cromosómicos, e%eune decide estudiar nueve pacientes con sndrome de o6n estableciendo inequvocamente que portaban ;B cromosomas en ve$ de ;>, anomala determinada por el exceso de un cromosoma del par 8*( *>,*B)" Este sensacional descubrimiento implicó una profunda y real comprensión del sndrome de la trisoma 8* determinando la inauguración formal de la citogenética humana como una nueva y trascendente disciplina bio3médica" 5eali$amos los primeros diagnósticos de trisoma 8* con 5amón3?uerra poco tiempo después(*D)" &u repercusión fue tan amplia que conmocionó el oscuro captulo de las malformaciones y retardo mental congénitos tanto en la esfera somática como en la sexual, problemas no comprendidos racionalmente por nadie hasta esa fecha" #un cuando este importantsimo descubrimiento abrió insospechadas rutas en m!ltiples áreas de la genética humana y de la bio3medicina, sorprendentemente todava no se ha hecho %usticia con el histórico aporte de e%eune ya que la trisoma 8* contin!a denominándose
bandas fluorescentes representaban los segmentos de #1 ricos en #' y no en ?(89)" 1o obstante, las imágenes fluorescentes resultaron sumamente !tiles ya que permitieron reconocer cada par cromosómico del cariotipo humano de acuerdo a su patrón de bandeo, un hecho no demostrado hasta esa fecha" Esta fue la primera clara evidencia de que cada bra$o cromosómico posea una estructura caracterstica" Este descubrimiento permitió resolver numerosos problemas citogenéticos relacionados con portadores de afecciones hereditarias ya que pudieron detectarse aberraciones cromosómicas de muy difcil interpretación empleando métodos citológicos convencionales" #unque, desde el punto de vista citogenético este descubrimiento fue altamente significativo, el método no se generali$ó debido a queK *) no todas las bandas obtenidas eran netas sino más bien ligeras gradaciones tintorialesL 8) las preparaciones teñidas con quinacrina no eran permanentes ya que la fluorescencia tiende a desvanecerse rápidamente, y, 9) los preparados una ve$ expuestos a la lu$ ultravioleta no podan usarse nuevamente debido a la degradación del fluorocromo y, por ende, pérdida total de la fluorescencia cromosómica"
