Radio in Mu No Ensayo

Radioinmunoensayo El Radioinmunoensayo (o abreviado RIA del inglés Radioimmunoassay) es un tipo de inmunoensayo o inmunoensayo o método radioinmunométrico que se basa en la formación especíca de los compleos Antígeno! Antígeno!Anticuerpo (Ag!Ac) Anticuerpo (Ag!Ac) lo que le dota de una gran especicidad unido a la sensibilidad de los métodos radiológicos" #a técnica $a sido pr%cticamente reempla&ada por el método E#I'A el E#I'A el cual mide la unión Ag!Ac mediante colorimetrías en colorimetrías en lugar de radiometrías" radiometrías" asi todas las moléculas pueden ser antigénicas y esto se usa para que los anticuerpos puedan unirse a esa molécula y marcarla radiactivamente" na buena manera de provocar que una molécula sea antigénica est% basada en que un$apteno un$apteno combinado  combinado con un coadyugante da respuesta inmune" n coadyuvante muy coadyuvante muy usado es la alb*mina de suero bovino o bovino o +'A, por lo que al conugar un $apteno con +'A e introducirlo en otra especie aparecer%n anticuerpos contra el $apteno" -ndice .ocultar/ ocultar/ 0 Radioinm Radi oinmunoe unoensa nsayos yos

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o

0"0 RIA 1irecto 1ire cto

o

0"2 RIA de In$ibición In$ibic ión

o

0"3 RIA de 'and4ic$ (IR5A)

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2 nión nió n no especí esp ecíca ca

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3 Referen Refe rencia ciass

editar/ Radioinmunoensayos.editar/ editar/ RIA 1irecto.editar/ El RIA se basa en la competencia e6istente entre el antígeno no antígeno no marcado y una cantidad conocida del antígeno marcado para formar los compleos AgAc o Ag7Ac" on estos tres componentes (Ag, Ag7 y Ac) puede reali&arse el ensayo en el que manteniendo constante la cantidad de Ag7 y Ac se observar% que a mayor cantidad de Ag menos Ag7 queda unido a la cantidad a de Ac (y por tanto menos radiactividad), radiactividad), lo que permitir% relacionar la radiactividad con la concentración de Ag" 0" 'e obtienen obtienen anticuerpos anticuerpos especícos especícos,, para ello se inyectan inyectan en un animal peque8as cantidades en varias dosis del antígeno muy puricado" El animal generar% animal generar% anticuerpos que podr%n ser recogidos del plasma sanguíneo" sanguíneo"

2" 'e marca el antígeno radiactivamente" El antígeno marcado debe seguir siendo reconocible por el anticuerpo" 3" 'e a8aden Ac a una placa de titulación y quedan unidos al soporte sólido, tras lo que se agrega el Ag7 en cantidad conocida y el Ag de la muestra problema" 9" 'e elimina el antígeno no unido por decantación y lavado, y se determina la cantidad de marcae unido" :" 'e interpola el valor obtenido en la recta de calibración que debe $aberse reali&ado con anterioridad"  ;abla de calibrado Antisuero

Ag7

Ag

'uero normal

 ;ubo 0

0m#

0m#


0m#

 ;ubo 2

0m#

0m#

<,0m#

<,=m#

 ;ubo 3

0m#

0m#

<,2m#

<,>m#

 ;ubo 9

0m#

0m#

<,3m#

<,?m#

 ;ubo :

0m#

0m#

<,9m#

<,@m#

 ;ubo @

0m#

0m#

<,:m#

<,:m#





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



Bara la reali&ación del calibrado se dispone de varios tubos en los que se a8aden una cantidad a de Ac y de Ag7 y una cantidad variable de Ag a la que se a8ade suero normal para enrasar al mismo volumen" Así obtendríamos una tabla como la adunta" En el tubo 0 Ac no se une a Ag" En el tubo 2 la mayoría se une a Ag7, la competencia se va despla&ando poco a poco a Ag por lo que la radiactividad de la muestra va disminuyendo (disminuyen los compleos Ac!Ag7)" 'e crea una recta R vs" .Ag/"

RIA de In$ibición .editar/ sado cuando no se puede marcar el antígeno"

0" 'e inmovili&a una cantidad constante de antígeno en un soporte sólido" 'e suele saturar con +'A, lec$e en polvo o caseína para que no se una nada m%s al soporte" 2" 'e a8ade una cantidad constante de Anticuerpo marcado y el antígeno frío a medir (o de calibrado)" En este paso se establece una competencia en la que el Ac se une al Ag o al soporte o al problema" 3" 'e eliminan el anticuerpo no inmovili&ado y el antígeno soluble y se determina la cantidad de anticuerpo marcado que se $a inmovili&ado" 9" 'e construye una curva de calibrado representando la cantidad de anticuerpo marcado inmovili&ado frente a la concentración de antígeno soluble a8adida o bien se interpola la radiactividad medida en esta curva de calibrado"

RIA de 'and4ic$ (IR5A) .editar/ 0" 'e inmovili&a una concentración a del Ac0 (no marcado) en un soporte sólido" ;ras lo que se satura el soporte" 2" 'e a8ade la muestra problema (o de calibrado) de Ag" 3" 'e a8ade Ac72 (marcado) que se una a otro epítopo del Ag" 9" Eliminación del Ac72 no unido" :" 'e determina la cantidad de anticuerpo marcado unido" @" A partir de una recta patrón se interpola el valor obtenido para saber la concentración de Ag presente o bien se reali&a la recta de calibrado"

nión no especíca.editar/ Cormalmente se suelen obtener valores de radiactividad por encima del < cuando .Ag/D<, esto se debe a la unión no especíca (C'+)" 'e suelen usar algunos pocillos para calcular el C'+ que e6iste ($aciendo un blanco de calibrado)" Bara ello se a8ade a un pocillo 0m# de suero0m# de Ag7Fm# de Ag(0!F)m# de suero y al no a8adir Ac se reali&a el mismo proceso y al lavar se mide la unión no especíca"