FACULTAD E ESTUDIOS SUPERIORES IZTACALA
METODOLOGIA CIENTIFICA I
BIOLOGÍA…
PRACTICAS
MANUAL DE PRÁCTICAS DEL MODULO DE METODOLOGIA CIENTIFICA I DE LA CARRERA DE BIOLOGIA
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METODOLOGIA CIENTIFICA I
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PRACTICAS
BALANZAS INTRODUCCION La balanza es un instrumento que mide la masa de una sustancia o cuerpo, utilizando como medio de comparación la fuerza de la gravedad que acta sobre dic!a masa es un instrumento de precisión capaz de medir masas, mediante una palanca de primer grado" #$isten diferentes balanzas entre las m%s comunes se encuentran encuentran las balanzas balanzas granataria, granataria, vernier vernier & anal'tica anal'tica que se pueden usar de acue acuerd rdo o a las nece necesi sida dade dess de prec precis isió ión n & capa capaci cida dad" d" #n ell ellas pued puede e dete determ rmin inars arse e la masa masa de cualqu cualquie ierr ob(e ob(eto to u organi organism smo, o, medi medirr cant cantid idad ades es prec precis isas as de cual cualqu quie ierr mate materi rial al,, mues muesttra o reac reacti tivo vo,, e incl inclus uso o real realiz izar ar determinaciones anal'ticas por diferencia de peso, para lo cual se requiere conocer el uso correcto, & las precauciones necesarias" Se debe tener en cuenta que el peso es la fuerza que el campo gravitacional terrestre e(erce sobre la masa de un cuerpo, siendo tal fuerza el producto de la masa por la aceleración de la gravedad )* + m $ g, que depende de factores como la latitud geogr%fica, la altura sobre el nivel del mar & la densidad de la tierra en el lugar donde se efecta la medición
OBJETIVO -". /ue el alumno conozca el mane(o correcto de los diferentes tipos de balanzas" 0". /ue el alumno distinga la precisión que tienen las diferentes balanzas e identifique los errores que se generan durante las mediciones"
MATERIAL 1alanza granataria de - plato" 1alanza granataria para animales •
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1alanza granataria de 0 platos" 1alanza vernier 1alanza anal'tica 23b(etos peque4os para pesar
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25aterial proporcionado por el alumno
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DESARROLLO •
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PRACTICAS
BALANZAS INTRODUCCION La balanza es un instrumento que mide la masa de una sustancia o cuerpo, utilizando como medio de comparación la fuerza de la gravedad que acta sobre dic!a masa es un instrumento de precisión capaz de medir masas, mediante una palanca de primer grado" #$isten diferentes balanzas entre las m%s comunes se encuentran encuentran las balanzas balanzas granataria, granataria, vernier vernier & anal'tica anal'tica que se pueden usar de acue acuerd rdo o a las nece necesi sida dade dess de prec precis isió ión n & capa capaci cida dad" d" #n ell ellas pued puede e dete determ rmin inars arse e la masa masa de cualqu cualquie ierr ob(e ob(eto to u organi organism smo, o, medi medirr cant cantid idad ades es prec precis isas as de cual cualqu quie ierr mate materi rial al,, mues muesttra o reac reacti tivo vo,, e incl inclus uso o real realiz izar ar determinaciones anal'ticas por diferencia de peso, para lo cual se requiere conocer el uso correcto, & las precauciones necesarias" Se debe tener en cuenta que el peso es la fuerza que el campo gravitacional terrestre e(erce sobre la masa de un cuerpo, siendo tal fuerza el producto de la masa por la aceleración de la gravedad )* + m $ g, que depende de factores como la latitud geogr%fica, la altura sobre el nivel del mar & la densidad de la tierra en el lugar donde se efecta la medición
OBJETIVO -". /ue el alumno conozca el mane(o correcto de los diferentes tipos de balanzas" 0". /ue el alumno distinga la precisión que tienen las diferentes balanzas e identifique los errores que se generan durante las mediciones"
MATERIAL 1alanza granataria de - plato" 1alanza granataria para animales •
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1alanza granataria de 0 platos" 1alanza vernier 1alanza anal'tica 23b(etos peque4os para pesar
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25aterial proporcionado por el alumno
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DESARROLLO •
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PRACTICAS Agrupe Agrupe los los ob(etos ob(etos & asign asigne e un nmero nmero a cada cada uno" uno" 6ete 6eterm rmin ine e la masa masa de cada cada uno uno de los ob(et ob(etos os media mediant nte e el uso de las las diferentes balanzas individualmente" Intercambie Intercambie los los ob(etos ob(etos con sus compa4e compa4eros ros & obtenga obtenga la masa masa de cada uno" uno" Por equipo equipo renan renan las masas de los ob(eto ob(etoss iguales iguales & calcul calcule e un promedi promedio o para cada grupo" Represente Represente los datos en en un cuadro cuadro & compare compare los pesos pesos promedios promedios obteni obtenidos dos de los ob(etos ob(etos en cada una de las balanzas balanzas & obteng obtenga a el coefic coeficien iente te de variación"
-" 0" 7" 8" 9"
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RESULTADOS -" Realic Realice e un cuadro comparat comparativo ivo,, indican indicando do los diferen diferentes tes pesos promedi promedio o de un mismo ob(eto en los diferentes tipos de balanzas & describa mediante la estad'stica descriptiva b%sica las variaciones & posibles fuentes de error" 0" Compar Compare e sus resulta resultados dos & analic analice" e" • • •
CUESTIONARIO • •
-" 0" 7" 8"
Con sus palabras :Cu%l :Cu%l fue la secuenc secuencia ia realiza realizada da para pesar pesar los ob(eto ob(etoss en cada una de las balanzas; :A que que se le llama llama
forma forma se obtiene; Se podr'a podr'a pesar ?9@"9 ?9@"9 gr" de glucos glucosa a en todas todas las balanza balanzass utilizada utilizadas; s; :Por qu>; :#n :#n qu> balanz balanza a se pesa pesar' r'an an con e$act e$actititud ud ?9 mg de pentobarbital , &a que este este es un anest> anest>si sico co mu& usad usado o en animal animales es de labora laborato tori rio; o; Adem%s indique cómo se leer'a el peso de este en la balanza"
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CUANTIFICACION CUANTIFICACION DE SAFRANINA •
INTRODUCCION • •
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La determinación de la concentración de un compuesto particular que se encuentre en presencia de otros Bincluido o mezclado en otros, es un problema cotidiano durante cualquier investigación, para lo cual se emplean frecuentemente t>cnicas fotom>tricas por su sencillez & e$actitud" La Le& Lambert 1eer es un medio matem%tico de e$presar cómo la materia absorbe la luz" #sta le& afirma que la cantidad de luz que sale de una muestra es disminuida por tres fenómenos f'sicosD
-" La cantidad cantidad de materia materiall de absorción absorción en su su tra&ectoria tra&ectoria Bconcent Bconcentración ración 0" La distancia distancia que que la luz debe debe atravesar atravesar a trav>s trav>s de la muestra muestra Bdistan Bdistancia cia de la tra&ectoria óptica 7" La probabilid probabilidad ad de que el el fotón de esa amplitud amplitud partic particular ular de onda onda sea absorbido por el material Babsorbencia o coeficiente de e$tinción •
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#sta relación puede ser e$presada comoD
A = εdc 6onde A + E + d + c + •
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Absorbencia
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Coeficiente molar de e$tinción
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6istancia en cm
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Concentración molar
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Con base en que la absorción de luz por una sustancia en particular ocurre a una determinada longitud de onda & que adem%s la concentración de dic!a sustancia guarda relación con la luz que absorbe, se !an desarrollado los m>todos fotocolorim>tricos que son tiles en el an%lisis qu'mico para la identificación & cuantificación de dic!as sustancias"
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Transmitancia A medida que un !az de luz atraviesa un medio absorbente, la cantidad de luz absorbida en cualquier volumen es proporcional a la intensidad de luz incidente multiplicado por el coeficiente de absorción" Consecuentemente, la intensidad de un !az incidente decae e$ponencialmente a medida que pasa a trav>s del absorbente" #sta relación cuando se e$presa como Le& de Lambert esD
T = 10-εcd or T = 10 -A •
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6onde T •
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Transmitancia
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Coeficiente molar de e$tinción
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Concentración molar del absorbente
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6istancia en cm
+ E + c + d +
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#n un enfoque simplificado, la transmitancia puede ser e$presada como la intensidad de la radiación incidente, Io, que divide a la luz emergente de la muestra, I" Se refiere a la relación IFIo como transmitancia o sencillamente T"
• • •
Absorción La transmitancia puede ser trazada en relación a la concentración, pero la relación no es lineal" #l logaritmo negativo en base -@ de la transmitancia s' es, sin embargo, lineal con la concentración" 6e esta manera, la absorción es medida comoD •
A = -o!10 " #I Io$ or A = -o! 10 "T$
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PRACTICAS Los m>todos fotocolorim>tricos son aquellos en los que se mide directamente la intensidad del color de la sustancia en función de la capacidad que tiene esta para absorber la luz de una longitud de onda espec'fica" #ste m>todo se aplica tanto a soluciones coloridas como incoloras"
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OBJETIVOS •
-" /ue el alumno aprenda el uso, mane(o & cuidados del espectrofotómetro & fotocolor'metro" 0" /ue elabore una curva patrón & la emplee para determinar la concentración de una muestra problema" 7" /ue determine la importancia del uso de la colorimetr'a en la investigación en 1iolog'a" • • • •
MATERIAL • •
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-9 tubos de ensa&e de -7 $ -89 mm 0 pipetas de 9 ml - vaso de precipitados de -@@ ml 7 pipetas de -ml -F-@@ 0 pipetas de -@ ml - gradilla
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REACTIVOS #tanol al ?GH B09@ml Piseta con agua destilada B9@@ml
Solución problema de Safranina Solución de Safranina J -@ .8 gFml 2Papel 5ilim>trico 2Toallas de papel
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APARATOS *otocolor'metro Klett. Summerson con filtro verde #spectrofotómetro
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25aterial Proporcionado por el alumno
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DESARROLLO •
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PRACTICAS -" 6istribu&a los tubos Bpreviamente numerados, en la gradilla" Prepare los tubos por duplicado 0" Adicione los volmenes que se indican en la tabla" T
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0 7 8 9 G
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%
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StocM de Agua Safranina 6estiladaBmL B7 [email protected] gFmL ............ -@"@@ @"@9 ?"?9 @"-@ ?"?@ @"0@ ?"N@ @"8@ ?"G@ @"N@ ?"0@ 10 &L d' ( )o*c+, .ro/'&( d' coc'r(c+, d')cooc+d( d' )(r(+( •
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7" tilice como blanco el tubo numero - & calibre a cero en el fotocolor'metro con filtro verde" #l espectrofotómetro a 90@ nm" 8" 6etermine las "K" & Abs" Para los tubos 0 al G encada aparato" 9" Con los valores obtenidos complete la tabla & constru&a la curva patrón graficando las Abs" Para los tubos 0 al G en cada aparato" • • • • • • • • • • • • • •
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T13
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Conc"Q g
PRACTICAS "K"
BIOLOGÍA…
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A1S
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TRAS
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G" 6etermine el valor en "K" & de Absorvancia de la solución problema" " Interpole en la gr%fica los valores de la solución & determine su concentración" •
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RESULTADOS 3btenga la concentración de la solución problema Compare el mane(o & la e$actitud entre los dos aparatos de medición" Compare los resultados & realice el an%lisis respectivo"
− − − • •
CUESTIONARIO •
-" 0" 7" 8"
Se4ale las partes caracter'sticas de un espectrofotómetro comn" :/u> entiende por absorbancia, transmitancia & unidades Klett; :Cu%les son las diferencias entre un fotocolor'metro & un espectrofotómetro; :/u> !ar'a para determinar la concentración de safranina si no conociera la longitud de onda a utilizar;
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1I1LI3ORA*IA
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.illiams,1"L" & ilson, K" -?N-" Principios & t>cnicas de bioqu'mica e$perimental" 35#OAD 1arcelona #spa4a
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MICROSCOPIA •
INTRODUCCION •
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PRACTICAS #l estudio de microorganismos, de c>lulas o de sus organelos requiere del empleo de microscopios, por lo que el aprender a usarlo es indispensable para el traba(o de laboratorio" •
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n microscopio compuesto fotónico cuenta con dos grupos de lentesD ob(etivo & ocular, utiliza la luz visible como fuente de iluminación" sando este microscopio se pueden e$aminar muestras mu& peque4as as' como detalles finos, & en algunos casos microestructuras2 •
na serie de lentes graduadas & las distancias de foco apropiadas, permiten la obtención de una imagen muc!as veces m%s grandes que la muestra" #sta amplificación se lleva a cabo cuando un !az de luz de la fuente de iluminación pasa a trav>s del condensador, donde los ra&os incidentes se compactan en un peque4o espacio en el punto focal de la lente ob(etivo, atravesando la muestra, donde es dirigida a la lente ocular & de esta al observador" •
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OBJETIVOS •
-"./ue el alumno aprenda el uso adecuado de los microscopios & adquiera destreza en la preparación de muestras 0"./ue asimile los conceptos de aumentos totales, poder de resolución, distancia de traba(o, 'ndice de difracción, iluminación" 7". /ue identifique la utilidad del microscopio en el que!acer del biólogo •
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MATERIAL • • • • • • • • • • • • • •
G tubos de ensa&e G tubos de goma 5icroscopio estereoscópico 5icroscopio óptico G pipetas Pasteur - ca(a de Petri 0 agu(as de disección C%mara de eubauer -@ cubreob(etos2 -@porta ob(etos2 ava(a de rasurar2 Lancetas2 2Papel celof%n de colores2
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2Papel, milim>trico albanene2 2Papel seda2 Piseta con agua destilada
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REACTIVOS Aceite de inmersión Azul de metileno Ro(o neutro @"@@-H 25uestra Bagua de c!arco, sangre, • • • •
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PRACTICAS Cultivo de levadura 25aterial proporcionado por el alumno
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Insectos, flores, suelo, !o(as de alcatraz, Siempreviva, cebolla, semen, papa2 •
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DESARROLLO •
-" Identifique cada parte del microscopio & determine cu%l es su función" 0" Realice preparaciones frescas, colocando una gota de la muestra sobre el portaob(etos 7" Coloque lentamente el cubreob(etos sobre la muestra, evite la formación de burbu(as" 7" 1a(e la platina, lentamente, !asta el tope con la a&uda del tornillo macrometrico & coloque la preparación sobre ella, su(>tala con las pinzas" 8" #ncienda la l%mpara, girando el revólver coloque el ob(etivo de menor aumento B-@J & eleve, lentamente, la platina con el tornillo macrometrico, !asta el tope, de tal manera que pueda visualizar la imagen & enfoque con el tornillo microm>trico lentamente la imagen !asta que pueda apreciar una imagen n'tida" 9" tilice los tornillos de la platina Bse puede identificar por el vernier que este posee, para desplazar la preparación & localizar el ob(eto deseado" G" Si requiere ma&or aumento, cambie con el revólver sin subir o ba(ar la platina, la posición del ob(etivo de 8@$ & enfoque la imagen con el tornillo microm>trico" " Para emplear el ob(etivo de inmersión gire el ob(etivo de 8@J, con a&uda del revólver, & deposite sobre la preparación una gota de aceite de inmersión, gire el revólver, nuevamente, para colocar el ob(etivo de inmersión sobre la gota & observe, si es necesario enfoque con el tornillo microm>trico N" Realice otra preparación depositando una gota de ro(o neutro o azul de metileno sobre la muestra & repita la actividad desde el paso 7" Co&.(r' ( +&(!' co ( o '3+d( ?" Para observar la muestra de sangre realice un frotis depositando una gota de sangre, que obtendr% limpiando la &ema del dedo con alco!ol & pinc!ando con una lanceta, coloque una gota de sangre en el e$tremo del portaob(etos, ponga el e$tremo de otro portaob(etos cerca de la gota para que se ad!iera a >l & arrastre el portaob(etos en un movimiento continuo para formar una capa delgada sobre este" O/)'r4' o) d+'r'') +.o) d' c5*() 6 d+/78'()2 •
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PRACTICAS • •
Importante: emplee una nueva en cada ocasión y deposite las lancetas
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usadas así como todo el material que haya estado en contacto con sangre o cualquier otro fluido corporal, en un recipiente con cloro comercial al 3% y manténgalo ahí durante 20 minutos antes de lavarlo o desecharlo
• •
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-@" Para contar c>lulas deposite una gota de levaduras sobre la c%mara de eubauer o recuento leucocitario & ponga el cubreob(etos sobre ella" Coloque en la platina & utilice el ob(etivo de -@J, enfoque !asta observar la cuadricula & las c>lulas sobre ellas" bique el cuadro central & cuente el nmero de c>lulas en 9 de las 09 subdivisiones que observa"
•
Cálculos: Sume el número de células por cuadro, divídalo entre cinco, para obtener el promedio multiplique este por 25 para obtener el total de las células en el recuadro central que equivale a una diezmilésima de mililitro. El resultado anterior se deberá multiplicar por 1 para obtener el número de células por mililitro. • •
--" Ponga una flor o insecto sobre una ca(a de Petri & colóquela en la platina del microscopio #stereoscópico, encienda la l%mpara & enfoque con el tornillo microm>trico" 6isgregue con agua & trate de localizar estructuras" 6ibu(e lo observado
•
• •
RESULTADOS 6ibu(e la im%genes observadas con & sin colorante 6e las c>lulas observadas en el frotis sangu'neo dib(elas & se4ale sus nombres Indique el numero de c>lulas que contó al usar la C%mara de eubauer & muestre la operación realizada para esto •
CUESTIONARIO • • • •
-" Indique en que consiste la I*&+(c+, 9:;'r 0 :/ue limita el poder de resolución del microscopio fotónico; 7" :Cu%l es ma&or aumento que puede alcanzar un microscopio fotónico; 11
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BIOLOGÍA…
PRACTICAS 8" :/u> importancia tiene el microscopio estereoscópico en la biosistem%tica;
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BIBLIOGRAFIA • •
.illiams, 1"L" & ilson,K" -?N- & principios & t>cnicas de bioqu'mica e$perimental" 35#OA" 1arcelona #spa4a"
• •
1arrera #scorcia ector, Crdenas Re&gadas Rodolfo" -??, <#l microscopio 3ptic=o" P & U editores, 5V$ico NNpp
• •
Castillo 5orales Oabriela Bedit, 0@@8, #nsa&os To$icológicos W 5>todos de #valuación de Calidad de Aguas Centro Internacional de Investigaciones para el desarrollo FInstituto 5e$icano de tecnolog'a del agua 5>$ico -N? pp
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PRACTICAS • • • • • • • • • •
POTENCI
INTRODUCCION • •
Las concentraciones de iones !idronio & !idro$ilo son importantes en los sistemas biológicos porque los protones son libre para moverse del 73X asoci%ndose con grupos cargados negativamente Bneutraliz%ndolos & los iones !idro$ilo disponibles neutralizaran a los grupos cargados positivamente" 6ebido al efecto del p en la ionización de los grupos b%sicos & %cidos de las prote'nas & otras mol>culas biológicas, el p de los l'quidos intra & e$tracelular debe mantenerse entre l'mites estrec!os en los que pueden actuar los sistemas enzim%ticos" Por lo que la determinación del p es indispensable en el an%lisis de cualquier proceso biológico"
•
OBJETIVO • •
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-". /ue el alumno determine la concentración de iones !idrogeno Bp por los m>todos colorim>trico Bempleo de sustancias indicadoras & potenciometrico Bfuerza electromotriz" 0". /ue el alumno identifique una solución amortiguadora"
•
. . . . . . . . .
MATERIALES - probeta de -@@ ml 7 pipetas de -@ml 0 pipetas de - ml 1alanza vernier - gradilla - piseta con agua destilada - varilla de vidrio -@ tubos de ensa&e 0 pipetas de 9ml
. . ml . . . .
- embudo de pl%stico c!ico vasos de precipitados de 9@ - termometro 9 ml de CL - Papel filtro - APARATOS Potenciómetro
- REACTIVOS 13
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PRACTICAS . 1uffer de referencia Bsol" . Olicina -@ m5 . 5uestra2 Blec!e, refresco, Calibradora . 0@ ml a3 -@ m5 vinagre, (ugos de frutas naturales, . 0@ml K0P38 -@ m5 suelo . 9 ml A3 - . . -@ ml de azul de bromotimol al . @"-H . . . . -
25aterial proporcionado por el alumno
DESARROLLO .
!
" #$%&% C %'%()"#$()C% * .
. -". Prepare una serie de patrones de p coloreados, como se se4ala en el siguiente cuadro" . T 9>PO? N(O >O COLOR P UBO 10M&"&L$ 10&M "&L$ . . 9"@ . .... . 9"@ . Amarillo . Ycido . 0 . 9"@ . @"-9 . 8"N . Uerde . eutro 9 . 7 . ..... . 9"@ . 9"@ . Azul . 1%sico . 0" A4ada posteriormente 9 gotas de azul de bromotimol a cada tubo" 5ezclar cuidadosamente el contenido, observe los valores espec'ficos de p para cada color en el cuadro 0 de la sección de p" 7" Para medir el p de las muestras l'quidas, coloque -@ ml de esta en tubos de ensa&e & adicione 9 gotas del indicador azul de bromotimol al tubo de ensa&e, mezcle & se busque el color equivalente o m%s cercano en la serie de patrones que preparó en el punto -" 8" Anote el valor apro$imado del p de sus muestras en una tabla para comparar contra el siguiente m>todo" 9" La muestra de suelo se prepara de la siguiente maneraD Pese 9 g" de >ste en un vaso de precipitados & se agregue 7@ ml de agua destilada, agite & de(e reposar por 9 minutos" G" Si es necesario filtre a trav>s de papel con a&uda de un embudo, determine el p como se indica en el paso 0" . . !étodo "otenciométrico D . 14
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PRACTICAS -" Calibración del potenciómetroD Lave el electrodo con agua destilada, colóquelo en un vaso de precipitados con -@ ml de buffer de referencia Bp 8, ó -@, & de acuerdo al instrumento mida la temperatura de la solución & a(uste el valor correspondiente en el aparato, el p se regula, colocando la perilla en s de cada determinación" . . . 7" 6eterminación del p de las muestrasD coloque -@ ml en vasos de precipitado, introduzca el electrodo & coloque la perilla en posición todo colorim>trico & potenciom>trico" Analice & discuta la veracidad de los resultados" . .#n otro cuadro comparativo anote el volumen requerido de %cido ó %lcali para cambiar una unidad de p a la muestra de alMa.seltzer & agua destilada, compare los resultados & e$plica" . Orafique el volumen de %cido ó %lcali contra p de la solución de glicina, e interprete la curva de titulación" . - CUESTIONARIO -" :/u> venta(as !a& al medir p potenciom>tricamente a diferencia de la colorim>tricamente; 0" :#star'a en desuso determinar el p colorim>tricamente; :Por qu>; 7" :Considera que el alMa.seltzer es una solución amortiguadora; :Por qu>; 8" :Por qu> es importante para un ser vivo regular su p; . R'4+)(r (.5d+c') .(r( )'!*+r o) +)r*c+4o) d' *)o d' o) Po'c+,&'ro) (( Mod'o)1>0 6 11 Or+o 2 15
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. . AISLAMIENTO DE CLOROPLASTOS @ CUANTIFICACIcnica mu& valiosa para el estudio de la morfolog'a, bioqu'mica & fisiolog'a de los elementos que conforman a las c>lulas, se requiere de aparatos como la centrifuga refrigerada para asegurar el buen estado de los organelos durante el aislamiento, pero se pueden separar fracciones ricas en determinados organelos, utilizando la centrifuga cl'nica" . Los cloroplastos son los organelos encargados de realizar la fotos'ntesis, en plantas, algas & protozoarios" #ste proceso consiste en sintetizar azucares utilizando la energ'a luminosa, que puede captar gracias a pigmentos como las clorofilas que se encuentran incluidas en las membranas tilacoidales de los cloroplastos" Las concentraciones de clorofilas cnicas espectrofotom>tricas basadas en la le& de 1eer & Lambert, sin necesidad de aislarlas & purificarlas lo cual es lento & dif'cil debido a la naturaleza de la sustancia misma & a limitantes de car%cter t>cnico" .
- OBJETIVO . -". /ue el alumno evale importancia de la centrifugación diferencial como t>cnica para separar componentes celulares para su posterior estudio . 0". /ue determine la concentración de clorofila
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. 0 vasos de precipitados de 09@ ml . - mortero con pistilo, previamente fr'os . 7 pipetas de 9 ml . 7 pipetas de -ml . - embudo peque4o de vidrio . - piseta con agua destilada . - probeta de 9@ ml . Oasa & papel filtro . . APARATOS 1alanza granataria de dos platos . 1alanza granataria de un plato . Centrifuga cl'nica . 5icroscopio óptico . - REACTIVOS . Solución de aCl a @"79 5 . Solución amortiguadora tris.Cl @"0 5 p N . Acetona al N@H . 9@ gr apro$imadamente de !o(as frescas & verdes2 Bespinacas, acelgas . - DESARROLLO . . -". Lave las !o(as con agua corriente & sacudirlas perfectamente . 0". 5ant>ngalas en frio dentro de una bolsa de pl%stico obscura para asegurar su turgencia . 7". Remueva las nervaduras m%s grandes & pesar 7@ g" . 8".Corte fragmentos peque4os & molerlos en un mortero con G@ ml de solución de aCl @"795 & -@ ml de solución amortiguadora" . 9". 5acere firmemente por un periodo no ma&or de 8 minutos Bsi lo (uzga a necesario macerar en dos partes" Coloque el mortero sobre el !ielo para inactivar las enzimas !idrol'ticas que se liberan durante la ruptura celular" . G". *iltre sobre cuatro capas de gasa, recuperando el !omogenizante en el vaso de precipitados" . ". Antes de centrifugar es necesario equilibrar el peso de los tubos en la balanza granataria de dos platos" . N". Centrifugue durante 7 minutos a 9@@ rpm para sedimentar fragmentos de te(ido & organelos grandes . ?". 3bserve muestras al microscopio iniciando con el ob(etivo de menor aumento
-@". Recupere el sobrenadante & centrifugue a 7@@@ rpm durante -@ minutos en esta centrifugación la mayor parte de los cloroplastos sedimentan . --". Resuspenda la pastilla Bpellet de cloroplastos en 0ml de la solución de aCl @"79 5", con una pipeta de - ml suave & lentamente !asta que la pastilla se disgregue completamente . -0". Adicione 9ml mas de aCl @"79 5, a cada tubo . -7". Centrifugue a 7@@@rpm durante -@ minutos para lavar los cloroplastos . -8". 6ecante con cuidado el sobrenadante & resuspenda todas las pastillas en 0ml totales de amortiguador BTris Cl @"05,pN para concentrar los cloroplastos en una sola muestra . -9". 6e la muestra anterior se tomar% @"- ml para adicionarlo a 0@ ml de acetona al N@H para solubilizar la clorofila . -G". *iltre a trav>s de papel filtro . -".5ida en el espectrofotómetro utilizando como blanco acetona al N@H, a GG7 & G89 nm que corresponde a las longitudes de absorbancia m%$ima de las clorofilas
.
. Sustitu&a los valores de absorbancia en las siguientes formulas & determinar la concentración de clorofila total, clorofila nga los valores en miligramos por mililitro Clorofila total + @"@0@0 Babs" G89 X@"@@N@0 Babs GG7 + mg clorofila F ml Clorofila papel (uega el aCl & el tris. Cl en el asilamiento de los cloroplastos; :Cu%l es la importancia de una metodolog'a como la centrifugación; :Por qu> se emplean longitudes de onda de G89 & GG7 mm, para cuantificar clorofila & como se relaciona con la le& de 1eer; . - BIBLIOGRAFIA . .ipMins, 5"* & 1aMer, "R" -?NG P!otos&nt!esisD energ& transductionD a practical approac!, IRL, prees, 3$ford" . . • • •
-" 0" 7" 8"
- PRACTICA BIOMEDICA
. #
. .
INTRODUCCION Las t>cnicas seleccionadas constitu&en parte de la tecnolog'a utilizadas en los laboratorios de an%lisis cl'nicos" 6entro de las razones que llevaron a esta selección se puede mencionarD la interrelación teórica & pr%ctica entre todas ellas, de forma tal que los resultados de cada fase a&udan en la discusión final de toda pr%ctica" Los aparatos & equipos son usados en varios momentos con el fin de e(emplificar en m%s de una ocasión su uso" W por ltimo, la importancia de utilizar tecnolog'a es que se puede discutir lo visto en clase sobre el ciclo ciencia $sica#ciencia aplicada#tecnología OBJETIVOS #l alumno integrara los conocimientos referentes al uso & mane(o de los aparato & las t>cnicas m%s comunes de biom>dica"
. • • • • • •
*AS# ID Preparación de reactivos" *AS# IID #$amen de orina" *AS# IIID Curva de calibración" *AS# IUD 6eterminación de glucosa en sangre" *AS# UD Recuento leucocitario *AS# UID An%lisis bacterio@logico de orina"
. # #
. . .
&'(I)I*&*+ "-+)I& e recomienda que previo a la reali.ación de la practica el alumno tenga conocimiento del mane/o y uso de los instrumentos a utili.ar, y revise los siguientes temas: los leucocitos su función, importancia y técnicas de conteo1, las $acterias su descu$rimiento e importancia en la relación con el ser humano1, el rion su función y la importancia del eamen de orina1 y la dia$etes que es, su descu$rimiento y alteraciones en el cuerpo1
FASE I PREPARACIN DE REACTIVOS
R'(c+4o)D Acido ac>tico al 7H 3$alato de potasio & amonio Reactivo de 1enededict . . . M'd+o)D Agar St" --@ Agar 5uller inton"
• • •
• •
.
W diverso material est>ril para la fase de bacteriolog'a
.
5atraz aforado de 9@ ml
.
Ycido ac>tico glacial
.
0 5atraces aforados de -@@ ml
.
Carbonato de sodio an!idro
.
0 Pipetas de 9 ml
.
Citrato de sodio
.
7 *rascos %mbar para reactivo de -@@ ml
.
Sulfato de cobre
.
0 5atraces #rlenme&er de 9@ ml
.
3$alato de amonio
.
8 5atraces #rlenme&er de 9@@ ml
.
3$alato de sodio
.
9 Tubos de ensa&e de -72-@@ con tapón de baquelita
.
Agua destilada
.
Pipeta de - ml
.
Azul de metileno en solución
.
G Ca(as Petri
.
Agar St" --@
.
Oradilla
.
Agar 5uller inton
.
Probeta de -@@ ml
.
.
8 Abatelenguas
.
.
8 Isopos
.
.
Papel estraza
.
.
Cinta testigo para esterilización
.
. . . .
Piseta con agua destilada
.
. .
PREPARACItico glacial & se afora con agua destilada" Se le agregan unas gotas de azul de metileno nicamente para darle una ligera tonalidad azul" La solución se guarda en un frasco para reactivo" OALATO DE AMONIO @ DE POTASIO Se colocan en un matraz aforado de -@@ml los siguientes reactivosD
3$alato de amonio -"0g 3$alato de potasio @"Ng Agua destilada -@@ml . La mezcla se guarda en un frasco para reactivo" . 6e esta solución se colocan los tubos de ensa&e @"9 ml & se meten a la estufa !asta la evaporación total" . . . . ! ( E+C$)% -EE&)C$ . . Se disuelven -@g de Carbonato de sodio an!idro & -"7g de Citrato de sodio en @ml de agua destilada" Se disuelve por separado, -"7g de Sulfato de cobre en -@ml de agua destilada & se vierte esta solución en la de Carbonato de citrato, con agitación constante" Se afora a -@@ml" #l reactivo se guarda en un frasco etiquetado" . - M'd+o) d' c*+4o 6 ')'r++(c+, . . Se lavan perfectamente las ca(as Petri & se en(uagan con abundante agua se les aplica un segundo en(uague con agua destilada" Se secan al aire & se envuelven con papel estraza una por una" Se les pone cinta testigo & se colocan en autoclave" . Se preparan los medios de cultivo de acuerdo con las especificaciones del fabricante en los matraces #rlenme&er de 9@@ml, se les coloca un tapón de gasa & se depositan en el autoclave" . Se esteriliza todo el material de acuerdo con las instrucciones para el uso del autoclave" . #n condiciones de esterilidad se vac'an los medios a las ca(as B0 por cada uno & se refrigeran" Sobraran dos ca(as para la fase G" . - FASE II EAMEN DE ORINA . . - MATERIAL - REACTIVOS . Uasos de precipitados de 9@ ml . Reactivo de 1enedict . Piseta con agua destilada . . Tubos para centrifuga B0 - MATERIA BIOLOGICO . Tubos de ensa&e B7 . 3rina de paciente sano . 5ec!ero bunsen . 3rina de diab>tico . 1a4o 5ar'a . • • •
. Tripie - APARATOS . Pipeta de -ml . 5icroscopio . Pipeta de 9ml . pmetro . Portaob(etos B9 . Centr'fuga . Cubreob(etos B9 . . . . - EAMEN DE SEDIMENTO . -" Se !omogeniza la orina en el recipiente que la contiene suavemente 0" Se colocan 9ml de orina en un tubo para centrifuga & se centrifuga a 09@@ rpm durante 9min" 7" Se decanta & se pone el sedimento en un portaob(etos" Se coloca el cubreob(etos con una gasa o papel absorbente se limpia el e$ceso" Se coloca al microscopio & se e$amina" 8" Se buscan principalmente leucocitos, c>lulas epiteliales, levaduras & bacteria" . - DETERMINACI
PRUEBA PARA SUSTANCIAS REDUCTORAS Aun cuando esta prueba puede dar positiva con cualquier tipo de substancia reductora, es una buena indicadora cualitativa de la presencia de glucosa en orina"
. . .
-". Se pone a !ervir agua en ba4o 5ar'a 0". #n un tubo de ensa&e lo suficientemente grande para que sobresalga del ba4o 5ar'a, se mezclan 9ml de reactivo de 1enedict & @"9ml de orina" 7". Se pone en ba4o de agua !irviente durante 9 min 8". Se de(a enfriar a temperatura ambiente & se lee de acuerdo al siguiente cuadro
. . . . . . .
Color Azul Azul verdoso Uerde
. . . .
Resultado B.negativo B!s !uellas BXapro$" @"9H de substancia reductora
. . . . . . . . -
Pardo verdusco . BXXapro$" @"- H de substancia reductora Amarillo . BXXX apro$" -"9 de substancia reductora Ro(o ladrillo . BXXXX apro$" de 0"@H de substancia reductora I'r.r'(c+, d' coor') o/'+do) co ' r'(c+4o d' B''d+c2
RESULTADOS
.
.
Reporte los resultados de acuerdo a la tabla siguiente, & discuta los valores obtenidos con los valores que normalmente se reportan en la bibliograf'a para pacientes sanos
.
! . . . . . . . . .
-
(esultados P(c+'' No21 p Reacción benedict Sedimento Leucocitos 1acterias Levaduras C>lulas epiteliales
-
R')* (do)
-
P(c+'' No>
-
. .
. .
. .
. . . . .
. . . . .
p Reacción 1enedict Sedimento Leucocitos 1acterias Levaduras C>lulas epiteliales
R')*(d o)
. . . . .
FASE III CURVA DE CALIBRACI
.
. . . . . . . . . . . . . -
MATERIAL 5atraz aforado de -@@ ml [eringa de -@ ml Tubos de ensa&e -9 cm Pipeta de -ml Pipeta de 9 ml Pipeta de -@ ml 5ec!ero 1unsen Tripie 1a4o 5ar'a
REACTIVOS
. . . . . . .
Olucosa Agua destilada Reactivos de orto.toluidina en acido ac>tico Aparatos #spectrofotómetro con celda
.
.
PREPARACI
.
.
. .
. .
-
-
-
C*r4( d' c(+/r(c+, Se prepara una serie de tubos de acuerdo con el siguiente cuadro - T*/o - P(r, d' - A!*( - G*co)( !*co)( d')+(d( - "&! ' "&L$ "&L$ 100&L$ . . @"@ . 7"@ . @ . 0 . @"9 . 0"9 . 9@ . 7 . -"@ . 0"@ . -@@ . 8 . 0"@ . -"@ . 0@@ . 9 . 7"@ . @"@ . 7@@ 6istribución de reactivos & los equivalentes en glucosa para los tubos del al 9 e(D al tubo 0 se le coloca @"9 ml de patrón de glucosa, mas 0"9 ml de agua destilada, & esto equivale a 9@ g de glucosa en -@@ ml" #sta equivalencia servir% para trazar la curva patrón Con los tubos &a preparados & perfectamente marcados se procede de acuerdo con la siguiente tabla, de tal forma que se rotulan otros 9 tubos para la reacción a los cuales se les marcara como G, , N, ? & -@ ! $ ! $ ! $ubo ! $ ! $ ! $ T* /o u u / u u u ) b b b b b o o o o o 1 2 0 5 ! m ' 3 . . . . . . 9 To *+d +( . @" . ... . ........ . .. . ... . 9 T* ... ..... .. ... /o ... .. ... H .. .. ... .. . . .. . @" . ........ . .. . ... . 9 T* .. ...... .. ... /o .. .. ... % .. .. ..
-
T* /o
.
-
T* /o
.
-
T* /o 10
.
. . .
. .
. .
.. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. . .. .. .. .. .
.
... ... ... ...
.
@"-
.
... ... ... ...
.
........ ........
.
... ... ... ...
.
........ .....
.
.. .. .. .. .
.
... ... ... ...
.
9
.
... ... ... ...
.
9
.
@" -
.
9
Preparación de los tubos del G al -@ e(D al tubo G se le coloca @"- ml del tubo - & 9 mL de ortotoluidina Agite los tubos & colóquelos en ba4o 5ar'a a ebullición & cuente N minutos" #l nivel del agua debe ser superior al nivel de los reactivos B No d' o) */o)" Saque los tubos del ba4o & enfr'elos al c!orro de agua Lea la longitud de onda de G7@ nm o con el filtro correspondiente Bro(o a(ustando al -@@H de transmitancia o cero de absorbancia con el blanco de reactivos Btubo G Trazar en papel milim>trico la curva de calibración con los datos obtenidos en el laboratorio, de la siguiente formaD
. 0.8 0.6 Absorvancia
f(x) = 0.01x R² = 1
0.4 0.2 0 0 10 20 30 40 50 60 70 80 Glucosa (mg /100 mL)
. . . .
.. . .. .. .. .. . . @" -
. . . . . . . . . . . . .
. . . . . . .
FASE IV DETERMINACIril de -@ ml con agu(a [eringa de -@ ml Tubos con anticoagulantes Bo$alatos BPreparados en la fase - & 0 M('r+( /+o,!+co Sangre venosa reci>n obtenida A.(r(o) #spectrofotómetro con celda Centrifuga R'(c+4o 3rto. toludina
. - Proc'd+&+'o . -". Se obtienen -@ ml de sangre venosa de acuerdo con las instrucciones del profesor . 0". Se depositan 9ml en dos de los tubos con anticoagulante que fueron preparados en la fase . 7". Se !omogenizan suavemente durante 0 minutos . 8". no de los tubos servir% para la fase 9, por lo que se rotulara & se guardara en refrigeración" #l otro tambi>n rotulado, se trasvasara a un tubo para centrifuga & se centrifugara a 7@@@ rpm durante 9 minutos" . 9". Se rotularan los tubos como blanco & problema los cuales se les prepara de la siguiente forma . . - R'(c+4o - B(co - Pro/'&( . ............. . @"-mL - S*'ro .ro/'&( . @"- mL . ......... - A!*( d')+(d( . 9"@ mL . 9"@ mL - Oro-o*+d+( . Pr'.(r(c+, d' o) */o) /(co 6 .ro/'&( e("D al tubo blanco se le coloca @"-ml de agua destilada & 9"@ ml de orto.toluidina . . Se agitan & se colocan en ba4o de agua !irviendo durante N minutos al t>rmino de los cuales se sacan & se enfr'an al c!orro de agua . Leer la longitud de onda de G7@ nm a(ustando a -@@H de transmitancia o cero de absorbancia con el blanco reactivo, e interpolar el resultado en la curva de calibración elaborada en la fase anterior . - R')*(do) . Reporer el resultado obtenido & discuta sobre la importancia de la determinación de la glucosa en sangre, as' como la diferencia con la determinación de glucosa en orina, ventas & desventa(as en los m>todos" . . - FASE V RECUENTO LEUCOCITARIO . . 1ulbo parta pipeta Pasteur - M('r+( . C%mara de eubauer . Perlas de vidrio . Cubre!ematimetro . . Tubo de 9cm con tapón - M('r+( /+o,!+co . Pipeta de - ml B9 . Sangre venosa con . Pipeta Pasteur anticoagulante Bobtenida en la . Pipeta de -@ ml fase anterior
. .
A.(r(o) 5icroscopio R'(c+4o) Acido ac>tico al 7H Bliquido de dilución
. . . .
.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Oradilla
Proc'd+&+'o -". #n un tubo se colocan -"? ml de liquido de dilución Bacido ac>tico al 7H 0". #l tubo que contiene la sangre se !omogeniza suavemente durante min" Apro$imadamente & se toma @"- ml el cual se deposita en el tubo el liquido de dilución" Se le agrega una perla de vidrio & se agita fuertemente pero sin verter" 7". Inmediatamente despu>s de agitar, se toma con una pipeta Pasteur & se coloca una gota de la dilución en una sección de la c%mara de eubauer Bver prctica de 5icroscopio 8". Se coloca la c%mara en la platina del microscopio & se realiza el recuento
RESULTADOS Reporte los resultados de cada uno de los cuadrantes de las esquinas Realize los c%lculos correspondientes, considerando las dimensiones de la c%mara & el factor de dilución 6iscuta con base en la importancia del recuento leucocitario" Compare los resultados con los valores normalmente obtenidos para pacientes sanos, de acuerdo con la bibliograf'a
FASE VI ANÁLISIS BACTERIOLriles 0 Ca(as de Petri con St" --@
. . . . . -
0 ca(as de Petri con 5uller inton 0Asas de siembra M('r+( B+o,!+co 3rina de paciente sano 3rina de paciente diab>tico
A.(r(o)
. . . . .
Incubadora a 7 @c Autoclaves
R'(c+4o) Agar gelosa sangre Agar st --@
. . .
. . .
. . .
. . .
. . .
Se preparan 0 ca(as de Petri con medio Oelosa Sangre de acuerdo con las especificaciones del fabricante utilizando la sangre sobrante de la fase 9 Con el mec!ero encendido, se abre el frasco cerca de la flama & se coloca la tapa sin enroscar" #l frasco queda (unto al mec!ero" Se flamea el asa de siembra & se enfr'a en una orilla del interior de la ca(a de la flama, se quita la tapa del frasco con la orina & se toma una asa del esp>cimen" A continuación se siembra en el agar gelosa sangre por estr'a cerrada" Se repite la operación con el agar St --@ Se esteriliza el asa al fuego, se enfr'a en el agar a una orilla de la ca(a, procurando no tocar la muestra" na vez fr'a, se a'sla mediante estr'a abierta" Las ca(as se incuban durante 08 !oras, al cabo de las cuales se revisan para detectar el desarrollo" #n caso de detectarse bacterias patógenas Bcomo ser'a el crecimiento de microrganismos en St --@ se proceder% a sembrar en estr'a cerrada en las ca(as de 5uller & inton, para efectuar el antibiograma" #ste consiste en colocar en un multidisco de antibióticos sobre la placa de agar 5"" despu>s de la siembra & leerlo a las 08 !oras"
R')*(do) #n todos los casos puede !aber desarrollado en el medio de gelosa sangre, no as' en el de st" --@ que es selectivo para taphylococcus" 6iscutir los resultados con la investigación bibliogr%fica
B+/+o!r(K( .1aMer, f" & 5 1reac!" R" --?@ 5anual de Tecnicas de 5icrobiologia 5edica . 1rads!a\, L"[" -?G 5icrobiologia de Laboratorio" #l 5anual 5oderno 5e$ico . . Collins C & l&ne 5P -?N? 5>todos 5icrobiológicos, Acribia #spa4a . .Lennette e ! -?N 5anual de 5icrobiolog'a Cl'nica" Panamericana" Argentina . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . .
.
TABLA PERIÓDICA DE LOS ELEMENTOS
.
. . . . . Cada
elemento químico contiene un enlace que explica sus propiedades químicas, efectos sobre la salud, efectos sobre el medio ambiente, datos de aplicación, fotografía y también información acerca de la historia y el descubridor de cada elemento. También puede consultar el apartado especial de terminología de los efectos de las radiaciones sobre la salud.
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I
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I
. H
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I
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I
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Elija los elementos por s nom!re" s#m!olo $ n%mero at&mi'o.
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in'e a*# para a''e+er a la istoria +e la ta!la peri&+i'a.
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Rea+ more, ttp,--.lennte'.es-perio+i'a-ta!la/ perio+i'a.tmix22R
. . . . . . . . . . . . . . . .
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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Casta4eda, R" S", 5" 5ontiel 5" & R" /uesada C" -?NG" Ser estudiante coordinación de apo&o & servicios educativos" A5.S#P Centeno, A"[" -?N- tecnicas en el proceso de investigación #d" Contraste" 5e$ico Coc!ram, O" \" & O" co$ 5" -??- dise4os e$perimentales Coleman, " -?N7" La biolog'a en siglo JIJ" Problemas de forma, función & tranformacion" *ondo de cultura económica 5e$ico C!almers, A" -?N8 :/u> es esa cosa llamada ciencia; Siglo veintiuno editores" 5e$ico C!avez, C"U" -?N 5etodos de investigación 0" Publicaciones cultural 5e$ico 6&a, R"A" -??@" Como escribir & publicar traba(os cient'ficos" #d" 3rganización panamericana de la salud" as!inton, eua *inne&, 6"[" -?N@ statistics for biologists" Science paperbacMs Oomez, P"A" -?N7" La investigacion en biologia" Ciencia & desarrollo o" 8?D G.0@ Oomez, R"[" -?N7 el m>todo e$perimental" arla me$ico" Oonzalez, R" S" -??@ 5anual de redacción e investigación" #d trillas Outierrez S", p" & Sanc!ez del C", *" -?N7" otas de investigación documental" AC" 6epto" 6e zootecnia" 5e$ico Outierrez, A" C" -?NG" Introducción a la metodolog'a e$perimental" Limusa 5e$ico" arre, R" -?@" #l m>todo de la ciencia" Conse(o nacional de ciencia & tecnolog'a einz, 6" S" -??G" ueva gu'a para la investigación cient'fica" #d" niversidad Autonoma 5etropolitana nidad Joc!imilco ernandez S"R, *ernandez C", C" & baptista L" P" -??-" 5edologia de la investigación 5c Ora\ !ill odora, [" -?N7" Refle$iones sobre la !istriografia & el an%lisis social de la ciencia en america latina ciencia & desarrollo no 97D 97.9 Kit!le&, #"5" & P" Sc!ereiner [" -?N@" 5anual para elaboracion de tesis, monograifas e informes" #d" Scott, foresman & compan&" Kneller, O" *" -?N- la ciencia en cuanto a esfuerzo !umano" 3#5A editores" 5e$ico" LebedinsM&, 5" -?N- notas sobre metodolog'a" #diciones /uinto sol" Little, T"5" & *"[" ills" -?N?" 5etodos estadisticos para la investigacion en la agricultura trillas me$ico 5eda\ar , P"1" -?N8" Conse(os a un (oven cient'fico" *C#" 5e$ico Bcol" 1iblioteca (oven 5endez, R" I", 6" a!imira O", L 5oreno A" & C" Sosa de 5tz -?N8 el protocolo de investigación ed trillas 5ontiel, 5"5" -?NGadministracion del tiempo" Coordinación de apo&o & servicios educativos" A5.S#P" 5ontgomer&, 6" -??-" 6ise4os & an%lisis de e$perimentos" Orupo editorial iberoamericana
. .
3lea, *"P" & sanc!ez del C", *" -?7" 5anual de t>cnicas de investigación documental para la ense4anza media" #d esfinge 5e$ico
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
.
. Ap>ndice .
-
Gu3a 4ara 5l uso 5l 6m5ro (o5nci7m5ro) - Hanna mO 210
. .
12 Conectar el adaptador a la corriente el>ctrica & >2 /uitar la cubierta del electrodo de p 2 #n(uagar ambos electrodos Btemperatura & p con agua destilada ?2 Sumergirlos en una solución 1uffer con rango conocido 2 Prender el pmetro con el botón gris Bparte derec!a superior del aparato H2 #sperar a que se estabilice el p -S+ ' . *' )' '' ') +!*( ( d' B*'r co+*(r co () +d+c(c+o') !&e lo contrario, calibrar leer la si4uiente seccin C+')-(+C)633 %2 Sacar los electrodos del 1uffer & colocarlos en el brazo del pmetro , tapar solución 1uffer" 2 #n(uagar los electrodos con agua destilada & colocarlos en la solución problema 2 #sperar a que se estabilice & leer" 102 Si es m%s de una la solución problema sacar los electrodos, repetir los pasos & N !asta terminar" 112 Al finalizar, sacar los electrodos en(uagarlos, colocarle el capuc!ón al electrodo de p, colocarlos en su posición Bbrazo, desconectar"
!
.
-
. CALIBRACI10
. . . -
#l pmetro cuenta con 9 valores de p para calibrar B8"@-, G"NG, "@-, ?"-N & -@"@- & se puede calibrar con 1 6 #o > B*'r)"
PARA CALIBRAR PASOS
CON NICAMENTE 1
BUFFER A@ UE SEGUIR LOS SIGUIENTES
. 1. Conectar el adaptador, quitar la cubierta del electrodo de p, & en(uagar
ambos electrodos con agua destilada] introducirlos en una solución 1uffer con rango conocido, prender el pmetro Bbotón gris, esperar a que se estabilice el p 2. Presionar la tecla CAL !
!!!En el lado izquierdo de la pantalla, aparecen los indicadores C +'!
-78 1
.
- --- E ' (do d'r'c;o BUFFER P 6 ' 4(or %201 7" Si el buffer con el cual se va a calibrar no es de ese valor, presionar las
teclas
9C
9C , para seleccionar el 1uffer deseado"
8" #n el lado izquierdo de la pantalla, aparece %$ ( E+&: esperar a
estabilizar 2 Cuando aparezca ( E+&: & las iniciales C8" parpadeen en la pantalla , se
oprime el botón CFM G" #l valor del 1uffer aparece en la pantalla " Presionar el botón CAL , conclu&endo con la calibración"
.
12 >2 2 ?2 2 H2
- CUANDO SE USAN DOS BUFFERS Segur los pasos -al G anteriores Sacar el electrodo & en(uagarlo r%pidamente, colocar este en el segundo 1uffer, Si el buffer con el cual se va a calibrar no es de ese valor, presionar las teclas 9C 9C , para seleccionar el 1uffer deseado" #n el lado izquierdo de la pantalla, aparece %$ ( E+&: esperar a estabilizar Cuando aparezca ( E+&: & las iniciales C8" parpadeen en la pantalla , se oprime el botón CFM #l pmetro queda calibrado & muestra en la pantalla autom%ticamente para realizar mediciones" . - MENSAJES DE CALIBRACI
READ@
-
Confirmación requerida"
.
QRONG
-
Se detecta un 1uffer invalidado
-
QRONG OLD
-
#$isten inconsistencias actuales & los vie(os"
.
QRONG TEMPERATURE
-
La tempertura del 1uffer se encuentra fuera del rango definido
-
CAL INTV
-
SE REUIERE CALIBRACI
entre
los
par%metros
.
-
. G*K( .(r( ' *)o d' P;&'ro (( Mod 111
. -" Conectar el adaptador a la corriente el>ctrica & quitar la cubierta del electrodo de p, en(uagar ambos electrodos Btemperatura & p con agua destilada 0" Sumergirlos en una solución 1uffer con rango conocido 7" Prender el pmetro con el botón gris Bparte derec!a superior del aparato 8" #sperar a que se estabilice el p 9" Para seleccionar el programa que se requiera usar, presione ( +;E p, IS#F3RPBmU o 5U relativo . Para registrar la configuración de calibración de p presionar la tecla C +' " Para cambiar el 1uffer de calibración presionar las teclas de *lec!as de p correspondientes N" Para despe(ar la calibración Presione la tecla C +', & las iniciales C8" en la pantalla se mantienen un momento ?" Sacar los electrodos del 1uffer & colocarlos en el brazo del pmetro , tapar solución 1uffer" -@"#n(uagar los electrodos con agua destilada & colocarlos en la solución problema --" #sperar a que se estabilice & leer" -0"Al finalizar, sacar los electrodos en(uagarlos, colocarle el capuc!ón al electrodo de p, colocarlos en su posición Bbrazo, desconectar" . . . Para efectuar lecturas e$actas, asegurar que se tiene bien calibrado el pmetro & con los electrodos listos . Para compensación de temperaturaD !a& dos manerasD o ZAutom%tico sar el electrodo de temperatura (unto con el de p 5anualD Sin el electrodo de temperatura usar las teclas teclas 9C 9C , para seleccionar la temperatura deseada . . ! $ (+-+<+&% C% -78E(S =+-)$7+'ES 12 Conectar el adaptador, 0". /uitar la cubierta del electrodo de p, 7".#n(uagar ambos electrodos con agua destilada]8". Introducir en una solución 1uffer !abitual9". Prender el pmetro Bbotón gris & esperar a que se estabilice el p >2 Presionar las teclas de flec!as de p, !asta que parpadee en la pantalla BUFFER P 2 #l cambio del valor del 1uffer !abitual est% de acuerdo con la temperatura, entonces presione S#T & las teclas correspondientes de temperatura . No(D Los buffers !abituales est%n establecidos en el modo SE$7>
o
-
. . . CALIBRACI
. . . -
#l pmetro cuenta con 9 valores de p para calibrar B8"@-, G"NG, "@-, ?"-N & -@"@- & se puede calibrar con 1 6 #o > B*'r)"
PARA CALIBRAR PASOS
CON NICAMENTE 1
BUFFER A@ UE SEGUIR LOS SIGUIENTES
.
12 Conectar el adaptador, quitar la cubierta del electrodo de p, & en(uagar ambos electrodos con agua destilada] introducirlos en una solución 1uffer con rango conocido B"@- o G"NG , prender el pmetro Bbotón gris, >2 Cuando aparezca ( E+&: & las iniciales C8" parpadeen en la pantalla , se oprime el botón CFM /. Presionar la tecla CAL -
!!!En el lado izquierdo de la pantalla, aparecen los indicadores C +'! -78 1 6 ' ' (do d'r'c;o BUFFER P 6 ' 4(or %201
?2 Si el buffer con el cual se va a calibrar no es de ese valor, presionar las teclas de flec!as correspondientes al buffer", para seleccionar el 1uffer deseado" 2 #n el lado izquierdo de la pantalla, aparece %$ ( E+&: esperar a estabilizar H2 #l valor del 1uffer aparece en la pantalla %2 Presionar el botón CAL, conclu&endo con la calibración" .
- CUANDO SE USAN DOS BUFFERS 12 Conectar el adaptador, quitar la cubierta del electrodo de p, & en(uagar ambos electrodos con agua destilada] introducirlos en una solución 1uffer con rango conocido B"@- o G"NG , prender el pmetro Bbotón gris, >2 Cuando aparezca ( E+&: & las iniciales C8" parpadeen en la pantalla , se oprime el botón CFM para aceptar el punto de calibración 2 Sacar el electrodo & en(uagarlo r%pidamente, colocar este en el segundo 1uffer B8"@ ó -@"@ & seleccionar este en el LCD )'c*d(r+o ?2 Si el buffer con el cual se calibra no aparece en la pantalla, presionar las teclas de flechas del 4uffer , para seleccionar el 1uffer deseado" 2 #n el lado izquierdo de la pantalla, aparece %$ ( E+&: esperar a estabilizar H2 Cuando aparezca ( E+&: & las iniciales C8" parpadeen en la pantalla , se oprime el botón CFM
%2 #l pmetro queda calibrado & muestra en la pantalla autom%ticamente para realizar mediciones" . - UNA TERCERA SOLUCI
