Universidad Politécnica de Puebla
Ingeniería en Biotecnología Genética Molecular
“Practica 1 Electroforesis (método casero)
Por! Marco "ntonio Mendo#a García $ivers Emmanuel Morales %ala#ar
&'BP
Introduccin!
La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por tamaños moleculares y carga eléctrica, dependiendo de la técnica que se use, el uso de la electroforesis para separar proteínas lo informo por primera vez en 197 el !ioquímico sueco "rne #iselius$ La técnica que el introdu%o, fue una de las pocas técnicas analíticas poderosas disponi!les en los primeros años de la química de proteínas$ &'iste una gran variedad de métodos$ Electroforesis de camo ulsante( método empleado para separar una mezcla de moléculas grandes, tales como fragmentos de ")* o proteínas, +aciendo pasar una corriente eléctrica a través de un gel que contiene las muestras que se desea separar$ Electroforesis cailar( muy e'tendido en los servicios de secuenciación de ")* a gran escala en donde la muestra se +ace pasar a través de un tu!o largo$ Electroforesis en gel! separación de varias moléculas !iológicas !a%o la influencia de un campo eléctrico, usando un polímero como alginato, agarosa o poliacrilamida$ Electroforesis en gel a#arosa! permite separar moléculas de ")* y "* en función de su tamaño, la muestra se somete a la acción de un campo eléctrico aplicado a un gel agarosa$ Electroforesis en gel de camo ulsante! separación de moléculas de ")* muy grandes -de ./ 0p!a varios mp! alternando de forma pulsante la dirección de la corriente eléctrica a través del gel$ Electroforesis en gel gradiente térmico! separación de ")* según su movilidad, en condiciones que favorecen progresivamente la desnaturalización por calor$ Electroforesis en gel de oliacrilamida! separación de 2cidos nucleicos y proteínas, atendiendo a su tamaño moléculas, se !asa en la migración de moléculas cargadas eléctricamente a través de un matriz inerte$
3rincipio general La electroforesis separa partículas en !ase al movimiento incluido por un campo eléctrico$ &l campo eléctrico resulta en la aplicación de una fuerza so!re las partículas que es proporcional a su carga o potencial de superficie$ La fuerza resultante induce una velocidad diferente en las distintas macromoléculas$ &n otras palaras si se aplica un campo eléctrico durante un período de tiempo dado a través de una matriz que contiene una mezcla de macromoléculas con diferentes potenciales de superficie, las moléculas estar2n en diferentes lugares al detener el ca mpo$ #ipos de electroforesis &'isten dos modalidades de electroforesis( •
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&lectroforesis li!re &l campo eléctrico se aplica a disoluciones o suspensiones$ &lectroforesis zonal &s una de las técnicas m2s utilizadas en !ioquímica y !iología molecular por su elevada resolución$ &l campo eléctrico se aplica a un medio o soporte esta!ilizante y la muestra se deposita en una reducida zona del mismo$
*b+etivos! • •
4onstruir una c2mara de electroforesis casera 3reparar una solución !uffer de corrida y el soporte solido
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5!servar el fundamento de la electroforesis
Materiales , métodos!
6ateriales &liminador de corriente -9 a 1 volts 6atraz &rlenmeyer ./ml 8eringa 3arafilm o papel cera #i%eras o cutter 3apel aluminio 4inta de aislar #apa de pl2stico
reactivos "gua em!otellada "gar !acteriológico inagre :licerina ;icar!onato de sodio 4loruro de sodio "zul de metileno
Metodología! Prearacin del buffer de corrida
-onstruccin de la c.mara de electroforesis
v de grenetina, utilizando ./ml del !uffer de corrida agreg2ndolos en un vaso de pp$, posteriormente se calentó +asta que la solución quedo +omogénea$
?na vez gelificado el soporte solido se retiró con cuidado la peineta y se sacó el gel del contenedor, se transfirió a la c2mara de electroforesis construida$ del gel$ $esultados!
4omo resultados se o!tuvo la construcción de una c2mara de electroforesis y se realizó una prue!a para determinar el funcionamiento de la misma y lograr o!servar el principio de la electroforesis$
Imagen 1: Cámara de Electroforesis
/iscusin de resultados!
Los resultados en esta pr2ctica se vieron limitados de!ido a distintos factores, uno de los principales fue la realización del soporte solido ya que después de +a!er gelificado fue un tanto difícil e'traerlo del molde, esto fue a que el molde no tenía la forma adecuada adem2s de que el gel se ad+erido a las paredes del gel, y al intentarlo e'traer se rompió, esto nos +iso suponer que la concentración de grenetina fue !a%a y adem2s que el molde de!ió llevar una !ase antiad+erente$ 5tro factor que afecto para o!tener un resultado satisfactorio fue que en la c2mara que se logró realizar la prue!a los polos se +a!ían invertido por lo que no se logro o!servar un movimiento de las moléculas del colorante$ -onclusin(
1$ 8acqueline @rosc+Aitz, ed$, &ncyclopedia of c+emical tec+nology$ Bt+ ed$, 8o+n Ailey C
$ 8orgenson, 8$ F$ "nalytical 4+em, 19GD, .G, 7, 7B"
