Practica No.1: Factores que infuyen en las separaciones cromatogracas / echa de realización: !/agosto/"1#$$/ %F&1/ Proesores: 'onathan Fragoso &(zquez) *uis +lmaz(n ,(nchez) -leuterio urgueo 0apia 0apia / -quipo : 2ern(ndez alderas 'os3 *uis) *ozano +polinar 4artin +le5andro. E%perimento 2! Efecto del olumen de muestra aplicada.
Objetivo •
Analizar la influencia influencia de algunos factores factores que afectan las separaciones cromatograficas.
+f0'#' microlitro$!
Introducción
'.3)(./-.(41
3.8 +f02#2 microlitro$!
La cromatografía es un conjunto de técnicas usadas para separar, identificar y determinar los componentes químicos de mezclas complejas . El principio de la cromatografía se fundamenta en la dispersión de los componentes de la mezcla a separar dentro de 2 fases no miscibles entre sí, una móil y otra estacionaria. La elución a elocidades diferentes de los compuestos de una muestra conduce a su separación. Esta diferencia de elocidades se atribuye a f actores como! •
•
'.3)(./-.(41
+f0(#1 microlitros$! '.1)(./-.( E%perimento (! Efecto de concentración de la muestra
"olaridad! es una propiedad de las moléculas que representa la separación de las cargas eléctricas a la misma. Adsorción! es el proceso mediante mediante el cual un sólido poroso #a niel microscópico$ es capaz de retener partículas de un fluido en su superficie tras entrar en contacto con este.
+f0' #'mg)ml$!
1
2'.*)(./-.11* +f02#3mg)ml$!
3.8 '.)(./-.12'
E%isten también, diersos factores que pueden influir en las preparaciones cromatograficas, como son! polaridad, olumen de la muestra concentración de la muestra, efecto de la matriz #se define como matriz a todo lo que &ay en la muestra e%cepto el analito$
Rf-3(10
E%perimento 1! Efecto de matriz.
Resultados
1
E%perimento '! Efecto de la polaridad del disolente.
3.
3.9
+f #sudan$! 2.*)(./-.*'-
2
1 3.
3.
(. acetato de etilo)&e%ano #(!*$ +f #+. de $! -.()(./-.-*
1
2
1 de etilo! '. acetato
2
A
+f #+.de $ ! 2.()(./-.-3 +f #sudan$ ! (.()(./-. 2. acetato de etilo)&e%ano #'!'$ +f #+. de $!'.1)(.4/-.(3 +f #sudan$! (.3)(.4/-.4*
B
2 3.
Practica No.1: Factores que infuyen en las separaciones cromatogracas / echa de realización: !/agosto/"1#$$/ %F&1/ Proesores: 'onathan Fragoso &(zquez) *uis +lmaz(n ,(nchez) -leuterio urgueo 0apia / -quipo : 2ern(ndez alderas 'os3 *uis) *ozano +polinar 4artin +le5andro. A] Efecto de la naturaleza del disolente de la muestra. +f0' #metanol$! '.4)(./-.3 +f02 #agua$! '.*)(./-.11* +f0( #56(57$! 2.3)(./-.3* B] "resencia de otros analitos +f0'#agua$!'.)(./-.12' +f02 #sacarosa$! '.3)(./-.(41 +f0( #7a5l$! '.2)(./-.('3
Discusión de resultados Efecto de la polaridad del disolente. 8e obseró que la afinidad muestra0disolente se fue modificando ya que se disminuía la polaridad del disolente por la adición de &e%ano, por lo se obseró que las muestras de rojo de metilo sus +f disminuyen considerablemente #de -.-3 a -.-*$ a comparación del 8udan #de -. a -.*'-$ , lo que indica que el +ojo de metilo es m9s polar que el 8udan , ya que en el +ojo e%iste un grupo carbo%ilo que tiene puentes de &idrogeno con el acetato de etilo y en el 8udan solo &ay un &idro%ilo. E%isten interacciones muestra0fase móil y muestra0fase estacionaria: si la muestra tiene mayor afinidad por la fase móil esta aanzara m9s que si se realiza con una fase móil poco afín a la muestra. Efecto del olumen de muestra aplicada. En este e%perimento los +f;s tuieron alores cercanos #-.(41, -.(41 y -.($ aunque cuando se coloca un olumen de muestra mayor #1 microlitros$ la manc&a es un poco m9s grande lo que prooca una resolución pobre y se tendr9n problemas si este se requiere separar de alg
Al aumentar la concentración de la muestra , esta interacciona en mayor proporción con la fase estacionaria por lo tanto se empieza a formar una asimetría en la manc&a #coleo$ con esto el alor de +f se e afectado. Efecto de la naturaleza del disolente de la muestra. El disolente que se encuentra en la muestra es de importancia ya que esta también interacciona con la fase móil y con la fase estacionaria con lo que modifica los alores del +f o puede proocar que la resolución de la manc&a sea pobre , esto debido a que el disolente no es el correcto parato para disoler la muestra , como en el caso del +ojo de metilo con 62=, este es insoluble en agua, como consecuencia se obsero una manc&a tenue y con coleo a diferencia de las muestras disueltas en acetonitrilo y metanol. "resencia de otros analitos. 8e debe de considera que si se encuentran presentes analitos en la muestra, se debe tomar lo alores de coeficiente de partición para lograr separar estos del analito de nuestro interés, ya que si no se considera esto en cuenta se obserara un coleo por la poca o con muc&a afinidad ya sea por la fase móil o por la fase estacionaria: como en el caso de la solución con 7a5l . esta tuo un +f menor y presento coleo ya que es m9s a fin por la fase estacionaria que por la fase móil, a diferencia de la sacarosa que tiene un poco de coleo pero no afecta el alor de +f.
Conclusiones La afinidad del analito por la fase móil est9 dada por la polaridad de ambos, interaccionando con la fase móil y)o fase estacionaria. A mayor olumen de muestra menor resolución se obtendr9. A mayor olumen de aplicación de muestra, mayor elocidad de migración. A mayor concentración de la muestra se presentara el fenómeno de coleo. La presencia de otros analitos afecta en la retención del analito de interés.
Practica No.1: Factores que infuyen en las separaciones cromatogracas / echa de realización: !/agosto/"1#$$/ %F&1/ Proesores: 'onathan Fragoso &(zquez) *uis +lmaz(n ,(nchez) -leuterio urgueo 0apia / -quipo : 2ern(ndez alderas 'os3 *uis) *ozano +polinar 4artin +le5andro.
A mayor afinidad del analito por la fase móil, mayor ser9 el +f.
F$ Gnestiga dos aplicaciones de la cromatografía en el an9lisis ambiental o
Cuestionario A$
>efina breemente los siguientes términos o •
?ipos de interacciones moleculares! '. Atracción dipolo0dipolo! fuerzas o que se producen entre dos o m9s moléculas polares, por atracción entre cargas parciales positias y negatias o
o
•
•
F$
Gmplementación de métodos analíticos para >eterminar compuestos org9nicos de interés ambiental en distintas muestras de aguas, sedimentos y lodos An9lisis de par9metros radioactios seg
2. Atracción ion0dipolo! fuerza entre un ion positio o negatia y una molécula polar. (. @uerzas de an de Baals #fuerzas de London$! son atracciones débiles entre moléculas no polares. 8e producen cuando estas moléculas no tienen polos y son inducidas a proocar un desplazamiento moment9neo de los electrones, generando un polo positio y uno negatio.
+esolución! Es una función del factor de o capacidad CD% y la retención relatia y el n
Bibliografia •
Asimetría de pico! Es la porción de cromatograma o diferencal que registra la respuesta del detector cuando un
o
o
o •
Efecto de matriz! 5onsiste en una disminución o o aumento de la respuesta instrumental del analito debido a la presencia de otros componentes.
o
@erré, H. I?écnicas de LaboratorioJ, 24* #2--1$ 4044. +iu H, Foqué +. I?écnicas de LaboratorioJ, 21 #2--($ *0-. >ominique "radeau. IAnalisis químicos farmacéuticos de medicamentosJ, "rimera edición, 7oriega Editores, e%ico, "ag. 1'(0 1(3. K. @uentes Arderiu. IFioquímica clínica y patología molecularJ 8egunda Edicion. Editorial +eerte. Espaa. olumen '. "ag.'30'-.
