INSTITUTO TECNOLÓGICO DE CHETUMAL
LICENCIATURA LICENCIATURA EN BIOLOGÍA
TURNO VESPERTINO ZB
“BIOLOGÌA CELULAR”
III SEMESTRE
UNIDAD 1 “INTRODUCCIÒN AL ESTUDIO CELULAR”
PRÀCTICA # 1- TINCIÒN DE WRIGHT
INTEGRANTES DE EQUIPO:
ALAN JAIR BASTO CAB EDUARDO AVILEZ CETZ
PROFESORA: LAURA SÁNCHEZ LARA
SEPTIEMBRE DE 2011
PRÁCTICA # 1- TINCIÓN DE WRIGHT
OBJETIVO General:
Realizar una tinción de las células blancas presentes en un frotis de sangre mediante la técnica de tinción de Wright. W right.
Específicos
Identificar los tipos de células sanguíneas presentes en la muestra de sangre una vez teñida. Identificar los reactivos a utilizar. Seguir los pasos indicados de la práctica.
INTRODUCCIÓN Las tinciones hematológicas son un conjunto de procesos que conducen a la coloración de las estructuras que componen las células sanguíneas. Esto tiene por objeto el aumentar el contraste entre esas estructuras y el medio que las rodea, y permite por tanto que las células sean visual izadas microscópicamente con mayor facilidad. Las tinciones hematológicas pueden clasificarse según distintos criterios:
Atendiendo al nivel de vitalidad de las células que se pretende colorear, se dividen en tinciones vitales y no vitales. Atendiendo al momento en el que empezaron a ser utilizadas para el diagnóstico hematológico, se dividen en tinciones tradicionales y especiales.
Las tinciones vitales y supravitales son aquellas que se practican sobre células que están vivas. Las tinciones vitales son aquellas que se efectúan sobre células que están vivas, mediante la introducción de un colorante en la circulación de un organismo vivo. Son colorantes vitales, por ejemplo, el verde Jano y el azul de metileno. Las tinciones supravitales son aquellas que se realizan sobre células o tejidos vivos, pero que están aislados del organismo del que proceden. Las tinciones no vitales se realizan sobre células muertas. La coloración de células muertas requiere un proceso previo de fijación, que tiene por objeto el mantener inalterada su estructura y el adherirlas firmemente a la superficie del
portaobjetos. La fijación puede realizarse habitualmente se realiza con etanol o metanol.
mediante
calor,
aunque
La tinción de Wright es una tinción de tipo Romanowsky. Es extremadamente importante en el laboratorio de hematología este tipo de tinción, ya que puede obtenerse una cantidad abundante de información a partir del examen de un frotis de sangre periférica bien teñido Una tinción de Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de oxidación, así como eosina Y o eosina B. La acción combinada de estos colorantes produce el efecto Romanowsky y da una coloración púrpura a los núcleos de los leucocitos y a los gránulos neutrofílicos y de color rosado a los eritrocitos. Los componentes de este efecto son el azul B y la eosina Y. Las propiedades de tinción de Romanowsky dependen del enlace de los colorantes a las estructuras químicas y de las interacciones del azul B y la eosina Y. Los agrupamientos de ácidos nucleicos, las proteínas de los núcleos celulares y el citoplasma inmaduro reactivo, fijan fi jan el azul B, colorante básico. La eosina Y, colorante ácido, se fija a los agrupamientos básicos de las moléculas de hemoglobina y a las proteínas básicas.
MATERIALES Y EQUIPO
Portaobjetos Cubreobjetos Jeringa estéril Lansetas (algodón con alcohol etílico) Tubos de ensayo con anticoagulante Guantes Liga o torniquete Microscópio Frotis de sangre Colorante de Wright Agua destilada
PROCEDIMIENTO
Tomamos una muestra de sangre de un integrante del equipo con ayuda de una jeringa esterilizada, una vez logrado hacer notar la vena con ayuda de una liga que se amarra no tan fuerte al brazo, solo de tal manera que sea visible para que de esta manera sepamos de donde tomar la muestra, luego colocamos un algodón en el lugar e hicimos que doblara el brazo por unos minutos, solo para evitar que siga saliendo sangre. Introducimos la sangre en el tubo de ensayo con anticoagulante y mezclamos con cuidado y destapamos el tubo para poder sacar una muestra. Realizamos un frotis muy delgado, fino de la muestra de sangre sobre el portaobjetos con ayuda de un cubreobjetos de manera que cubra un buen tramo del portaobjetos. Cubrimos el frotis completamente con colorante de wright. Esperamos 6 minutos de teñido. Enjuagamos con agua destilada los portaobjetos durante 30 segundos, de manera que se retirara gran parte del colorante. Observamos a microscopio y anotamos las observaciones correspondientes.
OBSERVACIONES Y RESULTADOS Pudimos observar en la muestra de frotis de sangre, células sanguíneas del tipo monocitos y segmentocitos. Los monocitos se tiñeron de color violeta o morado y se distinguieron por presentarse de un tamaño un poco más grande que de los globulos rojos y esta como hinchaditas las células. Los segmentocios como su nombre lo indica, eran células blancas que se estaban segmentando o separando para poder generar a sí, más globulos rojos, que son de vital importancia en el tejido sanguíneo. Realizamos varios frotis en 3 portaobjetos para tener de respaldo, de los cuales en el tercero logramos apreciar de una mejor forma la distribución de las células y la presencia de leucocitos.
Monocistos observados a 10x
Globulos rojos observados a 40x.
ANÁLISIS DE RESULTADOS RESULTADOS Debido a que ayuda a distinguir fácilmente las células de la sangre se convirtió en una técnica muy usada para el conteo de los glóbulos blancos, una técnica rutinaria usada cuando hay sospecha de infecciones .
Causas de error en las tinciones realizadas a frotis sanguíneos. Si la tinción de una extensión sanguínea es demasiado rosa, probablemente esto se deba a:
Un pH bajo del colorante.
Un tiempo de coloración insuficiente.
Un lavado excesivamente prolongado.
Si la tinción es demasiado azul, posiblemente, esto esté causado por: un grosor excesivo de la extensión, o un pH alto del colorante.
Una coloración excesivamente prolongada.
Un lavado insuficiente.
Si tras la tinción aparecen artefactos o/y precipitados en la extensión, probablemente esto se deba a:
Un empleo de portaobjetos sucios.
Una falta de filtración del colorante.
Una coloración excesivamente prolongada.
Un secado del colorante durante la tinción. t inción.
Un lavado insuficiente.
Muchos de estos errores pueden obviarse utilizando teñidores automáticos de las extensiones sanguíneas. Actualmente, no suelen emplearse en la práctica clínica.
RECOMENDACIONES Toma de sangre: Tomar el brazo del compañero, le colocar la ligadura haciendole un torniquete alrededor del brazo, posteriormente limpiar el área a punzar con una torunda, elegir la vena indicada y con la jeringa sacar la cantidad de sangre necesaria, ya teniendo la muestra, desamarrar la ligadura, y colocar de nuevo la torunda retirando al mismo tiempo la jeringa de la vena. Finalmente colocar la muestra sanguínea en un tubo de ensayo.
Cuidados: Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un dolor moderado, mientras que otras sólo sienten un pinchazo o sensación de picadura. Después, puede haber una sensación pulsátil. El conteo plaquetario se puede ver afectado por muchos estados patológicos. Igualmente, se puede medir para evaluar la causa de un sangrado excesivo. Entre los medicamentos que pueden disminuir el conteo de plaquetas están: agentes quimioterapéuticos, cloranfenicol, colchicina, agentes bloqueadores H2, heparina, hidralacina, indometacina, isoniacida, quinidina, estreptomicina, sulfonamida, diuréticos tiazídicos y tolbutamina.
TÉRMINOS TÉCNICOS Objetivo de 10x Sirve para realizar observaciones a no tan grandes rasgos de nitidez o resolución más clara.
Objetivo de 40x Ayuda a tener y mantener una visión mucho más clara de lo que se desea observa en el microscopio a una escala mayor.
Objetivo de 100x Sirve para realizar estudios con observaciones de muestras dentro de líquidos, por eso es también conocido como objetivo de inmersión, manteniendo un grado de resolución superior y muy capaz.
Leucocitos Los leucocitos (también llamados glóbulos blancos) son un conjunto heterogéneo de células sanguíneas que son los efectores celulares de la respuesta inmunitaria, así intervienen en la defensa del organismo contra sustancias extrañas o agentes infecciosos (antígenos). (antígenos). Se originan en la médula ósea y en el tejido linfático. Los leucocitos son células móviles que se encuentran en la sangre transitoriamente, así, forman la fracción celular de los elementos figurados de la sangre. Son los representantes hemáticos de la serie blanca. A diferencia de los eritrocitos (glóbulos rojos), no contienen pigmentos, por lo que se les califica de glóbulos blancos. Son células con núcleo, mitocondrias y otros orgánulos celulares. Son capaces de moverse libremente mediante seudópodos. Su tamaño oscila entre los 8 y 20 μm (micrómetro). Su tiempo de vida varía desde algunas horas, meses y hasta años. Estas células pueden salir de los vasos sanguíneos a través de un mecanismo llamado diapédesis (prolongan su contenido citoplasmático), esto les permite desplazarse fuera del vaso sanguíneo y poder tener contacto con los tejidos al interior del cuerpo. Con núcleo:
Monocitos Los monocitos son un tipo de glóbulos blancos agranulocitos. Es el leucocito de mayor tamaño, su tamaño es de 18 μm, y representa del 4 a 8% en la sangre. Presenta un núcleo arriñonado (forma de riñón), que se tiñe de color violetaazulado con una proporción 2:1 con respecto al resto de la célula, y tiene una depresión profunda. El citoplasma es abundante y de color gris azulado pudiendo estar acompañado de vacuolas blanquecinas.
Los monocitos se generan en la médula ósea y después viajan por la sangre, para luego emigrar a diferentes tejidos como hígado, bazo, pulmones, ganglios linfáticos, huesos, cavidades serosas, etc. Después de alrededor de 24 horas de permanecer en el torrente sanguíneo, los monocitos lo abandonan y atraviesan el endotelio de los capilares o las vénulas poscapilares hacia el tejido conectivo, donde se diferencian rápidamente a macrófagos. Su principal función es la de fagocitar, es decir, comerse a diferentes microorganismos o restos celulares. Para fagocitar se tienen en cuenta diversos factores como la presencia de antígenos.
Linfocitos Los linfocitos son un tipo de leucocito (glóbulo blanco) comprendidos dentro de los agranulocitos. Son los leucocitos de menor tamaño (entre 7 y 15 μm), y representan del 24 a 32% del total en la sangre periférica. Presentan un gran núcleo esférico que se tiñe de violeta-azul y en su citoplasma frecuentemente se observa como un anillo periférico de color azul. Poseen un borde delgado de citoplasma que contienen algunas mitocondrias, ribosomas libres y un pequeño aparato de Golgi. Los linfocitos son células de alta jerarquía en el sistema inmunitario, principalmente encargadas de la inmunidad específica o adquirida. Estas células se localizan fundamentalmente en los órganos linfoides. Tienen receptores para antígenos específicos y, por tanto, pueden reconocer y responder al que se les presente. pr esente.
Con núcleo lobulado:
Neutrofilo Los neutrófilos, denominados también micrófagos o polimorfonucleares (PMN), son glóbulos blancos de tipo granulocito. Miden de 12 a 18 μm y es el tipo de leucocito más abundante de la sangre en el ser humano. Se presenta del 60 al 75%. Su periodo de vida media es corto, durando horas o algunos días. Se llaman neutrófilos porque no se tiñen con colorantes ácidos ni básicos, por lo que su citoplasma se observa rosa suave. Se caracterizan por presentar un núcleo con cromatina compacta segmentada en 2 a 5 lóbulos conectados por delgados puentes. En neutrófilos inmaduros el núcleo se presenta sin segmentar, como una banda fuertemente teñida.
Basófilos Se denomina basófilo a cualquier célula que se tiñe fácilmente con colorantes basicos (Hematoxilina principalmente). Sin embargo, cuando se emplea este término sin ninguna aclaración adicional, suele referirse a uno de los tipos de leucocitos (glóbulos blancos de la sangre) de la familia de los granulocitos. Los gránulos de los basófilos son gruesos pero escasos. Son células de unas 10 μm de diámetro y su núcleo tiene una forma que recuerda a una S, su núcleo es globulado y se divide de 1 a 3 células. Se originan en el mismo lugar que el resto de los granulocitos (médula ósea), ósea), y son los menos numerosos, ya que constituyen sólo el 0,5% del total.
Eosinófilo Un eosinófilo es un leucocito de tipo granulocito pequeño derivado de la médula ósea, que tiene una vida media en la circulación sanguínea de 3 a 4 días antes de migrar a los tejidos en donde permanecen durante varios días. Su desarrollo en la médula ósea es estimulado por diversas interleucinas, como la IL-5, la IL-3 y el factor estimulante de colonias granulocito-macrófago. Es característico su núcleo bilobulado, al igual que sus distintivos gránulos citoplásmicos.
BIBLIOGRAFíA http://articulosdemedicina.com/biometria-hematica/ http://html.rincondelvago.com/tinciones-hematologicas.html http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Wright http://www.bio-optic.com/introduccion/Teoria_de_la_Microscopia.pdf
