ISOLASI DAN IDENTIFIKASI alkaloid dari Croton LOBATUS
Barthelemy K. Attioua*, Ramiarantsoa Harisolo, Jean Brice Boti, Vincent A. Adiko, Félix Z. Tonzibo, Léon A. Djakoure Laboratoire de chimie Organique Biologique, struktur des Sciences UFR de la Matière et Techno logie, Université de Cocody-Abidjan, Pantai Gading.
Diterima: 07-02-2012; Diselesaikan pada: 20-03-2012.
ABSTRAK
Croton lobatus L. (Euphorbiaceae) merupakan tanaman obat tradisional Ivoirian. Bagian yang terkena udara yang biasanya digunakan sebagai antimalaria dan penyakit lainnya. Selama penelitian kami terakhir pada spesies ini, beberapa senyawa yang diisolasi di antaranya satu alkaloid. Tujuannyadari penelitian ini adalah untuk mengisolasi alkaloid lain. Ini dikumpulkan bersama-sama, udara kering danbubuk.Tiga ekstrak (Cyclohexane, EtOAc - H2SO4 dan EtOAc NH4OH) direalisasikan.Namun hanya ekstrak ketiga yang difraksinasi dengan kromatografi kolom gel netral aluminium oksida.Struktur dari senyawa terisolasi dibentuk berdasarkan data spektroskopi IR, NMR dan HRESIMS.Fraksinasi dan analisis ini telah menghasilkan Palmitamide (1), Onosmin B (2), N- (2-hidroksi-1-Phenylpropyl) benzamide (3), Onosmin B (4) dan Aurentiamide asetat (5). Semua senyawa ini diisolasi untuk pertama kalinya dariC. lobatus, kecuali senyawa (3), yang diisolasi dari dari tanaman
sejak penelitian terdahulu .Temuan ini
mengkonfirmasi kehadiran alkaloid di Croton genus. Kata kunci: Croton, Lobatus, Alkaloid, Isolasi, Euphorbiaceae, Spektroskopi
1
BAB I
PENDAHULUAN
Croton lobatus L. (Euphorbiaceae), tanaman liar tropis
yangumum digunakan dalam
pengobatan tradisional Afrika untuk obat banyak penyakit (malaria, masalah kehamilan,disentri) 1. Menariknya, Weniger et al.2 telah melaporkan aktivitas in vitro antiplasmodial bagian yang terkena udara dan ekstrak akar kasar. Genus croton mencakuplebih dari 700 spesies. Sejumlah penelitian telah berurusan dengankonstituen Croton dan studi inimengungkapkan adanya sesquiterpenes3,4, diterpenes5,6,triterpenes7, steroid, flavonoids8 dan alkaloids9. Daridaun dan kulit batang C. lobatus, beberapasenyawa yang diisolasi di antaranya sterol,diterpenes, triterpen, polifenol dan satu unsur nitrogen10,11. Sifat antimalaria C. lobatusdikonfirmasi oleh aktivitas K1 antiplasmodium falciparumGeralnylgeraniol (IC50 = 1,07 mg / ml) dan Asam Betulinic(IC50 = 1,45 mg / ml) diisolasi dari bagian yang terkena udara olehATTIOUA12. Selama penelitian terdahulu di C. lobatus, satu alkaloid jelas teridentifikasi 10,11. Dalam penelitian ini, kami menjelaskan untuk pertama kalinya, ekstraksi, isolasi danstruktur alkaloid lain dari bagian C. lobatus yang terkena udara. Hal ini termasuk Palmitanoide (1), Onosmin B (2), N-(2-hidroksi-1Phenylpropyl) benzamide (3), Onosmin A (4)dan Au rentiamide asetat (5).
2
BAB II
BAHAN DAN METODE
Prosedur umum
Titik leleh ditentukan dengan menggunakan titik leleh Büchi B-545 asparatus.Spektrum UV diperoleh padaspektrometer Hewlett Packard 8452A array diod. Spektrum IR yang ditunjukan menggunakanspectrometer
IFS25 FT-IR Brukers. Spektrum 1H dan 13C NMR dan 1H-1H
COSY,DEPT, 2D-HSQC dan 2D-HMBC dicatatdari spektrometer Bruker Avance DMX 400 MHz.Pergeseran kimia dalam ppm dengan mengacu pada TMS.Konstanta kopling berada dalam Hz.
HRESIMS
diperoleh
padasebuah
Autospec
Micromass
(70
eV)
instrumen
(HewlettPackard).Kromatografi kolom dilakukan denganaluminium oksida gel netral (100-300 mesh) dan TLC dengangel F254 silika. Deteksi alkaloid dilakukan dengan menggunakan reagen Dragendorff , 3% Ce (NH4) 2SO4 dalam 85% H3PO4, atauReagen Ehrlich.
Bahan Tanaman
Batang dan daun dari C. lobatus dikumpulkan di Lingkungan Abidjan, Pantai Gading pada bulan Oktober 2003.Bukti spesimen (No 8950) disimpan diHerbarium dari Kebun Raya Cocody University, Abidjan, Pantai Gading. Batang dan daun segaryang dikeringkan diudara terbuka tanpa paparan sinar matahari langsung. Sampel kering dibubukan dan ditimbang.
Jumlah
total1200 g digunakan dalam penelitian ini.
Ekstraksi dan isolasi alkaloid
Daun kering dan bubuk dan batang C. lobatusdiekstraksi secara maserasi pada suhu kamar dalamEtOH (3 × 5 L) selama 12 jam.Ekstrak gabungan yang dikonsentrasikan pada tekanan rendah sampai volume500 mL, yang dicuci dengan sikloheksana (4 × 500 mL).Residu ekstrak sebelumnya dariEtOH (350 mL) dicuci dengan campuran EtOAc - H2SO4 10% (49: 1v / v) (5 × 350 mL). Akhirnya residu dari Ekstrak EtOAc - H2SO4dicuci dengan campuran EtOAc NH4OH (19: 1 v / v) (4 × 300 mL).ekstrak EtOAc - NH4OH hanya diuapkan di bawah tekanan 3
berkurang sampai kering, 3,53 g ekstrak kasar diperoleh. Penyaringan ekstrak menggunakan Dragendorff telah mengungkapkan adanyaalkaloid.Hal ini kemudian dikuatan oleh reagen Ehrlich.Kemudian, ekstrak diuji dengan serangkaian kromatografi kolom menggunakan aluminium oksida gel netral fase stasioner.Eluen dibentuk daricampuran CH2Cl2-EtOAc kemudian EtOAc - MeOH, mengikuti derajat polaritas. Untuk fraksinasi pertama, kami menggunakankromatografi kolom dengan ukuran: 3,5 cmdiameter (d) dan 17,5 cm tinggi (h). Eluen dengancampuran CH2Cl2 - EtOAc (90: 10 v / v) memberikan fraksi I, campuran CH2Cl2EtOAc (50:50 v / v) ke EtOAc -MeOH (99:01 v / v) memberikan fraksi II dan fraksi IIIdiperoleh dengan campuran EtOAc - MeOH (95: 5 sampai85:15 v / v). Fraksi I (200 mg) dimurnikan denganrecristallization di MeOH untuk menghasilkan 63,2 mg senyawa (1)(Rf 0,5 CH2Cl2EtOAc 85:15 v / v). Fraksi II (1325mg) dimurnikan dengan kromatografi kolom (d: 1.51 cm,h: 10 cm) pada aluminium oksida gel netral. Elusi dengancampuran CH2Cl2-EtOAc (55:45 v / v) memberikan sub-fraksiII1, campuran CH2Cl2-EtOAc (40:60 v / v) memberikan subfraksiII2 dan denagn campuran CH2Cl2-EtOAc (25:75 v / v) memberi subfraksi yangII3. Sub-fraksi dimurnikan olehrecristallization di sikloheksana. Sub-fraksi II1 memberikansenyawa (2) (25 mg, Rf 0.7 di CH2Cl2- CH3OH 95: 5 v / v),sub-fraksi II2 memberikan senyawa (3) (18 mg, Rf 0,55 diCH2Cl2- CH3OH 95: 5 v / v) dan sub-fraksi II3, yangSenyawa (4) (21 mg, Rf 0,5 CH2Cl2CH3OH 95: 5 v / v). Fraksi terakhir(III) 500 mg, dimurnikan dengan kolomkromatografi (d: 1.51 cm, h: 10 cm) pada aluminiumoksida gel. Elusi dengan CH2Cl2 - EtOAc (10:90 v / v) memberikanyang sub-fraksi III1. Sub-fraksi III1 dimurnikan denganrecristallization dalam sikloheksana untuk menghasilkan senyawa (5)(15 mg, Rf 0,45 di CH2Cl2- CH3OH 95: 5 v / v). Semua senyawa ini larut dalam kloroform. Palmitamide (1): bubuk putih; mp: 105-106 ° C; UV
max(MeOH) 215 nm; IR
max (KBr) di-
cm 1: 1647 (kuat,H2NC = O), 3375-3310 (NH), 2918 dan 2849 (CH2, CH3). 1Hdan 13C NMR (CDCl3)
(ppm): 2.24 (t, J = 7,5 Hz, H-2), 1,60(m, H-3), 1,25 (br s, H-4 sampai H-15, CH2),
0,87 (t, J = 6.9Hz, H-16, CH3), 5.40 (br s, H-17, NH2); 175,7 (C-1, C = O), 36,0 (C-2), 29,2 29,6 (C-4 untuk C-13, CH2), 14.1 (C-16, CH3).HRESIMS: [M + H] + pada m / z 256,45918, rumus C16H33NO. Onosmin B (2): amorf padat putih; mp: 139-141ᵒC;UV nm; IR
max (MeOH) nm: 242, 293 dan 302
max (KBr) dicm-1: 3345 (tajam, NH), 3012 (lebar, NH), 728 dan 987(benzil), 1698 4
(kuat, C = O). 1H dan 13C NMR (CDCl3)
(ppm): 3.77 (br s, H-8, O-CH3), 51,6 (C-8, O-CH3),
6.31 untuk7.77 (proton aromatik). HRESIMS: [M + H] + pada m / z256,13371, rumus C16H17NO2. N- (2-Hydroxy-1-fenil-propil) -benzamide (3): kristal putih; mp: 157-158 ° C; UV λmax (MeOH) nm: 293, 310; IRνmax (KBr) cm -1: 3369, 2957 (tengah, CH3), 1638 (kuat,C = O). HRESIMS: [M + H] + di 256,32024, rumus C16H17NO2. Onosmin A (4) : amorf padat putih, tl 187-189 ° C;UV nm; IR
max (MeOH) nm: 242, 293 dan 302
max (KBr) dicm-1: 3345 (tajam, NH), 3012 (lebar, NH), 728 dan 987(benzil), 1699
(kuat, C = O), 3015 (O-H asam). 1H dan13C NMR (CDCl3)
(ppm): 169,8 (COOH),
HRESIMS: [M + H] +pada m / z 242,29294, rumus C15H15NO2. Asetat Aurentiamide (5): amorf padat putih, mp= 180-182 ° C, dan 302 nm;IR
max UV (MeOH) nm: 242, 293
max (KBr) di-cm 1: 1670 (HNC = O) dan 1634 (HNC = O),1741 (COOCH3).
1H dan 13C NMR (CDCl3)
(ppm): 7.15 ke8.12 (proton aromatik), 170,1 (C-14), 2,01 (br s, H-
15,OCOCH3). HRESIMS: [M + H] + pada m / z 445,53782 rumus C27H28N2O4.
5
BAB III
HASIL DAN PEMBAHASAN
Fraksinasi dengan kromatografi kolom aluminium oksida gel netral (100-300mesh) ekstrak kasar EtOAc - NH4OHdari daun dan batang C. lobatusmemberikan tiga fraksi (I, II, dan III). Pemurnianfraksi ini dengan kombinasi kromatografi kolomdan metode recristallisation telah mengisolasi lima alkaloid (gambar 1).
Gambar 1: struktur Palmitanoide (1), Onosmin B (2), N-(2-hidroksi-1-phenylpropyl) benzamide (3), Onosmin A (4) dan Aurentiamide asetat (5). Panah hitam: nyaman (3JHH) dan HMB (2JC-H, 3JC-H dan 4JC-H) korelasi. Hal ini mengkonfirmasikan hasil tes alkaloid dengan reagen Dragendorff dan Ehrlich. Senyawa (1) adalah Palmitamide atau Hexadecanamide, sebuah derivatif alifatikalkaloid. Ini diisolasi sebagai bubuk putih dengan titik leleh (mp: 105-106 ° C), pita penyerapan UV215 nm. Spektrum IR pada KBr menunjukkan peregangan pitakarbonil H2NC = O pada 1647-cm 1. Untuk N-H, penyerapan diamati antara 3375 dan 3310 cm-1. Dua pita yang kuat di 2918 cm-1dan 2849 cm-1
6
dapat dikaitkan dengan kelompok metil (CH3) danmetilen (CH2). Spektrum NMR direkam dalamData CDCl3 dan data spektral dilaporkan dalam tabel 1. 1H NMR ditunjukkan oleh satu kelompok metil pada
0,87 ppm(t; H-16, J = 6,9 Hz). Singlet di
1,25 ppm (br s)menunjukkan
rantai alifatik (CH2) n. proton amida(H2NC = O) memberikan sinyal yang lebar antara
5,52
dan 5,37 ppm.13C NMR spektra mengkonfirmasikan adanya gugus amidadengan puncak pada 175,7 ppm (H2NC = O). Tabel 1: 1H-NMR (400 MHz) dan 13C-NMR (100 MHz) spektral data senyawa (1) dan (2) dalam CDCl3 (δ di ppm, J di Hz).
7
Tabel 2:1 H-NMR (400 MHz) dan 13C-NMR (100 MHz) spektral data senyawa (4) dan (5) di CDCl3 (δ di ppm, J di Hz).
Satu-satunya metil memberi sinyal pada
14,1 ppm danrantai alifatik,kuat di
29,6 ppm.
spektrumHRESIMS menunjukan puncak ion molekul[M + H] + pada m / z 256,45918 dengan rumus molekulC16H33NO3 (M = 255,45 g / mol). Palmitamide adalah produk alami yang sudah terisolasi dari Acropora pulchra13,Minyak esensial dari dua spesies Alpinia dan darigreen alga Rhizoclonium hieroglyphicum var. Senyawa (2) adalah Onosmin B atau Methyl 2- (ptolylmethylamino)benzoat, turunan alkaloid.itu 8
diisolasi sebagai padatan amorf putih dengan titik leleh(mp) dari 139-14 ° C. Penyerapan pita spektrum UV ditunjukkan maksimum di 242, 293 dan 302 nm, sesuai dengansistem benzoat metil dan p-metilbenzen . IR spektrum direkam pada KBr menunjukkan penyerapan pitaN-H di 3345 cm-1 (tajam) dan3012cm-1 (lebar),
kelompok benzil itu pada 728 dan -987cm 1.
Peregangan pitakarbonil C = O di1698 cm-1. Spektrum NMR direkam di CDCl3. 1HSpektrum NMR ditampilkan sinyal singlet H-8 di
3.77ppm karena kelompok metoksi (O-CH3).Sebuah
sinyal lebarascribable ke proton amina sekunder H-9 munculdi diamati pada
4.0 ppm. Proton benzoat yang
6.57 ppm (H-3), 7.31 ppm (H-4), 6.77 ppm (H-5) dan 7.77ppm (H-6). Proton
metilbenzen muncul di
6.93 ppm (H-12, H-16) dan
6.91 ppm (H-13, H-15). 13C NMR
mengkonfirmasikan adanyaSistem methylbenzoate dengan sinyal pada COCH3,C-1),
149,6 ppm (C-2) dan
108.3 ppm (O =
51,6 ppm (O-CH3). Spektrum COSY, HSQC dan
HMBC memberikan informasi terbaiktentang struktur senyawa ini. Kombinasi Data spektral COSY, HSQC dan HMBC telah menyebabkan urutan: C8-C7-C1; C6-C1-C7-C2-C3; C17-C15C13. Spektrumpuncak HRESIMS ion molekul dipamerkan [M + H] + pada m / z 256,13371dengan rumus molekul C16H17NO2 (M = 255,12).Onosmin B sebelumnya terisolasi dari Onosma hispidawall. Senyawa (3) adalah N- (2-hidroksi-1-Phenylpropyl) -benzamide.Itu sudah terisolasi dan dijelaskan dari C. lobatus pada penelitian terdahulu. Senyawa(4) adalah Onosmin A. diisolasi berupa amorfpadatputih , mp 187-189ᵒC. Strukturnya mirip dengan yangsenyawa (2), yang merupakan senyawa metil ester(4). Perbedaan kecil diamati dengangugus karbonil dari asam karboksilat (COOH), yangmenunjukkan Sinyal pada 13CNMR senyawa (4), sinyal pada
169,8 ppm (C-7). Padaspektrum 1H dan
3.77 ppm(H-8) dan
51,6 ppm (C-8) yang hilang; ini
ditunjukkantidak adanya kelompok metoksi (O-CH3). spektrumHRESIMSdipamerkan puncak ion molekul [M + H] + pada m / z242,29294 dengan rumus molekul C15H15NO2(M = 241,28 g / mol). Onosmin A juga sebelumnyadiisolasi dari Onosma hispida Wall. Senyawa (5) yang diisolasi sebagai amorf padat putih, mp = 180-182 ° C.Ini adalah phenylalaminoyl N benzoilphenlyalaninolacetate atau Aurentiamide asetat. spektrum IR ditampilkan dua pita penyerapan karenaperegangan karbonil C = O (HNC = O) pada 1670 dan 1634-cm 1, bahwa dari karbonil kelompok ester (COOCH3)muncul di 1741 cm-1. 1H NMR di CDCl3dipamerkan pergeseran
kimia
proton
aromatic
amidamemberikan sinyal lebar
antara
8.12
dan
7.02
ppm.Proton
kelompok
8.12 ppm (H-8, H-11) dan asetat ini yang (CH3-COO) 9
memberikan singlet di ppm (C-7, HNC = O), aromatic diamati antara
2.01 ppm (H-15). 13C NMR menunjukkan sinyal karbonil di 171,8 ppm (C-10, HNC = O) dan
168,5
170,1 ppm (CH3O-C = O). Karbon
125,7 dan 139,1 ppm. Struktursenyawa ini jelas didirikan berkat Data
spektral COSY, HSQC dan HMBC.spektrumHRESIMS dipamerkan puncak ion molekul [M + H] + pada m / z445,53782 dengan rumus molekul C27H28N2O4(M = 444,54 g / mol). Aurentiamide asetat sebelumnyadiisolasi dari C. hieronymi Griseb dan Patrinia villosa Juss.
10
BAB IV
KESIMPULAN
Investigasi ekstrak kasar EtOAc-NH4OH dari C. lobatus bagian permukaan telah menghasilkan isolasi limaalkaloid: Palmitanoide (1), Onosmin B (2), N- (2-hidroksi1-Phenylpropyl) benzamide (3), Onosmin A (4) danAsetat Aurentiamide (5). Struktur mereka ditentukan berkat Data spektroskopi NMR, UV, IR dan HRESIMS. .
11
DAFTAR PUSTAKA
Aké AL, kontribusi aux études ethnobotaniques et floristiques au Togo, koleksi "Médecine traditionnelle et pharmacopée'', Agence de Coopération Culturelle et teknik, 1975, 153.
Weniger B, Lagnika L, VonthronSénécheau C, Adjobimey J, Gbenou J, Moudachirou M, Brun, Anton R, Sanni A, evaluasi tanaman obat Benin ethnobotanically dipilih untuk aktivitas antiplasmodial secara in vitro, J. Ethnopharmacol. 90, 2004, 279-284.
AguilarGuadarrama AB, Rios MY, tiga baru sesquiterpenes dari Croton arboreous, J. Nat. Prod ., 67, 2004, 914-917.
Wang Y, ZOU ZM, Sesquiterpenes dari caudatus batang Croton Geisel. var. tomentosus Hook. Chin. J. nat. Med .,
6, 2008, 339-341.
McChesney JD, Clark AM, Silveira ER, antimikroba Diterpenes dari Croton sonderianus, 1. Hardwickic dan 3,4-Secotrachylobanoic asam, J. Nat. Prod ., 54, 1991, 1625-1633
Sutthivaiyakit S, Nareeboon P, Ruangrangsi N, Ruchirawat S, Pisutjaroenpong S,Mahidol C, Labdane dan pimarane diterpenes dari joufra Croton, Fitokimia, 56, 2001, 811-814.
Barbosa PR, Fascio M Martins D Silva Guedes ML, Roque F, Triterpenes Croton betulaster (Euphorbiaceae), Biochem. Sistem. dan ekologi, 31, 2003, 307-308.
Cai Y, Evans FJ, Roberts MF, Phillipson JD, Zenk MH, Gleba YY, polifenol senyawa dari lechleri Croton, Fitokimia, 30, 1991, 2033-2040.
Aboagye FA, Sam GH, Massiot G,Lavaud, Julocrotine C, glutarimide alkaloid dari Croton membranaceus, Fitoterapia, 71, 2000, 461-462.
12
Attioua B, kontribusi a l'étude phytocimique des feuilles et tiges de Croton lobatus (Euphorbiaceae), Ph.D., disertasi, University of Strasbourg, 2005, 135.
Chabert P, Attioua B, Weniger B, Brouillard R, Croton lobatus, tanaman obat Afrika: spektroskopi dan kimia penjabaran konstituennya banyak, BioFactors, 27, 2006,69-78.
Attioua B, Chabert P, Weniger B, Antiplasmodial aktivitas dari konstituen terisolasi dari Croton Lobatus (Euphorbiaceae), Pharmaceut. Biol., 45, 2007, 1-4.
Shihai X, Yang K, Guo S, Yingping L, kajian mengenai kandungan kimia dari Acropora pulchra, Tianran Chanwu Yanjiu Yu Kaifa, 15, 2003, 109-112.
Peng N, Yaoming H, Zhao J Feng Y, Zhong Y, komposisi kimia dari minyak esensial dari dua Alpinia spesies dari pulau Hainan, China, Zeitschrift fuer Naturforschung, J. Biosci., 59, 2004, 157-160.
Dembitsky VM, Shkrob I, Rozentsvet OA, asam lemak amides dari ganggang hijau air tawar Rhizoclonium hieroglyphicum, Fitokimia, 54, 2000, 965-967.
Ahmad I, Nawaz SA, Afza N, Malik A, Fatima I, Khan SB, Ahmad M, Choudhary MI, isolasi onosmins A dan B, lipoxygenase inhibitor dari Onosma hispida, Chem Pharm Bull (Tokyo), 53, 2005, 907-1010.
Catalan dapat, CS de Heluani, Kotowicz C, Gedris TE, Herz W, linear sesterpene, dua squalene derivatif dan dua peptida derivatif dari hieronymi Croton, Fitokimia, 64,2003, 625-629.
Peng J, ekstraksi cairan Fan G, Wu Y, superkritis asetat aurentiamide dari Patriniavillosa. Jus dan isolasi berikutnya oleh silika gel dan berkecepatan tinggi berarus kromatografi, J. Chromatogr. A, 1083, 2005, 52-57.
13
