Klt Multi Eluen Dan Dua Dimensi

Kristalisasi Dan Uji Kemurnian Dengan KLT Multieluen Dan Dua Dimensi BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang Pada saat ini, banyak masyarakat yang secara aktif mengkonsumsi obat tradisional untuk menyembuhkan penyakitnya. Hal ini dikarenakan karena banyaknya senyawa yang terdapat pada tumbuhan yang dapat dimanfaatkan. Penggunaan obat tradisional ini banyak digemari oleh masyarakat. Hal ini karena efek samping yang dihasilkan jauh lebih sedikit dibandingkan dengan obat yang dibuat dengan senyawa senyawa kimia. Salah satu cara untuk menarik senyawa kimia yang terkandung dalam tanaman adalah dengan cara ekstraksi. Terlebih, Indonesia memiliki banyak tumbuhan yang berkhasiat. Salah satunya adalah pulai ( Alstonia Alstonia scholaris L.). Bagian dari tumbuhan pulai yang paling sering dan mudah untuk dikonsumsi adalah daun. Secara empiris, diketahui bahwa manfaat pulai untuk kesehatan antara lain adalah mengatasi demam, menyembuhkan penyakit malaria, menyembuhkan diare, menyembuhkan penyakit beriberi, mengatasi sakit badan dan dada, memperkuat lambung, mengobati kencing manis dan menyembuhkan penyakit malaria. Teknik kromatografi telah berkembang dan telah digunakan untuk memisahkan dan mengkuantifikasi berbagai macam komponen yang kompleks

baik

komponen

organik

maupun

komponen

anorganik.

Kristalisasi merupakan salah satu cara untuk analisis kemurnian dari isolat hasil isolasi. Namun beberapa senyawa mungkin tidak akan mengkristal, ini disebabkan dari karakteristik setiap senyawa berbeda-beda. Namun itu tidak bisa dijadikan parameter untuk mengatakan bahwa senyawa tersebut bukanlah senyawa murni. Adapun metode yang dapat digunakan untuk memisahkan suatu campuran yang mengandung banyak komponen berupa modifikasi yaitu KLT dua dimensi dan pengujian kemurnian suatu senyawa dapat DEVY NUR AZALIA HASANUDDIN 15020150250

MUHAMMAD YUNUS SAREDDA

Kristalisasi Dan Uji Kemurnian Dengan KLT Multieluen Dan Dua Dimensi dilakukan dengan KLT multi eluen. Multi eluen adalah penggunaan eluen atau fase gerak yang berbeda yang memungkinkan pemisahan analit dengan berdasarkan tingkat polaritas yang berbeda. KLT dua dimensi adalah cara yang memungkinkan pemakaian lapisan fase diam yang lebih luas untuk memisahkan campuran yang mengandung banyak komponen. B. Rumusan Masalah Adapun rumusan masalah adalah apakah isolat fraksi daun pulai ( Alstonia scholaris L.) dari metode KLT multieluen dan KLT dua dimensi dihasilkan murni? C. Maksud Praktikum Adapun

maksud

praktikum

adalah

untuk

mengetahui

cara

memeperolesh isolat murni dari fraksi daun pulai ( Alstonia scholaris L.) menggunankan metode KLT multieluen dan KLT dua dimensi ? D. Tujuan Praktikum 1.

Tujuan Umum Praktikum Mampu mengetahui metode KLT multieluen dan KLT dua dimensi pada isolat fraksi daun pulai ( Alstonia scholaris L.).

2.

Tujuan Khusus Praktikum Mampu menetukan kemurnian isolat menggunakan metode KLT multieluen dan KLT dua dimensi pada fraksi daun pulai ( Alstonia scholaris L.). E. Manfaat Praktikum

1. Manfaat Teoritis Secara teoritis, hasil praktikum ini dapat mengetahui mengenai cara menggunakan metode KLT multieluen dan KLT dua dimensi pada fraksi daun pulai ( Alstonia scholaris L.). 2.

Manfaat Praktis Dapat memberikan informasi mengenai cara menggunakan metode KLT multieluen dan KLT dua dimensi pada fraksi daun pulai ( Alstonia scholaris L.).

DEVY NUR AZALIA HASANUDDIN 15020150250


Kristalisasi Dan Uji Kemurnian Dengan KLT Multieluen Dan Dua Dimensi BAB II TINJAUAN PUSTAKA A. Uraian Tanaman a.

b.

Klasifikasi Tanaman (Integrated Taxonomic Information System) Regnum

: Plantae

Divisi

: Tracheophyta

Kelas

: Magnoliopsida

Ordo

: Gentianales

Family

: Apocynaceae

Genus

: Alstonia R. Br.

Species

: Alstonia scholaris (L.) R. Br.

Morfologi Tanaman Tanaman berbentuk pohon, tinggi 20 - 25 m. Batang lurus, diameternya mencapai 60 cm, berkayu, percabangan menggarpu. Kulit batang rapuh, rasanya sangat pahit, bergetah putih. Daun tunggal, tersusun melingkar 4 - 9 helai, bertangkai yang panjangnya 7,5 - 15 mm, bentuknya lonjong sampai lanset atau lonjong sampai bulat telur sungsang, permukaan atas licin, permukaan bawah buram, tepi rata, pertulangan menyirip, panjang 10 - 23 cm, lebar 3 - 7,5 cm, warna hijau. Perbungaan majemuk tersusun dalam malai yang bergagang panjang, keluar dari ujung tangkai. Bunga wangi berwarna hijau terang sampai putih kekuningan, berambut halus yang rapat. Buah berupa buah bumbung berbentuk pita yang panjangnya 20 - 50 cm, menggantung. Biji kecil, panjang 1,5 - 2 cm, berambut pada bagian tepinya dan berjambul pada ujungnya. Perbanyakan dengan biji atau setek batang dan cabang (Sulina, 2010).

c.

Nama Lain Kayu gabus, pulai (Sumatera); lame (Sunda); polay (Madura) (Agromedia, 2008).



Kristalisasi Dan Uji Kemurnian Dengan KLT Multieluen Dan Dua Dimensi d.

Kandungan Kimia Alkaloid ditain, ekitamin (ditamin), ekitenin, ekitamidin, alstonin, ekiserin, ekitin, ekitein, porfirin, triterpen pikrinin, dan asam ursolat (Agromedia, 2008).

e.

Khasiat Tanaman Berkhasiat mengatasi demam, malaria, limfa membesar, batuk berdahak, diare, disentri, kurang nafsu makan, perut kembung, sakit perut, kolik, anemia, kencing manis, wasir, gangguan haid, bisul, hipertensi, rematik akut, beri-beri (Agromedia, 2008). B. Metode Kristalisasi digunakan untuk mendapatkan bahan dalam bentuk

Kristal murni. Oleh karena itu pembentukan Kristal menyebabkan zat terlarut memisah dari lelehan atau larutan dimana yang tidak murni tetap tertinggal dalam larutan, maka kristalisasi juga merupakan proses pemisahan (Harborne,1987). KLT dua dimensi merupakan salah satu metode untuk mengetahui kemurnian suatu senyawa dari hasil isolat, yang di mana bertujuan untuk meningkatkan

resolusi

sampel

ketika

komponen-komponen

solute

mempunyai karakterisktik kimia yang hampir sama. Karenanya nilai Rf juga hampir sama sebagaimana dalam asam-asam amino, selain itu 2 sistem fase gerak yang sangat berbeda dapat digunakan secara berurutan, sehingga memungkinkan untuk melakukan pemisahan analilt yang mempunyai tingkat polaritas yang berbeda (Sastrohamidjojo, 1985). KLT dua arah adalah cara yang memungkinkan pemakaian lapisan fase

diam

yang

lebih

luas

untuk

memisahkan

campuran

yang

mengandung banyak komponen. Selain itu, dua sistem pelarut yang sangat berbeda dapat digunakan secara berurutan pada campuran tertentu, jadi memungkinkan pemisahan campuran yang mengandung komponen yang kepolarannya sangat berbeda. Ekstrak ditotolkan dan dielusi

seperti

pada

KLT

normal

kemudian

diputar

900 untuk

pengembangan kedua (Gibbons, 2006). DEVY NUR AZALIA HASANUDDIN 15020150250


Kristalisasi Dan Uji Kemurnian Dengan KLT Multieluen Dan Dua Dimensi KLT Multieluen adalah penggunaan eluen atau fase gerak yang berbeda yang memungkinkan pemisahan analit dengan berdasarkan tingkat polaritas yang berbeda. Dalam multi eluen, setelah pengembang tunggal menaik, kromatogram diangkat dari chamber dan dikeringkan, biasanya selama 5-10 menit. Kromatogram tersebut kemudian dielusi lagi dalam eluen segar dari pelarut yang sama dalam arah yang sama untuk jarak yang sama.Proses ini, yang dapat diulang berkali-kali, meningkatkan resolusi komponen dengan nilai RF bawah 0,5. Beberapa pengembang dilakukan dengan pelarut yang berbeda dalam arah yang sama, masingmasing yang menjalankan jarak yang sama atau berbeda, disebut elusi bertahap. Sebuah fase kurang polar dapat digunakan pertama, diikuti oleh fase yang lebih polar, atau sebaliknya. Pemindahan material nonpolar kebagian atas lapisan, meninggalkan zat terlarut polar terganggu darimana dia berasal. Setelah kering, zat terlarut polar dipisahkan oleh pengembang dengan eluen (Stahl, 1985). Jika sebuah fraksi dipekatkan dan didinginkan serta pelarutnya dibiarkan menguap lambat, kristal dapat membentuk senyawa yang murni Kristalisasi dapat dilakukan dengan sedikit penggosokan pada bagian dalam dinding kaca selanjutnya membiarkannya di tempat dingin,bahkan dalam lemari pendingin. Beberapa deposit mungkin merupakan kristalin dan harus di cek dengan bantuan lensa tangan untuk meyakinkan bahwa deposit tersebut bukan bahan yang amorf yang berasal dari larutan saat pendinginan terjadi (Harborne,1987). Penyerap umum yang digunakan adalah silica gel, aluminium oksida, keiselgur, selullosa dan turunannya. Poliamida dll. Silica gel adalh penyerap umum yang banyak digunakan karena mempunyai daya pemisahan yang baik, hal ini telah diseleksi oleh Stahl untuk pertama kali 1958 (Stahl, 1985). Salah satu aplikasi untuk mengetahui kemurnian senyawa hasil isolat dengan metode ini yaitu dengan mengelusi noda pada 2 arah yang



Kristalisasi Dan Uji Kemurnian Dengan KLT Multieluen Dan Dua Dimensi berbeda dan menggunakan eluen yang berbeda, isolate dikatakan murni apabila noda yang dinampakkan adalah tunggal (Stahl, 1985). Multi eluen merupakan penggunaan eluen atau fase gerak yang berbeda yang memungkinkan pemisahan analit dengan berdasarkan tingkat polaritas yang berbeda (Sastrohamidjojo, 1985). Prinsipnya, ”like dissolve like” yang dapat digunakan untuk pemilihan pelarut dalam menentukan jenis senyawa kimia yang mungkin terekstraksi dari organisme. Dimana pelarut non polar akan mengestraksi senyawa-senyawa non polar akan terekstraksi oleh pelarut polar, serta dapat juga digunakan untuk menganalisis kemurnian suatu isolat/senyawa kimia yang diperoleh dari hasil isolasi dari bahan alam (Sastrohamidjojo, 1985).



Kristalisasi Dan Uji Kemurnian Dengan KLT Multieluen Dan Dua Dimensi BAB III METODE KERJA A. Alat Adapun alat –alat yang digunakan pada saat praktikum yaitu chamber, gegep besi, gelas ukur, lampu UV 254 nm & 366 nm, pensil 2B, penggaris hitam, pisau cutter, pipet tetes, sendok tanduk besi, dan vial. B. Bahan Adapun bahan yang digunakan dalam praktikum ini yaitu aluminium foil, etil asetat, isolat daun pulai ( Alstonia scholaris L.) , kertas saring, lempeng KLT multi eluen 7x1 cm dan lempeng KLT dua dimensi 5x5 cm, n-hexan, pipa kapiler dan tissue. C. Prosedur Kerja (Malik, A & Najib, A, 2018) 1. KLT Multieluen

Isolat ditotolkan pada lempang yang berukuran 7x1 cm. Lalu dielusi dengan eluen 1 n-heksan : etil asetat (7:3) dalam chamber. Noda yang terbentuk, diamati di UV254 dan UV366 nm. Lalu dielusi dengan eluen 2 metanol : kloroform (6:4) dalam chamber. Diamati di UV254 dan UV366 nm, kemudian disemprotkan dengan DPPH (1,1Diphenyl 2-Phicrylhidrazil). Terbentuk noda tunggal (ungu- kuning). 2. KLT Dua Dimensi Isolat ditotolkan pada lempang yang berukuran 5x5 cm. Lalu dielusi dengan eluen n-heksan : etil asetat (7:3) dalam chamber. Lempeng diputar 90° berlawanan jarum jam. Lalu dielusi lagi dengan eluen yang sama dalam chamber. Diamati di UV 254 dan UV366 nm dan terbentuk noda tunggal.



Kristalisasi Dan Uji Kemurnian Dengan KLT Multieluen Dan Dua Dimensi BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN NO

Fraksi

KLT Multieluen

KLT Dua Dimensi

1

Kromatografi Kolom

-

Tidak Tunggal

-

Tidak Tunggal

Konvensional (KKK) 2

Kromatografi Cair Vakum (KCV)

Kromatografi menyangkut metode pemisahan yang didasarkan atas distribusi diferensial komponen sampel di antara dua fasa, yaitu fasa diam (stationary phase) dan fasa gerak (mobil phase). Fasa diam dapat berupa padatan atau cairan yang terikat pada permukaan padatan (kertas atau suatu adsorben), sedangkan fasa gerak dapat berupa cairan disebut eluen atau pelarut. Pemisahan dan pemurnian suatu bahan terutama dilakukan dengan menggunakan salah satu dari beberapa teknik kromatografi ataupun menggunakan gabungan teknik-teknik tersebut. Pemilihan teknik kromatografi sebagian besar tergantung pada sifat kelarutan dan keatsirian senyawa yang akan terpisah. Praktikum fitokimia II merupakan lanjutan dari praktikum fitokimia I, dimana pada praktikum fitokimia II dilakukan beberapa tahap percobaaan yang bertujuan untuk memperoleh isolat murni atau senyawa tunggal. Proses untuk mendapatkan isolat atau senyawa tunggal (senyawa murni) disebut sebagai isolasi. Sampel yang digunakan dalam proses isolasi yaitu sampel fraksi daun pulai ( Alstonia scholaris L.) yang diperoleh dari praktikum fitokimia I. Untuk menguji kemurnian isolat digunakan Kromatografi Lapis Tipis multieluen dan dua dimensi. Tujuan dari tahap ini yaitu untuk mengetahui DEVY NUR AZALIA HASANUDDIN 15020150250


Kristalisasi Dan Uji Kemurnian Dengan KLT Multieluen Dan Dua Dimensi apakah senyawa isolat yang diperoleh merupakan senyawa yang murni atau tidak. Dengan kata lain untuk mengetahui kemurnian atau ketidakmurnian senyawa isolat tersebut. Pada praktikum Kromatografi Lapis Tipis multieluen dan dua dimensi, hasil isolat yang sebelumnya telah disentrifugasi dan diambil cairan atasnya untuk ditotolkan pada lempeng KLT multieluen (7 cm x 1 cm) dan lempeng dua dimensi (5

cm x 5 cm). Pada KLT multieluen,

digunakan dua eluen yang berbeda (n-heksan : etil asetat dengan perbandingan yang berbeda) untuk mengelusi. Sedangkan pada KLT dua dimensi, digunakan 2 eluen yang sama dan 2 cara penotolan pada satu lempeng dimana penotolan ke-2, salah satu arahnya diputar 90° dari posisi awal berlawanan arah jarum jam. Lalu dielusi dan diamati dibawah sinar UV254 dan UV366. Pada percobaan yang telah dilakukan, pada KLT multieluen, perbandingan yang digunakan yaitu 7 : 3 dan 5 : 5 (n-heksan : etil asetat). Sedangkan pada KLT dua dimensi, menggunakan perbandingan 7 : 3 (nheksan : etil asetat). Pada KLT multieluen dari isolat KKK, setelah dilihat dibawah sinar UV, tidak terdapat noda pada lempeng dan pada KLT dua dimensi, noda tampak tunggal pada sinar UV254 dan untuk isolat KCV pada KLT multieluen dengan UV366 tidak tampak noda. Hal ini dapat disebabkan karena faktor-faktor kesalahan yang dilakukan pada saat praktikum yakni dalam prosedur pengejaan yang kurang teliti.



Kristalisasi Dan Uji Kemurnian Dengan KLT Multieluen Dan Dua Dimensi BAB V KSIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan Dari hasil praktikum yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa isolat daun pulai ( Alstonia scholaris L.) yang diperoleh tidak murni berdasarkan metode KLT Multi Eluen dan KLT Dua Dimensi yang digunakan hal ini dibuktikan dengan tidak terbentuknya noda tungal pada semua lempeng dari masing-masing metode tersebut. B. Saran Sebaiknya praktikan teliti dan cermat dalam menjalani praktikum sehingga hasil yang diperoleh dapat akurat.



Kristalisasi Dan Uji Kemurnian Dengan KLT Multieluen Dan Dua Dimensi DAFTAR PUSTAKA Agromedia. 2008. Buku Pintar Tanaman Obat . Redaksi Agromedia : Jakarta. Badan BPOM. Jakarta.

2008.

Direktorat Obat Asli Indonesia. Depkes RI :

Gibbons, S. 2006. An Introduction to Planar Chromatography. Natural Products Isolation. Humana Press Inc. Totowa : New Jersey Harbone, JB. 1987. Metode Fitokimia : Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan. Penerbit ITB : Bandung. Integrated Taxonomic Information System. https://www.itis.gov/servlet/SingleRpt/SingleRpt?search_topic=TSN& search_value=184803#null. Diakses tanggal 26 Maret 2018. Stahl, Egon. 1985. Analisis Obat Secara Kromatografi dan Mikroskopi, ITB : Bandung. Sulina. 2010. Tanaman Obat http://www.iptek.net.id/ind/pd_tanobat/view.php?id=154.


Indonesia.


Kristalisasi Dan Uji Kemurnian Dengan KLT Multieluen Dan Dua Dimensi Lampiran 2. Gambar



Kristalisasi Dan Uji Kemurnian Dengan KLT Multieluen Dan Dua Dimensi LAMPIRAN Lampiran 1. Skema Kerja KLT Multi Eluen - ditotolkan isolat KKK dan KCV pada lempeng 7 x 1 cm - dielusi pada eluen n-heksan : etil asetat (7:3) - diangin-anginkan - diamati noda dibawah sinar UV 254 nm dan 366 nm - dielusi pada eluen n-heksan : etil asetat (5:5) - diangin-anginkan - diamati noda dibawah sinar UV 254 nm dan 366 nm - disemprotkan DPPH SenyawaMurni



Kristalisasi Dan Uji Kemurnian Dengan KLT Multieluen Dan Dua Dimensi KLT DuaDimensi - ditotolkan isolat KKK dan KCV pada lempeng 5 x 5 cm - dielusi pada eluen n-heksan : etil asetat (7:3) - diangin-anginkan - diamati noda dibawah sinar UV 254 nm dan 366 nm - diputar 90⁰ berlawanan arah jarum jam - dielusi pada eluen n-heksan : etil asetat (7:3) - diangin-anginkan - diamati noda dibawah sinar UV 254 nm dan 366 nm - disemprotkan DPPH SenyawaMurni



Kristalisasi Dan Uji Kemurnian Dengan KLT Multieluen Dan Dua Dimensi Lampiran 3. Perhitungan Eluen n-heksan : etil asetat 7:3 n-heksan 7

x 5 ml = 3,5 ml

10

Etil asetat 3

x 50 ml = 1,5 ml

10

5:5 n-heksan 5

x 5 ml = 2,5 ml

10

Etil asetat 5

x 5 ml = 2,5 ml

10



Klt Multi Eluen Dan Dua Dimensi

Recommend Documents