esterilizacion

“AÑO DE LA DIVERSIFICACIÓN PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACIÓN” UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO FACULTA FACULTAD D DE INGENIERÍA ING ENIERÍA AMBIENTAL Y DE RECURSOS REC URSOS NATURALES MICROBIOLOGIA GENERAL

INFORME DE ESTERLIZACION DE MATERIALES DE LABORATORIO 

Lujan Narrea Susan Yuleysi Yuleysi

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Bellavista, Setiembre del 2015

INFORME DE ESTERILIZACION DE MA M ATERIA TERIALES LES DE LABORATORIO

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL Y RECURSOS NATURALES

I.

OBJETIVOS:

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II.

Reconocer cuales son los agentes de control mas empleados para combatir los microorganismos en el laboratorio. Adquirir la destreza en el laboratorio. Esterilizar material de laboratorio para ser utilizados en prácticas futuras. INTRODUION

En el trabajo del laboratorio de Microbiología tienen importantísima aplicación los procedimientos, técnicas  productos que suprimen o disminuen la !italidad de los microorganismos patógenos. "o e#iste un procedimiento de esterilización  desinfección aplicable a todos los casos. El método de esterilización será$ seleccionado para cada caso teniendo en cuenta la naturaleza física del objeto  la naturaleza biológica del contaminante. %omo rara !ez se conoce la población de microorganismos sobre un objeto que debe ser tratado, debemos presuponer que se encuentran presentes las formas microbianas mas resistentes& las endosporas. 'as principales razones para controlar a los microorganismos pueden resumirse de la siguiente forma& •

(ara e!itar la transmisión de las enfermedades  las infecciones.

•

(ara eliminar los microorganismos de un )ospedador que esta infectado

•

(ara eliminar microorganismos de diferentes materiales  así e!itar su deterioro  alteración III.

!"RO TEORIO:

'os microorganismos pueden ser eliminados , in)ibidos o muertos por agentes *sicos, agentes quimicos, o por porcesos *sicos  agentes quimioterapeticos. +e dispone de una gran !ariedad de tecnicas  agentes que actuan de maneras diferentes  cada uno tiene su aplicación  limite de uso. n agente *sico es una propiedad o condicion que causa un cambio, por ejemplo la temperstura, la presion, radiacion  los -itors. n agente quimico es una sustancia que causa una radiacion especi*ca  que se caracterizan por una estructura molecular tipica, por ejemplo tenemos los compuestosfenolicos, los alco)oles, alde)idos, etc. "A%

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n proceso quimico es un procedimeinto que causa un cambio, por ejemplo la *ltracion, la esterilizacion, incineracion, )igienizacion. +e utilizan !arios terminos especi*cos para escribir a estos agentes  procesos. Esterilizacion: El porceso que destrue todas las formas de !ida se llama esterilizacion. n objeto esteril, en senrido microbiologico esta libre de microorganismos !i!os. n objeto o una sustancia esta esteril o no esta esteril. Desinfectante: n agente, usualmente un producto quimico que mata las celulas !egetati!as pero no necesariamente las formas esporuladas de los microorgnismos productos de enfermedades, se denomina un desinfectante. El termino se aplica comunmente a sustancias usadas sobre objetos inanimados. 'a desinfeccion es el proceso mediante el cual se destruen las celulas !egetati!as pero no necesariamente las esporas de los agentes infecciosos. Antiseptico: na sustancia que se opone a la infeccin o pre!iene crecimiento o accion de los microorganismos, bien sea destruendo o bien in)ibiendo su crecimiento o acti!ida, se denomina un antiseptico. Higienizacion: n agente que reduce la poblacion microbiana )asta ni!eles que se jzgan seguros para las e#igencias de la salud publica se denomina un )igienizante. 'os )iginizantes suelen aplicarse a objetos inanimados  generalmente se emplean en e cuidado diario de equipos  utencilios en las plantas lec)eras  la preparacion de alimentos, asi como para los !asos, platos  utencilios en los restaurantes. El proceso de desinfeccion producira )igienizacion. +in embargo en el sentido estreicto )igienizacion implica una condicion sanitaria o de limpieza cosa que la infeccion no implica necesariamente. Germicida: n agente que mata las celulas !egetati!as pero no necesariamente las formas esporuladas de los germenes se llaman germinicida. En la practica, germicida es casi sinonimo de desinfectante. (eor un germinicida se usa generalmente para toda clase de germenes microbios  para cualquier aplicación. Bactericida: n agente que mata las formas !egetati!as de las bacterias. /el mismo modo, los terminos fungicida, !iricida  esporocida se re*eren a agentes que matan a los )onogs, !irus  esporas respecti!amente. Bacterisotasis: na condcion en la que se pre!iene el crecimiento de las bacterias se denomina bacteriostasis. /el mismo, fungistatico describe la accion de un agente que detiene el crecimiento de los )ongos. 'os agentes que tienen en comun la capacidad de in)ibir los crecimientos de los microorganismos se designan colecti!amente, como agentes bacteriostaticos.

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Agente antimicrobiano: El termino de agente antimicrobiano se re*ere a un agente que interi*ere con el crecimiento  metabolismo de los microbios. En el uso comun, el termino denota in)ibicion de crecimiento  cuando se re*er a grupos especi*cos de organismos, suelen usarse con frecuencia los terminos tales como antibacteriano o antifungico. Algunos agentes antimicrobianos se utlizan especi*camente para el tratamiento de infecciones, estos se denominan agentes terapeuticos.

El método de esterilización a emplearse debe ser previamente valorado.

Actualmente e#isten !alores tabulados de tiempo de e#posición, temperatura  concentración de principios acti!os para los métodos de esterilización más usados que nos permiten elegir el más adecuado para cada caso. En la elección debe tenerse en cuenta también el uso posterior que le sera dado 1o no2 al objeto a esterilizar. (ara asegurar el é#ito de un proceso esterilizante es necesario considerar las siguientes pautas& Esterilización previa: +erá necesaria cuando el material 3 o equipos )aan sido utilizados con material infeccioso o presunto infeccioso, por ejemplo placas de (etri inoculadas, tubos conteniendo culti!os de microorganismos, frascos empleados en el cepario, etc. +erán esterilizados en autocla!e a  atm. de presión durante 4 5 67 minutos. (ara las pipetas, micro pipetas  tubos de )emólisis puede emplearse este método o sumergirlas inmediatamente después de ser utilizadas en solución desinfectante de formol al 7 8 durante una )ora. Limpieza previa: +e realizará para eliminar las partes gruesas de suciedad o residuos no infecciosos 1gratitud, resto de pegamento, cinta ad)esi!a, carbono, tinta de rotulado, etc.2. +e empleará el raspado con espátulas, cepillo, esponjas metálicas, pa9os, etc. +e enjuagará repetidas !eces bajo el c)orro de agua corriente a presión 1conectando a la canilla un tapón perforado o tapando parcialmente con un dedo2. +e aconseja un ultimo enjuague con agua destilada. +e dejará secar en canasto o rejilla de alambre boca abajo a temperatura ambiente o estufa a :7 5 ;7 <%. El material de !idrio que luego de este tratamiento a=n quedase manc)ado será sumergido en una solución sulfocrómica durante 0>

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)s 1Este procedimiento lo realiza personal especializado del /roguero2. Preparación del material de vidrio: este acondicionamiento debe realizarse de manera tal de asegurar la perfecta esterilización del mismo en todos sus puntos  e!itar la posterior contaminación. a2 (lacas de (etri& se en!uel!en en papel madera seg=n la técnica

indicada por el instructor 1se esterilizan en estufa a :7? ;7o% durante dos o una )ora respecti!amente2. b2 @ubos de ensaos, tubos de )emólisis  tubos de )an& se

confecciona en tapón de algodón  se cubre con un capuc)ón de papel aluminio. 1se esterilizan en estufa2. c2 (ipetas& se obtura el e#tremo superior con un *ltro de algodón

 luego se en!uel!en con tiras de > a 4 cm. de anc)o de papel madera comenzando por la punta de la misma. /ebe rotularse cada una con la capacidad  graduación correspondiente 1se esterilizan en estufa2.

Los métodos de esterilización se clasican en : !. "#$%&'$:

.&AL'(: Act=a por desnaturalización de proteínas  contribue a la fusión de lípidos de membranas. ... &AL'( H)*ED': 'a desnaturalización  coagulación se

facilita en presencia de agua pues se rompen los puentes de )idrogeno entre los grupos % B C????D" que constitue la estructura secundaria  se agrega 1también mediante puente de )idrógeno2 una molécula de agua a cada e#tremo de esas uniones rotas. 'as proteínas en soluciones más diluidas coagulan a menor temperatura que las concentradas. Esterilizar e#clusi!amente en calor )=medo& medios de culti!os, recipientes contaminados, material de goma,  todo elemento que no resista las altas temperaturas del calor seco. El autocla!e utiliza !apor a presión superior a la normal. Así$ , la temperatura del !apor de agua asciende a 0o%. El !apor saturado penetra en los recipientes tomando contacto con los microorganismos a destruir, allí se condensa liberando calor. El calentamiento es rápido por la gran cantidad de calor latente del !apor de agua, que libera al condensarse sobre la super*cie del objeto. entajas del calor )=medo& "A%

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i.

Rápido calentamiento

ii.

Fuena penetración

iii.

%orto tiempo de esterilización

i!.

Fajo deterioro del material e#puesto 1(or menor temperatura  menor tiempo2

!.

"o deja residuo tó#ico

!i.

Económico.

..0. &AL'( $E&': /es)idrata las bacterias, !irus, etc.  facilita la

coagulación o desnaturalización de las proteínas. +e requieren maores temperaturas para producir da9o irre!ersible 1muerte2. +e acepta que el calor seco actué o#idando los constituentes intracelulares. En el proceso de esterilización son prioritarios los procesos o#idati!os  de fusión de membranas por sobre la desnaturalización. Resulta lento por la menor e*cacia del calor seco  por la lentitud del transporte del calor 1con!ección  radiación2. +e recomienda el calor seco siempre que el !apor de agua que se emplea no sea deseable o no sea posible que entre en contacto directo con el material que se !a a esterilizar. Este tipo de calor comprende&

%ncineración + esterilización al ro,o: Métodos usados para esterilizar asa metálicas, espátulas, destrucción de carcasas, animales de laboratorio  cualquier otro material de laboratorio infectado que es preciso eliminar o material que solo se usa por el momento  constantemente. Estos métodos consisten en la e#posición directa del material a la acción de la llama )asta alcanzar una coloración roja. "lameado: Método utilizado para esterilizar bisturíes, agujas )ipodérmicas, boca de tubos de ensao, porta  cubreobjetos, etc. %onsiste en pasar !arias !eces el objeto a tra!és de la llama sin permitir que este alcance al rojo. Aire caliente: Método usado para esterilizar material de !idrio  objetos metálicos. +e deben en!ol!er todo el material de laboratorio en papel, además, los tubos, erlemeeres, pipetas  todo material en forma cilíndrica deben ser cubiertas por un tapón de algodón en su boca.

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!.!.-. BAA$ /E*PE(A/0(A$: 'as temperaturas por debajo del optimo de crecimiento microbiano disminuen la tasa de metabolismo  si la temperatura es su*ciente baja, cesan el crecimiento  el metabolismo. !.!.1. (E"(%GE(A&%'2: Este método es mu utilizado en los laboratorios de microbiología para mantener  conser!ar cepas de microorganismos a temperatura bajas. !.3

(AD%A&%'2E$

.0. L4z 4ltravioleta: solamente para aire o para super*cie o capas mu delgadas de líquidos pues no penetra. +e usa para consultorios, salas, laboratorios, cámaras, quirófanos. "o atra!iesan el !idrio. 'as ondas  tienen su*ciente energía para causar roturas en el A/", produciendo la muerte del organismo e#puesto. 'as cámaras de siembra !ienen equipadas con una lámpara de luz  para mantener el área estéril, la cual se debe apagar cuando se ingresa a la cabina por la peligrosidad a la e#posición de las radiaciones 1quemaduras, eritemas, cáncer de piel2 0. ME%G"H%C+&

3.! "iltración: (ara medios de culti!o, sueros  soluciones que se alteren con el calor. En la maoría de los *ltros )a tres factores principales que inter!ienen en la retención de partículas 1bacterias, !irus, proteínas, etc.2& 

Efecto mecánico de *ltro, seg=n el tama9o del poro.



Repulsión o atracción eléctrica

3.3 0ltraltración: (ara separación  medición de !irus. Membranas de ésteres de celulosa biológicamente inertes que no retienen partículas por adsorción por lo tanto la retención de partículas depende principalmente del tama9o de los poros. 3.- Desinfectantes: +on agentes antimicrobianos capaces de matar los microorganismos patógenos 1infecciosos2 de un material. (ueden 1 en muc)os casos suelen2 presentar efectos tó#icos sobre tejidos !i!os, por lo que se suelen emplear solo sobre materiales inertes. 3.1 Esterilización por gas plasma: Es una de las tecnologías posibles para esterilizar material termo sensible. %onsiste en crear un plasma 1estado entre liquido  gas2, aplicando una radiofrecuencia a (eró#ido de Didrogeno que ejerce la acción biocida. El plasma es considerado como

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el cuarto estado de la materia consistente en un conjunto de iones, electrones  partículas atómicas neutras. IV.        

V.

!"TERI"#ES

Algodón (apel en!ol!ente (a!ilo (ipetas (lacas petri @ubos de ensao Estufa Autocla!e $ROEDI!IENTO

El A4toclave

Es un recipiente utilizado para esterilizar medios de culti!o, agua destilada, tierra etc. Mediante calor )=medo. El material a esterilizar se e#pone a temperaturas superiores a la de ebullición del agua, gracias al aumento de la presión. El !apor del agua difunde por osmosis a tra!és de las esporas coagulando su protoplasma. Ieneralmente se esterilizan a temperaturas que !an entre 7J K 0:<% por un tiempo de 4 a 07 minutos con presiones que !arían entre 4  07 libras por pulgada cuadrada (ara lograr una esterilidad con*able el método estándar es el !apor saturado, en autocla!e, a una temperatura de 0 <% durante 4 minutos. En el caso de descontaminación el tiempo puede e#tenderse a 67 minutos. Esta temperatura se logra por !apor de agua a una atmósfera de presión sobre la presión atmosférica. 'os recipientes a colocar en el autocla!e no deben estar totalmente llenos  deben tener tapas -ojas o estar tapados con algodón con una sobre tapa para permitir la ebullición libre  la liberación del aire disuelto. (ara grandes !ol=menes de líquidos se debe permitir un maor tiempo de purgado. Este método se utiliza para esterilizar medios de culti!os  soluciones. En el caso de líquidos, éstos no deben formar emulsiones con el agua como Ej& aceite o !aselina. @ambién se utiliza para esterilizar ropa de cama o material te#til en general, siempre que el autocla!e esté pro!isto de un sistema de secado por !acío.

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"ormas de uso generales del autocla!e 'a utilización del autocla!e comprende los siguientes pasos& a2 %ontrolar el ni!el de agua& en caso necesario, completar con agua corriente b2 Mantener la posición abierta de la espita c2 %ontrolar las funciones de la !ál!ula de seguridad d2 Hntroducir el material a esterilizar. e2 %errar la tapa f2 Encender la fuente de calor g2 (urgar para eliminar el aire de la cámara de esterilización )2 %errar la espita. i2 %uando se alcanza la presión 1indicadora de la temperatura2 deseada se comienza a contar el tiempo

Est4fa El proceso de esterilización requiere mayor temperatura y tiempo que en el caso del vapor saturado, ya que tiene una menor capacidad de tomar, transportar y ceder el calor. La temperatura de esterilización puede variar entre los 160 °C, 2 horas a 180 °C 1 hora. El papel y el algodón no deben esterilizarse a más de 170 °C, ya que se carbonizan. Normas de uso generales de la estufa Los materiales no deben colocarse superpuestos ni tocando las paredes, de manera que no obstruya la circulación del aire. •

Cargar la estufa de forma tal de no impedir la convección del aire y que el material no toque las paredes.

•

Controlar la posición del termómetro: su tubo no debe tocar la carcaza metálica ni la puerta, pues se podrí an registrar temperaturas falsas (mayores a las reales).

•

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Encender la fuente de energí a

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VI.

•

Cuando se alcanza la temperatura deseada comenzar a contar el tiempo de esterilización.

•

Dejar enfriar antes de retirar el material.

UESTION"RIO

!5 674e materiales de laboratorio serina los indicados para ser esterilizados en estos e84ipos.9 35 Elabora 4na tabla indicando otros materiales de laboratorio 84e se p4eden esterilizar en a4toclave + orno esterilizador

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esterilizacion

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