Universidad Nacional Autónoma de México Facultad de Estudios Superiores Zaragoza Carrera de Química Farmacéutica Biológica Laboratorio Laborat orio de Microbiología II
AISLAMIENTO DE HONGOS DE DIFERENTES FUENTES Equipo:7 Integrantes: CEDILLO BRAVO JOSE NICOLAS FLORES ALVAREZ ALVAREZ ALEJANDRA ISELA ISE LA PEREZ LOPEZ OMAR JONATHAN RICARDO GONZALEZ VICTORIA
REQUERIMIENTOS REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES no son fotosintéticos Son
heterótrofos
Saprofitos:
Cuando toman nutrientes de materias orgánicas muertas o en descomposición
Parásitos : Cuando se nutren de materia viva
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Su estructura consta de un complejo llamado talo o micelio, que a su vez est esta constitu tituiida por múltip ltiple less fila filam ment entos (hifas)
•
No pose poseen en clor clorof ofil ila a
•
Pres Presen enta tan n tan tanto repr eproduc oducci ción ón sexu sexual al como como asex asexua uall
•
•
Los alimentos se disuelven mediante enzimas que secretan los hongos; después se absorben a través de la fina pared de la célula ( principalmente de quinina) Se dis distrib tribuy uye en por por difu difusi sión ón simp simple le en el prot protop opla lasm sma. a.
acidófilos, siendo su pH optimo de 5.6
teniendo un rango de temperatura entre 20 y 30°C.
Temperatura
pH
Condiciones de crecimiento Base Nutriente Humedad
humedad del 60%
Actividad de agua
aw =0.80
carbohidratos, sales de nitrógeno, proteínas, agua y los iones inorgánicos básicos.
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•
•
su fuente primordial es a base de CO2, H2O, sales les de nitr itrógeno y de carbohidr idratos, sobr obre todo la glu glucosa, sa, sac sacarosa y malto ltosa. sa.
Neces ecesit itan an de ion iones inor inorg gánico nicoss mas mas comu comune nes. s. Pueden sintetizar vitaminas, que le son necesarias pero hay especies que llegan a ser deficientes de estas y las toman del medio externo, esto se presenta sobre todo con tiamina y biotina.
Se deben estudiar las características siguientes: Forma
y tamaño supe rficie o en el reverso. Color en la superficie Difusión del pigmento. Coloración: blanca, rosada, gris ,anaranjada, verde, rojiza, negra.
gl abra, terrosa, granulosa, Textura: yesosa, glabra,
vellosa, cérea, cé rea,
cremosa. Superficie: elevada o plana, levantamiento central. Aspecto: plegado, radiado, cerebriforme, crateriforme. crateriforme. Consistencia: dura, suave, firme, membranosa. Rapidez de crecimiento: por ejemplo las levadur l evaduras as y los oportunistas crecen en 24 a 48 h, y los dermatófitos en 5 a 10 días.
IDENTIFICACIÓN PRELIMINAR DE CULTIVOS DE HONGOS •
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Se observa si una colonia de hongos es filamentosa o levaduriforme. levaduriforme. Observar la consistencia consistencia de la superficie de la colonia
•
El plegamiento
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La nitidez del borde de las colonias
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Presencia Presencia de pigmento en la superficie o el reverso reverso de la colonia o su difusión hacia el medio circundante.
Penicillium sp. sp. •
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Presenta micelios de crecimiento crecimiento rápido Aspecto: Aterciopelado o pulvurulento y rugosidades radiales. La colonia es inicialmente blanca y vellosa; a medida que se producen esporas pigmentadas, toman matiz verde o verde azulado. A veces se observan variantes variantes amarillas o tostadas. A menudo se forman rugosidades radiales. CRECIMIENTO: CRECIMIENTO: 22-30º, 7-10 dias
Aspergillus sp Macroscópicament e crecen entre 3-6 días a temperaturas de 25º y 37º, C 7-10 días las colonias están cubiertas con un micelio aéreo blanco, velloso. A medida que la colonia madura se observa una superficie cubierta de esporas negras. El reverso de la colonia presenta un color clar claro o o ver verdoso doso..
A. niger (Agar Czapek)
Aspergillus sp. (Agar Micosel)
A. terreus (Agar Czapek)
A. flavus (Agar Czapek)
Geotrichum sp. sp. •
•
Es de rápido crecimiento, presenta una colonia gris o gris amarillenta. Producen cadenas de artroconidios hialinos, lisos, de una sola célula, semiglobosos o cilíndricos a partir de hifas no diferenciadas
Curvularia sp Micelio aéreo bien desarrollado, denso, denso, algodonoso. Gris-blanco Gris-b lanco al comienzo se forma pronto marrón oscuro a rojo púrpura. Bordes enteros. El reverso es rojo púrpura a negro.
•
Alternaria sp Macroscopicamente las colonias tienen un aspecto denso denso,a ,alg lgod odon onoso oso grisgrisblanco al comienzo, tornandose pos posterio eriorrmen mente a color lor marr marrón ón oscur oscuro. o.
Fusarium sp En un principio las colonias son blancas y cubiertas por un micelio aéreo velloso bien desarrollado. Con la madurez se forman delicados pigmentos lavanda a rojo púrpura en la superficie de la colonia y en su reverso presenta color naranja o violeta, difu difusi sibl ble e al medi medio. o.
Mucor sp Macroscópicamente las colonias son de crecimiento muy rápido, algodonoso color blanco amarillento, que se convierte a gris oscuro con el desarrollo del esporangio.
Rhizopus ssp Macr Macros osco copi pica came ment nte e las las colonias crecen rapidamente en aproximadamente 4 días a 37º C, cubriendo la superficie del agar con un crecimiento denso con apariencia algodonosa que primero luce blanca, posteriormente gris gr isac acea ea,, de amar amaril ille len nta a café y el reverso se ve de colo colorr blan blanco co..
Microsporum fulvum Aspect Aspe cto o inco inconf nfun undi dibl ble: e: vell vellos osas as,, algodonos algodonosas, as, pulverulent pulverulentas. as. De vis vistosos osos y varia riados dos color olores es Crecen radialmente de modo progresivo Colo Coloni nias as de may mayor tamaño maño •
• •
•
Sacharomyces cerevisiae (Levaduras)
Características macroscópicas
Anverso: Forma colonias blancas cremosas, lisas.
Reverso: -Pigmento: Blancas cremosas, que no difunden al medio.
Trichosporon sp. (Hongos levaduriformes) levaduriformes)
Macroscopicamente las colonias crecen rapidamente en aproximadamente 8 días a 37º C , cubriendo la superficie del agar agar con apariencia cremosa blanca, posteriormente amarillenta
MEDIOS DE CULTIVO CULTIVO Medios de cultivo para aislamiento
Nutrientes básicos en medio m edio de cultivo •
Materias nitrogenadas como peptona.
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Azucares como glucosa o maltosa.
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Un soporte solido como la gelosa.
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pH ácido (5 a 6).
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Vitaminas (impurezas de la peptona)
AGAR SABOURAUD Composición: *Peptona *Glucosa *Agar-Agar *Agua destilada pH 5. 5.6 6 ± 0. 0.2 2
10g 20g 20g 1000ml
AGAR PAPA PAPA DEXTROSA DE XTROSA (PDA) Composición: *Pulpa de papa *Glucosa *Agar *Agua destilada
pH final final 5.6 5.6 +- 0.2.
250g 20g 20g 1000ml
USO:
Para cultivo de hongos patógenos y no patógenos, particularmente dermatofitos, levaduras y m.o. acidúricos.
USO:
Para cultivo, aislamiento y determinación del numero de hongos y levaduras.
AGAR LITTMAN
USO:
Composición: *Peptona, *Estreptomicina *Dextrosa, *Cristal Violeta *Agar
Medio selectivo, que suplementado con estreptomicina, estreptomicina, se emplea para el aislamiento primario y cultivo de hongos, especialmente dermatofitos.
10.0g 15.0g 10.0g 0.01g
20.0g
AGAR BIGGY *Sulfito de bismuto *Dextrosa *Extracto de levadura *Glicina *Agar *Citrato de Amonio y Bismuto pH 6. 6.8 8 ± 0. 0.2 2
8,0g 10,0g 1,0g 10,0g 16,0g
5,0g
USO:
El Agar Biggy (por sus siglas en inglés Bismuth-Glucose-GlycineYeast) es utilizado para el aislamiento y diferenciación diferenciación de especies de Candida. También es conocido como Agar de Nickerson.
HONGOS EN SUELO • •
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Fusarium solani Fusarium oxysporum Penicillium spp Aspergillus flavus Aspergillus fumigatus Rhizopus spp Rhizoctonia solani Macrophomina phaseolina Curvularia sp
HONGOS DEL AIRE El aire no es un medio en el que pueden desarrollarse los microorganismos pero es el portador de aerosoles biológicos como polvo, gotitas de agua y otros, que pueden estar cargados de los diversos grupos de micro microorg organi anismo smoss . De las capas de aire se han encontrado esporas de hongos que proceden principalmente del suelo, de la vege egetación ción y del del mar mar. El aire es también el medio de diseminación de hongos saprófitos
HONGOS EN FRUTAS Y VERDURAS • • • • • • • • • • • • •
Rhizopus Rhizopus sp. Gloeosporium sp Sclerotinia sp. Fusarium sp. Botrytis sp. Alternaria sp. Penicillium sp. Trichotechium Trichotechium sp. Cladosporium sp. Venturia sp. Fusicladium sp. Mucor sp. Phytotphora sp.
Ejemplos de hongos que se encuentran en el medio ambiente. Aire
Suelo
Plantas
Penicillium
×
×
Cladosporium
×
×
Trichoderma
×
Fusarium Fusarium solani solani
× ×
Fusarium
×
Aspergillus
×
×
Fenómenos fúngicos •
DIMORFISMO
Fenómeno en el cual un hongo hongo muestra en su ciclo biológico tanto un micelio filamentoso como un aspecto aspecto levaduriforme. algunos hongos principalmente las especies patógenas patógenas presentan dimorfismo dimorfi smo
forma filamentosa a 25 °C y 20°C forma de levadura a 37°C.
•
Temperatura dependiente
hongos dimorficos
Temperatura y nutrición dependientes
Nutrición dependientes
•
temperatura de 37 °C necesita la presencia de una atmósfera de CO 2 de 15 a 20% para crecer en forma levaduriforme
obedece a una variedad de factores ambientales, como oxigeno, CO2, hexosas (azucares), metales pesados
Temperatura dependiente Blastomices Blastomices dermatitides
Temperatura dependiente Candida albicas.
Diferentes formas de Candida albicans
Temperatura y nutrición nutrició n dependientes Histoplasma Histoplasma capsulatum
Nutrición dependientes Mucor racemosus (esporangios)
Polimorfismo Fenómeno que se da cuando un mismo hongo a diferentes diferentes condiciones de desarrollo presenta diferente diferente color color..
•
Pleomorfismo •
Es un fenómeno fúngico que se presenta en los medios de cultivo , consiste en la transformación irreversible de una cepa por un exceso de carbohidratos, esta tiende a cambiar dando un micelio blanco, estéril y algodonoso.
Pleomorfismo Se deb debe a aber aberrracio acion nes y mut mutacio acione ness crom cromos oso omic micas es propio de los derm ermatofit ofitos os.. En el caso de los dermatofitos, el pleomorfismo está relacionado con la pérdida de su capacidad de espo esporu rula lacción. ión. Al fina finall acab acaba a formá ormánd ndos ose e un mice miceli lio o carente de conid onidio ioss o con muy muy poc pocas estruc tructu turras de repr eproduc oducci ción ón..
Epidermophyton floccosum
Colonia, Pleomorfismo
Metodo de aislamiento
Aislamiento de Hongos del aire Aislamiento de hongos del aire
En una caja petri con agar Saboraud y otra con agar Litman
Exponerlas abiertas a la corriente de aire por 15 min.
Incubar a temperatura ambiente
Realizar lectura, reportar características macroscópicas
Aislamiento de Hongos del suelo Aislamiento de hongos en suelo
Pesar 0.5 g de tierra y agregar a un tubo 4.5mL de la solución salina estéril Dil 1:10
Fundir Saboraud y Littman
25º -30º se añaden 2 gts de la mezcla de antibióticos. PenicilinaStreptomicina 1:1
Añadir el contenido
*
Diluciones
hasta alcanzar
De las diluciones del
10 6
Realizar lectura, reportar características macroscópicas
Incubar a temperatura ambiente
paso ( * ) colocar 1 mL de las diluciones en dos cajas con agar Saboraud y dos con Littman
Diluciones realizadas para el aislamiento micologico del suelo
Aislamiento Aislamiento de de hongos de verduras verduras y frutos En el centro de la caja y fojandolo
Aislamiento de Hongo de verduras y frutas
Colocar un poco de tejido de la verdura o fruta que contenga el hongo
Pasarlos unos minutos por hipoclorito
No realizar si el hongo es de aspecto polvoso
Sembrar en agar Saboraud y Littman
Incubar a temperatura ambiente
Realizar lectura, reportar características macroscópicas
Bibliografía 1. 2.
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