Laboratorio No. 4
Biotecnología agrícola
AISLAMIENTO DE HONGOS FITOPATÓGENOS Prof. Diana Cárdenas Caro
Yenny Lorena Patiño Ramírez. Cód.1610312 Luisana Cristina Villamizar Flórez. Cód.1610250 Ana María Arismendy Pabón.Cód.1610319
INTRODUCCION
OBJETIVOS
Par Para cont ontrol rolar una enfer fermedad es indispensable conocer su agente causal. De lo con contra trario rio cualqu cualquier ier estrat estrategi egiaa de control podría ser infructuosa o eventualment eventualmentee agravar el estado sanitario del cultivo. Si no se conoce el fitopatógeno fitopatógeno (causante (causante de la enfermedad enfermedad en la planta) podría estarse utilizando un meca mecani nism smoo inap inapro ropi piad adoo cont contra ra algo algo desconoc desconocido ido.. Un correc correcto to diágno diágnosti stico co provee una cantidad considerable de info inform rmac ació iónn bási básica ca para para sele selecc ccio iona nar r métodos acordes al organismo o condición que esta causando el problema.
Objetivo general: Realizar el diágnostico de enfermedades en plantas ocasionadas por hongos. Objetivos específicos: Cono Co noce cerr y desc descri ribi birr los pri princi ncipale paless síntomas de enfermedades fúngicas en las plantas. Realizar los procedimientos preliminares de identificación del agente causal de la enfermedad vegetal. Prop Propon oner er algu alguno noss cont contro role less para para las las enfermedades encontradas. Equipos, Materiales y otros Reactivos.
Un diágnostico preciso se inicia siempre con con una una mues muestr traa repr repres esen enta tati tiva va y la observación apropiado del entorno de la planta. En el laboratorio la muestra es sometida sometida a diferentes diferentes análisis en busca de evide evidenci ncias, as, pist pistas as o la iden identi tifi ficac cació iónn defi defini niti tiva va del agen agente te caus causal al.. En el procedimiento se incluyen exámenes macrosc macroscópi ópicos, cos, microsc microscópi ópicos, cos, cultiv cultivo, o, pruebas bioquímicas, serólogicas, o patológicas. En muchos casos los simples s imples exáme exámenes nes prel prelim imin inar ares es respo responde ndenn a la incó incógn gniita, pero pero a vece vecess se requ requie iere re realizar realizar procedimiento procedimientoss específicos específicos para obtener el resultado preciso.
Estudiante: Mues Muestr tras as de órga órgano noss de plan planta tass con con lesi esion ones es,, defo deform rmac aciion ones es de tejid ejido, o, decoloraciones, pudriciones así (llevar en cámara húmeda según el ítem 4 Meto Metodo dolo logí gía) a),F ,Fru ruto toss de nara naranj njaa con con pudrición y con moho verde, Frutos de fresa con pudrición y moho gris, Bulbos de cebolla con pudrición y moho blanco, Hojas y tallos de plantas de tomate con lesiones de color marrón y con moho del mismo color, Hojas de rosa con presencia de polvo blanco, Hojas de planta de tomate con lesiones redondeadas de color marrón, Hojas de plantas de papa con lesiones de color negro, Plántulas Plántulas de ho hortali rtalizas zas (repollo, (repollo, brócoli, coliflor, apio, tomate o pimentón) con pudrición en el cuello del tallo y presencia de moho blanco.Bisturí estéril 1
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(hoji (hojill lla) a),, cint cintaa trans transpar paren ente te,, gua guant ntes, es, cofia, tapabocas, bata, cuaderno de
qu quee perm permit itan an ident identif ific icar ar el gén género ero del del hongo causante de la enfermedad.
laboratorio, portaobjetos y cubreobjetos, alcohol de 90 º.
PROCEDIMIENTO
Laboratorio: Cajas de agar PDA, Hipoclorito de sodio y alco alcoho holl, Ag Agua ua dest destiilada lada,, Az Azul ul de lactof lactofeno enol, l, Incubado Incubadora, ra, Microsc Microscopi opioo y estereoscopio, Mechero
•
Tomamos los frutos y cortamos con el bisturí las partes infectadas.
Remolacha, Papaya, Guanábana, Cacao. Real Realiz izam amos os la ob obse serv rvac ació iónn directa por presencia de signos en el tejid ejido, o, para para ell ello ident dentiifica ficam mos diferentes estructuras en el microscopio.
METODOLOGÍA Tomar la muestra de la planta planta infectada y colocarla en un recipiente con algodón embebi embebido do en agu agua, a, taparl taparloo con vinipe vinipell con con el obje objeto to de que que se desa desarr rrol olle le el hongo y no se afecten sus estructuras.
Finalm almente nte rea realizamo amos el aislamiento del agente causal a partir de teji tejido do enfe enferm rmo, o, real realiz izan ando do la siem siembr braa en caja cajass de pet petri con con el medio de cultivo PDA, el utilizado para el aislamiento de hongos.
Observación directa por presencia de Utilizando tinción tinción signos en el tejido: Utilizando simple con azul de lactofenol, observe las estructuras al microscopio describiendo el género al cual pertenece el agente causal de la enfermedad.
RESULTADOS
Aislamiento del agente causal a partir Realizar pequeños pequeños de tejido tejido enfermo: enfermo: Realizar cortes de la zona de avance de la infe infecc cció ión, n, dond dondee el pató patóge geno no está está en act activo desar desarro roll llo. o. Los Los trozo rozoss son son desi desinf nfec ecta tado doss supe superf rfic icia ialm lmen ente te con con alcohol de 70º y luego con una solución de hipoclorito a 1% durante 2 minutos, enjuaga enjuagados dos 2 veces veces con agua destila destilada da estéril y sembrados en cajas de Petri con medio medio de culti cultivo vo para hongo hongoss PDA. Se incuban a 28ºC por 4 a 7 días.
OBSERV OBSERVACI ACIÓN ÓN DIRECT DIRECTA A POR PRESENCIA DE SIGNOS EN EL TEJIDO
Observación macroscópica Remolacha
Iden Identi tifi fica caci ción ón micr micros oscó cópi pica ca de los los Realic icee mont montaj ajes es con con aislamientos: Real tinción azul de lactofenol y observe al microscopio para describir las estructuras
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Nombre del hongo: Rhizopus hongo: Rhizopus sp.
Características: H on g o blanco algo algodon donoso oso.. Presen Presenci ciaa de un hon hongo go negro, también de aspecto algodonoso.
Características: Hifa no septada o hialina. Color negro o verde pardo. Se ob obse serv rvaa el espor sporan angi gióf ófor oro. o. Produce esporas sexuales y asexuales.
Papaya
Naranja
Características: Hongo gris de aspecto algo algodon donoso oso,, que presen presenta ta un hong hongoo blanco en el centro de este. Nombre del digitatum.
Cacao
hongo:
Penicillum
Características: Hif Hifas sep septadas hialinas. hialinas. Los conidióforos son simples simples o ramifica ficaddos, que termi rminan en racimos de fiales en forma de botella. Conidias sueltas.
Papaya Cara Caract cter erís ísti tica cas: s: el teji tejido do enfe enferm rmoo presenta hongo de color balnco
Observación microscópica:
Remolacha Nombre del hongo: Clodosporium cladosporoides Cararterísticas: Hifa no sepatada. Color verde oscuro. Se observa el esporangióforo. Se trata de conidios hialinos, multicelulares y con forma característica de media luna.
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Cacao
Hongo blanco de textura algodonosa. Se observa el agente causal Rhizopus causal Rhizopus sp. •
Papaya
Nombre roreri
del
hongo: Monilopthora
Características: Hifas septadas hialinas siem siempre pre phia phiali lide des. s. Co Coni nidi dias as suelt sueltas, as, hial hialin inos os,, pigm pigmen enta tado dos, s, glob globos osos os o cilíndricos.
Características: Hongo Blanco algodonosa. Hong Ho ngoo bl blanco anco aterciopelada. •
AISL AISLAM AMIE IENT NTO O DEL DEL AG AGEN ENTE TE CAUSAL A PARTIR DE TEJIDO ENFERMO:
•
de
textura
de textu extura ra
Naranja
OBSERVACIÓN MACROSCÓPICA: Remolacha
Se observa un hongo blanco de textura algodonosa que cubre toda la superficie del fruto. •
Características:
Cacao
Se observa observann coloni colonias as de distint distintos os tipos de hongos: Hongo verde Hongo verde claro claro de text textura ura algodonosa. Hongo verde oscuro de textura algodonosa. Elevación. •
•
•
Características 4
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Cara Caract cter erís ísti tica cas: s: se ob obser serva va el agent agentee caus causal al de la pu pudr dric ició iónn en la nara naranj nja, a, Penicillium digitatum
Hongo verde oscuro de textura algodonosa. Hongo blanco de textura algo algodon donosa osa que se exti extien ende de sobre sobre la caja de petri. •
•
Cacao
OBSERVACION MICROSCOPICA Remolacha
Cara Caract cter erís ísti tica cas: s: se ob obser serva va el agent agentee causa causall de la moni monili liasi asis, s, Monilopthora roreri Características: se observa claramente el agente causal de la enfermedad, Rhizopus enfermedad, Rhizopus sp.
DISCUSIONES RESULTADOS
DE
LOS
En los resul sultados obte btenidos en el laboratorio se observo que en las cajas sembradas con agar PDA las cuales tenían tejidos enfermos de cacao; se presento crec crecim imie ient ntoo de un ho hong ngoo el cual cual se obser serva micelio de color bla blanco y manchas de color marrón en diferentes partes del fruto del cacao; después de sacar las cajas de Petri con los tejidos enfe enferm rmos os se ob obse serv rvoo crec crecim imie ient ntoo del del micelio micelio de color blanco, blanco, la monili moniliasis asis se presenta principalmente en cultivos que no tenga engann bu buen en índi índice ce de hu hum medad edad,, sombra sombra,, esté esténn somet sometid idos os a desce descenso nsoss bruscos de temperatura, mal drenaje del suelo y falta de poda.
Papaya
Carac Caracte terí ríst stic icas: as: se observa observa el agent agentee causal de la enfermedad, Clodosporium cladosporoides
Naranja
En la caja de Petri con tejidos enfermos de pap papay ayaa se ob obser servo vo creci crecimi mien ento to del micelio de color blanco y textura algo algodo dono nosa sa del del ho hong ngoo Clad Clados ospo pori rium um cladosporoides; este hongo generalmente se encuentra en el suelo, plantas pero casi 5
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no es nocivo al se humano; sus hifas se encu encuen entr tran an orga organi niza zada dass en pequ pequeñ eñas as cadenas que son ovaladas.
se caracteriza por ser un hongo que se encuentra en la carne, el cuelo, plantas, textiles y pinturas; es un hongo que no son patógenos para los humanos salvo en algunos casos que es capaz de dese desenc ncad aden enar ar reac reacci cion ones es alér alérgi gica cass a algunas personas sensibles. Las esporas de Cladosporium se encuentran formando sim simples ples o ram ramifica ficada dass cade cadena nass qu quee pueden tener forma ovoide, oblonga o esférica.
En la caja de Petri con tejidos de remol remolach achaa se observ observoo crec crecim imie ient ntoo del micelio de Rhizopus sp el cual era de verde claro y textura algodonosa; en su observación microscópica se observa un condiof cond ioforo oro llenos llenos de pequ pequeña eñass espora; espora; Rhizopus generalmente se encuentra en plantas marchitas o con cierto grado de pudrición. Las enfermedades en plantas con con este este hongo hongo se cara caract cter eriz izan an por por presentar en la parte pa rte inferior del capítulo, manchas acuosas irregulares, de tamaño variable que posteriormente son de color marrón. La consistencia del receptáculo se torna esponjosa y se cubre de micelio y espo espora rang ngio ioss de colo colorr gris gris negr negruz uzco co o negro, fácilmente visibles en las partes infectadas.
En la observación microscópica de tejidos enfer enfermo moss de remo remola lacha cha se ob obser servo vo la presencia del hongo Rhizopus sp; el cual se encu encuent entra ra clas clasif ific icad adoo dent dentro ro de las las clase de los Zygomicetes debido a que producen esporas asexuales no móviles contenidas en cuerpos pos fruc ructíferos ros denominados denominados esporangios. esporangios. Sexualmente Sexualmente producen esporas denominadas zigosporas. En la observación microscópica de tejidos enfermos de cacao se encontro presencia del hongo Moniliopthera roreri; el cual se caracteriza por ser la plaga que más ataca a cultivo de cacao, pero únicamente ataca a la mazorca del cacao es decir el fruto; sus conidia conidiass se encuent encuentran ran distri distribui buidas das como como en pequ pequeñ eñas as cade cadena nass de form formaa ovalada. En la observación micróscópica de tejidos de naranja se encontro la presencia del hongo Penicillium digitatum el cual se cara caract cter eriz izaa po porr ser ser el ho hong ngoo qu quee mas mas colo coloni niza za frut frutas as cítr cítric icas as en especi especial al la naranja en la cual se observa un moho verd verde; e; qu quee es el micel celio del del ho hong ngo; o; micr microsc oscóp ópic icam ament entee se ob obser servar varon on las las hifas septadas hialinas del hongo.
En la caja de petri que contenia tejidos enfermos de naranja se observo crec creciimien miento to del del micel iceliio del del hong hongoo Penicillium digitatum el cual era de color blanco y textura algodonosa; este hongo causa causa pud pudric ricion iones es en los cítric cítricos os sobre sobre todo la naranja; este hongo crea un moho verde; este patógeno ataca a la ruta solo si esta presenta algún tipo de herida o lesión en su superficie, difícilmente se propaga por contacto; las fuentes de infección puede suelo, del aire, envases, etc.
CONCLUSIONES En la rea realización de la prá práctica de laboratorio se observo microscópicamente la presencia de el hongo Cladosporium cladosp cladosporoi oroides des en tejido tejidoss enfermo enfermoss de papaya y tomate de árbol; Cladosporium 6
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CUESTIONARIO
es un hongo que crece muy rápido y es uno de los más frec frecue uent ntes es qu quee caus causaa pu pudr dric icio ione ness en frutos. frutos. Ataca Ataca princi principal palmen mente te frutos frutos de naran naranja ja,, en los los cual cuales es causa causann lesi lesion ones es graves.
Penicillum digitatum,
¿Cuále less sínt síntom omas as recon reconoci ocióó en las las 1. ¿Cuá muestras recolectadas? • • •
Pudrición blanda bacteriana. Tizón tardío Pudrición casera
Cultivo que ataca: Naranja. Enfermedad: Moho verde de los citrus. Agente causal: Penicillum causal: Penicillum digitatum
2. ¿Cuáles microorganismos encontró? es un hongo de la familia de las Mucoraceae, ampliamente usado como levadura (cultivo arrancador) para la producción casera de tempeh. Las esporas producen un micelio blanquecino, esponjoso, uniendo a los granos de soja y creando una "torta" comestible de granos de soja parcialmente fermentados.
Rhizopus oligosporus
Rhizopus oligosporus produce un antibiótico inhibidor de bacterias gram positivas, positivas, incluyendo a la potencialmente dañina Staphylococc Staphylococcus us aureus y a l a benéfica Bacillus subtilis (present (presentee en nattō), nattō), aún después de que Rhizopus se consuma.
es un hongo que causa grave gravess daños daños en difer diferen ente tess cult cultiv ivos, os, especia especialme lmente nte en culti cultivo vo de manzana manzana,, pera, aguacate, plátano y maiz. Fusarium Fusarium sp,
Algunas Algunas spp de Rhizopus son agente agentess oport opo rtun unis ista tass de cigomicosis humana. Pueden causar serias (y con frecuencia fatal fatales es)) infe infecc ccio iones nes en humano humanoss y en animales debido a su rápido crecimiento a relativamente altas temperaturas. Algunas especie especiess son patógenos vegetal vegetales. es. Dos son son usad usados os en fermentación: fermentación: Rhizopus oligosporus, oligosporus, en la producción de tempeh, tempeh, un alim alimen ento to ferm fermen enta tado do deri deriva vado do de grano de soja; soja; R. oryzae se usa en la producción de bebidas alcohólicas.
Micelio y esporas de Fusarium de Fusarium sp. en fruto de zapallo.
Fruto que ataca: Melón
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crema o rosado rosado a marrón marrón o negro. negro. Hifas son hialinas y septadas, con frecuencia cada vez marrón oscuro con la edad y en holothalli holothallicc transformació transformaciónn para formar cade cadena nass de 1 - 2-ce 2-cell lled ed,, de pare parede dess gruesas, oscura pigmentada arth arthro rocon conid idia ia comúnm comúnment entee se llam llamaa chlamy chlamydoco doconid nidia. ia. Estos Estos arthroco arthroconid nidia ia en realida realidadd represe representa ntann la Scytal Scytalidi idium um anamorfo anamorfo de Aureobasidium Aureobasidium y sólo son de importa rtancia secundaria en el reconocimiento de los miembros de este género. Conidias se producen sinc sincrón rónic icam amen ente te en denso densoss grupo gruposs de cicatrices o indistinta de corto denticles en indife indiferenc renciad iada, a, hiali hialino no a sub-hi sub-hifas fas hial hialin inas as.. Co Coni nidi dias as son son hial hialin inas as,, de paredes lisas, de un solo celled (ameroc (ameroconi onidia dia), ), elipsoi elipsoidal dales, es, pero de forma y dimensiones variables (8-12 x 46 um), a menudo con un indistinto hilo (una marca o cicatriz en el punto de fijación). fijación). Rango de temperatura temperatura para para el crecimiento nto 2-3 2-35C 5C;; ópt óptimo 25C 25C; máxim áximoo 35 35C C (sup (super eriior en algu alguno noss patógenos humanos aislados).
Conidios septados de Fusarium sp. Se trata de conidios hialinos, multicelulares y con forma característica de "banana "
Cultivo que ataca: maíz. Enfermedad: Pudrición de la raíz y tallo. Agente causal: Fusarim causal: Fusarim spp Cultivo que ataca: Plátano Enfermedad: Mal de Panamá Agente causal: causal: Fusarium oxisporum f. sp hongo de morfología simple, largo. Hialino, erecto. Phialides derivaos de hifas. El género Acremonium incluye patógenos, que en pocas ocasiones son patógenos de humanos.
Acremonium sp,
Esta Esta especie especie tiene tiene dos varieda variedades: des: A. pullulans var. va r. pullulans, con una colonia que sigue siendo de color rosa, marrón clar claro, o, amar amaril illo lo o po porr lo meno menoss tres tres semanas nas, y A. pullulans var. melanogenum que pronto se convierte en negr negroo o negr negroo-ve verd rdos osoo debi debido do a la oscuridad hifas que a menudo quedan al margen en celdas separadas.
Las colonias son son de crec crecim imie ient ntoo rápi rápido do,, suav suave, e, cubierto con viscosa masa de conidias,
Aureobasidium pullulans,
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•
Cultivo que ataca. Yuca Enfermedad: Pudrición Aureobasidium Agente causal: pullulans,
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es un hong hongoo que atac atacaa difer diferen ente tess tipo tiposs de cult cultiv ivos os en especial de guayabo (psidium guajaval)
Helminthosporium sp,
•
•
Algunas especies también atacan el maiz causando tizón tardío de las hojas del maíz.
3. ¿Qué medidas de control recomendaría para estas enfermedades?
•
Para el moho verde de los cítricos: •
•
•
•
Adelantar la cosecha de la fruta, despojando el árbol completamente.
•
La rec recolecc ección de la fru fruta vieja y manchada antes de fumigar y recoger la fruta del suelo después de la cosecha. Desinf Desi nfect ectar ar el equi equipo po,, las las caja cajass y los los vehículos.
Uso Uso de mate materia riall de plan planta taci ción ón libre de enfermedad. Plantar en suelos que no alberguen la enfermedad en ese momento, o en caso de existir antecedentes de plantas afectadas, no realizar movi movimi mien ento toss de tier tierra ra en las las zonas donde se hayan detectado plantas enfermas. Real Realiz izar ar enmie enmiend ndas as al suelo suelo si fuese fuese necesar necesario, io, princi principal palmen mente te aportando calcio a unos niveles adecuados (entre 1 y 2 Kgrs/p Kgrs/plan lanta ta de yeso yeso agrícol agrícolaa o tiosul tiosulfat fatoo cálcic cálcicoo a los nivele niveless adecuados). No deshijar aquellas plantas afect afectad adas as hast hastaa el veran verano, o, para para evit evitar ar el peri period odoo de máxi áxima incidencia y procurando que en esta labor se rompan las míni mínima mass raíc raíces es,, adem además ás de desinfec desinfectar tar la barreta barreta con lejía lejía después de cada uso. Eliminar los tratamientos nematocidas, a no ser que exista un ataque severo de nemátodos corr corrob obor orad adoo po porr un anál análiisis sis previo. Aplica Aplicarr product productos os estim estimula ulante ntess de los mecanismos de defensa de la plan planta ta.. Op Opti timi mizar zar toda todass las las prácticas de cultivo, espe specialm alment ente el rie riego y el abonado.
Para la pudrición de la raíz y el tallo:
Implementar un buen control en base a increme emento de la población de los enemigos naturales
•
Para el Mal de Panamá en el plátano:
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La baja incidencia de la enferme enfermedad dad no amerit ameritaa control control químico; sin embargo, se recomienda el entresaque de las plantas enfermas.
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El cont contro roll de Fusarium se ha logra ogrado do sat satisfa isfact ctor oriiamen amentte medi median ante te resis resiste tenc ncia ia genét genétic ica. a. Actual ualmente nte se cuenta con diversos diversos materiales materiales comerciales comerciales que poseen resistencia resistencia a las razas 1, 2 y 3. Usar Usar suelo sueloss con bue buenn drena drenaje je,, semi semill llaa y plán plántu tula lass libr libres es del del patógeno. Rotar Rotar los terrenos terrenos por al menos cinco años, solarizar el suelo y/o fumigarlo. Adic Ad iciionar onar mater ateriia orgá orgáni nica ca (estiércol y pajas o residuos de plantas que liberen productos tóxicos para los patógenos como la col, lechuga, neem y otros), micr microor oorgan ganis ismo moss o agen agente tess de control biológico (Trichoderma lignorum (Biotrol), Fusarium, Gilocladium, Gilocladium, Penicillium, Penicillium, Funiculosum, Funiculosum, Bacillus spp, la micorr corriiza Glom Glomus us intr intrar arad adic ices es,, entre otros), tener un buen balance de nutrientes (los cuales se pueden incrementar con el uso de extrac extractos tos de algas algas marinas) marinas) y excelente raíz, tratar la madera, hilo o metales, las charolas de poliuretano y la desinfección de los invernaderos, entre otras.
una micotoxina producida por patulina llamado por el hongo. Si tal se ven las manzanas para jugo entonces persiste la patulina en el zumo. Por lo tanto, las manzanas con la podredumbre parda no debe ser ser nunca utiliza el zumo de manzana.
¿En ¿En qué qué otra otrass plan planta tass podr podría íann esta estar r presentes?
El tomate de árbol es una baya aromática de forma oboidal, punteada en su extremo inferior.
•
•
•
•
Acremonium sp:
Ataca cultivos de importancia comercial como el melón.
El cultivo del melón es una planta anual, originaria de Asia occidental y África, se cultiv cultivaa para el aprovech aprovechami amient entoo de los fruto frutoss que que posee poseenn un sabor sabor deli delici cios oso, o, delicado delicado y apetecido, apetecido, especialmente especialmente en la época de mucho calor, presentan difer diferen ente tess ti tipo poss de pulp pulpaa desd desdee color color naranja, verde y salmón. Igua Iguallment ente atac atacaa cul cultivos ivos com como el Musa plátano, especialmente el hartón ( Musa AAB) que es un cultivo de vital importancia en el sector del Zulia. Aureobasidium pullulans:
Esta presente en cultivos como el tomate de árbol, sin embargo no causa daños en este sino que sirve como controlador
Penicillum digitatum:
Ataca cítricos en general.
BIBLIOGRAFÍA
enicillium expansum expansum Variedades Variedades como Penicillium causa una pudrición blanda de manzanas. Podrido La parte de la manzana contiene
MOHO MOHO VERD VERDE E DE LOS LOS CITR CITRUS US.. Disponible en la Word Wide Weeb.
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www.viarural.com.ar/viarural.com.ar/agri cultura/aa-enfermedades/penicilliumdigitatum.htm - 7k MICOLOGIA UNIVERSIDAD CHAPINGO
AGRICOLA. AUTÓNOMA
HELMINTHOSPORIUM SP Disponible en la Word Wide web: http://images.google.com.co/imgres? imgurl=http://student.bmj.com/issues/03/ 10/education/images/view_14.jpg&imgre furl=http://student.bmj.com/issues/03/10/ education/364.php&h=215&w=312&sz= 10&hl=es&start=1&um=1&tbnid=O_vnc EKcK0e0UM:&tbnh=81&tbnw=117&pre v=/images%3Fq%3DHelminthosporium %2Bsp%26um%3D1%26hl%3Des%26sa %3DN AYRES, AYRES, Antoni Antonioo Julian Juliano. o. CONTRO CONTROL L DE LA ENFERMEDAD DE LOS CÍTRICOS EN BRASIL ftp://ftp.fao.org/docrep/fao/006/x6732s/x 6732s13.pdf MAL MAL DE PANA PANAMÁ MÁ:: CONT CONTRO ROL L Y PREVENCIÓN. RODRÍGUEZ SERRANO, SERRANO, Miguel. Miguel. Dispo Disponi nibl blee en la Word Wide Web: http://isarac.mforos.com/988674/555077 4-mal-de-panama-control-y-prevencionultimo-informe-cabildo/v
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